潜在的抗肿瘤效应的树突细胞融合与肿瘤干细胞在肝细胞癌

文摘

肝癌干细胞被报告为治疗后残余肿瘤细胞,肿瘤复发中发挥关键作用。融合与肿瘤细胞树突细胞(dc)是一个理想的方法来有效地激活抗肿瘤免疫力在活的有机体内。DC /肝癌干细胞疫苗提供了一个潜在的策略生成多克隆免疫反应的多个肿瘤干细胞抗原包括那些尚未不明。评估的潜在能力DC /肝癌干细胞肝癌疫苗,CD90⁺HepG2细胞HepG2肝癌细胞系的排序。直流和CD90⁺HepG2和直流HepG2融合细胞被聚乙二醇(PEG)的诱导。融合细胞增殖的影响,评估了淋巴细胞的免疫功能转换通过FCM和ELISA试验,分别。具体融合cell-induced ctl对HepG2的细胞毒性试验是由CytoTox 96非放射性细胞毒性试验设备在体外。最后,预防肝癌的形成在活的有机体内描述了在一个小鼠模型。FCM分析的结果表明,CD90的比例⁺HepG2细胞球的CD90⁺HepG2浓缩悬浮球体文化从98.7%到99.5%不等,CD90 57.1%⁺HepG2 / DC融合细胞被成功构建。融合细胞表达一种更高层次的costimulatory CD80分子,CD83、CD86和mhc i和mhc ii分子HLA-ABC HLA-DR比未成熟dc ( )。和融合的功能分析cell-induced ctl CD90插图⁺HepG2 / DC融合细胞表现出更大的激活淋巴细胞增殖的能力在体外( )。的CD90⁺HepG2 / DC-activated ctl对CD90有具体的杀人能力⁺HepG2细胞在活的有机体内。这些结果表明CD90⁺HepG2 / DC融合细胞可以有效地刺激T淋巴细胞生成特定针对CD90 ctl⁺HepG2细胞。这可能是一个有前途的战略为肝细胞癌免疫治疗。

1。介绍

肝细胞癌是一种常见的恶性肿瘤的预后。只有少数的病人有资格获得手术和肝细胞癌的5年生存率小于15%,因为转移和复发1,2]。此外,肝细胞不合理的化疗和放疗。因此,迫切需要构建新颖有效的策略来抑制肝癌的转移和复发。

近年来,肝癌肿瘤生物学的进步在理解(3- - - - - -5)已经证明手术后肝细胞癌的转移和复发是癌症干细胞密切相关(二者)。二者都是一小群细胞被赋予的能力,使自己通过自我更新和产生成熟细胞分化,负责肿瘤的形成和发展。这些研究结果提醒我们,幸存的二者可能会造成肿瘤复发和传统癌症治疗的失败。因此,针对二者将是一个有效的治疗策略抑制肿瘤复发。根据先前的研究6- - - - - -9),CD90⁺表型的细胞被认为是二者的肝癌细胞系,因为更大的克隆形成的特点在体外、更高的增殖能力和更大的肿瘤发生的能力在活的有机体内相比正常的肝细胞。

树突状细胞(dc)是最重要的强大的抗原递呈细胞”在活的有机体内,突出表达costimulatory分子和唯一能够诱导的主要免疫反应(10]。DC /肿瘤细胞融合,首先由龚et al。11),可以处理和提供一个广泛的肿瘤抗原包括肿瘤相关Ag (TAA)和肿瘤特异性Ag (TSA)自体T细胞,然后有效地诱导特异性T细胞免疫。最近,据报道,李et al。9],DC疫苗使用肺CSC抗原诱导MHC表达,细胞因子的生产、淋巴细胞浸润和长期预防前列腺癌。此外,它可能是某些干细胞标记物表达的二者可能拥有不同的抗原性,从而提供增强的免疫疗法的机会。到目前为止,DCs装满CSC抗原的可能性在癌症免疫疗法已被证明。然而,与二者融合DCs的效率还没有在文献中。在这项研究中,我们开发了一个DC / CSC疫苗和评估肝细胞癌二者的CTL反应。

2。材料和方法

2.1。肿瘤细胞系

人类肝癌细胞株HepG2得到来自美国类型文化集合(写明ATCC)。rpmi - 1640年HepG2细胞培养介质(Gibco表达载体,卡尔斯巴德,CA,美国)和10% (/胎牛血清和100 U /毫升青霉素和链霉素37°C在湿润的气氛中补充公司为5%₂。

2.2。CSC排序和浓缩悬浮球体文化

细胞分类是由流式细胞术在BD FACSVantage SE系统(美国圣地亚哥BD生物科学)。HepG2细胞被贴上一个FITC-conjugated anti-CD90抗体(美国圣地亚哥BD生物科学)根据制造商的指示。然后,排序细胞的纯度被流式细胞术估计。根据CSC悬挂球文化的浓缩方法从先前的研究12),CD90排序⁺HepG2细胞首先用PBS洗净去除血清,然后悬浮在无血清IGF媒体,EGF (20 ng / ml)(研发系统,明尼阿波利斯,美国),和B27(20毫升/ l) (Gibco表达载体,卡尔斯巴德,CA,美国)。悬浮细胞被镀在超低附件25厘米²培养瓶(美国纽约康宁Inc .)的密度1000细胞/毫升。下观察肿瘤领域形成一个倒在400 x光显微镜放大。在800转离心收集球体然后分离Accutase®(Sigma-Aldrich有限公司,圣路易斯,密苏里州,美国)。然后,由此产生的单细胞悬液离心机和resuspended无血清培养基继续球的形成。每5 - 8天球面通道是管理。

2.3。代的树突状细胞和T细胞

从hla a2 PBMCs被孤立⁺健康的捐赠者Ficoll-Hypaque (Sigma-Aldrich有限公司,圣路易斯,密苏里州,美国)密度梯度离心法,孵化在37°C six-well聚苯乙烯板有限公司5%₂2 h的rpmi - 1640。之后,不依从细胞被移除和纯化的尼龙毛列和随后在rpmi - 1640完全培养基培养20 U /毫升rhIL-2(美国落基山PeproTech Inc .)的自体T细胞。贴壁细胞补充rpmi - 1640完全培养基含有100 ng / ml集落刺激因子(gm - csf)(美国落基山PeproTech Inc .)和50 ng / ml rh-interleukin-4 (il - 4)(美国落基山PeproTech Inc .)。一半的培养基和细胞因子是每2天更换一次。悬架和松散附着细胞收获7天。

2.4。DC /肿瘤细胞融合制备

DCs是沾着绿色荧光染料CFSE (Sigma-Aldrich)和coincubated CD90⁺HepG2和HeG2(辐照5000 cGy)沾着红色荧光染料PKH26 (Sigma-Aldrich) DC:肿瘤的比例2:1,使用50%挂钩(PEG1450 Sigma-Aldrich)来提高融合过程描述的其他地方(13]。短暂,混合细胞悬液是用无血清rpmi - 1640 prewarmed 37°C和离心机在1000 rpm 5分钟。之后,盯住了resuspend 1分钟的球团矿和球团矿轻轻搅拌2分钟。然后,挂钩与血清rpmi - 1640洗3次,并融合细胞孵化与gm - csf完全rpmi - 1640中,il - 4,成熟细胞因子肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α,PeproTech) 37°C公司为5%₂。融合率评估通过流式细胞仪分析,混合细胞显示两个绿色和红色荧光被认为是细胞融合。细胞表面分子包括CD80、CD83、CD86, HLA-ABC和HLA-DR接受变化表达式也估计通过流式细胞术。

2.5。通过ELISA分析IL-12p70释放

成熟的DCs(水平IL-12p70发布 /上层清液)是评估使用协议与人类IL-12p70酶联免疫试剂盒(Neobioscience技术,中国)。光密度(OD)使用微量滴定板读者阅读450海里。

2.6。T淋巴细胞增殖试验

T细胞增殖检测由流式细胞术分析如前所述[14]。总之,同种异体的T细胞从不依从孤立PBMCs通过尼龙毛列和在PBS resuspended最终的浓度 细胞/毫升。接下来,细胞被标记为0.5μ在PBS PKH26 10分钟。 彩色T细胞被作为父代,和其他T细胞被播种在圆底6-well盘子和cocultured CD90⁺HepG2 / DC融合细胞,HeG2 / DC融合细胞,DC + HepG2细胞混合(mdc)和DC DC: 30 T细胞比例:1 5天在4°C不透光条件。5天之后,分析了T细胞直播控制基于向前散射/散射。

2.7。干扰素-γ酶联免疫吸附点分析

评估特定的T细胞反应,检测干扰素-γ生产有关酶联免疫斑点工具是在一个(研发系统,明尼阿波利斯,美国)根据先前的研究[15,16]。简而言之,无血清rpmi - 1640是帖子:96 -有关酶联免疫斑点板以及激活特定的干扰素-γ抗体涂层的平底盘子10分钟。然后,纯化T细胞与CD90 coincubated⁺HepG2 /直流,HeG2 / DC融合细胞,mdc和DCs在DC: T细胞的比例10:1 18 h公司37°C的5%₂。18 h后,井浆分别与200年和治疗μ信用证的冰冷的去离子水为15分钟溶解残留细胞并与PBS洗了5次。用生物素化的探测器有关酶联免疫斑点板进一步孵化的抗体1 h。盘子洗了5次再次PBS和孵化与链霉亲和素1 h。最后,盘子洗3次和发达3-amino-9-ethylcarbazole (AEC) 30分钟,之后每个是积极点视觉检查和有关酶联免疫斑点系统4.3版软件KS(卡尔蔡司,Hallbergmoos,德国)。

2.8。特定的ctl细胞毒性试验

的细胞毒性进行了化验使用CytoTox 96非放射性细胞毒性试验装备(WI Promega,麦迪逊,美国)。根据协议,自体淋巴细胞和刺激细胞(CD90 cocultured⁺HepG2 /直流,HeG2 / DC融合细胞,mdc和DCs)完全rpmi - 1640包含20 U / ml - 2 7天生成特定的ctl。然后,ctl收获和coincubated CD90与目标细胞⁺HepG2细胞和HeG2细胞在96 - U-bottom板在各种效应:目标比率10:1,30日:1,100:1 4 h。随后,50μl /上层清液的收集检测乳酸脱氢酶(LDH)释放的微型板块成像系统在490 nm的吸光度。控制,自发的LDH的释放被孵化的ctl或评估目标细胞,和LDH的最大释放被孵化评估目标细胞Triton x - 100年的0.1%。特定的LDH释放的结果计算如下: 。

2.9。在活的有机体内研究

雌性BALB / c裸小鼠,年龄在4到6周,获得广西医科大学医学实验动物中心的标准条件下和维护广西所描述的实验动物中心。小鼠随机分为5组(6小鼠),和五组划分如下: HepG2混合 CD90⁺HepG2-DC-CTLs, HepG2-DC-CTLs, mDC-CTLs, 3×10⁷DC-CTLs在100年μ(1)CD90 l体积⁺HepG2-DC-CTL组,(2)HepG2-DC-CTL组,(3)争取民主变革运动组,和(4)DC-CTL集团分别在100年μl体积,悬浮细胞皮下注入裸鼠;同时, 100年HepG2停牌μl PBS和皮下注入裸小鼠作为对照组(5)。肿瘤体积测量卡尺一周一次和评估 。12周细胞注射后,裸体小鼠牺牲。

2.10。统计分析

数据了 偏差。单向方差分析和费舍尔最显著差异测试进行估计的差异在每组直流表面分子,T细胞增殖化验,IL12p70和干扰素-γ分析和细胞毒性分析。肿瘤体积的不同组间被重复测量方差分析评价和费舍尔最显著的差异比较。所有统计分析SPSS 16.0软件包。被认为是在统计意义值< 0.05。

3所示。结果

3.1。CD90⁺HepG2细胞分类和浓缩

HepG2纯化了流式细胞术,24.2%最明亮的彩色CD90⁺HepG2细胞被排序。然后,CD90排序⁺HepG2细胞被悬浮球体丰富文化(12]。的CD90⁺HepG2细胞通常不依从三维球体形成集群(图1(一))。球之后,集群被收获,然后CD90的比例⁺HepG2细胞检测。(图的平均比例为99.5±1.3%1 (b))。

3.2。融合DC / HepG2和DC表型

CFSE-positive直流显示为绿色(图2(一个)),PKH26-positive CD90⁺HepG2红(图2 (b))。结果表明,CD90的融合率⁺HepG2 / DC为57.1%(图2 (c))和HepG2 / DC融合率为55.4%(数据没有显示)。表型细胞表面的表达变化costimulatory融合DCs的分子也通过流式细胞术分析。costimulatory CD80分子的表达、CD83、CD86和主要组织相容性(MHC)分子HLA-ABC和HLA-DR融合DCs仅高于mdc和DCs ( )(图3(一个))。否则,CD90没有显著区别⁺HepG2 / DC和HepG2 /直流。

3.3。IL-12p70生产

IL-12p70级别的上层清液中DCs的四组评估。CD90 IL-12p70生产⁺HepG2 / DCs, HepG2 / DCs、mdc和DCs , , ,和 ,分别。融合细胞和mDC和融合细胞的区别和直流是重要的( )(图3 (b))。否则,两组的融合细胞之间的差异不显著。

3.4。分析扩散和干扰素-γ同种异体T细胞的释放

T细胞增殖的流式细胞仪分析显示,T细胞的增殖指数(PI) CD90⁺HepG2 / DC组、HepG2 / DC组,争取民主变革运动组和DC组 , , ,和 ,分别。结果表明,融合细胞刺激T细胞增殖的能力强于mDCs和DCs(图3 (c))。此外,干扰素——的结果γ释放表明,融合cell-induced T细胞的细胞因子分泌的能力明显强于其他人(图3 (d))。π和干扰素-γ释放CD90水平⁺HepG2 / DC组高于HepG2 / DC组,但仍没有显著的差异。

3.5。CD90⁺对CD90 HepG2 / DC-CTLs有更多的细胞毒性影响⁺HepG2细胞

CD90的细胞溶解能力⁺HepG2 / DC-CTLs HepG2 / DC-CTLs mDC-CTLs, DC-CTLs瞄准CD90⁺HepG2细胞HepG2细胞进行评估。结果表明,CD90⁺HepG2 / DC-CTLs CD90目标⁺HepG2细胞中最为有效的其他群体的效应:目标比率包括10:1,30日:100:1 ( )(图4(一))。然而,CD90的效果⁺针对HepG2细胞HepG2 / DC-CTLs并不比其他群体效应:目标比率10:1和30:1 ( ),除了效应:目标比率到100:1(图4 (b))(表1)。

3.6。抗肿瘤免疫在活的有机体内引起CD90⁺HepG2 / DC-CTLs

调查是否CD90⁺HepG2 / DC-CTLs对二者可能抑制HepG2 cell-induced体内肿瘤的生长,CD90⁺HepG2 / DC-CTLs HepG2 / DC-CTLs mDC-CTLs, DC-CTLs注入裸小鼠皮下注射混合HepG2细胞。与其他组相比,肿瘤结节的时间成为CD90检测⁺HepG2 / DC-CTLs组显著延迟(图5(一个))。1星期内检测到肿瘤结节形成在对照组,但花了2周,3周,5周和6周形成DC-CTL, mDC-CTL, HepG2 / DC-CTL, CD90⁺HepG2 / DC-CTL组注射后,分别(图5(一个))。最后在体内实验中,CD90肿瘤大小⁺HepG2 / DC-CTL组四组之间的最小和的区别变得重要,7周后注射(数字5 (b)和5 (c))。

4所示。讨论

多种机制可能参与HCC的开发和进展,包括肝癌干细胞的存在和缺陷在这些细胞的免疫反应。纠正这些缺陷的一个策略是提高肿瘤抗原表达使用DCs。有充分的证据表明,dc与肿瘤细胞的融合是一种有效的方法引入肿瘤抗原进入DCs。肿瘤/ DC融合细胞表达的肿瘤抗原的成套设置costimulatory MHC分子,便于访问的肿瘤抗原的抗原表达的内源性和外源性途径,导致感应CD4和CD8 T细胞。在目前的研究中,CD90⁺作为一个CD90 HepG2细胞融合与DCs⁺HepG2 / DC疫苗。CD90⁺作为全细胞HepG2 / DC融合细胞应用方法允许CD90的表示⁺CSC抗原和多个抗原包括那些尚未确定。的结果在体外细胞毒性试验的工作表明,CD90⁺HepG2细胞/ DC融合方法不仅发达的能力目标HCC二者也有效地针对普通HepG2细胞。流式细胞术结果显示,疫苗的融合率为57.1%,和融合细胞有较高的表达水平的DC成熟分子CD83和HLA-DR costimulatory分子CD80和CD86比未成熟DC,这表明CD90的策略⁺HepG2 / DC疫苗是可行的。

独特的功能性肿瘤的标准/ DC细胞融合疫苗中使用的设置能力分泌细胞因子刺激自体免疫力,激活细胞毒性T淋巴细胞。例如,细胞因子il - 12是一个heterodimeric上调直流costimulatory分子的表达,刺激T helper-1反应,抗原CD8扩大⁺T细胞(14),和增强位于抗肿瘤疫苗的有效性13,17]。另一方面,目前的研究(15,18,19]证明证据融合细胞疫苗的免疫反应的细胞内的表达增加干扰素-γ。在我们的研究中,水平IL-12p70融合细胞组高于mDC和DC组。同时,融合细胞组刺激T细胞的能力强于其他两组,和水平的IFN-γ融合cell-CTL组高于mDC-CTL和DC-CTL组。然而,没有显著差异在上面的实验结果之间的两个细胞融合组。这个现象表明cytokine-secreting相似的能力,costimulatory分子表达,和能力来刺激T细胞这两个融合细胞组。

很明显,CD90⁺HepG2 / DC-CTLs瞄准CD90 + HepG2细胞最效率根据细胞毒性试验的结果,这表明,在融合过程中获得的DCs茎状的taa然后将抗原T细胞,激活T细胞cytolysis-specific ctl。与此同时,不仅是时间在CD90形成可检测肿瘤结节⁺HepG2 / DC-CTL组小鼠延迟与其他组相比,而且肿瘤大小是最小的在所有组。最合理的解释是,CD90⁺HepG2 / DC疫苗专门CD90死亡⁺HepG2干细胞样细胞,减少HCC-initiating细胞,延缓了肿瘤的形成。减少CD90⁺HepG2细胞、肝癌细胞的更新和扩散也停止,导致最后被小肿瘤。另一方面,这些结果证明CD90具备干细胞的特点⁺HepG2细胞。有趣的是,我们竟然发现CD90细胞毒性试验⁺HepG2 / DC-CTLs目标HepG2细胞更有效地比HepG2 / DC-CTLs效应:目标比100:1,但不是在其他比例不同。我们猜测效应器达到一定量时,CD90⁺HepG2 / DC疫苗可以杀死一些CD90⁺在一群HepG2细胞HepG2细胞。不幸的是,我们还没有透露具体机制如何ctl杀伤二者在这项研究中。关于机制仍是个问题,从DC疫苗针对CSC明显优越的结果。杨et al。3,13,20.)指出,CD90具备干细胞⁺HCC可能与Wnt /β连环蛋白,刺猬/ SMO, Oct3/4 Notch通路;然而,CD90如何⁺HepG2 / DC疫苗有效沟通的途径仍然是未知的。还需要进一步的多中心研究来揭示未来未知的机制。

数据可用性

图片和表用于支持这项研究的结果已经存入科学数据的推荐列表存储库(DOI:10.6084 / m9.figshare.6818276)。

伦理批准

所有适用的国际、国家和/或机构动物保健和使用指南。这篇文章不包含任何研究与人类参与者由作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

这项工作是由小林设计罗和Ye-Bin庞。工作主要是收集和分析的数据,Ye-Bin彭日成Bi-Yu Cui Xi-Lei李和张Xue-Hui。Ye-Bin彭日成剑,他和严冯起草和修订工作至关重要的知识内容。盛徐、吴Man-Ya和荣梁给的最终批准出版的版本。Ye-Bin彭日成,小林罗和兴郭已同意负责所有方面的工作在确保相关问题的准确性或完整性的任何部分工作适当的调查和解决。彭日成YB et al . DC /肝癌疫苗抗肿瘤效应。

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金(81360347),广西自然科学基金重点项目(2015号gxnsfda139024),广西医科大学的研究生课程建设项目(YJSA2017014),和大学科学研究基金项目广西(没有的教育部门。ZD2014027)。

引用

1. w·陈,r .郑,p . d . Baade et al .,“在中国癌症统计数据,2015年,”CA:临床医生的癌症杂志》上,卷66,不。2、115 - 132年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. 洛杉矶老爹,f·布雷,r·l·西格尔,j . Ferlay j . Lortet-Tieulent和a . Jemal“统计数据,2012年全球癌症,”CA:临床医生的癌症杂志》上,卷65,不。2、87 - 108年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. h . j .门敏m . j .病患y唐et al .,”转化生长因子-β适配器,β2-spectrin,调节细胞周期蛋白依赖激酶4减少肝细胞癌的发展,“肝脏病学,53卷,不。5,1676 - 1684年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. v . m . j .,马夸特因素,s . s . Thorgeirsson“癌症干细胞的表观遗传调控肝癌:目前的概念和临床意义,”肝脏病学杂志,53卷,不。3、568 - 577年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. o .呃,“在实体肿瘤癌症干细胞,”肿瘤学,32卷,不。10日,605 - 609年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. z f·杨,d . w Ho·m·n·Ng et al .,”CD90的意义⁺癌症干细胞在人类肝癌。”癌症细胞,13卷,不。2、153 - 166年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. z f·杨,p . Ngai, d . w . et al .,“识别本地和循环癌症干细胞在人类肝癌,”肝脏病学卷,47号3、919 - 928年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. k .张切,z苏et al .,“CD90促进细胞迁移,可行性和sphere-forming肝癌细胞的能力,”国际分子医学杂志》上,卷2,不。41岁,946 - 954年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. j . j . Li陈、李x和y钱”与骨髓间充质干细胞与癌症疫苗功效增强模拟微重力下,“生物化学和生物物理研究通信,卷485,不。3、606 - 613年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d O ' neill, s·亚当斯和n . Bhardwaj”操纵树突细胞生物学的主动免疫治疗癌症,”血,卷104,不。8,2235 - 2246年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m . j .龚d . Chen Kashiwaba, d . Kufe”诱导抗肿瘤免疫活动的融合的树突和癌细胞,”自然医学,3卷,不。5,558 - 561年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. j·j·李,y Yu王et al .,“建立一个新的系统文化和扩张的肝干细胞癌细胞,”癌症的信,卷360,不。2、177 - 186年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. j . Rosenblatt Avivi, b . Vasir et al .,“疫苗接种与树突细胞/肿瘤融合后自体干细胞移植诱导免疫和多发性骨髓瘤患者的临床反应,”临床癌症研究,19卷,不。13日,3640 - 3648年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. n . l .阿尔维斯f·a·阿罗萨和r·a·w·范肝”IL-21维持人类天真CD8 IL-15-activated CD28表达⁺T细胞”,免疫学杂志,卷175,不。2、755 - 762年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. b . Pahar j . Li T·洛克c·j·米勒和m . b . McChesney”检测抗原T细胞干扰素γ有关酶联免疫斑点和细胞因子表达的流式细胞术检测在恒河猴,”《免疫学方法,卷282,不。1 - 2、103 - 115年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. p . m .阿伦j·l·加里,c . Palena j·马歇尔,j . Schlom K.-Y。曾荫权,“有关酶联免疫斑点试验小说来提高检测抗原T细胞采用抗原递呈细胞表达人类B7-1 vector-driven,”《免疫学方法,卷279,不。1 - 2、183 - 192年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. s . Anguille e . l .史密特,e .狮子,v . f . van Tendeloo和z n . Berneman”临床对癌症治疗使用的树突细胞,”柳叶刀肿瘤学,15卷,不。7,pp. e257-e267, 2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. a . r . Pyzer d . e . Avigan, j . Rosenblatt”临床试验的树突细胞在血液恶性肿瘤癌症疫苗,”人类疫苗和免疫治疗,10卷,不。11日,第3131 - 3125页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . Avigan b . Vasir j .龚et al。”融合细胞接种的转移性乳腺癌和肾癌患者诱发免疫学和临床反应,”临床癌症研究,10卷,不。14日,第4708 - 4699页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. z诉方和k . k .田边”,肝细胞癌的临床管理在美国,欧洲,和亚洲:一个全面的和以证据为基础的比较和评论,”癌症,卷120,不。18日,第2838 - 2824页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2019 Ye-Bin彭日成et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。