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Mi Ri Hyeonwoo Kim Hyun,唱世界卫生大会金姆gydF4y2Ba,gydF4y2Ba ”gydF4y2Ba脂肪干细胞对伤口愈合的影响:比较的方法的应用程序gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba干细胞国际gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 卷。gydF4y2Ba2019年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 文章的IDgydF4y2Ba2745640gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba 页面gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 2019年gydF4y2Ba。gydF4y2Ba https://doi.org/10.1155/2019/2745640gydF4y2Ba
脂肪干细胞对伤口愈合的影响:比较的方法的应用程序gydF4y2Ba
文摘gydF4y2Ba
受损的伤口愈合是一个重大的医学问题。最近,细胞疗法关注干细胞了克服的挑战有缺陷的伤口愈合。在这项研究中,我们旨在评估脂肪中提取干细胞的有效性(对asc)在促进伤口愈合,使用不同的技术来管理他们。背全层皮肤缺损(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba收到了三组小鼠静脉注射对asc通过静脉注射,肌肉注射,分别和局部应用。三个注入盐水对照组在相同的方式。临床评估伤口愈合,伤口进行组织学检查和对asc GFP-labelled发现新成像系统。结果显示,对asc加速伤口愈合的独立的管理模式。组织学检查显示,加速reepithelialization也对asc和新分析表明许多在场的伤口,伤口愈合后消失。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
受损的伤口愈合是一个重要的临床医学问题和社会经济成本。再生医学最新进展揭示了有前途的方法来克服这种基坑支护gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。这些大多是专注于干细胞,专业自我更新的细胞能够分化成多种细胞类型(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
间充质干细胞可以从各种孤立的网站,包括骨髓、脂肪组织,和脐带血(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。骨骨髓来源干细胞(bmsc)可以促进组织修复,产生生长因子,细胞因子和细胞外基质(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba),促进其它细胞的迁移(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。Fathke等人表明,bmsc参与重建真皮成纤维细胞的数量和伤口愈合gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。脂肪干细胞(对asc)在脂肪组织中提取细胞bmsc的特点类似于(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。然而,与侵入性程序需要收获bmsc及其低收益率,对asc很容易获取和最小的捐赠者的发病率。(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)自第一报告祖克et al。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba对asc],许多研究已经证实,有相同的有利影响bmsc伤口修复、免疫调节和抗凋亡活动(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
在这项研究中,我们评估的有效性对asc在促进伤口愈合的啮齿动物全层切除背伤缺陷模型,使用各种方法来管理细胞,即静脉、肌肉和局部应用程序。gydF4y2Ba
2。方法gydF4y2Ba
2.1。隔离和脂肪中提取干细胞的文化gydF4y2Ba
健康纯净的转基因小鼠3 - 5周的年龄和表达绿色荧光蛋白(GFP)被用来准备对asc植入。她们通常喂食,并使用两周后的适应。gydF4y2Ba
在麻醉下,皮下脂肪组织是收获的腹股沟区GFP-transgenic老鼠。从腹股沟约1毫升脂肪组织脂肪垫和洗PBS(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)。这是用剪刀绞成碎片1毫米gydF4y2Ba3gydF4y2BaI型胶原酶消化和0.2% (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在摇晃孵化器1小时37°C。由此产生的细胞悬液在1200转离心10分钟,上层的丢弃,沉积物用来准备一个细胞悬液在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)包含50毫升/ L胎牛血清(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。样品的细胞被镀在100毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba组织培养板和维持在37°C在5%的二氧化碳。媒介改变了24 h后,每3天。对asc是收获90%的融合和通道1:3稀释。gydF4y2Ba
第三段对asc被用于所有的实验。在应用程序之前,对asc分离trypsin-EDTA和离心机在250年为0.25%gydF4y2BaggydF4y2Ba在室温下。浮在表面的颗粒是resuspended出院了在中。然后,通过40细胞被过滤gydF4y2BaμgydF4y2Bam细胞过滤器和稀释成低gydF4y2Ba 单细胞悬液在EP管。gydF4y2Ba
2.2。免疫荧光染色gydF4y2Ba
通过对asc 3被播种到6-well文化板块gydF4y2Ba /在dmem - 10%的边后卫,培养3天。PBS的细胞被洗净,与4%多聚甲醛固定30分钟,和孵化主要CD34、CD45、CD73, CD105抗体(Abcam 1: 200年,剑桥,英国)。细胞被洗了三次PBS和反应与兔子anti-mouse免疫球蛋白G(免疫球蛋白;1:200年,Abcam) 45分钟。荧光染色细胞获得的图像在倒置荧光显微镜下观察(Leica-DMI4000B + DFC405C,徕卡微系统公司位于德国)和分析徕卡LAS X图像编辑程序。gydF4y2Ba
2.3。伤口愈合gydF4y2Ba
所有程序都按照指南进行动物福利委员会首尔国立大学。六个雄性C57BL / 7小鼠(gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba重约20克,。他们保持一个自动12 h光/暗周期和标准老鼠喂养的婴儿食物和水。所有动物都检查每日的迹象炎症,溃疡和其他副作用。gydF4y2Ba
手术在全身麻醉在标准无菌条件下进行。一个gydF4y2Ba 全层伤口是在36个老鼠的背上。的角落里gydF4y2Ba 广场的差距被缝合底层防止伤口收缩肌肉。老鼠被分为6组:三个实验小组,分别静脉注射1毫升gydF4y2Ba 对asc(对asc / IV),肌内注射1毫升gydF4y2Ba (对asc / IM)也和局部应用1毫升gydF4y2Ba 对asc和纤维蛋白凝胶(Tissucol双核快速、百特、奥地利)(对asc /纤维蛋白)。三个注入盐水对照组相同的路线(盐/ IV,盐水/ IM和盐水/纤维蛋白)。gydF4y2Ba
2.4。估计伤口愈合领域gydF4y2Ba
手术后0天,伤口测量领域。伤口的大小测量1天,3(4)、7(9),手术后14。数码照片拍摄和伤口区域确定使用图像分析仪软件(ImageJ软件版本2、美国国立卫生研究院的贝塞斯达,医学博士,美国)。gydF4y2Ba
2.5。组织学检查gydF4y2Ba
在14天小鼠牺牲。伤员都经过了精心组织和周围皮肤切除,固定,固定在10%福尔马林一夜之间在4°C。部分被苏木精和伊红染色检查伤口的地位。gydF4y2Ba
2.6。荧光成像技术gydF4y2Ba
对asc GFP-labelled监控使用一个新成像系统系列200(卡尺生命科学,数据,美国)调查他们的移植和分布在伤口上。对asc GFP-labelled与新成像系统能被探测到。gydF4y2Ba
2.7。统计分析gydF4y2Ba
SPSS 20.0软件(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)是用于统计分析。测量数据被表示为gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba组间比较和学生的表现gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba测试或单向方差分析。的值gydF4y2Ba 被认为是具有统计学意义。gydF4y2Ba
本研究经首尔国立大学的伦理委员会批准。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
3.1。对asc的表征gydF4y2Ba
高水平的表达的对asc干细胞标记CD73和CD105根据免疫荧光染色。相比之下,他们的负面CD34、CD45(特定造血细胞标记)(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3.2。治疗对asc加速伤口愈合gydF4y2Ba
总的来说,加快伤口愈合过程ASC-treated老鼠比控制。所有伤口的初始区域1厘米左右gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。数据gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba显示数字图像代表的进化在每组伤口愈合天0,1,手术后3、7、14。没有观察到的差异不同治疗之间的1天,但是从第三天到第七天显著加速伤口愈合的观察在所有三个治疗组相比,控制。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
对asc的静脉注射(图gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba)被加速伤口愈合3天(ASC组的伤口大小1.07±0.27与对照组gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba对asc和肌内注射(图gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba在第四天)也加速伤口愈合(伤口ASC组的大小gydF4y2Ba 与对照组gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba而局部应用对ASC也加速伤口愈合3天(伤口大小的ASC组gydF4y2Ba 与对照组gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba )gydF4y2Ba和第七天(伤口ASC组的大小gydF4y2Ba 与对照组gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba3 (c)gydF4y2Ba)。总的来说,加速伤口愈合,以应对对asc在术后3 - 4天最明显。14天,所有对asc组接收的伤口完全愈合,而在控制治疗是不完整的。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
3.3。组织学分析gydF4y2Ba
组织学分析显示,组织再生加快ASC-treated老鼠。在控制(图gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba),上皮细胞并没有形成,真皮血管出现少,仍和炎性细胞浸润。所有的活检ASC-treated老鼠提供了一个良好的分层和分化的上皮细胞层。表皮和真皮层是形成良好的足够多血管和炎症(数字gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)控制gydF4y2Ba
(b)对asc的静脉注射gydF4y2Ba
(c)对asc的肌内注射gydF4y2Ba
(d)对asc局部应用gydF4y2Ba
3.4。对asc迁移到移植gydF4y2Ba
静脉注射组和肌内注射组,使用一个新成像系统对asc GFP-labelled检查来确定是否对asc管理被纳入伤口面积。在局部应用程序组的情况下,对asc直接蔓延在伤口上,这次考试是不必要的。gydF4y2Ba
我们发现大量的对asc GFP-labelled ASC-treated老鼠的伤口区域(数据gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba5 (b)gydF4y2Ba)。然而,这些细胞的数量一天9(图之后迅速下降gydF4y2Ba5 (c)gydF4y2Ba)。这个机制可能与减少伤口愈合过程的进展。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
伤口愈合是一个复杂的过程,涉及炎症扩散,改造(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。受损的伤口愈合的结果许多疾病如糖尿病、慢性肾功能衰竭、自身免疫性疾病和辐射损伤gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。妥协的影响伤口愈合常数等炎症,降低细胞渗透,和生长因子和细胞因子水平降低,导致有缺陷的进展通过伤口愈合的正常阶段。然而,因为许多不同的因素会导致慢性伤口愈合,难以识别其主要原因。gydF4y2Ba
细胞疗法无法愈合伤口的治疗是一个有吸引力的方法(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。干细胞是未分化的细胞具有自我更新属性能够分化成多种细胞类型。间充质干细胞可以从各种孤立的网站,包括骨髓、脂肪组织、脐带血和羊水。(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba他们分享许多属性与骨髓间充质干细胞可以分化为血管内皮细胞,成纤维细胞,成骨细胞,内层,神经细胞(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。对asc更容易隔离和相对丰富,使他们一个伤口修复和再生的潜在资源gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。先前的研究已经表明,adc生存比成熟细胞在缺氧和机械应力,而在低营养。此外,他们有能力转移到网站的炎症刺激祖细胞的增殖和分化,促进受伤的恢复细胞分泌生长因子和细胞因子和免疫调节和抗炎作用gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。所有这些特点促进伤口愈合。gydF4y2Ba
我们使用小鼠模型与一个切除伤口检查对asc对伤口愈合的影响。我们切除相当大的伤口区域(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba和缝合边缘深肌层,以避免伤口愈合伤口收缩,并允许通过造粒和上皮形成。gydF4y2Ba
细胞的方法管理会影响体内注射细胞的分布(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。我们旨在比较注射细胞发生了什么以及他们如何影响伤口愈合,当他们注入系统,注射局部,局部使用。在此前的一项研究中使用啮齿动物,通过静脉注射干细胞被发现在整个身体,主要在肺和肝脏,而且在脾脏和其他器官。另外,干细胞可以迁移到网站的炎症,可能通过旁分泌机制(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。局部肌肉注射在受伤部位可能是有益的,伤口只需要精确数量的细胞所需的特定的目的。此外,我们对asc应用与纤维蛋白胶混合局部直接作为结构支撑在伤口上。中包含的纤维蛋白原、纤粘连蛋白纤维蛋白胶还可以刺激细胞外基质的分泌和宿主组织的再生。局部应用程序在伤口上也可以缩短治疗时间和更准确。gydF4y2Ba
在我们的实验中,adc显著加速伤口愈合过程中,随着越来越多的快速reepithelialization和增加肉芽组织形成从第三天到第七天;这减少完成伤口愈合所需的时间。我们还观察到一个数量的迅速减少GFP-labelled adc后术后9天,这可能与伤口愈合的进展。gydF4y2Ba
我们的研究结果还表明,许多静脉注射adc迁移到切除伤口面积,对asc和肌内注射仍在注射部位出现的,就像对asc局部管理。这进一步支持这个想法,通过静脉注射干细胞迁移到网站,要求他们对asc本地管理和有类似的效果。gydF4y2Ba
5。结论gydF4y2Ba
目前的研究清楚地表明,政府的adc到老鼠全层伤口,静脉注射,肌肉,或局部,加速伤口愈合。有趣的是,除了增加愈合率,adc改善伤口的重塑,改善关闭。这些影响的adc不依赖政府的方法。gydF4y2Ba
数据可用性gydF4y2Ba
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。如果需要更多数据的出版本文之后,请求将被视为由通讯作者。gydF4y2Ba
的利益冲突gydF4y2Ba
作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba
作者的贡献gydF4y2Ba
Hyeonwoo金设计和执行工作。Mi Ri Hyun纠正数据并进行分析。金唱世界卫生大会解释数据和写和修改后的文章。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项工作是支持的研究安置基金首尔国立大学的新教师。gydF4y2Ba
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