人类Urine-Derived干细胞的疗效Cisplatin-Induced急性肾损伤的大鼠模型体内和体外

文摘

急性肾损伤)是一种极其危险的临床综合征发病率和死亡率高。干细胞疗法显示AKI的治疗提供了广阔的前景。Urine-derived干细胞(usc)是一种新型细胞来源的组织工程和细胞治疗提供简单的优点,无创,收获和低成本的方法,有效的扩散,multi-differentiation潜力。在这里,我们描述了南加州大学的治疗效果在鼠模型cisplatin-induced安琪作为小说的疗法。体内,南加州大学缓解静脉管理阿基老鼠肾脏功能损害,血尿素氮(BUN)的水平和血清肌酐(SCr)显著降低。USCs-treated集团也表现出改进的组织学和超微结构的变化,促进增殖和抑制细胞凋亡在肾组织中。南加州大学疗法后,促炎细胞因子(TNF的表达水平α和il - 6)和apoptosis-related蛋白质(伯灵顿和裂解caspase-3)表达下调。此外,存在几个GFP-labeled南加州大学在大鼠肾组织确认。在体外,鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)与顺铂诱导细胞损伤,然后孵化cocultured南加州大学。与南加州大学coculture后,cisplatin-induced NRK-52E细胞显示细胞生存能力和较低的细胞凋亡率高于对照组,细胞周期阻滞是改善。总之,我们的结果表明,南加州大学治疗显著改善肾功能、组织学损伤,抑制肾脏炎症和细胞凋亡过程,和提升管状上皮细胞增殖。我们的研究表现出的潜在治疗阿基,南加州大学的代表一个新的临床治疗策略。

1。介绍

急性肾损伤)是一个日益严重的健康问题在全球范围内,因为其发病率急剧上升和不良结果(1]。阿基的主要危险因素包括糖尿病,高血压,和先进的时代,大量的人们正遭受或面临2]。快速增加的发病率安琪最近报道,条件是在住院患者中更严重3]。阿基影响多达50%的危重患者,增加短期和长期死亡率风险;最常见的原因在重症脓毒症,血容量减少,肾毒性药物(4]。因此,动物模型模拟这些过程(包括缺血/再灌注损伤和肾毒性代理管理)被广泛用于病理和治疗的研究。尽管医学最新进展,一些干预措施可以用来治疗阿基除了透析和肾脏替代治疗等支持疗法。需要更多的资源来指向阿基的治疗和预防。

一线抗癌药物顺铂是一种广泛用于各种实体肿瘤的治疗,但也足以危害肾脏的(5]。顺铂行为通过DNA相互作用,从而导致DNA损伤和线粒体功能障碍;它往往积聚在肾小管细胞在药物代谢,从而导致细胞死亡和导致阿基(5]。肾小管损伤的主要病理改变是阿基,和受损的肾小管上皮细胞的再生是复苏的关键(6]。小说干细胞疗法,如管理骨骨髓来源间充质干细胞(bmsc),脐带血液间充质干细胞(UC-MSCs),脂肪间充质基质/干细胞(超导公司)和诱导多能干细胞(万能),显示了治疗的巨大希望阿基(7- - - - - -11]。然而,有缺点这些干细胞的临床应用,例如,隔离和文化间充质干细胞(msc)通常是侵入性的,缓慢的,昂贵的,应用msc异体移植术提出了免疫排斥和伦理问题12],则可以从一个生成的体细胞,但他们仍然潜在的肿瘤发生的。需要更多有用的干细胞基础研究和临床应用。

Urine-derived干细胞(usc)小说成人干细胞从尿液和隔离是通过非侵入性方法,收获效率,和负担得起的13]。南加州大学可以轻松获得不管供体的年龄,性别,或健康状况(除了一些特殊的条件,包括尿路感染和无尿),并能分化成常见的尿路的细胞类型,如平滑肌细胞(smc),泌尿道上皮细胞(UCs)和内皮细胞,效率高(14]。此外,南加州大学起源于肾脏和被认为是一种理想的细胞来源治疗尿路疾病(15- - - - - -17]。有趣的是,据报道,南加州大学导致肾脏缺血/再灌注损伤的修复大鼠模型代表肾前的(即。,低灌注)阿基18]。此外,液分泌南加州大学被证实是有用的肾并发症的预防1型糖尿病大鼠(19]。南加州大学所示是一个很好的治疗不同类型的肾损伤,但对他们的影响在intrarenal(即。阿基模型,对肾脏有害处的代理);本研究旨在探索南加州大学的潜在的治疗效果有cisplatin-induced安琪体内和体外的老鼠。

2。材料和方法

2.1。道德声明

研究是按照道德标准进行详细的赫尔辛基宣言,这是医学伦理委员会批准的第二附属医院(新桥医院)的军队医科大学(中国重庆)。书面知情同意之前就获得每一个捐赠者捐赠的尿液样本。

2.2。隔离和南加州大学的文化

南加州大学6个健康成年人的尿液中分离的捐助者的平均年龄 岁根据先前的研究中描述的方法(20.,21]。短暂、无菌中游尿液样本收集和离心机,和细胞球洗resuspended进行进一步的文化。主要媒介是用于前三天,和RE / MC介质用于进一步扩散的文化。主要介质是由1:1的混合high-glucose DMEM(美国犹他州HyClone)和火腿的F12营养(美国大岛屿Gibco)补充10%的边后卫(Gibco、澳大利亚),1% antibiotic-antimycotic(美国大岛屿Gibco)的组件REGM SingleQuot工具包(Lonza、巴塞尔、瑞士)。再保险扩散介质包含500毫升的再保险细胞基础培养基补充的组件REGM SingleQuot工具包。MC增殖培养基中含有high-glucose DMEM补充10%的边后卫,1% GlutaMAX (Gibco、日本),1% NEAA(美国大岛屿Gibco), 1%笔/喉炎的症状(美国大岛屿Gibco), 5 ng / ml bFGF(美国落基山PeproTech), 5 ng / ml PDGF-AB(美国落基山PeproTech)和5 ng / ml EGF(美国落基山PeproTech)。RE / MC介质是由1:1的混合扩散介质和MC增殖培养基。P3代细胞用于下游实验。

2.3。细胞增殖实验

细胞增殖是评估使用细胞计数Kit-8 (CCK-8)试剂(多国评价、上海、中国)根据制造商的指示。细胞被播种在96 -孔板的密度2000细胞。CCK-8解决方案(10μ信用证)添加到媒体,之后的文化孕育了一个额外的2 h 37°C。吸光度的测定波长450 nm使用标仪(美国热费希尔)。所有实验进行了一式三份,重复三次,然后生成生长曲线。

2.4。流式细胞术测定和抗体

表面标记检测、收集南加州大学和resuspended密度 细胞/毫升,然后100年μl resuspended细胞是整除成管状。以下使用单克隆抗体:反CD31 eFluor 710 (eBioscience, 46-0319-42),反CD34 PE (eBioscience, 12 - 0349),反/鼠标CD44 PE (eBioscience, 12 - 0441),反CD73 FITC (eBioscience 11 - 0739),反CD105 APC (eBioscience, 17-1057-42),和反CD146 FITC (eBioscience, 11 - 1469)。孵化后30分钟在37°C,这些细胞被洗两次磷酸盐(PBS)然后resuspended在300年μl PBS的流式细胞术。细胞周期测试,超过 收集细胞,1毫升的预冷为隔夜固定,增加了70%的酒精和细胞周期分布的第二天被发现。细胞凋亡检测,超过 收集细胞,膜联蛋白V-FITC /π工具包(Beyotime、上海、中国)是根据制造商的协议。

2.5。细胞免疫荧光染色和抗体(如果)

南加州大学评估为干细胞表面标记物的表达CD31(细胞信号技术,3528),CD34 (Proteintech, 14486 - 1 - ap)、CD45(细胞信号技术,13917),CD44 (Abcam ab46793), CD133 (Proteintech, 18470 - 1 - ap), SSEA4 (Proteintech, 19497 - 1 - ap), CD146 (Proteintech, 17564 - 1 - ap),血小板源生长因子β受体(PDGFRB Proteintech 13449 - 1 - ap),和神经/胶质抗原2(喜欢的《忍者外传2》,Abcam ab129051)和SMC或UC-induced南加州大学进行评估SMC或加州大学表面标记肌间线蛋白(Abcam ab32362),肌凝蛋白(Proteintech, 20716 - 1 - ap), alpha-smooth肌肉肌动蛋白(ASMA Proteintech 23660 - 1 - ap)、波形蛋白(Proteintech, 10366 - 1 - ap),或1 uroplakin (UP-Ia Proteintech 25275 - 1 - ap), uroplakin 3 (UP-III Proteintech 15709 - 1 - ap)、细胞角蛋白克隆AE1 / AE3 (AE1 / AE3、Proteintech 18566 - 1 - ap)、细胞角蛋白13 (CK13 Proteintech 10164 - 2 - ap)。简单地说,幻灯片和4%多聚甲醛固定(武汉博士德,中国)在室温下20分钟(RT)和PBS清洗三次。100年0.1%的细胞被permeabilized Triton-X PBS 10分钟和屏蔽3%驴血清(美国大岛屿Gibco) PBS 30分钟。幻灯片是上述主要抗体孵育过夜在4°C。洗涤三次后,幻灯片被孵化与适当的二次抗体(热费希尔;- 11001,- 11034,- 21235,- 21244)在RT在黑暗中45分钟。幻灯片是安装使用不变色安装媒体(美国表达载体),使用激光扫描共焦显微镜和图像捕获(徕卡,SP5,德国)。

2.6。SMC和加州大学区别

南加州大学镀的密度1000细胞/厘米²被用于培养分化成两个谱系的一个特定的媒介14天。肌原性的分化,等于卷包含10%的边后卫和胚胎成纤维细胞的DMEM培养基(Cyagen、广州、中国)包含10%的边后卫,2.5 ng / ml TGF -β1(美国落基山PeproTech),和5 ng / ml PDGF-BB(美国落基山PeproTech)。uroepithelial分化、DMEM包含10%的边后卫和KSFM(美国大岛屿Gibco) 1: 4比,30 ng / ml EGF是添加到混合物中。分化培养基是每三天更换一次。

2.7。绿色荧光蛋白(GFP)转染和检测

南加州大学是转染lentiviral-GFP向量(Genechem、上海、中国)根据制造商的协议。短暂,南加州大学融合在孵化器培养30 - 50%(5%股份有限公司₂,37°C), GFP慢病毒( 你/毫升)是悬浮在RE / MC介质,RE / MC中包含慢病毒的媒介所取代,和细胞培养4 h。然后,细胞中被丢弃,进一步培养48 h。明显的荧光显微镜下观察绿色荧光。的GFP-labeled南加州大学注入模型大鼠,和肾组织分为5μ米厚的样品使用低温恒温器切片机。在4%多聚甲醛固定了15分钟后,部分与4孵化 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI Solarbio、北京、中国)染色细胞核。使用莱卡激光扫描共焦显微镜图像被抓获。

2.8。动物模型

总共30 Sprague-Dawley老鼠被随机分为3组:正常对照组(正常, ),阿基组处理PBS(阿基+ PBS, ),与南加州大学和阿基组治疗(阿基+南加州大学, )。顺铂(多国评价、上海、中国)溶解在生理盐水(1毫克/毫升)和阿基模型由顺铂腹腔注射诱导剂量的5毫克/公斤体重,而正常控制老鼠只收到了盐水注射。模型建立的日期被认为是d0日期。阿基+南加州大学(usc组大鼠在注射 细胞悬浮在0.2毫升的PBS),而阿基+ PBS组注射0.2毫升的PBS的第二天(d1)。老鼠与异氟烷麻醉通过呼吸面罩(RWD生命科学、深圳、中国),和细胞悬液注入到尾静脉。在d2和d4 GFP-labeled南加州大学发现了。所有的老鼠在d4牺牲。血液采样从老鼠的眼睛,和血液尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)被发现。左肾被固定在一个多聚甲醛和戊二醛固定解决方案形态染色和透射电子显微镜(TEM),右肾是用于全蛋白的提取。

2.9。组织学染色和形态学评估

肾脏组织固定后被嵌入在石蜡和分为5μ米厚的部分。部分被苏木精和伊红染色(他)和周期性acid-Schiff (PAS)试剂,光学显微镜下和所有部分进行评估一位病理学家盲治疗组。肾小管损伤的程度被报道得分方法(18]。10个高倍放大视觉领域(×200)他染色是随机选择的每个大鼠的肾髓质,从每个视野和10个肾小管被选中,共有100个肾小管是得分:肾小管明显扩张,扁平细胞,或肿胀(1分);刷边缘损坏或脱落(1 ~ 2分);的管式(2分);坏死细胞脱落和腔没有管状或碎片)(1分)。肾小球损伤semiquantified是计数。3高倍率视觉领域(×200)皮质区域从每个老鼠被随机选中,和受伤的肾小球数在每个视野,然后计算平均数量。包含下列肾小球病变包括在计算:肾小球萎缩,拥挤的肾小球毛细血管丛,内皮细胞水肿、空泡形成,系膜细胞增殖和肿胀,矩阵扩张。PAS-positive面积比是计算使用Image-Pro + 6.0软件(媒体控制论Inc .,罗克维尔市,医学博士,美国)。视野非常高倍率(×400),和5小球被随机选中。 The positive area of glomeruli along with the whole area of glomeruli was measured, and the ratio of PAS-positive area to glomerular area was calculated. At least 3 rats of each group were used for the above morphological evaluations.

2.10。TEM

老鼠牺牲后,肾组织样本立即收获。小块(约1毫米³)的肾皮质组织在戊二醛固定24小时修复解决方案在4°C。组织进行清洗和2 h后缀的1%四氧化锇在4°C。标本被洗又与丙酮脱水,然后浸泡在一个包埋介质。部分60 ~ 90纳米的厚度减少,然后沾铀酰乙酸和乙酸铅。肾脏是透射电镜下观察超微结构的机器(日立公司(Hitachi Ltd .)、东京、日本)。

2.11。免疫组织化学染色(包含IHC)

评估肾脏的扩散,Ki67的表达是通过免疫组织化学方法评估。PFA-fixed,石蜡包埋部分deparaffinized和水化第一,执行和heat-mediated抗原检索使用三羟甲基氨基甲烷/ EDTA缓冲液pH值9.0。然后,部分接受3% H₂O₂30分钟和孵化ImmunoBlock试剂为30分钟rt Ki67的部分被孵化主要抗体(Abcam ab92742)在4°C一夜之间,其次是生物素化的anti-rabbit免疫球蛋白二次抗体为30分钟37°C。抗原抗体反应与diaminobenzidine可视化(DAB),导致一个棕色沉淀抗原的网站,和苏木精复染色。从每个部分拍摄20个随机领域,进行了半定量的评估使用ImageJ软件(Rawak软件公司,斯图加特,德国)。

2.12。TUNEL分析

DNA裂解使用荧光素TUNEL检测化验(罗氏诊断,曼海姆,德国)根据制造商的协议。deparaffinized,简单地说,部分患者,然后蛋白酶K的工作解决方案是用于抗原检索。TUNEL反应是由透化作用后的试剂混合设备。细胞核后DAPI对比染色,染色部分被显微镜检查,和凋亡细胞的数量在20个随机领域计算的放大下60×。

2.13。免疫印迹分析和抗体

从肾组织总蛋白提取使用里帕裂解缓冲(Beyotime、上海、中国),和浓度测量BCA分析工具包(Beyotime、上海、中国)。然后,30μ克蛋白质分离使用8 - 12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)和转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(默克密理博,达姆施塔特,德国)。被屏蔽后5%脱脂牛奶(溶解在Tris-buffered盐水)为2 h RT,一夜之间,细胞膜被孵化在4°C以下主要抗体:il - 6 (Proteintech, 21865 - 1 - ap)、肿瘤坏死因子-α(17590 - 1 - ap) Proteintech NF -κB(细胞信号技术,6956),caspase-3 (Proteintech, 19677 - 1 - ap)、bcl - 2 (Proteintech, 12789 - 1 - ap),伯灵顿(Proteintech, 50599 - 2 - ig), GAPDH (Proteintech, 60004 - 1 - ig)β肌动蛋白(Beyotime,上海,中国,AF0003)。然后,与辣根杂化膜peroxidase-conjugated二级抗体(中山有限公司,北京,中国,zb - 2301和zb - 2305)。美国Billerica ECL衬底(微孔)是用于检测蛋白质的乐队,和图像可视化与ImageQuant las - 4000 BioImaging系统(通用电气医疗集团,斯德哥尔摩,瑞典)。

2.14。与顺铂NRK-52E细胞的诱导

大鼠肾上皮细胞系NRK-52E购买从周中乔鑫生物技术有限公司有限公司(上海,中国)和培养high-glucose DMEM包含10%的边后卫。当细胞达到60 - 70%融合,顺铂浓度梯度(0μ2.5米,μ5米,μ10米,μ米,20μM, 40μM)申请16 h。CCK-8测试和流式细胞术进行了最后的感应检测细胞活力和细胞周期分布。的浓度,导致明显的细胞损伤被用于后续的实验。

2.15。Coculture NRK-52E细胞和南加州大学

NRK-52E细胞培养在6-well盘子。与顺铂诱导后16 h,媒介所取代,NRK-52E细胞无触点cocultured与南加州大学( 在对数期细胞)使用插入24毫米直径和0.4μ米毛孔6-well板块(美国Kennebunk康宁)。coculture后24小时,NRK-52E CCK-8测试收集细胞,细胞凋亡和细胞周期使用流式细胞仪检测。24小时文化诱导NRK-52E细胞作为消极的控制。

2.16。统计分析

这样的数据 的意思。与SPSS 19.0软件进行统计分析(美国芝加哥SPSS Inc .),每组之间的显著差异和使用方差分析或Mann-Whitney计算测试。 被认为是具有统计学意义。所有实验进行不少于3个独立的复制。

3所示。结果

3.1。南加州大学的生长特点和Multipotential分化

小型集群的大米很像细胞最初播种后观察2 - 3天,并迅速形成克隆中观察到一个额外的4 - 6天。细胞保持了大米很像形态(图后几段文字1(一))。南加州大学CCK-8测试证实了对数增长(图1 (b))。流式细胞术,如果证实MSC-like细胞表面标记(CD44, CD73、CD105和CD133)但不是造血干细胞标记(CD31、CD34、CD45)都表示在南加州大学。此外,南加州大学表达了胚胎干细胞(ESC)标记SSEA4和周皮细胞标记(CD146 PDGFRB,喜欢的《忍者外传2》)(数据1 (c)和1 (d))。更重要的是,南加州大学有能力分化成平滑肌血统(中胚层起源)和移行细胞谱系(内胚层的起源)诱导后14天。诱导细胞显示SMC-like(细长纺锤状)或UC-like (cobblestone-shaped形态(图)1(一))和日益表示SMC表面标记(ASMA,肌间线蛋白,肌凝蛋白和波形蛋白)(图2(一个))或UC-specific表面标记(UP-Ia UP-III, AE1 / AE3、和CK13)(图2 (b)),分别。南加州大学我们获得显示MSC-like特性和潜在的泌尿应用程序,这是符合我们之前的报告(13]。

3.2。南加州大学的影响肾脏功能和组织学损伤

评估肾功能的恢复,包子的水平和血清检查可控硅。水平都显著的高于阿基+ PBS组比正常组,和这些生化值都降低了南加州大学的管理(图之后3 (c)A、B)。确定南加州大学在组织学损伤的影响,他和PAS染色进行分析肾组织的组织学改变组织横断面图。在髓质,有大量肾小管坏死腔扩张,刷状缘的损失,大量的扁平管状上皮细胞和投阿基组与正常组相比,和阿基的损伤明显减轻+南加州大学组与阿基+ PBS组(数字3(一个)和3 (b)髓质)。管损伤评分阿基+南加州大学组明显低于在阿基+ PBS组(图3 (c)C)。在大脑皮层,肾小球损伤包括肾小球萎缩、拥挤的肾小球毛细血管丛,内皮细胞水肿、空泡形成,系膜细胞增殖和肿胀,和矩阵扩张观察阿基组与正常组相比,和阿基的损伤明显减轻+南加州大学组与阿基+ PBS组(数字3(一个)和3 (b)皮层)。受伤的阿基的肾小球数量+南加州大学组明显低于在阿基+ PBS组(图3 (c)D), PAS-positive面积比显著降低在阿基+南加州大学组与阿基+ PBS组(图3 (c)E)。

3.3。南加州大学在肾脏超微结构变化的影响

TEM显示阿基组,肾超微结构的变化和南加州大学的超微结构变化后被改进政府(图4)。髓质,正常组显示完整的近端小管上皮细胞的超微结构与正常细胞器如线粒体丰富,而阿基+ PBS组显示与中断嵴线粒体肿胀,核固缩,在管状上皮细胞自噬小体,和阿基+南加州大学组只显示轻微水肿在细胞质和线粒体(图4髓质)。在大脑皮层,正常组显示完整的三层滤过屏障;相反,阿基+ PBS组显示内皮细胞水肿、空泡形成肿胀足细胞、系膜细胞增殖与矩阵扩张,脚和节段融合的过程;与此同时,阿基+南加州大学组显示矩阵扩张(图4皮层)。

3.4。南加州大学在增殖和凋亡的影响肾脏和跟踪GFP-Labeled南加州大学

Ki67的表达水平代表了细胞增殖水平;因此,包含IHC Ki67进行评估肾脏的南加州大学对扩散的影响。扩散主要是观察到管状上皮细胞,增殖在最低水平后阿基+ PBS组,但增加管理的南加州大学(图5(一个))。增殖细胞的数量在阿基+南加州大学组高于阿基+ PBS组(图5 (c))。TUNEL检测荧光素进行检测肾脏的细胞凋亡和裂解DNA染色是绿色的。细胞凋亡在南加州大学治疗后肾组织减少(图5 (b))。阿基+南加州大学组表现出更低的凋亡细胞的数量比阿基+ PBS组(图5 (d))。注入的南加州大学被GFP跟踪使用激光扫描共焦显微镜(图5 (e)A、B), GFP-labeled肾组织细胞在d2和d4(图观察5 (e)C, D),但只有少量的细胞被发现在d4。

3.5。炎症和凋亡蛋白的表达变化

炎症生物标记物的表达水平TNF -α、il - 6和NF -κB在阿基+ PBS组明显高于正常组,和阿基+南加州大学组水平低于阿基+ PBS组(图6(一))。细胞凋亡蛋白的表达水平伯灵顿和裂解caspase-3增加阿基+ PBS组与正常组相比,而水平明显降低了阿基+南加州大学组相比,那些阿基+ PBS组(图6 (b))。然而,antiapoptosis bcl - 2蛋白的表达水平在阿基+南加州大学组显著高于阿基+ PBS组(图6 (b))。

3.6。体外细胞模型的建立

感应与顺铂浓度梯度导致NRK-52E不同程度的细胞损伤细胞,如图7。细胞周期阻滞在S期和变得更糟的是随着浓度的增加(数据7(一)和7 (b))。诱导后细胞生存能力下降,浓度超过10μM导致明显的损伤(图7 (c))。浓度的20μM和40μ几乎相等的影响(数据7 (b)和7 (c));因此,10μM和20μ米被选为体外诱导的顺铂浓度。

3.7。南加州大学在诱导NRK-52E细胞的影响

NRK-52E细胞孵育10μ米到20μ顺铂诱导细胞损伤。与南加州大学coculture后24 h,诱导细胞表现出更高的细胞生存能力(图8(一个))和细胞周期阻滞在S期显著提高在两种类型的细胞诱导NRK-52E与控件(数字8 (b)和8 (d))。此外,NRK-52E细胞的凋亡率显著下降后coculture不管入伍前的浓度(数字8 (c)和8 (e))。

4所示。讨论

南加州大学是一本小说类型的成人干细胞和已被证明是一个了不起的细胞来源细胞治疗和组织工程,特别是对于泌尿疾病,如糖尿病cystopathy、间质性膀胱炎、膀胱尿道重建,重建(22- - - - - -25]。尽管南加州大学的治疗效果在老鼠模型中肾前的缺血/ reperfusion-induced阿基模型已报告,它仍然是必要的调查在其他类型的治疗效果是否普遍。Cisplatin-induced阿基是一个典型的intrarenal阿基,这是一种常见的顺铂肾的并发症管理,更要注意它的诊所。南加州大学是否有治疗对这种类型的肾损伤的影响尚不清楚。在目前的研究中,我们调查了南加州大学的可行性和能力,促进大鼠肾脏的功能恢复和细胞再生的体内和体外。

我们的体内实验表明,静脉管理南加州大学可能是一个有效的方法来保护大鼠肾脏功能和组织学顺铂诱导的损害。结果显示抗炎、抗凋亡和proproliferation南加州大学的阿基模型的影响。我们的体外实验进一步证实,南加州大学proproliferation负责和对肾小管上皮细胞凋亡的影响,潜在的可能性质旁分泌机制。

在大多数研究干细胞治疗,干细胞研究人员强调充分定位的重要性为更好的结果(受伤的组织26,27]。在我们的实验中,大多数南加州大学被困在肺部尾静脉注射后的第一个6 - 12 h(数据未显示),和这种现象是符合我们以前的报告22]。GFP-labeled南加州大学在d2中观察到肾组织和d4,表明一些南加州大学到达肾脏和可能分化成肾细胞,参与修复受伤的肾脏。然而,只有少数GFP-labeled南加州大学观察在实验结束时,表明南加州大学在其他方面可能产生的影响。

越来越多的研究报道,液可能扮演重要的角色在干细胞疗法通过旁分泌机制(28]。液是纳米膜囊泡分泌的多种类型的细胞,包括干细胞,能在细胞间传递信息等航运功能分子DNA, RNA (mrna, lncRNAs圆形RNA和小分子核糖核酸),蛋白质和脂质。这些货物可能退化很快裸体时的血液或其它体液,而液由磷脂双分子层提供一个安全的车辆。功能分子可以调节许多生理和病理过程,包括免疫反应、炎症、血管生成和扩散,在受体细胞。研究人员报道,南加州大学液分泌的包含各种因素(如生长因子、转化生长因子-β1、血管生成素和骨形成protein-7)和功能蛋白质和对各种疾病有疗效,包括糖尿病肾病、糖尿病皮肤损伤,和压力性尿失禁(19,29日,30.]。液分泌是否由南加州大学有相同的影响他们发挥阿基模型和关键作用值得进一步研究。

当前研究的主要局限是,治疗效果之间的关系模型和损伤的程度和干细胞的治疗方案是不清楚,有限的指导临床应用。正如我们所知,啮齿动物是故意给大剂量顺铂,为了引起严重的和很容易被阿基。因此,阿基以不同的方式出现在人类和大鼠模型。各种诱导剂量和程序可能导致不同程度的损伤31日]。在临床实践中,顺铂是长期使用,不到10毫克/公斤的剂量,治疗实体肿瘤患者(5]。5毫克/公斤的剂量使用在目前的研究中,这是尽可能接近临床剂量,但为了避免高死亡率,顺铂是只使用一次。此外,我们建立的大鼠模型是患肿瘤是完全不同于临床现实。因此,重视使用肿瘤的模型与一致的政府低剂量顺铂的进一步的研究。另一方面,治疗效果取决于干细胞的治疗方案。在目前的研究中,一个单一的静脉注射 南加州大学产生明显的治疗效果。在我们的初步实验,较低的细胞数量等 南加州大学可以产生治疗效果在某种程度上,。局部注射而非静脉注射能达到同样的目标报道(18]。但没有比较数据之间的影响从不同数量或不同的管理途径。此外,注射时间和频率的选择也是值得考虑的,例如,当注射多少能产生最好的结果。一般来说,仍有很长的路要达到最好的治疗方案的确定。

然而,目前的研究提供了重要参考更新AKI的治疗策略,特别是用顺铂治疗实体肿瘤患者。为了避免免疫排斥反应,患者自身的干细胞无疑是最好的细胞来源。考虑到容易获得性质,南加州大学显示自体移植的应用前景[14]。南加州大学可以很容易地获得即使在肿瘤病人的尿液样本。据报道,南加州大学的膀胱癌患者可以成功分离并扩大32]。顺铂被广泛用于各种实体肿瘤,如睾丸、卵巢、宫颈,头、颈、肺癌、直肠癌(5]。南加州大学的自体应用可能被用作治疗方法在将来这些病人。

5。结论

目前的研究表明,南加州大学的管理可以减轻肾损伤在阿基模型体内和体外通过抑制炎症反应和凋亡过程和改善肾小管上皮细胞的增殖。还需要进一步的研究来阐明底层机制和临床应用价值。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

的废话设计研究中,执行大部分的实验,起草了手稿。XL和YY参加了动物建模和抽样。CY和PL进行免疫印迹,细胞培养,CCK-8测试,流式细胞术,如果,他染色。XD执行PAS染色、TUNEL检测和细胞跟踪。ZY进行了统计分析。XD, JX YZ,修订后的手稿。JX YZ,构思研究和参与其设计和协调。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

我们承认资金支持中国的国家自然科学基金(批准号81770761路。李)和跨学科和军队医科大学的国际合作项目(批准号2016 yxkjc03路。李)。

引用

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