炭疽毒素受体1 (ANTXR1)在胰腺癌干细胞来源于丰富原发肿瘤的文化

文摘

胰腺导管腺癌(PDAC)是目前癌症相关死亡的第四大原因。癌症干细胞(二者)已被证明是司机的胰腺肿瘤的生长、转移和药物抗性,但我们对这些细胞的理解仍受限于我们无法有效地识别和隔离。而许多标记能够识别胰腺癌二者(PaCSCs)自2007年以来被发现,毫无疑问,仍然需要更多的标记。炭疽毒素受体1 (ANTXR1)被认定为功能性三阴性乳腺癌二者的生物标志物,和PDAC患者分层的基础上ANTXR1表达水平显示,增加死亡率和浓缩的通路CSC生物学是必要的,包括TGF -β切口,Wnt /β连环蛋白和il - 6 / JAK / STAT3信号和上皮间充质转变,表明ANTXR1可能代表一个假定的PaCSC标记。在这项研究中,我们表明,ANTXR1⁺细胞不仅可检测整个小组7 PDAC patient-derived异种移植主要文化但是ANTXR1表达显著增加CSC-enriched 3 d球体的文化。重要的是,ANTXR1⁺细胞也coexpressed其他已知PaCSC标记如CD44、CD133和自发荧光,ANTXR1⁺细胞显示增强CSC功能和分子特性,包括增加自我更新和pluripotency-associated基因的表达,而ANTXR1^{- - - - - -}细胞。因此,本研究验证ANTXR1作为一种新的PaCSC标记,我们建议使用在这个肿瘤识别二者类型及其剥削PDAC CSC-targeted疗法的发展。

1。介绍

而胰腺导管腺癌(PDAC)目前是全球第四个癌症相关死亡的最常见原因,预计超过结肠癌和肺癌成为2030年癌症相关死亡的第二大原因(1]。这些令人震惊的统计数据是由于几个关键因素,包括缺乏和特定的早期症状,阻碍及时检测和诊断。因此,大约有80%的患者存在nonresectable晚期转移性疾病(2]。同样,内在的高转移性的性质和阻力PDAC肿瘤化疗和放疗(2]努力治疗基本无效,导致总体生存率平均不到7个月,5年生存率不到7% (1]。这些内在和定义PDAC特征被认为是部分原因是族群的存在肿瘤内的干细胞样细胞被称为肿瘤干细胞(二者),驱动肿瘤发生、转移和药物抗性(3- - - - - -5]。

为了隔离并更好地理解这些罕见的干细胞样细胞的生物学性质,已确定跨不同实体肿瘤包括大脑、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌和肝癌患者(6- - - - - -9),研究人员专注于识别标记呈现在细胞表面。在胰腺的背景下二者(PaCSCs),我们和其他人取得了重大进展在识别标记,能够识别PaCSCs细胞系(10,11从patient-derived)和主要文化建立异种移植(pdx) [12- - - - - -16),直接从主病人PDAC肿瘤(14,16),和血液中17]。尽管如此,升值,可能存在许多PaCSCs各亚群,或层次结构在特定PaCSC人口,它仍然需要继续寻找额外PaCSC标记。

炭疽毒素受体1 (ANTXR1)是一个564个氨基酸的跨膜蛋白编码的肿瘤血管内皮标记8 (八级)基因18),是一个已知的三个受体促进炭疽毒素进入细胞(19]。ANTXR1(或八级)专门结合无毒炭疽毒素保护性抗原(PA)的组成部分(20.]。上下文中的癌症,ANTXR1 /八级最初被圣克罗伊等人见过表达在肿瘤血管在肿瘤血管生成中发挥作用(18];然而,在2001年,Duesbery等人的研究表明在体外的V12 H-ras-transformed NIH 3 t3细胞或在活的有机体内注入炭疽致命毒素((LeTx): PA加上致命因子(低频))在无胸腺的裸小鼠植入ras-transformed细胞导致强烈的抗肿瘤反应,在某些情况下,造成完整的异种移植肿瘤回归(21]。这项研究强烈建议除了表达肿瘤脉管系统(18),ANTXR1也表达了对肿瘤细胞允许LeTx-mediated消除这些细胞。它后来被证实,ANTXR1是癌症细胞上表达不同的实体肿瘤包括乳腺癌、神经母细胞瘤,黑色素瘤(22- - - - - -24),神经母细胞瘤和黑色素瘤异种移植LeTx[也敏感23),突显出广泛的作用,这种蛋白质在癌症细胞生物学。现在欣赏ANTXR1或八级还可以绑定胶原蛋白的裂解C5A片段α3 (VI) [25,26]和与Wnt信号交互脂蛋白受体相关蛋白6 (LRP6) [26),调节胶原劈理(26]或下游Wnt信号(26,27分别),在肿瘤微环境的发展途径重要或具备干细胞在癌症细胞”。“这不会是直到2013年,然而,陈等人的一项研究将首次展示ANTXR1表达在胶原蛋白信号转移性乳腺癌二者和功能,以及Wnt信号,ZEB1表达式,CSC自我更新,侵略,致瘤性,和转移(26]。,这突出了一个重要的角色在乳房二者ANTXR1 ANTXR1在二者的表达与其他肿瘤实体,如PDAC,迄今为止尚未研究。

弥合这一差距,我们使用3 d球体文化建立pdx和丰富PDAC二者对表达式求值的ANTXR1 PaCSCs单独或结合其他已知CSC标记,如CD133, CD44,或自体荧光。我们不仅显示ANTXR1富含PaCSC球体与其他已知的文化和coexpresses PaCSC标记但是ANTXR1-positive细胞有自我更新能力的提高和整体ANTXR1-negative细胞相比pluripotency-associated基因的高表达。因此,这些研究验证ANTXR1新的PaCSC标记和我们进一步提出其在识别使用二者PDAC及其剥削CSC-targeted疗法的发展。

2。材料和方法

2.1。基因表达数据集和GSEA分析

除了TCGA基因表达数据集,数据集从Janky et al。28),从莫菲特et al。29日]从地理(GSE62165和GSE71729)下载;数据集从Jandaghi et al。30.)从ArrayExpress下载(e - mtab - 1791);贝利等人的数据集是包含在辅助图的出版工作(31日),元数据集,数据集包含GSE15471, GSE16515, GSE22780, GSE32688,生成所述[32]。患者分层的基础上ANTRX1使用最优截止通过计算表达式http://www.kmplot.com(33),和生存分析与r .生存率较被用来确定统计学意义。Cox回归分析用于计算风险比。样品包括在GSEA两组比较,使用特征基因集MSigDB数据库的集合。GSEA模块GenePattern套件的Broad研究所,1000年排列, 被认为是具有统计学意义。

2.2。主要人类胰腺癌细胞和Macrophage-Conditioned媒体

PDAC patient-derived异种移植(pdx)下获得材料转让协议与西班牙国家癌症中心(CNIO)、西班牙马德里(参考号I409181220BSMH)。异种移植处理如前所述[34)建立低主要PDAC PDX-derived在体外文化。PDAC PDX-derived文化是指由一个随机数的名称(例如,Panc185, Panc215, Panc253, Panc286, PancB06, PancB023,和Panc354)。PDAC PDX-derived文化和L3.6pl细胞被维护在RPMI媒体补充10%的边后卫和50个单位/毫升青霉素、链霉素和二性霉素b(所有从热费希尔科学)。所有文化都进行支原体检测至少每4周,和微卫星分析进行验证所有的细胞系。Macrophage-conditioned媒体产生MCSF-treated血液monocyte-derived文化从一个健康的捐赠者如前所述[16]。

2.3。免疫印迹

分析微管蛋白的蛋白质和八级水平,文化与里帕缓冲细胞溶解(σ)含有蛋白酶抑制剂鸡尾酒(罗氏应用科学,印第安纳波利斯)。蛋白质(50μg)是解决通过sds - page和转移到PVDF膜(Amersham法玛西亚,皮斯卡塔韦,NJ)。膜被阻塞,阻塞缓冲区(1 x TBS;5% BSA (w/v);渐变20 (0.5%v/v)),孵化1:500稀释的兔子anti-TEM8(猫没有。ab21270 Abcam)或1:5000稀释的鼠标anti-Tubulin(猫没有。T9026σ)一夜之间在4°C,洗了5次洗涤缓冲(1 x PBS;渐变20 (0.5%v/v)),孵化与辣根peroxidase-conjugated山羊anti-rabbit或山羊anti-mouse抗体(Amersham),并再次清洗去除游离抗体。结合抗体复合物与SuperSignal检测化学发光底物(Amersham)。

2.4。流式细胞术

细胞分析与4-laser调NxT声血细胞计数器(热费希尔科学)。样本resuspended流缓冲区(1 x PBS;3毫米EDTA (v/v);3%的边后卫(v/v)),下面的荧光标记的抗体被用来标记细胞30分钟在4°C:鼠标单克隆反CD133-PE(1: 20,猫没有。130-110-962,Miltenyi)、鼠单克隆反CD44-PE(1: 20,猫没有。130-095-180,Miltenyi),和鼠标单克隆反EpCAM-APC(1: 20,猫没有。130-113-260,Miltenyi)。ANTXR1检测,细胞首先贴上兔子反八级(1:50,猫没有。ab21270 Abcam),洗了三次1 x PBS和随后与goat-anti-rabbit孵化(Alexa 647年1:500年,猫没有。A27040表达载体)。DAPI用于马克和排除坏死细胞,和数据分析了使用软件FlowJo v9.3(树明星Inc .,亚什兰或)。Autofluorescent细胞兴奋的用蓝色激光488 nm和选为过滤器的十字路口530/40和580/30如前所述14]。

2.5。球体形成分析

球被培养生成 PDAC细胞每毫升超低附件板(康宁,纽约,纽约)暂停使用无血清DMEM / F12补充B27(1: 50,表达载体,沃尔瑟姆,MA), 20 ng / ml bFGF,和50单位/毫升青霉素和链霉素总共7天,使球体大小> 75μ米,如前所述35]。量化范围> 40岁μ分析了m, 1毫升的样品体积与卡西细胞计数器(罗氏应用科学,曼海姆,德国)。卡西细胞计数器测量原理是基于毛细粒子计数器与脉冲面积分析,允许细胞计数的决心,细胞浓度,细胞体积(峰值),和平均细胞直径,特别是直径40 - 80μ米,80 - 120μm, > 120μm。

2.6。RNA制备和实时定量PCR (RTqPCR)

GTC方法(36)是用于分离总RNA。简单地说,1μ克净化RNA是用于cDNA使用最大值合成第一链cDNA合成装备与dsDNase RT-qPCR(热费希尔科学),其次是SYBR绿色(PowerUp™SYBR™绿色主结构,热费希尔科学)RTqPCR使用一个应用生物系统公司StepOnePlus™实时thermocycler(热费希尔科学)。使用的热循环条件包括以下:predenaturation周期(10分钟在95°C)其次是40周期的变性(15秒95°C)和退火/扩展(1分钟60°C)。确定相对信使rna复制数据,标准曲线组成的系列稀释的质粒包含目标包括编码序列。循环阈值被规范化β肌动蛋白的水平。引物后的人类记录。KLF4:向前,5 - - - - - -ACCCACACAGGTGAGAAACC-3和反向,5 - - - - - -ATGTGTAAGGCGAGGTGGTC-3 ;SOX2:向前,5 - - - - - -AGAACCCCAAGATGCACAAC-3和反向,5 - - - - - -CGGGGCCGGTATTTATAATC-3 ;OCT3/4:向前,5 - - - - - -CTTGCTGCAGAAGTGGGTGGAGGAA-3和反向,5 - - - - - -CTGCAGTGTGGGTTTCGGGCA-3 ;NANOG:向前,5 - - - - - -TGAACCTCAGCTACAAACAGGTG-3和反向,5 - - - - - -AACTGCATGCAGGACTGCAGAG-3 ;ANTXR1 /八级:向前,5 - - - - - -ACAGGGTCCTCTGCAGCTTCAA-3和反向,5 - - - - - -GTCAGAACAGTGTGTGGTGGTGAT-3 ;和β肌动蛋白:向前,5 - - - - - -GCGAGCACAGAGCCTCGCCTT-3和反向,5 - - - - - -CATCATCCATGGTGAGCTGGCGG-3 。

2.7。统计分析

结果给出了 平均误差(sem)除非另有说明。使用双尾学生的统计分析 - - - - - -测试或单侧费舍尔的测试和意义被认为是 。所有分析使用GraphPad棱镜版本5.0摄氏度(美国加州圣地亚哥)。额外的实验细节可以在补充材料和方法。

3所示。结果

3.1。ANTXR1 /八级是在PDAC

而ANTXR1 /八级超表达已观察到在不同肿瘤实体(22,23),其表达和假定的角色在PDAC没有严格检查。使用公开可用的转录组数据集(Jandaghi et al。30.),Janky et al。28),元数据集(32],莫菲特et al。29日]),ANTXR1表达的转录水平进行评估。我们观察到,ANTXR1mRNA表达明显升高在整个胰腺肿瘤样本与相邻正常组织(图1(一)基底亚型(图)和肿瘤1 (b)),预后差,表达显著更高水平的ANTXR1相对于古典肿瘤亚型。TCGA数据集和贝利等人系列(31日好的注释,临床数据和用于确定高水平的ANTXR1表达与总体存活率下降。正如预期的那样,一个清晰的偏差,显著降低平均总生存期ANTXR1high-expressing病人相比ANTXR1TCGA low-expressing患者观察到的数据集,虽然不显著( ),类似的趋势与贝利等人观察系列(图1 (c))。接下来,我们进行GSEA比较患者样本表达高水平的ANTXR1(前75%)低水平的表达ANTXR1TCGA(25%)和贝利等人数据集。使用“标志”基因集集合,我们观察到显著和一般丰富通路在系列,包括TGF -β切口,Wnt /β连环蛋白和il - 6 / JAK / STAT3信号和上皮间充质转变(EMT)基因浓缩(数字1 (d)和1 (e)和补充图S1A-B)。同样,使用“Kegg”基因集采集、浓缩类似的途径,如Wnt /β连环蛋白、EMT TGF -β观察信号在两个数据集(补充图S1C-D)。此外,浓缩与胶原重塑相关途径,细胞外基质,和附着力也丰富,符合结果将ANTXR1与裂解C5A胶原蛋白绑定(补充图S1C-D)[25,26]。

3.2。ANTXR1 /八级在胰腺二者

因为许多通路参与CSC生物学中丰富ANTXR1高人口,考虑到之前发表ANTXR1表达式和乳房二者之间的联系(26),我们着手确定ANTXR1 PaCSCs过表达。使用L3.6pl细胞和PDX-derived小组主要文化,ANTXR1蛋白质和mRNA表达决心在附着文化(非浓缩干细胞)和3 d球体文化(CSC丰富),免疫印迹和RTqPCR分析,分别为(数字2(一个)和2 (b))。使用这两种方法,我们观察到的表达增加ANTXR1 CSC-enriched球体文化与附着单层控制。这不仅明显增加血清总蛋白和mRNA水平,但ANTXR1细胞表面表达也显著增加CSC-enriched球体文化(图2 (c))(图5的7 PDX文化测试2 (d))。有趣的是,尽管L3.6pl细胞已被证明含有CD133和趋化因子受体CXCR4 double-postive CSC人口(13),这些细胞没有显示ANTXR1增加细胞表面表达在培养3 d球体。

3.3。ANTXR1 / TEM8-Positive在肿瘤细胞检测,可以诱导

以确定ANTXR1⁺细胞可以在刚发现消化pdx 3低pdx消化和ANTXR1的百分比⁺细胞内确定生活(DAPI-negative)人类上皮细胞(EpCAM-positive)人口。如图3(一个),ANTXR1⁺在所有三个PDX测试细胞检测,Panc215 PDX包含比例最高的。这些数据表明,ANTXR1表达的不是一个结果在体外文化,而是EpCAM⁺/ ANTXR1⁺在肿瘤细胞存在。

我们以前公布,CSC舱可以激活与巨噬细胞诱导治疗扩展——(MF)的媒体(CM)从monocyte-derived巨噬细胞极化与MCSF M2表型(16]。确定ANTXR1⁺也可以诱导细胞扩张,Panc185和Panc354附着单层文化对待MF厘米从M2-polarized巨噬细胞,流式细胞仪分析检测的百分比ANTXR1细胞治疗后48小时。正如所料,在这两个主要文化测试,ANTXR的百分比⁺细胞增加了5.2和8.5倍,分别(图3 (b))。

3.4。ANTXR1 /八级Coexpressed胰腺CSC标志物CD133, CD44和自体荧光

我们推断,如果ANTXR1识别PaCSCs,这些细胞也应该coexpress其他已知CSC标记,如CD44和CD133。确定coexpress ANTXR1-postive细胞CD44和CD133 ANTXR1一起Panc253 PancB023细胞被流式细胞术分析。虽然只有不到1%的附着单层文化CD44⁺/ ANTXR1⁺或CD133⁺/ ANTXR1⁺double-positive范围条件下,不仅ANTXR1细胞表面表达增加但CD44⁺/ ANTXR1⁺和CD133⁺/ ANTXR1⁺double-positive数量增加到3.27%和5.88%,分别在Panc253 2.42%和9.02%,分别在PancB023细胞,表明ANTXR1⁺细胞也表达已知CSC标记(图4)。只有一小部分的ANTXR的事实⁺细胞coexpressed CD133和CD44并不出人意料,因为我们已经表明,层次结构存在于CSC的数量(14]。最后,利用自体荧光,最近发现CSC标记中核黄素积累的结果ABCG2-coated胞内囊泡只存在于上皮二者(14),我们评估是否autofluorescent二者表达ANTXR1。类似于CD133和CD44,我们可以检测autofluorescent-positive(氟⁺在ANTXR1)细胞⁺人口和人口增加,当二者在3 d球体文化(数据丰富5(一个)和5 (b))。同样,在氟⁺人口,很大一部分的细胞也ANTXR⁺(图5 (b))。

3.5。ANTXR1 / TEM8-Positive PDAC细胞拥有CSC功能和分子特征

最后,评估是否ANTXR1⁺细胞分享功能特征描述为其他CSC的数量(4),ANTXR1⁺细胞被隔绝PancB023、Panc253 Panc354通过流式细胞仪。ANTXR1的自我更新能力^{- - - - - -}和ANTXR1⁺细胞是一个球体形成分析评估。符合增加自我更新,ANTXR1⁺从所有三个PDX-derived细胞系细胞分离形成明显比ANTXR1球体^{- - - - - -}细胞(图6(一))。二者也被证明有增加pluripotency-associated成绩单的表达,这是必要的维护CSC的状态。在ANTXR1-postive-sorted PancB023细胞,KLF4,OCT3/4,SOX2表达显著高于ANTXR1-negative-sorted细胞。NANOGmRNA水平没有显著调制,正如预期的那样,ANTXR1 /八级信使rna水平2倍ANTXR1-positive-sorted细胞(图所示6 (b))。这些数据的总和支持声称ANTXR1⁺细胞具有功能和分子特征二者的特征。

4所示。讨论

需要特别标记识别二者是由需要目标,或消除这些高度遗传性和chemoresistant细胞。不幸的是,迄今为止,没有通用的标记,表明二者在所有肿瘤类型存在。这可能是由于不同CSC克隆肿瘤内存在,二者是一个国家而不是一个实体,层次结构存在于CSC的亚种(5]。因此,当我们增加的数量标记可用于确定和隔离这些细胞,我们将增加我们的理解在癌症生物学和作用。在这项研究中,我们建立ANTXR1表示,二者通过展示首次对PaCSCs的表达式。这项工作之前,陈等人认为ANTXR1功能正常干细胞和乳腺癌干细胞样细胞的生物标志物(26];然而,存在ANTXR1二者缺乏其他肿瘤实体。我们表明,ANTXR1⁺细胞存在于PDX-derived文化从7 PDAC病人及其表达显著增加细胞培养时3 d球体。自增长anchorage-independent无血清条件促进分化细胞的凋亡和二者的浓缩,观察和显著增加ANTXR1表情sphere-derived细胞强烈建议一个CSC链接。后者表明ANTXR证实了⁺CD44和CD133细胞coexpress已知CSC标记13),以及最近发现CSC自体荧光标记(14]。有趣的是,当高度侵略性L3.6pl细胞株培养为3 d球体,没有观察到ANTXR1细胞表面表达增加。L3.6pl细胞来源于父母的成品由多个细胞在活的有机体内使选择对高转移性细胞(37],它已被证明含有CD133⁺/ CXCR4⁺转移性二者(13]。L3.6pl ANTXR1表情球体的低水平可能表明ANTXR1⁺二者中失去了在活的有机体内选择这个细胞株或ANTXR1⁺细胞细胞株并不丰富,包含主要转移PaCSC亚种群(13]。事实上,我们已经表明,层次结构中确实存在CSC的数量(14)和CSC标记并不总是同样丰富在不同条件(例如,球体形成,肿瘤形成,或药物抗性)。例如,使用CSC生物自发荧光,我们观察到,并不是所有的氟⁺二者表达CD133和CD133⁺细胞autofluorescent。根据这些原则,并不是所有的ANTXR1⁺细胞CD133阳性、CD44或自体荧光,反之亦然。因此,使用ANTXR1结合其他CSC标记可以识别不同的CSC分组人口,可能不同的生物作用。在功能和分子水平上,然而,ANTXR1⁺细胞表现出更高的自我更新能力和ANTXR1 pluripotency-associated基因的表达而增加^{- - - - - -}同行。因此,ANTXR1⁺细胞满足两个主要CSC的需求,但更多的研究是必要的,完全理解ANTXR1的干细胞样状态⁺细胞。例如,在活的有机体内这些细胞的致瘤和转移能力的评估仍然是必要的。

重要的是要注意,ANTXR1不是唯一炭疽受体(19]。除了ANTXR1 /八级,毛细血管形态发生基因2 (CMG2) / ANTXR2还可以与LeTx交互。然而,这两种受体在生理上和功能上不同。例如,八级已被证明在小管形成的调控中发挥作用,内皮细胞迁移,而CMG2可能更特定于内皮细胞增殖。此外,八级和CMG2似乎不同绑定我胶原蛋白和胶原蛋白VI,分别或IV型胶原蛋白和层粘连,分别38];然而,CMG2最近也证明作为胶原蛋白受体VI以及调节其细胞内降解[39),这表明八级和CMG2可能会有一些重叠的功能。在癌症的背景下,描述了CMG2矛盾的角色。例如,尽管CMG2显示调节细胞粘附和侵袭性前列腺癌40),在乳腺癌,CMG2抑制乳腺癌细胞生长和与疾病进展和预后呈负相关41]。有趣的是,最近的一份2018年出版吉等人首次表明,CMG2不仅表达在胃癌干细胞样细胞,但有必要维持这些细胞通过Wnt /干细胞表型β连环蛋白途径激活(42]。看来Wnt /β连环蛋白的信号可能是炭疽的主要下游信号通路在二者受体(s)。有趣的是,我们还观察到患者高ANTXR1表情,Wnt /β连环蛋白信号丰富;然而,更多的研究是必要的,以确定ANTXR1呈现在细胞表面的PaCSCs维护通过Wnt /“具备干细胞”β连环蛋白信号。

最后,事实LeTx结合ANTXR1, LeTx可以减少肿瘤的生长在活的有机体内和ANTXR1表达/表面富集二者表明抗肿瘤效果观察与LeTx Duesbery发表的研究报告等。21和卷轴等。23)可能是CSC目标的结果。这些研究强调很可能ANTXR1二者可以利用目标在活的有机体内作为一种治疗癌症的方法。事实上,针对炭疽的受体抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长的目的进行了广泛的调查(了38])和LeTx和修改的影响形式的PA管理以及低频显示强劲和鼓励反血管增生和抗癌效果在临床癌症模型。同样,采用PA和低频成分,提高其生物活性,减少毒性,合成突变体PA半个更强有力的反血管增生和肿瘤的生长特性43),也一直在探索和发展中anti-ANTXR1抗体。关于后者,NCI研究者和诺华公司是第一个发展强有力的ANTXR1-specific马伯使用噬菌体展示库和测试这些马伯的抗癌疗效临床异种移植小鼠模型的结肠癌和同源的黑色素瘤的小鼠模型44]。作者表明,抗体开发的抗八级细胞外领域不仅有广泛的抗肿瘤活性,也可以不增加毒性与抗癌化疗结合使用。因为这个研究发表在2012年,MMAE-linked anti-ANTXR1抗体药物共轭(ADC)治疗方法已经开发和证明是耐受性良好,能够诱导肿瘤回归或肿瘤根除在多种实体瘤类型,抑制转移性生长和延长在活的有机体内生存(45]。同样,汽车T细胞免疫疗法针对ANTXR1 /八级了,显示细胞毒性特异性肿瘤内皮细胞以及ANTXR1-positive三阴性乳腺癌细胞(46)或胃腺癌细胞(47]。因此,根据我们的研究结果显示,PaCSCs表达ANTXR1,上述ANTXR1-based疗法应该测试在胰腺癌的临床前模型。

总之,我们在这项研究表明ANTXR1有效识别PaCSCs, ANTXR1⁺细胞coexpress其他已知PaCSC标记如CD44、CD133和自发荧光,ANTXR1⁺细胞显示增强CSC功能和分子特性。因此,我们建议ANTXR1应该添加到列表PaCSC标记,用于未来anti-PaCSC-based疗法的发展。最后,考虑上述CMG2发现胃癌干细胞样细胞,它不是不可能CMG2 PaCSCs也可能表示,使用ANTXR1和ANTXR2可能会进一步促进能力丰富/隔离一个纯净CSC人口。为此实验正在进行中。毫无疑问,炭疽毒素受体的作用似乎超越仅仅与LeTx交互。他们的角色在肿瘤血管,肿瘤血管生成,在肿瘤生物学CSC突出动态角色,这些蛋白质在多个生物过程。时间会告诉他们参加什么其他进程,但是现在,在癌症应该充分利用他们的效用。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究是支持·拉蒙-卡哈尔Ministerio de隐藏y Competitividad绩效奖,西班牙(b, Jr。);协调拨款Fundacion Cientifica Asociacion诺拉魂斗罗el癌症(AECC GC16173694BARB) (b, Jr。);洋底de Investigaciones疗养地(FIS)授予PI15/01507 (b, Jr。)(共同投资通过洋底Europeo de Desarrollo区域(菲德尔)“Una manera de做欧罗巴”)从de Salud研究所卡洛斯三世(ISCIII),西班牙;欧盟第七框架计划(fp7/2007 - 2013)根据授权协议。602783 (CAM-PaC) (CH)和新南威尔士大学锋利的种子资金(CH);德国癌症的马克斯•埃德尔奖学金援助(111746)(PCH);德国研究基金会(脱硫、CRC 1279”利用人力Peptidome新型抗生素和抗癌剂”)(PCH);奥地利科学基金会(FWF-B27361) (PM);和英格丽Shaker-Nessmann癌症研究基金会(PM)。

补充材料

图S1: ANTXR1 PDAC /八级过表达。(补充材料)

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