文摘
间充质干细胞/基质细胞(msc)代表一个有前途的细胞来源的研究和治疗的应用程序,但它们的限制体外传播能力限制的应用程序。大量干细胞的自我更新可以通过重新编程细胞诱导多能干细胞(万能)可以很容易地扩展为未分化的细胞即使在大众文化。在这里,我们调查了差异化协议使人类iPSC-derived msc的生成和选择展示相关的表面标记表达谱(CD105和CD73)和功能特点。我们生成iPSC-MSCs从成纤维细胞和骨髓msc利用两种不同的重组结构。所有这些iPSC-MSCs展出正常骨骨髓来源的特点(BM) msc。直接我们BM-MSCs iPSC-MSCs相比表现出类似的表面标记表达谱但是短翻倍,而不衰老在20通道。考虑功能,iPSC-MSCs提供支持CD34支线层+造血干细胞的自我更新和集落形成能力。此外,iPSC-MSCs上涨抑制CD4免疫调节功能+细胞增殖,减少促炎细胞因子在混合淋巴细胞反应,并增加监管CD4细胞+/ CD69+/ CD25+早期的人口。总之,我们生成全功能从各种iPSC msc行不管他们的起始细胞源或重编程因子成分,我们建议iPSC-MSCs允许重复单元应用先进的治疗方法。
1。介绍
关于干细胞临床应用,间充质干细胞/基质细胞(msc)介绍了作为一个良好的细胞类型,可维护体外和有可能再生中胚层组织如软骨、肌腱、骨骼,在各种骨骼和肌肉疾病(审查[1])。此外,msc可以支持造血作用[2,3),能够调节炎症反应的动态相互作用与先天和适应性免疫系统(4- - - - - -6]。然而,msc在长期文化的扩散能力有限导致细胞衰老后8 - 10通道挑战代大规模细胞产量,这将是必不可少的重复治疗的应用。原则上,这种需求将被满足通过多能干细胞具有无限增殖能力,可以从患者的样本通过重组生成的体细胞诱导多能干细胞(万能)7- - - - - -10]。这样的人类则响应分化期间刺激在体外培养和最近的一代iPSC-derived msc (iPSC-MSCs)是描述和证明iPSC-MSCs显示相应的抗原和骨髓msc分化能力(BM-MSCs)和表现出相当多的功能特性11- - - - - -16]。此外,有令人信服的证据,iPSC-MSCs高扩展能力可以被移植在许多退化性疾病导致类似的结果BM-MSCs [13,15,17]。然而,越来越多的证据表明,来自不同起源msc异质种群表现出变量(基因表达模式18,19),呈现不同的表面标记20.),或显示增殖潜力和分化能力降低21- - - - - -23]。
此外,一个成功的方法iPSC-based再生医学治疗细胞应用程序依赖于建立一个有效的分化能力协议导致所需的高纯度的细胞群。最重要的是,必须避免有害污染未分化的多能干细胞,排除畸胎瘤形成的风险。因此,健壮的一代人口同质iPSC-MSC细胞特征相同的善意msc和类似甚至增强功能如扩散、造血支持和抗炎反应需要进一步关注。这里,我们利用三行iPSC来自纤维母细胞的分化潜能或主msc与山中重组因子(10),即Oct4、Sox2 Klf4,原癌基因(OSKM)或汤森因素(7),即Oct4、Sox2 Nanog, Lin28 (OSNL)。MSC分化我们应用慢病毒选择构造带CD105, CD73-promoter驱动荧光记者和新霉素/ Puromycin-resistance-transgenes丰富大部分分化为完全分化MSC。接下来,我们探讨了抗原,分化潜能,扩散能力、造血支持,和免疫低下可能在调节淋巴细胞增殖,促炎细胞因子分泌,活化标记的iPSC-MSCs直接比较骨髓msc (BM-MSCs)从三个不同的捐助者(LM02、LM05和LM06)。
2。材料和方法
2.1。人类“诱导多能性”细胞培养
人类胎儿肝纤维母细胞(FLF)“诱导多能性”细胞提供了使用通过慢病毒转导重组因子从内部供应Oct4、Sox2, Klf4,原癌基因(OSKM) [24)和Oct4、Sox2 Nanog, Lin28 (OSNL) [25]。人类万能干细胞培养在辐照小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)在37°C和5%湿润孵化器有限公司2淘汰赛中含DMEM / F-12 20%血清替代(技术),20 ng / mL重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,提供从莱布尼兹汉诺威大学),0.1毫米β巯基乙醇(技术),1毫米谷酰胺,1%不重要的氨基酸,1%青霉素和链霉素(所有从Sigma-Aldrich)。
媒体被离解每周每天改变,细胞分裂与200 U /毫升的胶原酶IV(技术)和细胞被镀上Matrigel-coated盘子中补充了40 ng / mL bFGF进一步分化。
2.2。推导和浓缩的人类MSC-Like细胞
引发iPSC向MSC-like分化细胞,人类iPSC殖民地种植在基底膜基质(康宁)保持与MSC诱导媒体组成的DMEM(血糖过低,Sigma-Aldrich),定义10%胎牛血清(的边后卫,干细胞的技术),1%不重要的氨基酸,1% penicillin-streptomycin, 2 ng / mL人类重组bFGF 7天。接下来,细胞治疗与胶原酶IV 3分钟37°C,分离玻璃珠和温柔的移液,然后通过40毫米细胞过滤器(费舍尔科学)。单个细胞被播种到gelatin-coated板1×104细胞/厘米2媒体在MSC。
促进浓缩和筛选msc在万能的标准差异化协议到msc、两个阳性标记的组合,即CD73和CD105在msc(持续表达),选择生产MSC-specific选择向量。启动子区域CD73和CD105和结扎放大成相应的慢病毒骨干;CD105启动子pRRL-Puro-IRES-GFP;和CD73 pRRL-neo-IRES-dTom启动子。(慢病毒脊椎内部提供基于慢病毒结构从阿克塞尔Schambach实验室)。细胞在500年被选中μg / mL g - 418和4μ从Sigma-Aldrich g / mL Puromycin-dihydrochloride(都)在文化媒体2周,直到untransfected细胞被杀。功能荧光染料确诊的向量表达式转导细胞的荧光显微镜。
Double-positive msc人口转导和pRRL-CD105-Puro-IRES-GFP pRRLCD73-neo-IRES-dTom与FACSAria II纯化细胞分选仪(BD生物科学)。总共2×106镀排序细胞立即回gelatin-coated板块促进依从性。24小时后,新鲜prewarmed msc中添加和细胞被允许扩大和融合达到近100%。在不同时间点细胞数。骨髓msc被孤立在法兰克福大学医院(如前所述)(26]。10 ~ 30毫升的骨髓不久从股吸气腔所需的患者髋关节置换手术知情同意后,依照《赫尔辛基宣言》。密度梯度分离后,光密度单核细胞部分被播种在T25 (TPP)组织培养在媒体前面提到的MSC烧瓶。
2.3。慢病毒载体生产
HEK 293 t细胞被用于病毒生产。3×106在转染细胞被播种一天10厘米菜(TPP)在DMEM(高葡萄糖,生活技术)补充10%谷酰胺青霉素、链霉素的边后卫和1%和1%。第二天,媒介与8毫升DMEM补充25交换μM氯喹(Sigma-Aldrich)。对慢病毒质粒编码呕吐/波尔(pCDNA3.GP。预备,10μg), RSV-Rev (pRSV-Rev 5μg), VSV-G (pMD2。G, 2μg),包装质粒编码各自的转基因pRRL-Puro-IRES-GFP和400年pRRL-neo-IRES-dTom涨跌互现μL (ddH2O和100μL (1.25 CaCl2。的plasmids-CaCl2混合添加一滴一滴地2 xhbs并观察直到沉淀在相差显微镜下可见,然后添加到HEK细胞。6小时后,介质交换了10毫升DMEM高与10%葡萄糖补充谷酰胺青霉素、链霉素的边后卫和1%和1%。48小时后,收集上清液,经过0.45μm过滤器,离心机,享年14000岁g 8 h。病毒颗粒在200年resuspendedμL PBS (Sigma-Aldrich)。病毒滴度测定HEK 293 t细胞的转导序列稀释通过流式细胞术和分析报告基因的表达。一般来说,浓度在1 - 2的范围107每毫升病毒颗粒。
2.4。抗原通过流式细胞术分析
评估immunophenotypic BM-MSCs简介和iPSC-derived msc、单个细胞悬浮液被胰蛋白酶消化准备(技术)和洗冷PBS含有1%牛血清白蛋白BSA(默克密理博)。接下来,2×105细胞培养与各自的30分钟APC-conjugated单克隆抗体:CD73, CD90、CD105、CD34、CD45,和CD19 (BD生物科学中列出所有表1),随后resuspended密度的2×105细胞每200μL在寒冷的包含1% BSA PBS。非特异性荧光是由孵化isotype-matched单克隆抗体的细胞能整除。
样本运行在流式细胞仪石中剑(BD生物科学)血细胞计数器使用流式细胞仪天后软件。为每个分析,至少10000个细胞化验。数据进一步处理使用FlowJo软件(树明星)。
2.5。生长动力学
从三种不同的捐赠者人类bmsc (LM02 LM05, LM06)和3 iPSC-MSCs线镀(2×104细胞/一式三份)到12-well盘子。细胞后72小时在每个通道(10通道为iPSC-MSCs BM-MSCs 15章节)。累积人口倍增计算使用公式:(27),细胞培养液的细胞数量和NH收获数量。产生累积两倍水平,计算每个通道的人口翻了一番,然后添加到前面的段落的人口翻倍水平。文化被抛弃时就显示出衰老表型停止扩散。
2.6。在体外脂肪形成的、Chondrogenic和成骨分化
分化诱导iPSC-MSCs进行21天在不同的媒体分化。完全104每口井的细胞被播种在six-well盘子(TPP)。与MSC诱导成骨分化,细胞培养介质包含1μ0.5 M地塞米松,μM抗坏血酸,10毫米b-glycerol磷酸从Sigma-Aldrich(所有)。脂肪形成的诱导、细胞培养的MSC中补充了50μ50 g / mL消炎痛(Sigma-Aldrich)μg / mL抗坏血酸,和100 nM地塞米松。chondrogenic分化,iPSC-MSCs离心机在0.2毫升的介质在500 g 10分钟15毫升猎鹰管形成颗粒。球团培养在MSC与0.01中补充μ地塞米松,397μg / mL抗坏血acid-2-phosphate (Sigma-Aldrich), 1毫米丙酮酸钠(Sigma-Aldrich), 10 ng / mL转化生长因子-β1 (TGF -β1、生活技术)和1% insulin-transferrin-selenium(技术)。骨生成评估了茜素红染色,油红染色脂肪形成,软骨形成由阿尔新蓝染色从Sigma-Aldrich(所有)。
2.7。qRT实时聚合酶链反应
细胞总RNA分离使用试剂盒试剂(技术)。合成RNA受到DNase治疗和互补脱氧核糖核酸合成工具(技术)与随机五个一。混合电力SYBR绿色主人qRT PCR分析进行基于StepOne +周期计(应用生物系统公司)使用标准的设置。我们收集样本至少三个独立的实验。表达式值的人类过氧物酶体proliferator-activated受体γ(PPARγ),PPARα脂蛋白脂肪酶(LPL),胶原蛋白II型(COL2) aggrecan(能)、骨钙素(OCN)和碱性磷酸酶(ALP)规范化GAPDH表达式。引物序列表中列出2。
2.8。Coculture CD34的+祖细胞与iPSC-MSCs
人类iPSC-MSCs或BM-MSCs层增长到80% confluency six-well盘子然后对待mitomycine-C (Sigma-Aldrich),以防止细胞过度生长。24小时后,介质被和纯化CD34+细胞(resuspended 7.5×104细胞每)被添加在长期培养基含有2毫升α最小的基本介质(技术)与20%的边后卫,1μmol / L氢化可的松(Sigma-Aldrich)和0.1毫米β巯基乙醇。cocultures孵化了20天介质交换每周两次。不依从可行的细胞数在指定的时间点(每天10和20)。CD-markers为造血分化也决定8天后CD34、CD45、CD-11b, CD-14。实验重复三次。
2.9。在体外祖化验
影响人类的iPSC-MSCs或BM-MSCs使用集落形成细胞祖细胞进行了分析测定。人类骨髓CD34+细胞(2×106)获得Lonza镀,在媒体2毫升的甲基纤维素(干细胞的技术)有或没有iPSC-MSCs和综合。殖民地> 50细胞得分4和8天后孵化。
2.10。CD4的评估+早期iPSC-MSCs增殖反应
标准5天高文化建立了5×104丝裂霉素C-treated (Sigma-Aldrich)人类外周血单核细胞(PBMCs)诱导和2×105人类CD4+t细胞(Lonza)在96 - 200年圆底板块μL完全培养基组成RPMI 1640(技术)与0.1毫米补充β巯基乙醇,10%的边后卫,GLUTAMAX我(生命技术),100 U /毫升青霉素,100μ存在与否的g / mL链霉素iPSC-MSCs BM-MSCs。分析CD69的表达+和CD25+调节t细胞的人口,106应答细胞混合2.5×105刺激器PMNCs 2×10的存在与否5iPSC-MSCs或BM-MSCs。高钙进行一层支流Mitomycine C治疗前一天msc播种。扩散决心与BrdU ELISA测定(罗氏)根据制造商的指示。和干扰素- - 2γ浓度测定在MSC /高coculture上层清液使用商用ELISA (BD生物科学)根据制造商的指示。CD25和CD69 CD4 (BD生物科学)表达式+细胞被流式细胞术分析。
3所示。结果与讨论
3.1。代的msc与梭形形态从人类万能
访问一个适当的和同质的挑战与持续增长动力学来源msc,趋化因子或生长因子的免疫抑制的潜力和生产支持内生再生分化导致质疑同质的msc可以来源于人类诱导多能干细胞(万能)。为了解决这个问题,我们使用两种不同来源的体细胞,肝纤维母细胞和骨骨髓来源msc (BM-MSCs),以及这些细胞进入细胞则重新编程。除了两个来源的躯体细胞开始,我们也比较两种稍微不同的重组因子组成的鸡尾酒。组合的一个因素是由Oct4、Sox2 Klf4,原癌基因(OSKM)最初被随后在众多出版物(山中伸弥8- - - - - -10)和其他组合包括Oct4、Sox2, Nanog, Lin28 (OSNL)被詹姆斯汤姆森和一些进一步组织(7,25]。综上所述,我们生成胎儿肝脏fibroblast-derived万能OSKM和OSNL (FLF万能干细胞)和骨髓MSC-derived万能与OSKM (MSC-iPSCs),强烈表达OCT4、SOX2, SSEA-4(图1)。iPSC线都是差异化基于之前报道CD73差异化协议导致约70%+/ CD105+细胞(14),我们已经做了一些修改,以便抗生素选择和荧光记者净化(图2(一个))。正如所料,Epithelial-Mesenchymal转变发生在分化引起人口异构(图2 (b))。然而,早期mesenchymal-like细胞浓缩,我们观察到中间值和高度CD73-dTom / CD105-GFP表达细胞数量(图2 (c))。我们分类高度表达GFP / dTom阳性细胞和获得了更多的同质人口(图2 (d))。刺激的第一次描述iPSC-derived msc丽安等人于2010年(15],许多其他团体试图直接和自发分化到msc的细胞则通过各种方式。我们考虑使用慢病毒的记者和选择结构作为重要的工具来监控细胞的纯度人口分化过程中,以确保优质的同质性在最终的细胞群。最近这样的选择结构中引入其他血统的差异化协议(28]。因此,在本研究架构应用于选择CD73相似向量+/ CD105+积极的iPSC-MSCs。有趣的是,我们获得了大量的iPSC-MSCs (R1: 63.3%)和一个更小的部分iPSC-MSCs (R2: 6.43%),我们得出的结论是,排序越丰富人口可能提供最均匀的细胞群。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.2。iPSC-MSCs Immunophenotype、增殖和分化潜能
为了描述iPSC-MSCs根据国际社会的细胞疗法(ISCT)标准(29日)细胞表面标记表达式的流式细胞术分析了所有三个iPSC-MSC线条和BM-MSCs在早期的段落(文章3 - 6)。所有3分化和丰富iPSC-MSCs MSC-like抗原概要文件显示,表现出高CD105, CD73, CD90和缺乏CD34、CD45、CD19表达式(图3(一个))。因此,我们能够证明同质人群可以分离和纯化的所有三个iPSC行独立的体细胞源(成纤维细胞或骨髓msc)和重组法(OSKM或OSNL因子鸡尾酒)。引人注目的是,表面标记CD105 CD73的子主题表达荧光记者利用转基因和抗生素选择磁带,在近100%的纯化细胞容易检测,表明我们丰富的高纯度iPSC-MSCs。有趣的是,CD90不仅是积极的在所有iPSC-MSCs线以及BM-MSCs还未分化的细胞则(MSC-iPSCs)。此外,造血表面标记物的表达msc和万能。
(一)
(b)
增长动力学iPSC-MSCs与BM-MSCs相比表现出更大的增殖能力较短(图翻倍3 (b))。在我们的实验中,三个独立派生BM-MSCs展出翻倍约36 h在早期的段落,长时间高于60 h通道8左右,其次是停止的扩散明显衰老表型通道(图10左右3 (b))。相比之下,所有三个iPSC-MSCs展出一倍时间短得多(约20 h在早期的文章)。的倍增时间延长超过60 h不发生之前通过后15甚至20通道iPSC-MSCs并未显示出衰老表型。这些结果与以前报道的数据桑切斯et al .,谁表明,人类胚胎干细胞CD73+和CD90+msc的增殖率高于BM-MSCs (ESCs-MSCs ~ 18倍相比,文化在30天内BM-MSCs ~ 5倍),但类似于脐带派生msc(30天~ 15倍)12]。的更健壮的增殖潜力iPSC-MSCs BM-MSCs表明一个重要的优势,只要重复相同的移植MSC批最优惠(审查的影响与年龄相关的疾病,看到30.])。尽管msc的剂量灌注目前争议讨论不同的障碍,可以假设越来越需求的msc移植可能出现在某些障碍。例如,肌肉骨骼损伤发生在老年人(高31日]愿敦促工程msc具有更高的增殖能力,但与BM-MSCs相同的功能的能力。因此,iPSC-MSCs可以作为“现成的移植,可提供的血液/干细胞银行机构和用于一些退化性疾病。此外,这样的well-proliferating同质性越高,nonsenescent iPSC-MSCs数量显示有更高的安全性和有效性配置文件和这些细胞可能更多的长期治疗,如炎症性肠病或在预防移植物抗宿主疾病或移植排斥在未来移植设置(12]。
解决iPSC-derived msc分化我们应用协议的功能对adipo,骨的,或chondrogenic血统,分别进行细胞学染色和rt - pcr对细胞形态的变化和相关标志基因的表达。重要的是,所有3 iPSC-MSCs可以产生这三个血统。然而,相比BM-MSCs的质量和形态学特征分化iPSC-MSCs表现出轻微的差异。iPSC-MSCs都更不愿意去和各自的总数分化细胞含脂滴低于BM-MSCs(图4)。这个观察证实了脂肪细胞特定的信使rna表达水平的PPAR -水平α和PPAR -γ在比BM-MSCs iPSC-MSCs显著降低。LPL表达水平也明显()低FLF-iPSC-MSCs (OKSM)和MSC-iPSC-MSCs OKSM BM-MSCs相比。另一方面iPSC-MSCs更有亲和力分化成骨和chondrogenic血统。逐渐矿物质形成开始在iPSC-MSCs 1周前,茜素红染色阳性的骨钙素的表达和碱性磷酸酶是BM-MSCs可比。描述软骨形成,相应的颗粒与阿尔新蓝染色更强烈和胶原蛋白II显示各自的基因表达谱表达式相比,iPSC-MSCs BM-MSCs更高。然而,Aggrecan同样表达了在所有三个iPSC-MSCs和BM-MSCs。已经表明,一些msc例如来自骨膜和滑膜很容易能够区分的骨头和软骨,但只有一个小人口其中可能引起脂肪细胞(23,32],我们推测这种MSC-related表型类似iPSC-derived msc。
3.3。支持对长期CD34的影响+细胞的维护
骨髓领域起着至关重要的作用在保护造血祖细胞提供足够的血液细胞的一生中(33,34]。这个活跃的微环境是培育niche-accompanying细胞分泌的因素如msc和正弦内皮细胞支持静止状态的一些造血祖细胞(35,36]。msc提供的支持细胞微环境调节自我更新和分化的骨髓中造血干/祖细胞(37,38]。此外,基于他们的分泌细胞因子支持造血细胞增殖,MSC被认为作为一个优秀的细胞类型用于长期的祖细胞培养(39]。作为不受干扰的功能进一步说明iPSC-MSCs我们利用iPSC-MSCs和CD34 coculture系统+造血干/祖细胞和调查总细胞数,集落形成能力,CD34的同质性+细胞。10天后,所有三个iPSC-MSC coculture化验包含显著()更多的不依从细胞CD34相比+细胞培养基质。比较coculture CD34+细胞与iPSC-MSCs BM-MSCs,我们观察到一个健壮的(但在我们的实验中不显著)不依从细胞数量增加iPSC-MSCs化验(图5(一个))。对于OSKM所衍生iPSC-MSCs(图5(一个))类似的结果即使在20天。金属堆焊后CD34+MethoCult媒体细胞集落形成试验时,我们观察到显著增加在所有iPSC-MSCs殖民地和BM-MSCs线4天后coculture比较单一CD34+文化。此外,8天MethoCult文化导致显著()更高的殖民地数字iPSC-MSCs和2行BM-MSCs(图5 (b))。这些数据进一步演示了一个重要的功能方面,由之前的调查显示支持msc在造血作用的本质通过提供合适的微环境对干细胞/祖细胞不断增长的网站(40]。与我们的数据我们也提供了证据,明显高于CD34+细胞数量维持干细胞状态iPSC-MSCs和BM-MSCs而不是传统的造血中(图5 (c))。这些增强扩散和提高集落形成能力可以观察到后8天的coculture iPSC-MSCs线表明所有这些都代表了一个可靠的细胞来源支持造血干/祖细胞的长期培养。一些出版物的影响不同的支线层和涂层维护和扩张的祖细胞和体细胞模仿的重要性在活的有机体内条件和提供类似的微环境41- - - - - -43]。
(一)
(b)
(c)
3.4。iPSC-MSCs免疫抑制的影响
开创性研究间充质干细胞为基础的方法被用于抑制自身免疫性疾病的免疫反应,移植物抗宿主病(GVHD),或实体器官移植后(审查[44,45])。在同种异体细胞或器官移植、细胞毒性和辅助t淋巴球细胞被激活并杀死目标或促进器官移植的排斥反应46]。因为msc能分泌抗炎分子抑制炎症反应(47),一个人可以推测iPSC-derived msc还可以提供一个有价值的细胞免疫调节疗法(来源审查[11])。为了调查的免疫调节特性iPSC-MSCs我们使用混合淋巴细胞反应(高)CD4混合模拟炎症反应+淋巴细胞与健康供者外周血单核细胞(PMNCs) iPSC-MSCs BM-MSCs支线层,分别。首先,我们检查了CD4细胞+在高钙测定淋巴细胞增殖BrdU合并。人类FLF-iPSC-MSCs (OSNL)和hMSC-iPSC-MSCs (OSKM)可以显著()抑制淋巴细胞增殖和我们观察到类似的减少FLF-iPSC-MSCs (OSKM)和BM-MSCs(图6(一))。msc已知展览管理属性在不同类型的免疫细胞包括淋巴细胞),但到目前为止,它已经不够考虑到什么程度iPSC-MSCs显示这种调节活动。以前,免疫监管iPSC-MSCs对自然杀伤(NK)细胞的影响已经被研究了朱利安尼et al .,它表明,天然杀伤细胞细胞溶解的机械中断通过抑制NK细胞增殖和活化- 2通过表达不同的激活标记和ERK1/2信号(48]。也有大量的证据表明,淋巴细胞可以通过msc分泌抗炎细胞因子的反应抑制促炎的刺激通过和干扰素- - 2介导的γ(49,50]。因此,我们研究了干扰素-的数量γ(图6 (b))和(图- 26 (c)在上层清液的高钙化验iPSC-MSC coculture实验。虽然我们能够观察到明显降低干扰素-γ水平在iPSC-MSC BM-MSCs coculture实验,我们只能检测一个小- 2水平的降低控制BM-MSC coculture实验以及iPSC-MSC实验。然而,这些结果支持先前的调查结果,msc可以通过抑制t细胞增殖抑制炎症反应(51),由于一氧化氮产量减少促炎细胞因子,抑制Stat-5磷酸化在内存和细胞毒性t细胞(4]。此前有报道称高coculture与msc显著增加监管标记(CD69、CD25)表达CD4人口+细胞(5,52- - - - - -54]。我们的研究结果表明MSC-iPSC-MSCs和BM-MSCs显著增加早期激活t细胞CD69标志+人口相比,高钙(图6 (d))。即使CD69的增加+人口FLF-iPSC-MSCs并未达到显著性水准,我们推测,这些细胞产生免疫调节的影响。此外所有iPSC-MSCs支线层能够显著提高CD25+人口相比,高钙(图6 (e)),这是按照以前的出版物(52,55]。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
4所示。结论
在这里,我们描述一个慢病毒选择磁带介导允许高度的浓缩功能人类iPSC-derived msc不同体细胞开始细胞。这样iPSC-MSCs表现出更高的增殖能力和类似的表面标记相比,真正的msc来自骨髓。此外,我们能够证明iPSC-MSCs CD34的长期文化的支持+造血干/祖细胞与原状集落形成能力。最后,人类iPSC-MSCs也表现出与降低CD4免疫调节功能+早期的人口,减少干扰素-γ分泌,增加监管t细胞数量。因此,iPSC-MSCs可能被认为是相关的细胞资源为未来移植移植物抗宿主病的研究在临床前模型和退化性自身免疫性疾病。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者要感谢马提亚Ballmaier和汉诺威医学院的流式细胞术单位的技术援助。作者感谢乌苏拉意大利船级社(莱布尼兹汉诺威大学)支持bFGF和阿克塞尔Schambach(汉诺威医学院)支持与慢病毒载体以及里特•Eggenschwiler(汉诺威医学院)帮助iPSC文化和细胞特征。作者还要感谢Raymund Buhmann和基督教Wichmann(路德维希Maximillian大学、慕尼黑)的支持设计和解释结果的iPSC-MSCs CD4免疫调节效应+淋巴细胞)。部分的研究资助通过卓越的重生集群DFG (EXC 62/2)和洛伊细胞和基因治疗中心法兰克福。