移植人类羊膜上皮细胞的旁分泌影响卵巢功能改善化疗所致的小鼠模型原发性卵巢功能不全

文摘

人类羊膜上皮细胞(hAECs)通过尾静脉移植已报道救援卵巢功能与化疗所致小鼠原发性卵巢功能不全(POI)。测试腹腔移植hAECs能否诱导治疗效果描述移植hAECs的旁分泌作用,我们利用POI的化疗诱导的小鼠模型,研究hAECs能力和收集的条件培养基培养hAECs (hAECs-CM)恢复卵巢功能。我们发现移植hAECs或hAECs-CM 7天24小时或化疗后可以增加卵泡数量和部分恢复生育能力。通过PCR分析受体小鼠卵巢,SRY基因的存在只是在小鼠中发现移植与男性hAECs化疗后24小时。此外,VEGFR1的基因表达水平和VEGFR2卵巢下降,尽管VEGFA增加化疗后2周。治疗后hAECs或hAEC-CM, VEGFR1和VEGFR2的表达增加,与免疫组织化学分析一致。此外,hAECs和hAECs-CM治疗提高卵巢的血管生成。结果表明,hAECs-CM hAECs一样,可以部分恢复卵巢功能,腹腔移植hAECs的治疗作用主要是引起paracrine-mediated卵巢保护和血管生成。

1。介绍

原发性卵巢功能不全(POI),曾经被定义为卵巢功能早衰或原发性卵巢衰竭,是卵巢功能障碍的一个子类,卵巢内造成损害(1]。POI的特点是闭经的三合会,增加促性腺激素的分泌,减少生产雌激素40岁以下的年。癌症化疗被建议的原发性卵巢功能不全有关。卵巢组织通常会显示卵泡损失,皮质纤维化,血管损害化疗后通过组织学检查(2- - - - - -4]。烷基化剂(如环磷酰胺)和白消安似乎高风险诱导gonadotoxicity [5]。我们使用老鼠消毒busulphan和腹腔注射环磷酰胺(Bu / Cy)建立一个不孕小鼠模型(6]。

由外胚层8天后授精在原肠胚形成之前,人类羊膜上皮细胞(hAECs)可能维持pregastrulation胚胎细胞的可塑性。hAECs已经证明保持能力分化成肝(内胚层),胰腺(内胚层),心肌细胞(中胚层)和神经细胞(外胚层)在体外(7]。多能性,低免疫原性,与使用一些伦理问题,nontumorigenicity使hAECs有用的干细胞来源细胞移植和再生医学8]。移植hAECs已被证明改善心脏功能注入大鼠心肌梗死模型通过hAECs到梗死区(9]。和腹腔内管理hAECs到老鼠lung-injured减少肺纤维化,减少结构性肺损伤,保护肺功能(10,11]。我们之前的研究表明,静脉注射hAECs可以transdifferentiate成粒状的细胞,恢复folliculogenesis POI小鼠模型(12]。然而,目前尚不清楚hAECs能否通过旁分泌恢复卵巢功能的影响。

血管内皮生长因子A (VEGFA)中扮演一个重要的角色在卵巢血管生成的规定(13]。虽然VEGFA最众所周知的血管生成因子,它还参与许多重要的事件在一个排卵的周期,包括卵泡生长、排卵、黄体发展(14]。在活的有机体内后,中小学卵泡的数量增加VEGF注入大鼠卵巢(15]。此外,腔的形成率和减数分裂到信息产业部的发展阶段向培养基中添加VEGFA后被增强的山羊的preantral毛囊(16]。更重要的是,尽管抑制VEGFR1和VEGFR2可以减少血管和卵泡发育,抑制卵泡VEGFR2街区发展但不一定破坏围产期鼠卵巢血管发展,这表明VEGFA及其受体可能参与nonangiogenic和血管生成机制调节卵泡发展(17]。

这里我们调查如果hAECs移植可以恢复Bu / Cy-damaged卵巢功能的腹腔内管理和治疗效果是否介导的旁分泌作用。我们也发现VEGFA及其受体的表达在Bu / Cy管理和分析引起的小鼠卵巢移植hAECs和因素的影响由hAECs分泌卵巢血管生成。

2。材料和方法

2.1。隔离和hAECs文化

分离、培养男性hAECs如前所述[12]。简言之,丢弃胎盘从男性胎儿在怀孕期间获得简单的剖腹产与书面知情同意女人测试为阴性HIV-I和肝炎B和c .剖腹产的迹象是臀先露,重复操作,胎儿窘迫,双胞胎。人类羊膜的机构伦理委员会批准使用这个项目。

机械去皮后的绒毛膜部分胎盘,羊膜,看起来像一个半透明的纸,放在250毫升玻璃瓶包含杜尔贝科鹰中等DMEM / F12的修改。减少剃刀后产量0.5 - 1.0厘米²段,胎盘段与0.25%胰蛋白酶消化/ EDTA在37°C 45分钟。离心机在250×g 5分钟25°C,细胞与PBS resuspended上层清液后丢弃。然后过滤后100年μ与PBS m细胞过滤器,清洗一次,resuspended,由此导致细胞悬浊液被播种six-well板在DMEM / F12培养基补充10%胎牛血清(美国纽约的边后卫,Gibco大岛),链霉素(100 U /毫升;Gibco)、青霉素(100 U /毫升;Gibco)和谷氨酰胺(0.3毫克/毫升;Gibco)和37°C 5%孵化有限公司₂在湿润的空气。一旦hAECs融合达到80至90%,细胞为实验做好准备。

2.2。免疫荧光染色

hAECs固定用4%多聚甲醛在室温下20分钟,然后洗两次与PBS(5分钟)。细胞permeabilized 0.1% Triton x - 100在室温下10分钟然后洗两次1×PBS。然后用阻断细胞被封锁在一夜之间解决方案30分钟和孵化在4°C anti-Cytokeratin 18(博士德鼠标反1:200年,武汉,中国),anti-CD34抗体(Abcam兔子反1:100年,剑桥,妈,美国),和anti-Vimentin(兔子反1:100年,细胞信号技术,丹弗斯,妈,美国)。与PBS洗了三次,细胞;探讨了FITC-labeled免疫球蛋白g(1: 200年,圣克鲁斯、钙、美国)或罗丹明- (TRITC)标记免疫球蛋白g(1: 100年,表达载体、钙、美国)。荧光图像得到用徕卡DMI3000显微镜(德国海德堡)。

2.3。制备条件培养基培养hAECs (CM)

的厘米hAECs准备根据杨协议前面描述的et al。18),小的修改。百分之八十的支流hAECs与PBS洗两次,然后用无血清培养基为24小时。然后收集并用于媒介在活的有机体内实验。对于每一个动物,我们使用4×10厘米生成⁶hAECs。CM在300 g离心5分钟通过220纳米过滤和消毒。收集到的CM集中使用Amicon Ultra-15离心过滤单元(3 kDa截止;微孔)。

2.4。动物

六个女性C57BL / 6野生型小鼠购自上海SLAC实验动物有限公司有限公司所有的动物保持在12小时光/暗周期可以随意提供食物和水。建立化疗所致卵巢损伤的POI模型,共有85只老鼠作为接受者被一个腹腔内消毒(IP)注入Bu / Cy (busulphan 30毫克/公斤,环磷酰胺,120毫克/公斤,resuspended在DMSO) (6]。所有程序涉及动物被批准的机构进行了上海和动物保健和使用委员会按照国家研究委员会指导护理和使用实验动物。注射后,布鲁里溃疡/ Cy-treated和控制动物体重每周两次在9点。

2.5。IP注入hAECs和hAECs-CM

C57BL / 6野生型小鼠被随机分为六组。正常的控制老鼠没有接受治疗)。Bu / Cy组,老鼠只管理Bu / Cy ()。Bu / Cy + hAECs(24小时)组(),老鼠收到Bu / Cy政府然后IP移植4×10⁶hAECs体积的0.2毫升PBS 24 h后。Bu / Cy + hAECs-CM(24小时)组(),老鼠收到Bu / Cy政府然后IP注入0.2毫升厘米由4×10⁶hAECs 24 h后。Bu / Cy + hAECs (7 d)组(),老鼠收到Bu / Cy政府然后IP移植4×10⁶hAECs 7天后。Bu / Cy + hAECs-CM (7 d)组(),老鼠收到Bu / Cy政府然后IP注入4×10厘米生成的⁶hAECs 7天后。管理hAECs或hAECs-CM重复第二天。在每组5只老鼠交配实验,其他老鼠扑杀后28天或14 Bu / Cy管理或第二个治疗。两国从每个动物卵巢收集进行分析。

2.6。交配实验

控制老鼠,Bu / Cy-treated只老鼠,老鼠接受Bu / Cy然后hAECs或hAECs-CM被安置与C57BL / 6雄性小鼠化疗后的一个月。成年男性的生育能力被安置与雌性的比例1:2。窝的数量每怀孕被记录。

2.7。卵泡数量和形态分析

收集一个月治疗后,卵巢和卵泡检测和分类。切除卵巢在4%多聚甲醛固定至少24小时。固定后,卵巢是脱水,石蜡包埋,连续切片在5μ米,安装在显微镜玻片。常规苏木精和伊红染色())和光学显微镜进行组织学检查。原始、小学、中学,窦的毛囊数在每个第五部分。只包含一个卵泡卵母细胞被数,以避免任何卵泡计数两次。毛囊被分类如下:原始卵泡卵母细胞包围一层扁平颗粒细胞;初级卵泡,完好无损放大卵母细胞可见核和一层的立方形的颗粒细胞;次级卵泡,一层以上的立方形的颗粒细胞没有窦的空间;新兴窦的窦的毛囊(包括排卵期前的毛囊)、空间(19]。

2.8。实时定量聚合酶链反应

hAECs细胞收集当细胞达到90%到80融合。收集和卵巢样品最后一次治疗后2周。然后从卵巢总RNA分离样品和500 ng的总RNA从每个样本使用primescript RT反转录试剂盒(豆类生物有限公司、志贺、日本)。实时PCR进行互补使用SYBR预混料Taq交货(豆类)Mastercycler ep realplex(埃普多夫,汉堡,德国)。所有反应进行了一式三份,使用25μL体积。总之,使用一个初始变性进行PCR扩增95°C 5分钟,其次是40周期为30秒95°C, 30秒60°C, 30秒72°C。样本缺乏模板DNA作为一个消极的控制。表中提供的基因的引物1和2。

2.9。免疫组织化学分析

卵巢从治疗和控制动物被固定,脱水,玻化,嵌入在石蜡。卵巢部分(5μ米厚)deparaffinized二甲苯和水化使用乙醇梯度。水化部分在3%的过氧化氢甲醇洗20分钟在室温和阻塞在PBS(σ)含3% BSA(σ)30分钟。部分被抗体治疗主要包括兔子anti-CD34抗体(1:200;Abcam、剑桥、马、美国),兔子anti-VEGFA抗体(1:50;Abcam)、兔anti-VEGFR1抗体(1:200;细胞信号技术,丹弗斯,妈,美国),或者兔子anti-VEGFR2抗体(1:200;Abcam)抗体检测在一夜之间在4°C。洗后,幻灯片被孵化与合标记anti-rabbit抗体(过氧化物酶反应包、向量实验室、伯林盖姆、钙、美国)。过氧化物酶底物是由使用轻拍(3,39-diaminobenzidine)衬底工具包(向量实验室)。幻灯片与苏木精复染色QS(向量实验室),脱水和安装VectaMount永久安装介质(向量实验室)。

2.10。测定微血管密度(MVD)

血管生成被MVD测量,由光显微镜分析评估(400×)地区的部分包含最微血管。两个独立的研究人员对实验条件也不被分配到观察和计算每隔十部分MVD在五个部分。微脉管被定义为一个棕色染色内皮细胞集群与不完整的CD34 +内皮和信息联系。五个部分的微脉管数字计算,计算出平均每个卵巢的微血管数量(20.]。此外,从五个部分卵巢每组调查的平均MVD。

2.11。PCR分析

预测是否hAECs从男性胎儿胎盘可以移植到老鼠的卵巢,Y-specific的多重PCR扩增对不起序列是由Tungwiwat et al。21),进行小修改。使用TIANamp卵巢DNA提取基因组DNA工具包(TIANGEN,中国)协议提供的制造商。的对不起特殊序列放大首先通过PCR引物对,Y1.5 (5′-CTAGACCGCAGAGGCGCCATC-3′)和Y1.6 (5′-TAGTACCCACGCCTGCTCCGG-3′)。使用第一个PCR产品作为模板,SRY-specific序列被另一对引物扩增Y1.7 (5′-CATCCAGAGCGTCCCTGGCTT-3′)和Y1.8 (5′-CTTTCCACAGCCACATTTGTC-3′)。十毫升的每个产品在2%琼脂糖凝胶电泳和可视化分析了溴化乙锭染色后光镜下紫外线。嵌套Y-specific片段对不起基因的长度是198个基点(21]。Y-specific序列的识别hAECs从男性和女性胎儿胎盘被用作正面和负面的控制。卵巢的雌性老鼠的DNA没有hAECs注射也用作负控制模板。

2.12。数据分析和统计

数据表达每个实验组意味着±SEM。统计学意义是由统计分析软件(GraphPad棱镜,GraphPad软件Inc .)、美国),和学生的评价t以及。统计学意义时给予。

3所示。结果

3.1。描述孤立hAECs

在光学显微镜下,hAECs支流形成cobblestone-shaped单层上皮细胞(图1(一))。研究干细胞特定基因和上皮基因hAECs,实时PCR。与先前的研究一致(7),我们发现孤立的AE细胞表达Oct-4 Nanog,和Sox2,这些都是参与细胞多能性(22- - - - - -24]。此外,我们发现上皮的表达(细胞角蛋白19(CK19),钙粘蛋白)和间充质(N-cadherin,波形蛋白,和蜗牛在培养细胞标记。如图1 (c),两个钙粘蛋白和细胞角蛋白19培养hAECs细胞中高度表达。相比之下,mRNA的表达间充质细胞标记,包括N-cadherin和波形蛋白,很低的表达蜗牛基因没有被探测到。

进一步确定纯度的新孤立hAECs,免疫荧光染色。这些细胞被澄清对CD34阳性染色细胞角蛋白18和消极和波形蛋白(图1 (d))。几乎所有新孤立hAECs细胞角蛋白是积极的。同时,没有CD34染色观察,这表明,隔离不含有造血干细胞等脐带血液或胚胎成纤维细胞。同时,波形蛋白的缺失表明hAECs没有污染从羊膜间充质细胞。

3.2。hAECs效果和hAECs-CM治疗后Bu / Cy管理体重

评估的影响人类hAECs hAECs-CM全身重量,野生雌性老鼠被与Bu / Cy预处理,然后消毒腹腔内管理hAECs或hAECs-CM。正常控制老鼠相比,政府Bu / Cy导致显著减少体重超过7天(克和克,,数据2(一个)和2 (b))。之间无显著差异观察Bu / Cy-treated老鼠和老鼠收到hAECs或hAECs-CM治疗后Bu / Cy管理在任何时间点。

3.3。hAECs移植后24 h Bu / Cy政府可以渗透到受损的卵巢组织

确认是否男性hAECs可以转移到受体卵巢,PCR分析对不起序列的Y染色体。如图2 (c)基因组DNA准备从男性hAECs清楚地展示了198个基点对不起特殊序列。基因组DNA从女性hAECs和C57BL / 6小鼠卵巢作为消极的控制,与一些非特异性的乐队和缺席的198个基点对不起特殊序列。有趣的是,虽然198 bp片段被确定在老鼠的卵巢样品接受男性hAECs化疗后的24小时内,没有检测到产品上的老鼠的卵巢样本对待男性hAECs化疗后7天。

3.4。hAECs移植和hAECs-CM治疗增加卵泡数量在不同阶段POI老鼠

确定hAECs通过腹腔移植和hAECs-CM治疗可能恢复卵巢folliculogenesis,串行部分从卵巢hAECs和hAECs-CM治疗1月后沾染了)。如图3(一个)、管理与Bu / Cy诱导卵泡损失,间质纤维化,闭锁的毛囊。然而,组织学评估显示,hAECs或hAECs-CM治疗化疗后增加了受体卵巢的卵泡数量。

进一步计算卵泡的数量在所有阶段,每一个第五部分进行了分析,和原始的数量,小学,中学,和窦的毛囊数使用光学显微镜。与正常对照组相比,原始的数量(与,),初级(与,)、二级(与,)和窦的毛囊(与,)在Bu / Cy-treated小鼠显著降低。在老鼠的卵巢hAECs处理24小时后化疗,原始的数量()和初级卵泡()相比显著增加Bu / Cy-treated集团(,数据3 (b)和3 (c))。然而,没有显著差异之间的大量的中等和窦的毛囊hAECs-treated组和Bu / Cy-treated组。此外,原始卵泡的老鼠接受hAECs-CM 24小时与hAECs Bu / Cy管理和小鼠移植后7天后Bu / Cy管理显著增加(和、职责)。此外,与Bu / Cy-treated小鼠相比,窦的毛囊的hAECs-CM-treated组显著增加,是否治疗或化疗后的7天内(24小时与和与分别地,,图3 (e))。

3.5。hAECs移植和hAECs-CM治疗改善POI老鼠的生育能力

估计的治疗是否hAECs或者通过腹腔hAECs-CM可以恢复卵巢功能,自然雌性老鼠交配雄性老鼠的生育治疗后4周。每个怀孕的窝数计算。的平均数量在布鲁里溃疡组/ Cy-treated老鼠窝()明显低于正常对照组()。治疗hAECs和hAECs-CM Bu / Cy管理24小时后显著增加每个怀孕的窝(和、职责)与Bu / Cy-treated老鼠。每个怀孕老鼠窝hAECs处理或hAECs-CM 7天后Bu / Cy管理增加,但没有明显差异。因此,老鼠可以部分改善生育向腹腔注入hAECs和hAECs-CM Bu / Cy-treated老鼠(图4)。

3.6。VEGFA通路参与hAECs和hAECs-CM的治疗效果

,据报道,VEGFA及其受体可能参与调节卵泡发展(17),我们试图检查是否VEGFA通路分子参与卵巢修复治疗后hAECs和hAECs-CM通过分析RNA和蛋白质表达水平使用实时PCR和免疫组织化学。如数据所示5 (b)和5 (c),VEGFR2卵巢中表达水平明显降低化疗后2周(),以及增加VEGFA表达式()的mRNA水平与正常对照组相比。治疗后与hAECs或hAECs-CM VEGFR1和VEGFR2都表达高于Bu / Cy-treated只老鼠(数字5(一个)和5 (b))。

免疫组织化学分析卵巢2周治疗后显示VEGFA及其两个受体也有类似的表达蛋白质水平的信使rna表达水平(数字6- - - - - -8)。免疫组织化学研究表明,VEGFA、VEGFR1 VEGFR2经常被观察到在正常对照组2周,1个月。VEGFA表达降低,有趣的是,VEGFR1, VEGFR2观察1个月化疗后Bu / Cy-treated组。然而,这些蛋白的表达在hAECs——或者hAECs-CM-treated小鼠卵巢部分恢复的水平与对照组(见补充数据在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2016/4148923)。

3.7。hAECs移植和hAECs-CM治疗增加POI老鼠的卵巢组织中MVD

CD34,血管的内皮标记用于本研究评估,被免疫组织化学染色在卵巢组织评估MVD。组织学评估表明,CD34-staining船只的数量显著减少后卵巢组织Bu / Cy管理局(数字9(一个)和9 (c))。如数据所示9 (b)和9 (d)与正常对照组相比,卵巢MVD减少34% ()和60% (),分别在小鼠卵巢后2周,1月Bu / Cy管理。治疗一个月后hAECs或hAECs-CM CD34在所有四个治疗组显著高于Bu / Cy-treated集团无论hAECs或hAECs-CM管理的时机。没有明显差异的四个治疗组在治疗后2周(数字9(一个)和9 (b))。然而,治疗1月后,卵巢水平hAECs-CM-treated组MVD明显高于hAECs-treated组无论注射时间,24小时或化疗后的7天内(,数据9 (c)和9 (d))。

4所示。讨论

hAECs吸引了对其可能用于再生医学的因为他们的多能性,低免疫原性,nontumorigenicity,几个伦理问题与他们的用法(8]。有两种可能的机制来解释hAECs移植的治疗效率。一个是移植的细胞受损细胞的分化潜能。另一种是能够分泌功能或移植细胞的保护性因素。这些因素可能会刺激细胞增殖,抑制细胞凋亡的细胞居住在受损的器官,和促进受损组织的血管生成,提高氧输送和代谢交换(25,26]。解决机制的有益作用hAECs卵巢恢复,我们使用一个临床前小鼠模型Bu / Cy-induced卵巢衰竭。然后我们hAECs和hAECs-CM注入Bu / Cy-treated小鼠的腹腔调查hAECs能否迁移到卵巢恢复卵巢功能和是否因素分泌hAECs也可能引起相似的治疗效果。

2002年,王先生和他的同事们27)报道,实时PCR是敏感,物种,和性别检测男性对不起基因sex-mismatched肝细胞移植后。最近,PCR检测的对不起基因在卵巢建议作为一个有效的方法来调查男性骨髓来源间充质干细胞是否可以移民到chemotherapy-damaged卵巢恢复卵巢功能(3,28]。有趣的是,在我们的研究中,细胞跟踪实验使用PCR分析证实男性hAECs-derived捐赠者的存在对不起hAECs后基因在卵巢移植后24小时内化疗。然而,老鼠接受hAECs化疗后的7天内没有对不起基因在卵巢。据报道,女性暴露于各种化疗政权可能引起囊下的局部皮质纤维化(4),这可能会抑制hAECs从移民到卵巢化疗后7天。此外,最大的好处是实现hAECs移植时24小时(7天)后Bu / Cy管理。原始的数量,小学,中学,和窦的毛囊是更高的小鼠移植hAECs化疗后的24小时内超过7天后,虽然并没有显著的差异。这些结果表明,移植的时机很重要,是否hAECs可以迁移到卵巢可能影响治疗的效果。

最近,越来越多的研究使用的因素从细胞释放细胞再生医学治疗。这是证明条件媒体从脂肪中提取干细胞分离(ADSC)也有类似的保护作用改善心脏功能都完好的ADSC的梗塞的心和肺血管保护作用后肺组织微血管损伤(18,29日]。这些结果强烈支持主要参与再生医学的旁分泌作用。类似于这些结果,IP注入hAECs-CM在我们的研究中部分恢复卵泡数量和提高生育率与Bu / Cy-treated小鼠相比。虽然治疗24小时后Bu / Cy治疗7天后似乎比治疗更有效,没有显著差异。令我们吃惊的是,hAECs-CM注入的数量显著增加窦的毛囊不管管理的时机。总之,IP注入0.2毫升集中hAECs-CM收集的4×10⁶hAECs(30倍集中)似乎足以改善卵巢癌化疗所致卵巢功能损伤。因此,hAECs-CM可能为临床应用程序有意义的治疗策略。

据报道,VEGF是一个因素,可以通过刺激内皮细胞的有丝分裂,增加血管通透性30.,31日),这可能导致窦的流体的积累,形成生长卵泡腔,,最后,卵泡破裂的诱因14,32,33]。实际上,增加VEGF培养基提高的发展山羊的preantral卵泡培养在体外,允许生产成熟的卵母细胞(16]。因此,hAECs的疗效可能部分源于hAEC-derived旁分泌因子,特别是VEGFA。

在目前的研究中,我们分析了VEGFA及其受体的表达在卵巢(VEGFR1和VEGFR2)实时PCR和免疫组织化学分析。控制与正常小鼠相比,VEGFR1的表达和VEGFR2 Bu / Cy管理是降低2周后,连同VEGFA表达增加。IP hAECs或hAECs-CM移植到Bu / Cy-treated小鼠诱导的表达VEGFR1 VEGFR2 2周后治疗。我们推测VEGFA布鲁里溃疡/ Cy-treated小鼠表达的增加引起的瞬态和自动调整应对减少VEGFR1和VEGFR2表达式。实际上,VEGFA的表达,VEGFR1, VEGFR2减少化疗后1个月。此外,移植hAECs或hAECs-CM卵巢显示血管生成减少由于Bu / Cy治疗导致的感应cd34多细胞,即更多的血管生成。综上所述,hAECs hAECs-CM可能恢复卵巢功能通过调节VEGFA及其受体的表达,从而诱导血管生成,增加卵泡生长相关的旁分泌活动。

所以如果VEGFA及其受体发挥了作用,恢复卵巢功能,我们可以对POI VEGFA管理局吗?Takehara et al。34]表明,只有一个小复苏诱导VEGFA时注射到老鼠的卵巢。最近,它已被证实,人类hAECs分泌多种生长因子,如表皮和纤维母细胞生长因子(HB-EGF、EGF-2 bFGF, FGF-4, FGF-6,和FGF-7),血管生成生长因子(VEGF, VEGF-D VEGF-R2, VEGF-R3)、胰岛素样生长因子(igf - 1, IGF-ISR IGFBP-1, IGFBP-4),和血小板源生长因子(PDGF-AA, PDGF-BB PDGFRa, PDGFRb) (35]。因此,卵巢被化疗不仅VEGFA恢复还需要其他生长因子分泌hAECs。

5。结论

目前的研究表明IP注入hAECs hAEC-CM可以部分恢复卵巢功能和hAECs-CM似乎足以改善卵巢癌化疗所致卵巢功能损伤。此外,我们的研究表明,可能的机制hAECs参与恢复卵巢功能是通过调节VEGFA及其受体诱导卵泡生长相关的旁分泌活动。需要进一步调查以确定是否增加频率的IP管理条件培养基从hAECs-CM hAECs或直接管理到受损的卵巢可以更有效地恢复卵巢功能。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

郭Xiaofen姚明和人家的贡献同样这项工作。

确认

这项工作是由上海市卫生局赠款支持,上海,中国(没有。XBR2011069),国家自然科学基金委(中国国家自然科学基金,没有。81370678),上海市科学技术委员会(没有。12431902201)。

补充材料

引用

1. m·德·沃斯·p·Devroey,公元前Fauser“原发性卵巢功能不全,《柳叶刀》,卷376,不。9744年,第921 - 911页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a . n . Hirshfield”的供应关系原始卵泡,卵泡增长的老鼠,”生物的繁殖,50卷,不。2、421 - 428年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. s, s·h·Abd-Allah m .青年外交官访华团h·f·帕夏et al .,“机械动作的间充质干细胞注射治疗化学诱导卵巢衰竭兔子,“Cytotherapy,15卷,不。1,第75 - 64页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. d . Meirow j .金龟子b·考夫曼et al .,“人类卵巢皮质纤维化和血管损伤接触化疗。卵巢损伤的潜在机制”,人类生殖,22卷,不。6,1626 - 1633年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m . Sommezer和k . Oktay”女病人生育能力保留。”人类生殖更新,10卷,不。3、251 - 266年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. k .邹z元,z杨et al .,“生产后代的生殖系干细胞系来源于新生儿卵巢,”自然细胞生物学,11卷,不。5,631 - 636年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. t .杨爱瑾,t·莱曼h . Cai d . b . Stolz和s . c .斯特罗姆“羊膜上皮细胞的干细胞特性,”干细胞,23卷,不。10日,1549 - 1559年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 户田拓夫,m·冈t吉田,t . Nikaido”羊膜的潜力/ amnion-derived细胞再生各种组织,”药理科学杂志》,卷105,不。3、215 - 228年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 学术界。方,j .金黄永发。乔et al .,“人类羊膜上皮细胞的体内分化成cardiomyocyte-like细胞和细胞移植对心肌梗死大鼠:脐带血与脂肪tissue-derived间充质干细胞,”细胞移植,21卷,不。8,1687 - 1696年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 墨菲,r . Lim h·迪金森et al .,“人类羊膜上皮细胞防止bleomycin-induced肺损伤和肺功能保护,”细胞移植,20卷,不。6,909 - 923年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p . Vosdoganes r . Lim,大肠Koulaeva et al .,“人类羊膜上皮细胞调节hyperoxia-induced新生儿肺损伤小鼠,”Cytotherapy,15卷,不。8,1021 - 1029年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. x l . f . Wang Wang姚明,d .赖和l .郭”人类羊膜上皮细胞可以分化成颗粒细胞的小鼠模型和恢复folliculogenesis化疗所致卵巢功能早衰,”干细胞研究和治疗,4卷,不。5日,第124条,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 大肠Geva和r·b·贾菲”角色的血管内皮生长因子在卵巢生理和病理,”生育与不孕,卷74,不。3、429 - 438年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 下午林和c·海恩斯”,血管内皮生长因子扮演一个多在女性生殖系统血管生成的作用,“生育与不孕,卷84,不。6,1775 - 1778年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. d·r·丹弗斯l . k . Arbogast Ghosh, a·迪r . Rofagha和c i•弗里德曼“血管内皮生长因子刺激preantral鼠卵巢卵泡生长,”生物的繁殖,卷68,不。5,1736 - 1741年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. v . r . Araujo通用席尔瓦,a . b . g . Duarte et al .,“血管内皮生长因子a_165年(VEGF-A_165年)刺激在体外发展和山羊preantral卵泡的卵母细胞的能力。”细胞和组织的研究,卷346,不。2、273 - 281年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. r·m·麦克菲r . a . Artac r·m·麦克菲et al .,“抑制血管内皮生长因子受体信号转导块卵泡发展但不一定破坏围产期鼠卵巢血管发展,”生物的繁殖,卷81,不。5,966 - 977年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l·d·杨,w . Wang李et al .,“paracine效应的相对贡献与直接分化脂肪干细胞移植介导心脏修复,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。第三条ID e59020, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m·迈尔斯k·l·布瑞特n . g . m . Wreford f . j . p .电子提单和j·b·克尔”量化方法在小鼠卵巢卵泡数量,”繁殖,卷127,不。5,569 - 580年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. n .怀德“当前病理方法测量瘤内微血管密度在乳腺癌和其他实体肿瘤,”乳腺癌研究和治疗,36卷,不。2、169 - 180年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. w·Tungwiwat g . Fucharoen t . Ratanasiri k . Sanchaisuriya和s . Fucharoen“非侵入性胎儿性别决定使用常规嵌套PCR分析胎儿DNA在母亲的血浆中”我们共同Chimica学报,卷334,不。1 - 2、173 - 177年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. j . Nichols b . Zevnik k Anastassiadis et al .,“哺乳动物胚胎多能干细胞的形成取决于POU转录因子Oct4、”细胞,卷95,不。3、379 - 391年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 钱伯斯,d·科尔比m·罗伯逊et al .,“Nanog功能表达克隆,胚胎干细胞的多能性维持因素,”细胞,卷113,不。5,643 - 655年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. d·j·瑞达J.-L。咀嚼、L.-H。Lim et al .,“转录调节Nanog OCT4和SOX2”生物化学杂志,卷280,不。26日,第24737 - 24731页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. t .杨爱瑾,“Amnion-derived干细胞:在临床应用的探索,“干细胞研究和治疗,卷2,不。3、第二十五条,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m z联手,m . Kucia t Jadczyk et al .,“关键作用的旁分泌作用干细胞在再生医学治疗:我们可以将茎细胞分泌旁分泌因子和微泡转化为更好的治疗策略,”白血病,26卷,不。6,1166 - 1173年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. L.-J。d . Wang Y . m . Chen乔治et al .,“在人类和小鼠肝组织移植评估sex-mismatched肝细胞移植为Y染色体序列实时定量PCR,”肝移植,8卷,不。9日,第828 - 822页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 美国科里奇,f . Pinarli c . Ozogul n . Tasdemir g .纳兹Sarac和t . Delibasi”保护cyclophosphamide-induced卵巢损害与骨骨髓来源间充质干细胞在青春期,”妇科内分泌学,30卷,不。2、135 - 140年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. k . s .史怀哲b·h·约翰斯通j·加里森et al .,“脂肪干细胞治疗小鼠变弱吸烟引起的肺癌和系统性的受伤,“美国呼吸和重症监护医学杂志》上,卷183,不。2、215 - 225年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. d . a . Redmer和l·p·雷诺兹在卵巢血管生成评论的繁殖,1卷,不。3、182 - 192年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. n .费拉拉惠普嘉宝,j . LeCouter“VEGF及其受体的生物学,”自然医学,9卷,不。6,669 - 676年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. c . Tamanini和m . de Ambrogi“发展中卵泡和黄体,血管生成”在家畜繁殖,39卷,不。4、206 - 216年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. r·c·齐默尔曼t·哈特曼s Kavic et al .,“血管内皮生长因子受体2-mediated血管生成对于gonadotropin-dependent卵泡发育是至关重要的,”临床研究杂志,卷112,不。5,659 - 669年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. y Takehara, a . Yabuuchi k Ezoe et al .,“恢复脂肪间充质干细胞对受损的卵巢功能的影响,“实验室调查,卷93,不。2、181 - 193年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. z Grzywocz,大肠Pius-Sadowska, p .绝et al .,”来自人类羊膜细胞生长因子及其受体在体外,”叶形线Histochemica et Cytobiologica,52卷,不。3、163 - 170年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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