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研究文章

PTF1a活动丰富后前肠内胚层,但不是决定性的内胚层,导致增强胰腺的分化在体外鼠标ESC-Based模型

表1

总结实验过程和结果的几个内胚层分化协议测试的Tet-Ptf1a细胞表明明确的内胚层分化的程度,Pdx1⁺细胞,Nkx6.1⁺细胞。


协议	媒体	生长因子浓缩的。	细胞种子数/文化格式	Sox17⁺Foxa2⁺细胞	PTF1a诱导/天	Pdx1⁺细胞	Pdx1⁺细胞长时间的文化

EB在15%的边后卫(24]	15%的边后卫,DMEM老7天+ 1%,DMEM 2天	没有一个	3×10⁶细胞在60毫米盘	- EB7 + 2 10% 25%——EB7 + 4 并不是所有的EBs copositive细胞	是的。顺序/ 3 d	开始看到EB7 + 7	是的

贝尔纳多协议在单层28]	DMEM (Iscove改性DM +火腿的F12培养基1:1的比例),L-Glut, BSA 5 g / L,脂质1 x, 2 x, BME 1 x。	A100B10 3天 A100B10 3天+ A100 2天	500000每24好	很少和细胞不健康 5% copositive细胞边缘的殖民地	是的。顺序/ 3天	没有一个 2集群(50个细胞)	没有一个没有一个

	0.5%,血清DMEM, penstrep L-glut 1%, 1%	A100B10 3天		几乎没有		没有一个	没有一个
低血清		A100B10 3天+ A100 2天	500000每24好	一些细胞但看起来不健康的文化	是的。顺序/ 3天	没有一个	没有一个
	2%,血清DMEM, penstrep L-glut 1%, 1%	A100B10 3天		一些细胞和文化看起来更好		没有一个	没有一个
		A100B10 3天+ A100 2天		5 - 8% copositive细胞密度很低的地方		没有一个	没有一个

徐协议w / o人工基底膜(17]	DMEM高葡萄糖,2 g / L BSA L-Glut penstrep 1%, 1%	A100F100B10	300000每24好	2 - 3%	没有		没有一个
		A100F100B50		1 - 2%	没有		没有一个
		A100B10		1 - 2%	没有		没有一个
		A100B50		< 1%	没有		没有一个
		A100F100B10	100000每24好	10%	没有		没有一个
		A100F100B50		3 - 4%	没有		没有一个
		A100B100		10%	没有
		A100B50		5%	没有

汉森协议(5]	KO DMEM + 1 penstrep L-glut x-n2 1 x-b27 + 1% + 1% + Bme + NEAA 5天	A100	1000年每96人	50 - 60%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	是的,(a)分散细胞(b)分散	没有看到Pdx1⁺细胞长时间的文化
		故事本来	1000年每96人	40 - 50%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	是的,分散的细胞
		A100	5000年每96人	10%	没有
		故事本来	5000年每96人	10%	没有
梅尔顿协议在96年(7]	L-glut-penstep ARPMI + 0.2%的边后卫+ 1%	Nodal1000	1000年每96人	> 90%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	(a) (b) 15细胞集群20 - 100细胞
		IDE 800海里		30%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	(a)和(b)
		IDE 5μ米		高40 - 50%	没有
		Nodal1000	5000年每96人	> 80%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	(一)分散细胞(b)
		IDE 800海里		> 60%	是的,(a) (b)重叠顺序/ 3 d	(a) (b)分散细胞
		IDE 5μ米		40 - 50%	没有

梅尔顿24日协议	L-glut-penstep ARPMI + 0.2%的边后卫+ 1%	IDE 800海里	7500每24好	10%	是的/ 3 d	没有一个
			15000每24好	5%	是的/ 3 d	没有一个

		IDE 800海里		25%	没有
梅尔顿议定书24 w基底膜基质	ARPMI + 0.2%的边后卫+ 1% L-glut-penstep基底膜基质	Nodal1000	7500年	25%	没有
		A100		1%	没有

梅尔顿修改(来自[7])	明确的内胚层:苯丙酸诺龙(50 ng / mL)或节点(1000 ng / mL)在0.2%的边后卫ARPMI 4 - 6天原肠管:FGF10 (50 ng / mL), KAAD-cyc (0.25μ米)在2%的边后卫ARPMI 2天胰腺内胚层:FGF10 (50 ng / mL), KAAD-cyc (0.25μ米),RA (2μ米)在B27 DMEM 4天 PTF1a归纳为4天B27 DMEM老或1% 额外的文化在同一媒体4天		2000年每96人每隔一天吃一次	苯丙酸诺龙~ 70%。节点:80 - 90%。进一步治疗因素之后,一些Pdx1见过在节点文化PTF1a归纳	是的。顺序/ 4 d	激活素A:是的,分散Pdx1⁺细胞 Nodal-yes Pdx1在开花如集群。	没有看到Pdx1培养4天吗	在一些Pdx1 Nkx6.1表达式⁺细胞,但这些细胞并没有成为胰岛素⁺即使在ra + nic治疗。