Interleukin-1β通过LFA-1/ICAM-1相互作用增强脐带间充质干细胞对人脐静脉内皮细胞的粘附能力

摘要

施用间充质干细胞（MSC），以便通过血流损伤部位的迁移已被证明。然而，脐带MSC粘附于内皮细胞的跨内皮迁移期间的基本机制仍然不清楚。在这项研究中，我们的数据表明，IL-1β诱导的LFA-1的表达对HUVECs MSC和ICAM-1表达。然后，我们预处理蛋白质合成抑制剂环己的MSCs。结果表明，IL-1β通过蛋白合成途径诱导msc表面LFA-1表达。通过p38 MAPK信号通路抑制剂SB 203580，我们发现IL-1β诱导LFA-1的通过在HUVEC中的p38 MAPK信号传导并提高ICAM-1表达的表达。此外，IL-1βIL-1RA和LFA-1抑制剂洛伐他汀可以抑制-诱导的MSC粘附于HUVECs。这些结果表明IL-1β通过LFA-1/ICAM-1相互作用促进msc细胞粘附于HUVECs。我们阐述了IL-1的细胞粘附机制的证据β促进MSC粘附于HUVECs。这些发现的意义可以增强间充质干细胞的治疗潜力。

1.简介

脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是多能细胞，具有自我更新能力并分化为心肌细胞、脂肪细胞和成骨细胞[1]。间充质干也有能力分泌旁分泌因子，并在家里在小鼠模型中组织损伤后炎症部位[2-4]。既往研究表明，细胞因子或生长因子预处理等治疗策略可能改善间充质干细胞的迁移和粘附[五，6]。虽然在不同健康状况的MSCs的治疗益处的临床前和临床证据已证实，在MSC的一个主要障碍的治疗是苛刻的微环境，与MSC归巢能力干扰和掩盖我们的细胞粘附机制内皮迁移过程中的初始阶段的知识。

il - 1β是一种高度炎性的细胞因子，当组织因单核细胞和巨噬细胞的存在而发炎时产生[7]。它们有系统地分泌和循环[8]。在我们之前的研究中，我们发现了白细胞介素-1β(il - 1β）诱导间充质干细胞迁移的体外[9，10]。IL-1预处理增强MSC的功效移植硫酸葡聚糖钠（DSS-）诱导的结肠炎[11]。已经显示了IL-1β上调许多基因包括细胞因子和粘附分子的表达[12]。il - 1β诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达[13]，ICAM-1和VCAM-1的表达在人血管平滑肌细胞[14]。

对细胞迁移、生长和存活至关重要的细胞-细胞和细胞-基质相互作用主要由整合素介导[15]。整LFA-1 / ICAM-1interaction一直被认为是粘附分子的主要对跨内皮促进白细胞迁移的不同步骤中的一个[16]。研究表明，炎症过程中的白细胞黏附以级联方式进行，其中整合素负责白细胞的牢固黏附和转运[17]。有证据表明，间充质干穿过毛细血管小静脉毛细血管以类似于白细胞归巢的方式[18]。尽管内皮细胞上ICAM-1的表达与活跃的间充质干细胞有关，但尚不清楚在间充质干细胞与ICAM-1的相互作用中存在哪些配体。

淋巴细胞功能相关抗原1（LFA-1）是α大号β2异源二聚体整联由两个链，CD11a和CD18的。它在免疫细胞的黏附和迁移[中起重要作用19]。LFA-1的主要配体是细胞间粘附分子-1（ICAM-1）[20.，21]。LFA-1和ICAM-1的相互作用通过内皮起着许多免疫应答过程，包括粘附和白细胞的轮回作用[17]。先前的研究已经表明，与MSC人平滑肌细胞的共培养增强VCAM-1依赖性迁移并且，在此过程中，LFA-1在MSC迁移中起重要作用[22]。许多研究已经证实，LFA-1的表达可以通过细胞因子，如IL-1，TNF-α被增强α,TGF -β[23，24]。已经发现这两个IL-1β和LFA-1在大鼠慢性食道炎高度表达[25]。最近的研究发现，用间充质干激酶抑制剂预处理滚装31-8425提高CD11a表达和诱导对ICAM-1 [MSC的牢固粘附26]。

IL-1信号通路已经表明IL-1β-诱导的IL-1R将激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应[27]。MAPK有三个成员，包括细胞外信号调节kinase1/2 (ERK1/2)、c-JUN n -末端激酶(JNK)和p38 [28]。已经显示了IL-1β单独可激活的p38，ERK1 / 2，和JNK1 / 2在成骨细胞[29]。此外，IL-1β星形胶质细胞和细胞外基质之间的细胞-基黏附调节已被证实是通过ERK1/2之间的交叉对话机制以及RhoA和Rho激酶的抑制[30.]。另一项研究表明，IL-1β激活肾近端小管细胞的p38蛋白激酶信号传导途径和增强细胞迁移能力[31]。

在本研究中，我们发现IL-1诱导MSC粘附于HUVECsβ。根据被引文献的结果，我们预测LFA-1/ICAM-1会发生msc - huveco -粘附相互作用。我们研究了IL-1通路，特别检查了IL-1诱导的p38 MAPK的作用β涉及IL-1β全身LFA-1表达式。我们的调查发现IL-1β介导的MSC粘附到内皮细胞取决于LFA-1 / ICAM-1的表达，其涉及p38蛋白激酶信号转导通路在LFA-1的表达。

2.材料和方法

2.1。细胞培养

脐带间充质干细胞(UC-MSCs)购自台湾新竹生物资源采集与研究中心。培养条件采用前面描述的方法制备[1]。Mesenchymal stem cells were cultured in a low glucose-defined medium consisting of 56% low-glucose Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM; Invitrogen, CA, USA), 37% MCBD 201 (Sigma, MO, USA), 2% fetal bovine serum (Thermo, Logan, UT), 0.5 mg/ml of AlbuMAX® I (Invitrogen, CA, USA), 50 nM L-ascorbic acid 2-phosphate (Sigma, MO, USA), 10 nM dexamethasone (Sigma, MO, USA), 1x antibiotic antimycotic solution (Thermo, Logan, UT), 1x insulin-transferrin-selenium-A (Invitrogen, CA, USA), 10 ng/ml of epidermal growth factor (PeproTech, NJ, USA), and 1 ng/ml of platelet-derived growth factor-BB (PeproTech, NJ, USA) at 37°C and 5% CO₂。When cells reached 70-80% confluence, they were detached using HyQTase (Thermo, Logan, UT) and reseeded at a ratio of 1 : 4.

从足月出生的母亲的同意而获得的来自人类脐带的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。隔离内皮细胞的方法，按照陈等人。方法 [32]。将HUVEC在1％明胶（Sigma公司，MO，USA）中培养，并保持在由98％的DMEM / F12，2％胎牛血清（热，洛根，犹他州），1的自制介质 μ克/ ml氢化可的松（Sigma公司，MO，USA），20 μg/ml硫酸肝素(Sigma, MO，美国)，250 ng/ml胰岛素(Sigma, MO，美国)，1x青霉素-链霉素溶液(Thermo, Logan, UT)， 5 ng/ml表皮生长因子(PeproTech, NJ，美国)，10 ng/ml成纤维细胞生长因子基础(PeproTech, NJ，美国)，温度为37℃，CO为5%₂。When cells reached 70-80% confluence, they were detached using HyQTase (Thermo, Logan, UT) and reseeded at a ratio of 1 : 3. Passages 3 to 4 were used in all the experiments.

2.2。细胞因子和抑制剂

MSCs在含0.5%胎牛血清(Thermo, Logan, UT)的无血清DMEM/LG中饥饿15-18小时，然后用2μ克/ ml的IL-1βIL-1RA抑制剂(PeproTech，美国新泽西州)在细胞因子刺激前2小时。将LFA-1/ICAM-1抑制剂洛伐他汀(美国开曼化学公司)以50的浓度加入细胞共培养μM. MAPK p38抑制剂SB 203580（5 μM) (Tocris, UK)加入IL-1后细胞培养β刺激。根据我们之前的研究，100 ng/ml的人重组IL-1处理MSCsβ在18小时内，迁移显著增强，而不影响细胞活力和细胞增殖[10，32]。At the indicated time, cells were incubated for 30 minutes with 100 ng/ml human recombinant IL-1β(PeproTech, NJ，美国)在这些抑制剂的持续存在。

将HUVECs在含1%牛血清白蛋白的无血清DMEM/F12 (Sigma, MO, USA)中饥饿3小时，然后用100 ng/ml IL-1处理β6小时。

2.3。细胞活力测定

细胞在含0.5%胎牛血清的无血清DMEM的96孔板中沉积15-18小时，用100 ng/ml的人重组白细胞介素-1刺激细胞β30分钟。MTT测定试剂（3-（4,5-二甲基-2-噻唑基）-2,5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物）（SERVA，海德堡，德国）直接加入到培养基中，并将细胞温育在37℃下4小时。然后将DMSO加入到细胞中（Sigma公司，MO，USA）处理2小时。The results were detected using multimode microplate readers (Infinite 200, TECAN) under absorbance of 545 nm.

2.4。Western印迹

为了分离胞质和膜相关蛋白，使用Mem-PER™Plus膜蛋白提取试剂盒(Thermo, IL，美国)处理细胞，同时使用Halt蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Thermo, IL，美国)。首先用PBS清洗并刮除细胞。300g离心5分钟。细胞微球用洗涤液洗涤，300 g离心5分钟。第二步，在细胞微球中加入含1%蛋白酶抑制剂的渗透缓冲液，4℃孵育30分钟，4℃16000 g离心15分钟，收集含细胞质蛋白的上清。为获取膜蛋白，在微球中加入含1%蛋白酶抑制剂的增溶缓冲液，4℃孵育60分钟，4℃16000 g离心15分钟，收集含增溶膜及膜相关蛋白的上清液。为制备整个细胞裂解液，用PBS洗涤细胞，使用M-PER哺乳动物蛋白提取试剂(Thermo, IL, USA)裂解，使用Halt蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Thermo, IL, USA)裂解，4℃14000 g离心10分钟，收集预清的细胞提取物。使用Coomassie Plus (Bradford)蛋白测定试剂(Thermo, IL, USA)，使用multimode microplate reader (Infinite 200, TECAN)测定蛋白浓度。蛋白质样品用8%的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，转移到聚偏二氟乙烯膜(默克公司，达姆施塔特，德国)。5%的膜被鱼明胶阻断缓冲区(Amresco,哦,美国)1小时,然后用反CD11a孵化抗体(美国GeneTex) 1: 4000稀释,anti-p38 MAPK抗体(美国圣克鲁斯,TX) 1: 200稀释,phospho-p38 MAPK主要抗体(细胞信号、马、美国)在一夜之间在4°C。 The blots were washed with Tris-buffered saline with Tween 20 (TBST) and incubated with goat anti-rabbit secondary antibody for 1 hour at room temperature. Membranes were washed and then detected by an enhanced chemiluminescence substrate using the Luminescence Imaging System (LAS-4000, GE, USA).

2.5。细胞免疫荧光和图像

细胞s were plated in microscope cover glasses (12 mm) for 2 days, incubated in starvation medium for 16 hours, and then stimulated with interleukin-1β在不同的时间。细胞s were fixed in 4% paraformaldehyde (Ferak Berlin GmbH, German) for 15 min. Cells were then blocked with 2% bovine serum albumin (BSA, Sigma, MO, USA) and then incubated with the anti-human CD11a antibody (GeneTex, USA) at 1 : 200 dilution or ICAM-1 antibody (R&D system, USA) at 1 : 100 dilution at 4°C overnight. The blots were washed with PBS and incubated with rabbit anti-mouse secondary antibody or mouse anti-rabbit secondary antibody (1 : 200) for 1 hour at room temperature. After washing three times with PBS, cells were stained using Hoechst 33258 (Sigma, MO, USA) at 1 : 5000 dilution to identify cell nucleus and mounted with a Fluorescence Mounting Medium (Dako, CA, USA). Images of cells were acquired using a laser confocal microscope (FV1000, Olympus).

2.6。免疫荧光研究粘附试验

将HUVEC在通道3-4接种于24孔板中。3-4天后，汇合单层形成，然后饥饿3小时，用IL-1处理的β6小时。的MSC标记钙黄绿素AM（Tocris，UK）6 μM.然后，的MSC（ μl)与HUVECs在含1% BSA的DMEM/F12培养基中，37℃共培养30分钟。粘附后，PBS与Ca结合^{2 +}/毫克^{2 +}洗涤细胞3次，以去除非粘附细胞。用Hoechst 33258 1:3000稀释染色，鉴定细胞核，4%多聚甲醛固定15分钟，荧光固定培养基固定。细胞图像通过荧光显微镜(DM6000B，徕卡)获得。在10倍放大倍数(5个随机视场)下计数细胞数。

2.7。统计分析

统计分析采用棱镜5软件来执行。定量数据是由学生的分析 -检验和单因素方差分析。值<0.05被认为是统计学显著。

3.结果

3.1。il - 1β刺激LFA-1表达的MSCs

确定IL-1是否β刺激LFA-1在MSC细胞膜上表达水平，免疫细胞化学染色分析荧光强度。100 ng/ml IL-1处理间充质干细胞β诱导LFA-1表达15、30、120、360分钟。结果表明，IL-1β诱导的LFA-1的表达，以在30分钟时的最高水平。为了进一步证实LFA-1的表达，我们使用直方图来分析数据。如图图1（a），LFA-1的荧光强度时的MSC用IL-1处理的大大增加β和其他组的人进行30分钟的对比IL-1后细胞存活率无明显变化β治疗相比于对照组（增刊图30分钟。1)。

为了调查是否IL-1β诱导LFA-1蛋白在间充质干细胞中的表达，我们用IL-1处理间充质干细胞β(100 ng/ml)持续15、30和120分钟。提取总蛋白，分离膜蛋白。我们使用Western blotting分析LFA-1蛋白表达(图)图1（b）和1 (c))。结果表明，IL-1后LFA-1蛋白表达显著上调β在细胞膜上处理30分钟。

进一步确认IL-1是否β可诱导MSC细胞膜LFA-1蛋白的表达，进行了Western印迹分析。的MSC用IL-1预处理β抑制剂，IL-1RA（2 μ微克/毫升）处理2小时，然后用IL-1 cotreatedβIL-1RA 30分钟结果表明，该抑制剂对IL-1有显著抑制作用β-诱导LFA-1蛋白表达(图)1 (d)和1 (e))。为了明确IL-1RA处理是否会影响细胞存活率，我们进行了细胞存活率检测，结果显示IL-1RA处理150分钟后与对照组(Suppl)相比无明显变化。无花果。1)。

3.2。il - 1的影响β诱导由LFA-1 / ICAM-1相互作用MSC粘附能力的HUVEC

确定il - 1β-刺激HUVECs细胞膜上ICAM-1表达水平，免疫细胞化学染色分析细胞蛋白位置和荧光强度。用100 ng/ml IL-1处理HUVECsβ诱导ICAM-1表达15、30、120、360分钟(图)2(一个))。结果表明，IL-1β诱导细胞膜上ICAM-1表达达到最高水平。细胞活力测定结果显示，IL-1作用后HUVECs细胞活力无明显变化β治疗相比于对照组（增刊图360分钟。1 b)。

为了进一步证实，IL-1β可以增强MSC细胞粘附能力，与IL-1预处理的MSC进行细胞粘附试验β抑制剂，IL-1RA 2小时，然后用IL-1 cotreatedβ30分钟。结果表明，IL-1RA显著抑制IL-1β与IL-1相比，-诱导MSC与激活的HUVECs粘附β治疗组(图2 (b)和2 (c))。然而，IL-1RA的治疗产生了在与未活化的HUVEC共培养抑制MSC粘附无显著效果。

观察IL-1是否β诱导的MSC的粘附能力的HUVEC通过LFA-1 / ICAM-1相互作用的影响，使用了LFA-1抑制剂洛伐他汀。进行细胞粘附试验研究MSC和内皮细胞之间的细胞 - 细胞粘附的能力。洛伐他汀对MSC粘附能力，IC 50值是50 μM(增刊。无花果。2)。骨髓间充质干细胞经IL-1预处理后进行细胞粘附试验β，用calcein AM标记，与未处理或IL-1处理的HUVECs共培养30分钟β6小时。为了研究LFA-1/ICAM-1相互作用的作用，我们添加了抑制与HUVECs共培养的MSCs相互作用的lovastatin。当两个细胞都用IL-1处理时β，相比于对照组时的附着率显著增加。此外，粘附细胞洛伐他汀治疗组显著降低（有/无的HUVECs IL-1β治疗)(图2 (d)和图2（e）)。洛伐他汀治疗30分钟后，与对照组(Suppl)相比，细胞存活率检测显示MSCs和HUVECs无明显变化。无花果。1 b)。当两个细胞都用IL-1处理时β，相比于对照组时的附着率显著增加。此外，粘附细胞洛伐他汀治疗组显著降低（有/无的HUVECs IL-1β治疗）。

3.3。p38 MAPK信号通路参与IL-1β-介导LFA-1在间充质干细胞中的表达

为了研究通过蛋白质合成或易位由IL-1诱导的LFA-1蛋白的表达βMSC中，将细胞与该蛋白质合成抑制剂放线菌酮预处理（20 μg/ml)处理1小时，然后与IL-1共处理β30分钟。结果表明，环己酰亚胺抑制IL-1β在细胞膜上诱导的LFA-1蛋白水平的表达（图3(一个)和图3（b））和降低的IL-1β-诱导MSC粘附HUVECs的能力(图)图3（c）和3（d）)。

3.4。p38 MAPK通路对IL-1的作用β介导的MSC粘附血管内皮细胞

观察有无p38蛋白，在AKT，ERK1 / 2，JNK和信号传导途径的IL-1β诱导MSC细胞膜冲击LFA-1蛋白的表达，我们进行了免疫细胞化学MSC中染色LFA-1。的MSC与p38蛋白激酶抑制剂SB 203580（5处理 μAKT抑制剂GSK690693 (20)μERK1/2抑制剂U0126 (20)μ和JNK抑制剂SP600125 (20 nM)，再与IL-1结合β30分钟。结果显示，p38 MAPK抑制剂SB 203580抑制了非il -1和LFA-1的表达β全身和il - 1β诱导的MSC（图图4（a）)。我们还发现AKT抑制剂GSK690693和ERK1/2抑制剂U0126仅能抑制非il -1中LFA-1的表达β是-诱导的，而不是IL-1β治疗,msc。Western blot结果显示，骨髓间充质干细胞经IL-1预处理β诱导p38 MAPK磷酸化(图)图4（b）），表明IL-1β引起的p38信号传导途径。我们进一步证实，在IL-1的P38 MAPK通路β诱导MSC细胞膜影响LFA-1蛋白的表达。结果表明，IL-1β与IL-1相比，SB 203580显著降低了蛋白的表达β治疗组(图图4（c）和图4（d）)。

进一步证实p38 MAPK通路在IL-1中的作用β诱导的MSC的粘附能力，在用IL-1的MSC cotreated进行细胞粘附试验β和p38蛋白激酶抑制剂SB 203580.的MSC与所述抑制剂SB 203580处理（5 μM）或与SB 203580和IL-1 cotreatedβ30分钟(数字图4（e）和图4（f）)。数据表明抑制剂SB 203580没有影响MSC粘附能力在与对照组比较。但cotreated SB 203580与IL-1β与IL-1相比，显著抑制了间充质干细胞对活化的HUVECs的粘附β治疗组。此外，未激活的HUVECs中间充质干细胞的粘附也呈现同样的趋势。细胞存活率检测显示，与对照组(Suppl)相比，使用SB 203580治疗30分钟后，MSC细胞存活率无显著变化。无花果。1)。

4。讨论

间充质干细胞（MSC），用于他们的能力再生受损组织是公知的[33]。目前，在MSC治疗两种分娩方式：直接植入局部或全身性血管内给药。以前的研究发现，干细胞往往在流通死，不留船[6]或成为陷入不必要的器官[34]后的静脉注射到体内。只有1％的MSCs都能够找到自己的方式向靶组织[35-37]。为了使MSC治疗有效，对MSC归巢机制的研究至关重要。

导引机构有三个步骤:滚动、粘附和转移。在本研究中，我们关注的是细胞粘附步骤，因为许多报道表明，比较细胞粘附分子之间的细胞-内皮细胞-粘附相互作用，可以进一步了解MSC归巢的潜在机制[38，39]。根据Segers等人的研究，TNF-活化了间充质干细胞和心脏微血管内皮细胞α或il - 1β之前粘附可以提高MSC粘附于内皮细胞[40]。

在我们的研究，我们推测IL-1β诱导MSC和HUVEC细胞黏附相互作用。既往研究表明间充质干细胞的VLA-4/VCAM-1粘附作用形成对内皮细胞的粘附[15，41]。Ko等人发现，用棕榈化蛋白G (PPG)包裹间充质干细胞，然后用抗ICAM-1抗体治疗，可促进间充质干细胞附着于内皮细胞上[42]。在MSC粘附阶段检测到内皮细胞上ICAM-1的表达，但尚不清楚在MSC与该受体的相互作用中存在哪些配体[6]。所述LFA-1 / ICAM-1受体 - 配体对是中央的白细胞发起粘附到内皮细胞[43]。综上所述，我们推测与IL-1治疗，干细胞和血管内皮细胞β将诱导LFA-1 / ICAM-1细胞粘附相互作用。在我们的研究中，我们使用免疫印迹和免疫荧光染色检测IL-1β-诱导LFA-1在间充质干细胞上表达(图)1)和il - 1β-诱导HUVECs上ICAM-1表达(图)2)。相反，IL-1刺激HUVECsβ不诱导LFA-1的表达（增刊图3)。IL-1刺激间充质干细胞β未诱导ICAM-1表达。无花果。4)。在体外研究细胞粘附试验表明，该LFA-1拮抗剂抑制的洛伐他汀MSC粘附于内皮细胞。洛伐他汀是能够在体外抑制LFA-1 / ICAM-1相互作用通过结合至LFA-1 L-站点。洛伐他汀不结合到L-站点样在其他I基序结构域如β2整联的Mac-1（也称为细胞CD11b / CD18）[44，45]。既往研究表明，阻断LFA-1/ICAM-1相互作用的洛伐他汀可降低t细胞的活化。这可能是一种潜在的治疗炎症和免疫抑制的方法[46]。我们的结果表明，当与MSC和共培养的HUVECs洛伐他汀能抑制LFA-1 / ICAM-1细胞粘附相互作用（图2 (d))。此外，通过激活IL-1β接着用洛伐他汀治疗显著抑制MSC粘附于内皮细胞。有了这些结果，我们证明了IL-1β通过促进LFA-1 / ICAM-1细胞粘附相互作用的上调MSC粘附于内皮细胞。有趣的是，IL-1β-诱导的间充质干细胞粘附在未激活的HUVECs上并没有显著增强间充质干细胞的粘附能力。这一结果并不让我们感到惊讶，因为我们发现IL-1处理的HUVECs中ICAM-1高表达β在与对照组比较例6小时（图2(一个))。通过对急性炎症的研究，我们知道内皮细胞的激活是由受损组织中的炎症因子介导的。骨髓间充质干细胞通过血流作用于受损组织中活化的内皮细胞。炎症因子在很短的时间内诱导细胞-内皮细胞黏附[47，48]。从我们的结果，我们证实IL-1的存在β最初只需要很短的时间，以诱导对HUVECs MSC的LFA-1 / ICAM-1细胞粘附相互作用。

根据调查的结果在这项工作中提出，IL-1β诱导的MSC与上调LFA-1的表达和增强的时间很短的时间的细胞粘附的能力的能力。为了确定这些作用是否需要新的蛋白质合成，的MSC用放线菌酮，翻译抑制剂，预处理IL-1前β治疗。我们发现用放线菌酮衰减LFA-1蛋白的表达和细胞粘附能力在治疗。这些结果表明，在需要新的蛋白质合成。下一步，我们要进一步研究负责IL-1介导的下游β全身LFA-1表达式。il - 1β触发IL-1途径的下游信号传导分子核因子κB（NFκB）和MAPK（P38，JNK和ERK）途径。以往的研究表明，p38蛋白是IL-8激活LFA-1，MAC-1的主要介质，和α在嗜中性粒细胞4-整联49]。我们的结果(图图4（a）)在IL-1免疫细胞化学染色中显示β在抑制剂(p38 MAPK, JNK, ERK1/2，和Akt)的协同作用下，只有p38 MAPK抑制剂影响IL-1β全身LFA-1表达式。这些结果证明，所述p38蛋白抑制剂显著块LFA-1的表达。此外，我们检测了LFA-1蛋白水平的影响IL-1的共处理β通过p38 MAPK抑制剂和细胞粘附实验来确定p38 MAPK在细胞-内皮细胞粘附机制中的作用(图)4)。结果表明，IL-1β诱导通过MSC中的p38蛋白激酶途径中的LFA-1蛋白表达的路径。另外，p38蛋白抑制剂治疗不影响MSC粘附到内皮细胞，而共处理的IL-1的β与p38蛋白抑制剂显著降低MSC粘附能力。以前的研究结果证实p38蛋白在IL-1的关键作用β全身的il - 1通路。

5.结论

总之，这项研究的结果表明，IL-1β促进MSC粘附于内皮细胞的LFA-1 / ICAM-1细胞粘附相互作用和进一步表明，IL-1β在通过p38蛋白的MSC（诱导LFA-1的表达图五)。这项研究表明，通过归巢到炎症部位之前，增强对内皮细胞黏附MSC以提高基于细胞疗法的治疗效果的新策略。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包含在本文中。

利益冲突

作者宣称，他们没有竞争的利益。

致谢

这项工作由中华民国台湾科技部资助，项目编号为MOST-104-2320-B-010-0090MY3和MOST-107-2320-B-010-029-MY3 (H.-S.)。和教育部共同制定的台湾顶尖大学计划。王。作者要感谢杨文义编辑了这份手稿。

补充材料

补充图1:药物对MSCs和HUVECs细胞毒性影响的细胞活力测定。(A) IL-1处理的间充质干细胞β30分钟后，IL-1RA 150分钟，洛伐他汀30分钟，SB 203580 30分钟，放线菌酮90分钟，和DMSO 90分钟。（B）血管内皮细胞用IL-1β处理过的β6小时，洛伐他汀30分钟，和DMSO 30分钟。数据通过多模酶标仪量化。数据显示为 （ )。（N.S .: nonsignificance）。补充图2：不同浓度的洛伐他汀抑制IL-1β诱导MSC粘附到内皮细胞;il - 1β不同浓度的洛伐他汀可以抑制-诱导的MSCs到HUVECs。数据代表 （ ）（ ， ，和 )。补充图3：LFA-1在HUVEC中的表达预处理用IL-1β和内皮细胞没有处理的IL-1β作为对照组或用IL-1β处理过的β为15，30，120，和360分钟。对于LFA-1（绿色）免疫细胞化学和内皮细胞DAPI（蓝色）。补充图4：ICAM-1的MSC中的表达预处理用IL-1β的MSC没有处理过的IL-1β作为对照组或用IL-1β处理过的β为15，30，120，和360分钟。对于ICAM-1（绿色）免疫组化染色和MSCs的DAPI（蓝色）。（补充材料）

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