Oct4基因表达在初级大肠癌促进肝脏转移

文摘

目的。的Oct4基因扮演着一个重要的角色在未分化的胚胎干细胞和调节干细胞多能性。本研究的目的是检查Oct4表达式之间的关系和肝转移的结直肠癌(CRC)在临床样本和调查Oct4-positive CRC细胞的作用和能力。方法。这项研究包括158名患者接受手术CRC在2009年和2011年之间。之间的相关性Oct4基因表达和临床参数进行了评估,并肝metastasis-free (LMFS)评估这些患者的生存。Oct4-EGFP-positive细胞建立检查程序和能力。能力形成肝转移在体内使用CRC检查细胞系和主要培养CRC细胞。结果。LMFS明显的差Oct4高表达组比低表达组( )。多变量分析表明,Oct4表达式( )和TNM阶段( )LMFS有显著相关性。Oct4-EGFP-positive茎细胞相关标记细胞高表达自我更新和分化能力。Oct4-high细胞积极形成肝转移。结论。Oct4表达式是CRC患者与肝转移。Oct4表达细胞自我更新和分化能力像癌症干细胞。Oct4导致CRC形成肝转移。

1。介绍

癌症是死亡的一个主要原因,在日本和发达国家,它已成为一个主要的死亡原因在发展中国家(1,2]。据估计,全球癌症死亡的总人数将达到960万年的2018,和结直肠癌(CRC)将癌症死亡的第三大原因(癌症死亡总数的10.2%)2]。

远处转移导致CRC患者死亡,和肝转移中最常见的是CRC患者(3,4]。全身化疗结合的发展改善了预后。然而,转移患者的中位总生存期(OS) CRC (mCRC)大约是30个月5),四期患者的5年生存率仅为19% (4]。有必要确定远处转移的机制来开发治疗以改善预后。识别机制和基因负责肝转移将有助于控制CRC患者的发病率。

基因编码POU域、类5、转录因子1 (POU5F1),也被称为Oct4,表达在胚胎干细胞(ES)和扮演重要的角色在保持胚胎干细胞的多能性和自我更新6,7]。Oct4也表达了在组织干细胞和参与他们的增殖和分化8,9]。我们此前报道称,高Oct4表达式是一个小说在CRC预后标记(10]。Oct4也与恶性肿瘤和癌症干细胞(二者)在某些癌症。在乳腺癌中,Oct4表达水平与nonsentinel淋巴结转移显著相关(11),在骨肉瘤,Oct4有关干细胞的特性(12]。Oct4宫颈癌细胞促进肿瘤发生[13)和诱导干细胞的属性和epithelial-mesenchymal过渡(EMT)在肺癌14]。Oct4监管EMT及其廉价的抑制细胞迁移和入侵CRC细胞系(15]。Oct4被认为发挥重要作用在二者10,12),但只有部分的机制。本研究关注Oct4的角色转移CRC (mCRC) Oct4表达式之间的关系和肝转移的CRC在临床样本,以及主要Oct4-expressed细胞培养细胞的作用。我们旨在调查这两个角色在mCRC患者的预后和揭示Oct4在CRC的干细胞的特性。

2。材料和方法

2.1。临床样本

一百七十三CRC患者被注册。共有一百五十八例病人接受了完整切除原发性肿瘤(R0切除,Cur)和15个病人接受了完整的小学和转移性肿瘤切除术(R0切除,坏蛋B)在大阪国际癌症研究所2009年和2011年之间(4]。没有患者术前化疗或放疗。收到他们的知情同意后,主CRC标本和正常结直肠粘膜取自患者根据制度伦理准则。标本固定,切片,苏木精和伊红染色和弹力van Gieson污渍我们之前报道(10]。组织学分化和淋巴和静脉入侵检测。对于基因表达分析,手术切除标本在液态氮冷冻,保存在−80°C。所有患者进行了血液随访检查检查肿瘤标志物(血清癌胚抗原(CEA)和癌抗原胜负(CA19-9)),和影像学检查,如腹部超声、ct和胸部x射线进行手术后每3 - 6个月。根据日本指南(4),第三阶段患者和四期R0切除收到辅助术后化疗患者知情同意后。

根据肿瘤临床病理的因素被诊断为节点转移国际抗癌联盟(TNM)分类(UICC) (16]。大阪国际癌症研究所伦理委员会批准了这项研究(没有。1608057113),书面知情同意是获得所有的病人。

2.2。RNA制备和表达分析

RNA净化设备(试剂盒、希尔登,德国)被用来准备总RNA。使用Transcriptor执行逆转录合成第一链cDNA工具包(罗氏诊断、东京、日本)。设计引物,用普遍调查图书馆平台(罗氏诊断)补充表中列出S1。互补脱氧核糖核酸从NTERA-2作为积极的控制进行了研究。定量评估了使用实时逆转录- PCR (RT -)使用通用探针库平台(罗氏诊断),由于“快速上手”项目TaqMan探测器主(罗氏诊断)目标基因的互补脱氧核糖核酸扩增。表达式的比率Oct4信使rna复制标准化对后计算GAPDH信使rna表达。

2.3。CRC细胞系的文化

人结直肠肿瘤细胞系HCT116、DLD-1和,RKO天才伯特Vongelstein博士(美国马里兰州巴尔的摩约翰斯·霍普金斯大学),在杜尔贝科修改鹰的培养介质(DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫;热费希尔科学Inc .,沃尔瑟姆,妈,美国),1% GlutaMAX-I(热费希尔科学Inc .),和1%的青霉素、链霉素、两性霉素B (Wako纯化学工业有限公司,大阪,日本)。这些细胞被保持在37°C在湿润的气氛中含5%股份有限公司₂。

2.4。CRC细胞的主要文化

CRC组织切成1毫米块和分离使用1毫克/毫升胶原酶(C6885;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在DMEM (Sigma-Aldrich)和动摇BioShaker BR-13FP (Taitec有限公司、埼玉县、日本)6 g×15分钟在37°C。分离组织定制的过滤器过滤(山有限公司、东京、日本)。离心机在400 g×5分钟在室温下,收集细胞颗粒在2毫升resuspended培养基(修改后的干细胞培养基)。暂停了初代培养细胞(821年603 sicc sicc, 28 osicc)被播种在盘子里涂上0.03%人工基底膜(美国纽约康宁公司康宁)在DMEM / F12 (Sigma-Aldrich)。媒介是改变每2或3天。在细胞分布在超过50%的板,他们通过使用Accutase (Nacalai Tesque,京都,日本)约5分钟。细胞培养基中收集和resuspended Matrigel-coated板和播种。

2.5。异种移植模型

组织学检查,异种移植模型建立。Accutase-dissociated细胞( 悬浮在基底膜基质细胞)移植(BD生物科学)皮下注射的背侧翼7-week-old nonobese糖尿病/严重联合免疫缺陷小鼠(克丽、东京、日本)。老鼠牺牲当肿瘤直径10毫米。对于肝转移模型,细胞( 细胞)悬浮在80μL杜尔贝科的改性磷酸盐(D-PBS;Wako纯化学工业)注入脾脏,这是手术切除后15分钟。肝转移是4周后评估。每周的老鼠体重,减肥。

2.6。免疫组织化学

deparaffinization和阻塞后,部分CRC标本与初级孵化anti-Oct4兔多克隆抗体(# 2570;细胞信号技术公司,贝弗利,妈,美国)的稀释1:200一夜之间在4°C。Vectastain环球精英(美国向量实验室,伯林盖姆,CA)是用于检测信号。Diaminobenzidine用于颜色修改。所有的部分都与苏木精复染色。

2.7。流式细胞术和单细胞排序

在培养细胞表面蛋白的表达与流式细胞仪测定。肿瘤细胞与Accutase收获在孵化(Nacalai Tesque)。细胞染色使用CD133/1 (AC133)共轭allophycocyanin (APC;130-090-826;Miltenyi研究,赤褐色,CA)和CD44共轭APC / Fire750 (33817;圣地亚哥BioLegend CA)。相对荧光强度测量使用SH800细胞分选仪(索尼、日本东京)。单一的细胞分类使用SH800细胞分选仪(索尼)。数据分析与FlowJo 10.2软件(美国FlowJo LLC、亚什兰或)。

2.8。建立Oct4-EGFP细胞

PL-SIN-Oct4-EGFP表达EGFP在Oct4启动子,是一个礼物从詹姆斯·埃利斯(Addgene质粒# 21319)。这是使用慢病毒转染成初代培养细胞高效价包装混合pLVSIN(豆类生物有限公司,首先,日本)根据制造商的协议。EGFP-positive细胞丰富了排序两次使用SH800细胞分选仪(索尼)。Oct4使用定量rt - pcr mRNA表达决心。

2.9。RNA分析

对Oct4-EGFP细胞基因表达微阵列进行了分析。Oct4-EGFP-high细胞和Oct4-EGFP-negative细胞分类使用SH800细胞分选仪(索尼)和总RNA准备使用一个RNA净化设备(试剂盒)。基因表达微阵列(美国安捷伦,圣克拉拉,CA)也是构建(见补充材料)。基因集富集分析(GSEA)进行GSEA 3.0软件(Broad研究所,剑桥,麻萨诸塞州,美国)比较与Oct4-EGFP-negative细胞表达谱Oct4-EGFP-high细胞。

2.10。统计分析

之间的关系Oct4表达与临床病理的因素进行了分析与Wilcoxon总和和排名²测试。绘制kaplan - meier生存曲线和比较广义的生存率较。单变量和多变量分析来确定使用Cox比例风险回归模型预后因素。的值在体外化验分析使用Wilcoxon等级测试。所有统计分析使用JMP软件(版本。13.0.0;美国NC SAS研究所,卡里)。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。

3所示。结果

3.1。Oct4表达式在临床样本和临床病理的因素

Oct4信使rna表达水平测定在初级CRC使用定量rt - pcr。Oct4信使rna表达水平计算Oct4/GAPDH表达对每个样本,中位数的值Oct4 / GAPDH信使rna表达水平为0.273(范围0.021 - -10.187;补充图S1)。我们先前报道,OCT4信使rna表达水平与蛋白质含量(10]。所有患者的临床病理特征归纳在表格1。患者,包括94名男性和79名女性,年龄在16到88岁(中位数,65年)。十个阶段我疾病的患者,66例II期,82名患者III期,15个病人四期。我们将病人分成两组的平均价值Oct4 / GAPDH信使rna表达水平:低表达式(< 0.273)和高表达(> 0.273)。低表达组包括87名患者,高表达组包括86例。之间的关系Oct4总结在表表达状态和临床病理的因素2。Oct4表达状态没有明显与任何临床病理的因素如组织学分级、肿瘤侵犯、淋巴结转移、淋巴入侵和血管侵犯。根据单变量分析,高TNM阶段( )和高Oct4表达式( )可怜的肝脏metastasis-free生存有显著相关性(LMFS;表3)。多元回归分析表明,高TNM阶段( )和高Oct4表达式( )也可怜的独立预测指标LMFS(表吗3)。的分布Oct4mRMA表达水平分层的肝转移状态和TNM阶段补充图所示S2。操作系统、无病生存期(DFS)和LMFS在所有患者进行评估。Oct4表达没有明显与操作系统和DFS(补充图S3)。然而,LMFS显著高表达组比低表达组(中 ;图1)。五年LMFS低表达组90%和74%的高表达组。

3.2。分析Oct4-EGFP-Positive细胞

Oct4-EGFP-positive细胞丰富了排序。Oct4-EGFP-positive细胞复制异构人口包括Oct4-EGFP-negative细胞(图2(一个))。的表达Oct4信使rna在Oct4-EGFP-positive细胞明显高于Oct4-EGFP-negative细胞(图所示2 (b))。CD44和CD133之前报告的CRC干细胞标记(17,18),这些标记流式细胞术分析。Oct4-EGFP-negative人口,76%的细胞表达CD44和大约54%的细胞表达CD133(图2 (c))。Oct4-high人口,98%的细胞表达CD44表达CD133和54%的细胞。所有细胞表达CD44和/或CD133 OCT4-high人口。此外,基因集富集分析(GSEA)显示,有关WNT基因蛋白质绑定( )和纤维母细胞生长因子(FGF)受体结合( )在Oct4-EGFP-high丰富细胞相比Oct4-EGFP-negative细胞(图2 (d)补充表S2)。接下来,Oct4-EGFP-positive和Oct4-EGFP-negative单个细胞分为个别井在96孔板。单排序Oct4-EGFP-positive细胞扩散与Oct4-EGFP-negative细胞(数据相比3(一个)和3 (b))。井的数量与殖民地4和8周后测定单细胞的排序。计算单个细胞的存活率(与殖民地形成的油井数量/排序细胞的数量)(%)。Oct4-EGFP-positive单一细胞明显比Oct4-EGFP-negative更好的生存和保持长期扩张(图3 (c))。单排序Oct4-high细胞产生Oct4-EGFP-positive和Oct4-EGFP-negative细胞(图3 (d))。

3.3。异种移植模型的肝脏转移

三个CRC细胞系(DLD1 HCT116, RKO)和三个CRC可以(821年603 sicc、28 osicc sicc)注入脾脏形成肝转移( )。821年sicc肝脏转移率为100%,75%在HCT116、25%, RKO DLD1和0%,603的sicc, 28 osicc。821的sicc HCT116形成肝转移效率高(≥75%)。Oct4蛋白表达和mRNA表达使用免疫组织化学检查。rt - pcr, 603年DLD1 sicc, 28 osicc没有形成肝转移;因此,Oct4蛋白表达比较使用皮下异种移植肿瘤。Oct4蛋白表达HCT116和821 sicc更高DLD1和603年sicc(图4(一))。同时,Oct4蛋白表达在异种移植肝转移由HCT116和821年sicc高。Oct4mRNA的表达HCT116和821年sicc高于其他细胞(RKO DLD1 603 sicc, 28 osicc;图4 (b))。

4所示。讨论

转移是因为几个组合的因素,如肿瘤位置、肿瘤的特点,和有针对性的器官特征(19- - - - - -21]。最近的生物检测表明,anti-EGFR单克隆抗体Cmab和Pmab等是有效的在野生型RAS(喀斯特/国家管制当局方面),和药物选择根据RAS突变状态不考虑转移网站(3]。虽然目前治疗mCRC是相同的肝脏和/或肺转移患者目标器官的特点,有针对性的器官特征及其关键因素仍鲜为人知。更好地了解肿瘤的特点将为癌症患者提高瀑特异性治疗和预后。超表达Oct4、Nanog诱发EMT和促进肺癌的转移14],击倒Oct4抑制EMT和块在肺癌和大肠癌转移能力14,15]。这是第一个报告来评估Oct4表达式之间的关系和肝转移的结直肠癌(CRC)在临床样本,Oct4-expressed具备干细胞的细胞,使用主要培养细胞和肝脏metastasis-forming能力没有基因工程。

我们专注于肝转移的CRC和Oct4基因。Oct4与操作系统和DFS表达没有明显相关。然而,高Oct4表达与LMFS显著相关,是CRC患者肝转移的独立预测指标。Oct4表达和非转移之间的关系也检查了,但是没有意义。我们显示Oct4肿瘤特性,特别是在临床CRC与肝转移。接下来,我们检查的作用Oct4具备干细胞体外分析重点。OCT4可以直接重组成人细胞诱导多能干细胞(iPS)细胞,在CRC二者中表达的也是22,23]。二者或“癌症干细胞样细胞”被认为促进肿瘤细胞侵袭和转移24),导致耐药(22,25]。主要培养CRC细胞异构而细胞系(补充图S4),Oct4-EGFP-positive细胞的人口是主要培养细胞检查。我们建立Oct4-EGFP主要培养CRC细胞和检查了他们的特点。单排序Oct4-EGFP-positive Oct4-EGFP-negative多细胞,细胞扩散,形成殖民地和Oct4-EGFP-positive细胞产生Oct4-EGFP-positive和Oct4-EGFP-negative细胞。这些结果表明,Oct4-EGFP-positive细胞有自我复制能力和堂吉诃德能力中被报告为二者的特点(24]。比Oct4-EGFP-negative Oct4-EGFP-positive细胞通常表达CD44 / CD133细胞,和所有Oct4-high细胞CD44表达17]。GSEA表明WNT蛋白质绑定和FGF受体结合在Oct4-EGFP-high细胞丰富。WNT信号通路中发挥着重要作用CRC转移(26FGF,相声和WNT信号通路导致了更多的恶性表型通过几个信号级联包括EMT (27]。总结我们的研究结果,Oct4-EGFP-positive细胞表达更多的干细胞细胞相关标记与Oct4-EGFP-negative细胞并在二者自我更新和分化能力。此外,主要培养细胞包含Oct4-expressed细胞自我更新和分化能力。最后,我们检查的能力形成肝转移在体内使用CRC细胞系和主要培养细胞。Oct4监管epithelial-mesenchymal过渡CRC细胞系及其击倒抑制CRC细胞迁移和入侵15]。我们发现细胞(HC116和821 sicc)高度表达Oct4形成肝转移效率高。这项研究有一些局限性。在临床分析中,样品的数量太小,不能分析非转移。我们没有检查其他网站,如肺转移转移潜力,和更多的考试需要披露的角色Oct4有关瀑特异性转移潜能。然而,我们得出的结论是,Oct4-high肿瘤可能转移在临床情况下,所以额外的治疗干预Oct4-high肿瘤和/或治疗目标Oct4 CRC患者可能会减少肝转移,改善预后。

5。结论

高OCT4表达式是CRC患者肝转移的独立预测指标。OCT4-positive主要培养细胞自我更新和分化能力,积极形成肝转移。

缩写

儿童权利公约:	结肠直肠癌
操作系统:	总生存期
DFS:	无病生存
LMFS:	肝脏metastasis-free生存
mCRC:	转移性CRC
Oct4 (POU5F1):	POU域、类5、转录因子1
CSC:	癌症干细胞
EMT:	Epithelial-mesenchymal过渡
TNM分类:	肿瘤转移节点分类
rt - pcr:	实时逆转录
GSEA:	基因集富集分析
“诱导多能性”:	诱导多功能干细胞。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

志贵Fujino和Norikatsu三好同样这项工作。

确认

我们感谢阿雅Ito女士她的技术援助。我们还要感谢博士Masayuki Ohue, Masayoshi Yasui博士和Yusuke高桥临床随访的病人。这项工作的部分支持由年轻科学家的补助金(批准号JP17K16542)和大阪为棘手的疾病医学研究的基础。

补充材料

表S1:引物序列对应的通用探测器库。表S2:途径丰富Oct4-EGFP-high细胞。图S1:分布Oct4 mRMA肿瘤样本中表达水平。图S2:分布Oct4 mRMA表达水平分层的肝转移状态和TNM阶段。图S3:生存曲线总生存期(OS)和无病生存期(DFS)根据POU5F1 mRNA的表达。图S4:流式细胞术分析CD44和CD24的细胞系和iCC安捷伦芯片协议。(补充材料)

引用

1. NCC癌症控制中心和信息服务,“统计数据,2016年日本最近的癌症,”2018年9月,http://ganjoho.jp/reg_stat/statistics/stat/summary.html。视图:谷歌学术搜索
2. f·布雷,j . Ferlay Soerjomataram, r·l·西格尔,l·a·托瑞和a . Jemal”2018年全球癌症统计数据:GLOBOCAN估计36癌症的发病率和死亡率全球185个国家,“CA:临床医生的癌症杂志》上,卷68,不。6,394 - 424年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. e·范·卡特森、塞万提斯a, b . Nordlinger d·阿诺德和代表ESMO指南工作组,“转移性结直肠癌:ESMO临床实践指南的诊断、治疗和随访,”《肿瘤学补充3卷。25日,pp. iii1-iii9, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. t .渡边,k . Muro y Ajioka et al .,”日本社会对癌症的结肠和直肠(JSCCR)指南2016治疗结直肠癌,”国际临床肿瘤学杂志》上,23卷,不。1,猴,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. h . j .笨蛋e··范·卡特森a . Stein et al .,“ESMO共识指南管理患者的结肠癌和直肠癌。一种个性化的临床决策方法。”《肿瘤学,23卷,不。10日,2479 - 2516年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. h·r·Scholer g·r·杜丝勒r .球磨机h . Rohdewohld和p·格鲁斯,“Oct-4: germline-specific转录因子映射到鼠标t-complex,”在EMBO杂志,9卷,不。7,2185 - 2195年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 黄懿慧Loh,吴,j . l .咀嚼et al .,“Oct4和Nanog转录网络调节在小鼠胚胎干细胞多能性,”自然遗传学,38卷,不。4、431 - 440年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. j·h·金,m . k . Jee郑胜耀李et al .,“调节脂肪组织基质细胞行为的内生的Oct4表达式控制,”《公共科学图书馆•综合》,4卷,不。9篇文章e7166 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . m .汉s h·汉y . r .寇et al .,“增强的增殖和分化Oct4 Sox2-overexpressing人类脂肪组织间充质干细胞,”实验与分子医学,46卷,不。6 p . e101 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. n .三好s Fujino m . Ohue et al .,“结肠直肠癌的POU5F1基因表达:一种新的预后标记,”今天手术,48卷,不。7,709 - 715年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. Cai,耿,f·金,j .刘曲,和b·陈,“POU5F1 / Oct-4表达在乳腺癌组织中与non-sentinel淋巴结转移显著相关,”BMC癌症,16卷,不。1,p。175年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 张郭x l . Yu, z, g .戴t高,和w·郭”mir - 335负调节骨肉瘤干细胞的特性,针对POU5F1,”癌细胞国际,17卷,不。1,p。29日,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. n . y . d . Wang Cai, x l .吴h .曹z l·l·谢和p . s .郑”OCT4促进肿瘤发生和抑制宫颈癌细胞的凋亡mir - 125 b / BAK1通路,”细胞死亡和疾病,4卷,不。8 p . e760 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. y . t . s . h .邱m . l . Wang周et al .,“Coexpression Oct4 Nanog提高恶性肿瘤的肺腺癌诱导癌症干细胞的特性和epithelial-mesenchymal分化转移,”癌症研究,卷70,不。24日,第10444 - 10433页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. x x戴,j . Ge Wang x钱,c,和李x”OCT4调节epithelial-mesenchymal过渡及其击倒抑制大肠癌细胞迁移和入侵,”肿瘤的报道卷,29号1,第160 - 155页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. l . h . g . m . Sobin和c . Wittekind恶性肿瘤的TNM分类,牛津大学著名第七版版,2010年版。
17. m·g . Muraro诉Mele CD133 Daster et al。。⁺,存在⁺CD44⁺,CD24⁺CD44⁺表型无法可靠地识别细胞群与癌症干细胞功能特性在人类结肠癌细胞系建立了,“干细胞转化医学,1卷,不。8,592 - 603年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l . Du g . Rao王h . et al .,“cd44阳性的癌症干细胞表达细胞的朊蛋白有助于转移性结直肠癌的能力,”癌症研究,卷73,不。8,2682 - 2694年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. j . Guinney r . Dienstmann x王et al .,“结直肠癌的分子亚型的共识。”自然医学,21卷,不。11日,第1356 - 1350页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a . Hoshino b . Costa-Silva t . l .沈et al .,“肿瘤外来体整合蛋白确定organotropic转移,”自然,卷527,不。7578年,第335 - 329页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. s . Tejpar s Stintzing f . Ciardiello et al .,“预后和预测患者原发肿瘤位置的重要性拉野生型转移性结直肠癌:回顾性分析晶体和FIRE-3试验”,JAMA肿瘤学,3卷,不。2,p。194年,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. n .三好h . Ishii k Nagai et al .,“定义因素诱发胃肠道癌症细胞的重组,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷107,不。1,降价,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. n .三好h . Ishii h .长野et al .,“重组的老鼠和人类细胞多能性使用成熟的小分子核糖核酸,”细胞干细胞,8卷,不。6,633 - 638年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m . Todaro m . Gaggianesi诉Catalano et al .,“CD44v6的标志本构和癌症干细胞重新编程驱动结肠癌转移,”细胞干细胞,14卷,不。3、342 - 356年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. d .香港、李y, z . Wang和p.h. Sarkar“癌症干细胞和epithelial-to-mesenchymal过渡(EMT)表型细胞:他们亲戚或者是双胞胎吗?”癌症,3卷,不。1,第729 - 716页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 傅y . g . Wang,杨x et al .,“Brg-1针对小说miR550a-5p / RNF43 / Wnt信号轴调节结直肠癌转移,”致癌基因,35卷,不。5,651 - 661年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. m . Katoh和m . Katoh WNT信号通路和干细胞信号网络。”临床癌症研究,13卷,不。14日,第4045 - 4042页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2019志贵Fujino和Norikatsu三好。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。