01:01 in the absence of protective HLA class I signal peptides, we utilized soluble HLA technology in class I negative LCL cells in order to characterize HLA-01:01-bound ligands by mass-spectrometry. To understand the immunological impact of these analyzed ligands on NK cell reactivity, we performed cellular assays. Synthesized peptides were loaded onto recombinant T2 cells expressing HLA-01:01 molecules and applied in cytotoxicity assays using the leukemia derived NK cell line (NKL) as effector. HLA-E in complex with the self-peptides demonstrated a shift towards cytotoxicity and a loss of cell protection. Our data highlights the fact that the HLA-E-peptidome is not as restricted as previously thought and support the suggestion of a posttransplant role for HLA-E."> HLA-E:演讲的肽曲目影响细胞免疫Response-Implications HSCT的结果 - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果
标志”src=

干细胞国际
PDF
干细胞国际/2015年/文章

研究文章|开放获取

体积 2015年 |文章的ID 346714年 | https://doi.org/10.1155/2015/346714

托马斯•Kraemer亚历山大·a·侯赛因·特雷弗•更具Heike Kunze-Schumacher, Rainer Blasczyk克里斯蒂娜Bade-Doding, ”HLA-E:演讲的肽曲目影响细胞免疫Response-Implications HSCT的结果”,干细胞国际, 卷。2015年, 文章的ID346714年, 12 页面, 2015年。 https://doi.org/10.1155/2015/346714

HLA-E:演讲的肽曲目影响细胞免疫Response-Implications HSCT的结果

托马斯Kraemer,1 亚历山大·a·侯赛因,1 特雷福更具,1 Heike Kunze-Schumacher,1 Rainer Blasczyk,1 和 克里斯蒂娜Bade-Doding1

1输血医学研究所,30625年汉诺威医学院汉诺威,德国

学术编辑器:Andrzej兰格
收到了 2015年2月18日
修改后的 2015年5月14日
接受 2015年5月20
发表 2015年8月12日

文摘

HLA-E轨迹编码模类Ib分子,许多免疫功能抑制NK细胞激活ctl。结构分析HLA-E / NKG2A复合物可视化微调的保护性免疫反应通过AA HLA-E之间的相互作用,结合肽,NKG2A / CD94。损失的细胞保护通过废除HLA-E / NKG2A订婚是依赖于HLA-E肽。HLA-E的作用具有重要的结果不是很清楚,但可能归因于其肽曲目。调查活动的HLA - 01:01没有防护的HLA类我信号肽,我们利用可溶性HLA技术在课堂上我消极的拼箱的细胞为了描述HLA - 由质谱仪01:01-bound配体。了解免疫这些分析配体对NK细胞活性的影响,我们进行了细胞化验。合成肽被加载到重组表达HLA - T2细胞 01:01分子和应用于白血病细胞毒性分析使用派生NK细胞系(NKL)效应。HLA-E与自身多肽显示出转向复杂的细胞毒性和细胞保护的丧失。我们的数据突出表明,HLA-E-peptidome限制不如先前认为的和支持的建议HLA-E的作用具有重要的意义。

1。介绍

古典文学课我人类白细胞抗原(抗原,HLA-B和HLA-C)存在allele-specific自我或致病性CD8肽+免疫效应细胞。肽的体验,可以由HLA分子完整地确定pHLA复合物的多样化的景观,从而访问互动为t细胞表面受体(TCR)。即使一个不匹配的重链(hc) HLA的类肽分子可以影响绑定配置文件和曲目1- - - - - -8]。从HLA类我分子高度多态和大部分的多态性影响肽结合地区(PBR) [6),它变得明显,系统化的HLA匹配是实现成功的关键外源的造血干细胞移植(HSCT)。对于许多血液恶性肿瘤HSCT被用作治疗治疗尽管组成posttransplantation相关并发症的发展严重的移植物抗宿主病(GvHD),感染和复发。为了达到最好的结果,当没有HLA相同的同胞供体是可用的,匹配的抗原,HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, DQ无关的捐赠者和接受者之间让最好的机会最大化HSCT的成功(9,10]。

最小化posttransplantation并发症的风险过程中有人建议多态HLA-E越少可能负责的结果具有重要的意义11- - - - - -13]。HLA-E属于群模HLA类分子,可以从经典HLA分子类我杰出的结构由两个主要特征:(I)只有13 HLA-E等位基因是已知的,虽然只有两个 01:01和 已被证明有助于分子免疫功能(14];(2)提出了已知的肽的曲目HLA-E分子非常有限,建议peptide-HLA-E (pHLA)复合物免疫系统相对不变的配体。然而,HLA-E众所周知是受体的配体分子的先天和适应性免疫系统15- - - - - -21]。它变得明显,比之前认为的更大的展示肽存在并提供免疫原性pHLA-E分子可以刺激先天和适应性免疫反应22- - - - - -25]。

次要组织相容性抗原的背景——(mHag)介导的GvHD HLA匹配HSCT, HLA-E的角色已经解决。被假定一个竞争的经典HLA分子HLA-E mHags的演讲可能发生高度炎症环境中诱导其upregulation posttransplantation [11]。这反过来可以有益的结果在降低移植物抗宿主病的风险高,否则将HLA匹配HSCT关于mHAG不相容(26]。另一个假设是相关的角色alloreactive自然杀伤(NK)细胞在t细胞耗竭HSCT关于graft-versus-leukemia (GvL)异体移植的效果27]。这种效应与不匹配的捐献者杀手immunoglobulin-like受体(吉珥)和病人吉珥配体,是由成熟的NK细胞在移植后的收件人数周出现。早期的时期的NK细胞群表型之间具有重要的意义−NKG2A+是主要的。的亲和力NKG2A / CD94 HLA-E取决于结合肽;因此不同的肽的演讲HLA-E可能会影响这些NK细胞的抑制作用。

健康细胞表面HLA-E描述呈现一组有限的高度保守的疏水肽来源于经典HLA类我前导肽序列(28),这些配合物配体NKG2 / CD94人类NK细胞受体家族(18,20.]。这个受体家族包含两个受体只承认HLA-E,尤其是抑制NKG2A / CD94和刺激NKG2C / CD94受体(19]。基于交互与HLA-E NKG2 / CD94受体,NK细胞可以间接地监视我HLA类分子的表达在细胞内。HLA类的演讲我领导人通过HLA-E肽是依赖于细胞的健康状态(29日]。在这些细胞经历细胞压力,HLA-E现在热休克蛋白质片段(例如,HSP60) [30.),这些pHLA-E复合体抑制受体NKG2A / CD94绑定。抑制信号导致后续的结果废除NK细胞介导细胞溶解,通过激活触发信号刺激受体NKG2D, NKp46, NKp44或NKp30 [31日- - - - - -33]。HLA-E分子健康细胞的保护功能完整的先天免疫和适应性免疫调查系统,主要是通过古典实现HLA分子。此外HLA-E分子发挥重要作用在病毒干扰,例如,人类巨细胞病毒()血巨细胞病毒感染。在感染血巨细胞病毒经典HLA类我分子是由病毒免疫逃避蛋白表达下调,以及缺乏经典HLA分子类我使NK细胞敏感细胞介导溶菌作用[34]。为了避免这种情况,病毒进化的一种有效方法,利用HLA-E分子(35,36]。肽VMAPRTLIL,源自UL40血巨细胞病毒蛋白质,模拟信号肽序列存在于大多数HLA-C球蛋白;因此, 复杂能够规避NK细胞介导细胞溶解,作为配体受体NKG2A / CD94 [37]。VMAPRTLIL肽已被绑定到报告 01:01以及 01:03 [29日]。保存的HLA-E衍生肽血巨细胞病毒因此允许病毒逃避免疫系统的识别。然而,扩大NKG2C / CD94+NK细胞子集被报道在感染者血巨细胞病毒,建议pHLA-E复合物的存在容易NKG2C / CD94受体的配体(38,39]。这NKG2C / CD94的扩张+NK细胞子集后,据报道,从HLA-E不可或缺的表情感染细胞以及不同的细胞因子il - 12和IL-15的存在。然而,这些NK细胞的扩张是donor-dependent尚不清楚如果NKG2C / CD94的扩张+NK细胞仅限于由HLA-E肽。

pHLA-E复合物的结构分析与受体结扎表明先天NKG2 / CD94受体分辨的细微差别的氨基酸(AA)序列结合肽(40]。机制的某些pHLA-E复合物激活或抑制NK -或t细胞反应然而仍然没有完全理解(16,40]。

之间的相互作用的结构基础NKG2A / CD94和HLA-E已被证明为HLA-E绑定到VMAPRTLFL肽来源于HLA-G [41]。事实上细微变化的AA组成结合肽可以影响之间的交互NKG2A / CD94或NKG2C / CD94受体复合物和HLA-E。的主要贡献HLA-G衍生肽是由肽介导的残留p5-Arg并通过氢键p6-Thr CD94-Ser110和CD94-Gln112,分别。然而,NKG2A单元贡献只残留pro - 171与肽位置p5-Arg范德瓦耳斯键。AA差异多肽的p5已经证明对受体识别的影响(37]。

到目前为止,HLA-E限制配体的序列和功能略微自我或致病的起源是确定。利用可溶性HLA技术(42我们确定了肽的特性和变化 01:01肽和他们的能力对NK细胞功能的影响。

2。材料和方法

2.1。细胞系

HLA类我B-LCL不足721.221和水龙头缺乏T2细胞系维护在RPMI 1640(生活技术,达姆施塔特,德国)补充10%热灭活胎牛血清(FCS), 2毫米谷酰胺,100 U /毫升青霉素,100 g / mL链霉素(C-C-Prom Oberdorla,德国)。生产的慢病毒HEK 293 t细胞在DMEM培养(生命技术)补充10%热灭活FCS, 2毫米谷酰胺,100 U /毫升青霉素,100 g / mL链霉素和1毫克/毫升Geneticin(技术)。人类的杀手Ig-receptor(吉珥)−细胞毒性NK细胞系(NKL) [43,44](请提供的c·福尔克教授,汉诺威医学院,汉诺威,德国)是培养与热灭活15% FCS RPMI补充,200 U - 2 /毫升(美国新泽西PeproTech,落基山)2毫米谷酰胺、丙酮酸钠1毫米,100 U /毫升青霉素,100 克/毫升链霉素。所有细胞培养在37°C有限公司2大气的5%。多克隆得到了NK细胞从PBMCs健康献血者(汉诺威医学院)。

2.2。多肽和抗体

HLA-E限制自身多肽,在这项研究中,确定合成和购买从热费希尔科学(乌尔姆,德国)和溶解在DMSO溶液的浓度为100毫克/毫升。ELISA和亲和纯化可溶性(s) HLA-E分子anti-HLA类我单克隆抗体(mab)(克隆W6/32) (AbD Serotec,杜塞尔多夫,德国)或马伯anti-V5(生活技术,达姆施塔特,德国)使用。马伯的反β2 m结合辣根过氧化物酶(合)(Dako,汉堡,德国)是用于ELISA检测。马伯anti-HLA-E(克隆3 d12)贴上藻红蛋白(PE)(美国圣地亚哥BioLegend)是用于流仪分析。

2.3。克隆和转导sHLA-E或mHLA-E结构

互补脱氧核糖核酸片段的 01:01(外显子1 - 7) 01:01(外显子1 - 4)是由PCR、克隆放大到向量pRRL.PPT.SFFV.mcs慢病毒。如前所述(以前45]。慢病毒粒子的生产 HEK293T细胞转染和5μ克pRRL / mHLA-E或pRRL / sHLA-E向量,psPAX2(包装质粒),和pDM2G(信封质粒)Lipofectamine 2000(生活技术,达姆施塔特,德国)。然后B-lymphoblastic拼箱721.221细胞转导与病毒颗粒包含pRRL / sHLA-E pRRL / mHLA-E和T2细胞。四天之后由拼箱721.221细胞转导sHLA-E分子的表达是由ELISA定量验证的。自慢病毒为sHLA-E构建编码包含V5标记验证应用通过anti-V5马伯或anti-HLA类我(W6/32)马伯捕获抗体。anti-b2m-HRP马伯用于检测和细胞克隆sHLA-E最高的表达被用于大规模生产。

2.4。生产sHLA-E分子sHLA-E肽配体的识别

大规模生产sHLA-E分子 01:01 /拼箱721.221细胞培养生物反应器和蛋白的生产监控每周的水平。亲和纯化sHLA-E分子的细胞培养上清液进行如前所述[45]。在短暂的上层清液池,在1200转离心20分钟,0.45的过滤μm截止滤光片(缝匠肌、哥廷根、德国)。净化了pH值8.0使用NHS (N-hydroxysuccinimide)激活HiTrap列,precoupled马伯W6/32。sHLA-E分子的洗脱进行0.1甘氨酸/盐酸缓冲pH值2.7。

2.5。质谱分析sHLA-E肽配体

大约2毫克的纯化sHLA-E蛋白用于肽分析。纯化sHLA-E分子对待0.1%三氟乙酸(组织)从三聚物的洗提肽复合物。hc和肽的分离β2米是通过膜过滤通过YM 10 kD截止(微孔,Schwalbach,德国)。随后肽的分离和分析的Eksigent nano-LC超二维液相色谱耦合到一个Orbitrap离子阱质谱仪(热费舍尔,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)导致非常高质量的准确性( 5 ppm)。AA序列被分配使用吉祥物IPI人类实现数据库(46]。

2.6。HLA-E表面分子的稳定和稳定分析

稳定的mHLA-E分子转导T2的细胞表面细胞(T2E)肽绑定进行化验。 T2E细胞孵化与五个不同浓度范围1μ50米,μ米、100μ米、200μ米,300μ米的肽或细胞毒性研究饱和浓度为2.5小时37°C无血清培养基(RPMI 1640)。检测稳定pHLA-E复合物在细胞表面,T2E细胞孵化与PE-labeled反HLA-E马伯3 d12 (BioLegend) 30分钟在4°C。T2E细胞没有肽作为消极的控制。作为pHLA-E积极控制表面稳定肽VMAPRTLFL携带在试验浓度为200 m . pHLA-E表面稳定是由流式细胞术(流式细胞仪第二章,BD生物科学,海德堡,德国),表示为对数的几何平均荧光强度值(gMFI)和荧光指数(FI)由公式计算: 。测定细胞表面HLA-E水平的显著差异是由单向方差分析分析,其次是Bonferroni的多重比较检验。每个肽的流式细胞术直方图代表可以在补充图 在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2015/346714。个体的稳定p: HLA-E复合物在时间监控6 h在37°C和HLA-E表面水平被流式细胞术获得每2 h。减少HLA-E水平在细胞表面被认为是腐烂的p: HLA-E复合物HLA-E的肽分子的离解。在37°C肽孵化为2.5 h后的细胞被洗两次PBS为了消除自由肽和随后resuspended在200年μ无血清培养系统L RPMI媒介。最初的时间点( = 0 h) HLA-E表面水平决定立即通过流式细胞术。细胞被进一步孵化37°C和HLA-E表面水平确定后2,4,6 h后最初的时间点。

2.7。细胞毒性试验

对NK细胞介导细胞毒性的影响通过pHLA-E复合物是由基于流量仪的细胞毒性试验(如前所述47与修改)。T2E细胞孵化与饱和浓度的肽(300μ米)在细胞毒性研究和作为靶细胞。前肽孵化的细胞被标记为5μM CFDA SE细胞示踪(生活技术,达姆施塔特,德国)在室温下10分钟。标记细胞被洗两次在PBS和resuspended血清RPMI 1640中。HLA-E稳定分析进行2.5小时37°C与没有CD56 coincubation紧随其后+NK细胞刚从PBMCs负选择分离或与NKL细胞效应:目标(E: T)比例为4小时37°C。CD56的消极的选择+NK细胞从EasySep PBMCs是由人类NK细胞浓缩设备(干细胞技术,加拿大温哥华)根据生产协议。作为自然的控制细胞死亡靶细胞没有效应细胞在无血清培养基培养。4小时后孵化样本孵化与7-amino-actinomycin (7-AAD)(美国圣地亚哥BioLegend) 2.5的最终浓度μ克/毫升 细胞,最后由流式细胞术分析的样本。

2.8。仪采集和数据流分析

流仪采集使用流式细胞仪进行第二章流式细胞分析仪(BD生物科学、海德堡、德国)。停止门函数被用来获得10000 CFSE+每个样本的目标。之间的歧视效应和目标细胞的控制做了侧散射(SSC)与对数尺度CFSE。CFSE测量靶细胞死亡+细胞在7-AAD封闭+而向前散射(FSC)确定7-AAD的百分比+靶细胞cocultured与效应细胞或自发的靶细胞的细胞死亡效应细胞的缺失。NK细胞的细胞毒性的百分比计算使用以下方程:

2.9。建模与经典之中自身多肽pHLA-E复合物

了解结构pHLA-E复合物对NK细胞功能的影响,不同pHLA-E复合物进行的模块化模型。

有限数量的HLA-E晶体结构,其中大部分包含9-meric肽。因为在这个工作自身多肽的非凡的长度和结构的使用 01:01或 01:03长肽是可用的, 01:01晶体结构3 cdg [41)与VMAPRTLFL肽模板从蛋白质数据库(PDB,获得http://www.rcsb.org/)是用于肽诱变使用傻瓜和旋转异构体实现图书馆找到最好的侧链取向以最小的空间冲突(48]。每个模型然后进行能量最小化使用分析员[49]。图形程序PyMOL (http://www.pymol.org/)是用于生成数据结构。

3所示。结果

3.1。肽的特性

扫描的曲目HLA-E限制肽,可以获得在缺乏HLA分子转导HLA类类我不足721.221 pRRL.PPT.SFFV.mcs细胞系。前/ sHLA-E矢量编码的截断版本 01:01重链。亲和纯化后sHLA-E分子,多肽筛选了,通过质谱测序。分析导致36 HLA-E限制肽,27岁的长度> 10 AAs(表1)。其中有六个16-mer,五15 - m抗议,六14-mer五13-mer四12-mer, 11-mer肽(s)。肽的来源是高度多样化的,所有的肽都是来源于细胞周期调控蛋白,矩阵蛋白质、DNA修复、压力诱导蛋白质。尽管锚图案不能准确地确定,10个36肽被证明含有少量疏水残基(Val或亮氨酸)在P2的位置。
肽序列 源 参考
规范HLA-E肽配体(在文献报告)
肽位置
1 2 3 4 5 6 7 8 9
V 米 一个 P R T l 我 l HLA-Cw信号肽 (50]
V 米 一个 P R T l F l HLA-G信号肽 (24,28]
V 米 一个 P R T l l l HLA - 01信号肽 (51]
V 米 一个 P R T l V l HLA - 02信号肽 (51]
一个 l 一个 l V R 米 l 我 ATP结合盒转运体 (52]
问 米 R P V 年代 R V l 热休克蛋白60 (30.]
一个 我 年代 P R T l N 一个 艾滋病毒gag蛋白 (22]
年代 问 问 P Y l 问 l 问 Gliadin-wheat蛋白质 (23]
年代 问 一个 P l P C V l EBV-BZLF1蛋白质 (24]
不在经典里的HLA - 01:01肽配体
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
T l 问 一个 年代 N 问 年代 E 我 我 问 K 问 V V 同种型2亚基BPTF nucleosome-remodeling因素
我 l D l 年代 年代 米 一个 P 问 一个 l V 问 F W POLQ DNA聚合酶θ
T R 我 F G D 一个 l 一个 年代 我 K 问 问 一个 问 同种型1的丝氨酸/精氨酸重复的基质蛋白
R 米 G l 一个 K V 年代 l 年代 P V 我 T E 米 Plectin-1 PLEC1同种型6
G G 我 V T l 年代 问 一个 一个 G D V D 一个 R 的同种型6 Nesprin-1
我 K D D E K E 一个 E E G E D D R D HNRPC蛋白质
V P R l G 年代 T F 年代 l D T 年代 米 年代 CBL E3 ubiquitin-protein连接酶CBL
H l 我 G 我 H F T G C 年代 米 N P 一个 AQP6 Aquaporin-6
V V T G N 米 G 年代 N D K V G D F DSG1 Desmoglein-1
l V D 年代 G 一个 问 V 年代 V V H P N l ASPRV1 retroviral-like天门冬氨酸蛋白酶1
l G H P D T l N 问 G E F K E l Calprotectin S100A9
G R C 我 问 米 W F D 年代 一个 问 G N FOLR3叶酸受体3前体
米 年代 F l W P V H 一个 E P N P D 假定无特征蛋白质TTC39A
一个 P 我 V G G E 米 一个 V l 一个 l l COL29A1同种型胶原蛋白的第1 alpha-5 (VI)链
G 问 G 年代 N G 问 G 年代 年代 年代 H 年代 年代 IRS4胰岛素受体底物4
l T P F P G P G P R R P P W LMTK3狐猴酪氨酸激酶3
Y R 年代 G G G F 年代 年代 G 年代 一个 G 我 KRT1角质,II型细胞骨架1
年代 l 我 N N H 我 P C l 我 年代 G 假定无特征蛋白质HMGN1
P K K T E 年代 H H K 一个 K G K 组蛋白H2A 3型
D V H D G K V V 年代 T H E 问 KRT14角质,I型细胞骨架14所示
一个 年代 G Y V 年代 年代 一个 D l V F T 同种型2细胞因子受体常见的β亚基
l D G K V 我 年代 F E G C 一个 V 嗅觉感受器10 s1
V 年代 E K G T V 问 问 一个 D E 7 kDa蛋白质
P R V 米 T P P 年代 D E P D Protocadherin脂肪1
一个 V T F 年代 年代 l P 一个 一个 我 T Smoothelin cDNA FLJ59480,高度相似
G P 问 R C G W P D G l G AP2相关激酶1
P 年代 l T 年代 V T T T F V 嗅觉感受器51 d1
年代 K G K 我 Y P V G Y 52 kDa蛋白质
P G H C E D V l V l 同种型2的尿素运输车2
一个 P P P P E P 一个 l 智人选择性LIM绑定的因素
问 P H P G D 问 年代 E HSPA1L假定无特征的蛋白质
我 l N F P P P P 同种型Caprin-2的第2
我 V E 年代 R P V P XRN2同种型1 5′3′exoribonuclease 2
我 我 一个 我 F G P G 同种型1的多药耐药性蛋白质3
米 K 一个 一个 P G V E 溶质载体家庭成员6同种型c
一个 一个 V l E Y l 组蛋白H2A 2 b型
据报道,规范HLA-E肽配体诱导HLA-E表面表达,和经典之中HLA-E肽配体肽在这项研究中被识别。稳定和细胞毒性研究肽选择以粗体突出显示。
表1
规范和经典之中HLA-E肽配体。
3.2。典中的识别自身多肽稳定HLA-E T2E细胞表面表达

sHLA-E限制自身多肽的功能稳定空HLA-E T2E细胞表面分子利用肽绑定测试化验与四个选肽中突出显示表1。肽是每个滴定pHLA-E分子的相对饱和平衡。孵化的十米级SKGKIYPVGY和15 - m抗议LGHPDTLNQGEFKEL显示类似的能力在稳定HLA-E在细胞表面(图1)。的孵化13-mer DVHDGKVVSTHEQ导致HLA-E表面分子的表达最高,而15 - m抗议LVDSGAQVSVVHPNL肽显示最低增加HLA-E表面表达相比其他肽肽浓度最高的300μm .四肽的功能稳定HLA-E分子与已知HLA-E肽配体VMAPRTLFL存在于领导者HLA-G序列(28]。HLA-E表面表达水平无显著差异可能观察到测试肽和HLA-G肽在最高浓度测试。


图1
典中的肽稳定HLA-E表面表达。的T2细胞系转导 01:01孕育了等位基因的存在与否表明肽在37°C的染色前2.5小时马伯3 d12 (anti-HLA-E)并通过流式细胞术分析。每个肽与指定的浓度和相对于一个已知滴定HLA-E肽配体VMAPRTLFL与饱和浓度的携带200μM表示之间的平均荧光强度的差异T2E细胞肽±SEM的存在至少两个独立的实验。FI值T2E细胞在缺乏肽被减去背景控制实验样本。
3.3。HLA-E限制自身多肽NK细胞介导细胞毒性的影响

为了确定的影响确定HLA-E限制肽对NK细胞介导细胞毒性,我们基于流式细胞仪进行细胞毒性检测肽脉冲T2E细胞。特定的靶细胞裂解的比例确定为所有四肽以及靶细胞肽VMAPRTLFL脉冲的控制。 复合物是抑制性受体NKG2A / CD94配体,虽然 也描述了绑定到NKG2C / CD94激活受体(53),然而,亲和力较低。像预期的那样在缺乏外源HLA-E肽,与空HLA-E T2E细胞分子表面被NKL触及NK细胞,细胞溶解(图2)。所有四个自身多肽影响了NK细胞介导细胞毒性导致完全丧失抵御NK细胞的细胞毒性,显示无显著差异在保护NKL或没有NK细胞相比T2E细胞没有肽。最高的十米级SKGKIYPVGYY和13-mer DVHDGKVVSTHEQ引起损失的保护导致几乎相同比例的细胞死亡与靶细胞没有肽孵化。两个15 - m抗议肽LGHPDTLNQGEFKEL和LVDSGAQVSVVHPNL对细胞毒性的影响略低但也nonprotective HLA-E VMAPRTLFL肽配体相比,表现出显著的保护作用对NK细胞的细胞毒性与NKL和没有NK细胞,因为它已被证明在先前的报道19,37,50]。这表明足够HLA-E表面水平用于抑制NK细胞和识别其他pHLA-E复合物的差异可能是由于低稳定受体NKG2A / CD94 HLA-E复合物或没有交互。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
图2
典中的肽对防止NK细胞的细胞毒性的影响。(a) T2E细胞孵化在4个小时前肽的存在与否与NK细胞细胞毒性试验(NKL)或新鲜CD56孤立不变+NK细胞从PBMCs E: T比10:1和(b)没有NK细胞在10:1或50:1。特定的细胞死亡是基于死(7-AAD的百分比计算+)和活细胞(CFSE+)±SEM。特定的靶细胞的细胞死亡孵化与肽与靶细胞没有肽孵化。
3.4。稳定的HLA-E中的肽pHLA-E复合物稳定结果

排除的HLA-E表面水平的损失的原因是细胞抵御NK细胞细胞毒性我们检查pHLA-E复合物的稳定性孵化与测试得到的肽。HLA-E细胞表面水平确定为每个测试肽肽孵化后的时间点。孵化后与肽T2E细胞被洗除去自由在37°C肽,并进一步孵化;HLA-E表面水平测定时间点0,2,4,6 h后肽通过流式细胞术孵化。HLA-E表面表达的水平并没有改变相对初始水平对所有测试肽后6 h(图3)。这表明pHLA-E复合物中的测试稳定的多肽提供足够HLA-E表面水平4 h孵化期间,细胞毒性试验和另外突出其免疫原性潜力提供稳定HLA-E复合物。


图3
典中的肽提供稳定HLA-E表面的水平。T2E细胞孵化与测试肽和HLA-E表面水平测定在四个不同的时间点0,2,4,6 h后稳定肽测定±SEM。四个中的肽浓度300孵化μ与200年M, HLA-G肽μM。
3.5。结构建模显示非凡的肽构象

因为没有结构分析的HLA-E绑定到一个肽超过9 AAs可用我们建立了结构的四个选择基于一个可用的肽 01:01晶体结构PDB ID: 3 cdg [41)显示 在复杂的NKG2A / CD94。本研究从可溶性肽 01:01分子和高度多样化的顺序和长度。通过在网上目前VMAPRTLFL肽的肽诱变,我们模仿四肽PBR的分析 01:01(图4)。这些pHLA-E复合物显示显著的变化在肽链的构象13-mer DVHDGKVVSTHEQ和两个15 - m抗议LGHPDTLNQGEFKEL和LVDSGAQVSVVHPNL肽向外伸出的PBR暴露AA侧链的不同部分溶剂。根据AA组成的肽可及表面暴露在溶剂中变化显著发现自身多肽选择进行分析。的十米级SKGKIYPVGY肽显示没有明显异常的拉伸与规范肽构象发现绑定到HLA-E VMAPRTLFL肽如图所示。

(一)”name=
(一)
(b)”name=
(b)
(c)”name=
(c)
(d)”name=
(d)
(e)”name=
(e)
图4
模型中的自身多肽绑定到HLA-E显示高度多样化的确认导致不同的可及表面区域。(a)与VMAPRTLFL HLA-E晶体结构(橙色)肽(PDB: 3 cdg)肽作为造型的模板使用的PBR HLA-E分子(覆盆子)。(b) SKGKIYPVGY(橄榄)肽显示只有最小的表面积(c)相比,突出了PBR DVHDGKVVSTHEQ(蒂尔)强烈形式一个凸出的结构,提供了大部分的溶剂可及表面。这也是的肽(d) LGHPDTLNQGEFKEL(海洋蓝色)和(e) LVDSGAQVSVVHPNL(青色)。

4所示。讨论

HLA-E被认为监控类我表达和展示他们的信号肽免疫效应细胞;然而对其整体肽曲目。已是不争的NK细胞识别pHLA-E复合物在细胞特异表达的压力或病毒感染。理解HLA-E限制肽的不变性和确定HLA-E是否能够获得和现在自身多肽非HLA类我得到信号肽,我们利用可溶性HLA技术(42]。第一次自然 01:01限制肽可以被识别。这些多肽是收购了HLA班上我消极的细胞,模仿致病的情况下,是高度多样化的功能,结合主题与16 AAs和长度。HLA-E已知存在优先肽8 - AAs (52,54,55在长度和大多数这些肽相似特性考虑他们的整体疏水性和青睐AAs在主锚位置的存在如蛋氨酸在p2或亮氨酸在肽(c端位置的55- - - - - -57]。可用HLA-E结构只绑定到nonameric肽。的结构分析 与肽VMAPRTLFL 01:01 VMAPRTLLL、VMAPRTVLL VMAPRALLL, VMAPRTLIL, VMGPRTLIL [40,41,53,57,58), 与肽VMAPRTVLL 01:03 VTAPRTLLL [59p2)透露,职位,p7,票数是主要的锚残留9 AAs肽的长度和疏水肽之间的主要联系人残留的HLA-E重链是由范德瓦耳斯相互作用[28,40,54]。确定多肽的序列是不同的锚定AAs和高度潜水员(表1),即使9 AAs的肽长度不确认之前定义的p2或p9锚图案HLA-E限制肽。新发现的肽的特性使它无法预测其构象时绑定到HLA-E根据可获得的肽绑定模式由pHLA-E结构。他们的多样性表明微分绑定模式中PBR而且广泛pHLA-E景观的变化呈现给免疫效应细胞。先前的研究显示的PBR HLA-E限制不如最初以为乱抗原表位和支持的结果。在体外重折叠研究证明之前,HLA-E能够绑定一组微分的肽(55),结合肽的可变性决定pHLA-E复合物的热稳定性(60]。另一项研究通过Lampen等人发现了超过500肽绑定到 01:03在利用表达下调K562细胞溶解产物这些肽显示长度13 AAs和高度多样化的序列组成61年]。然而, 01:03肽曲目被Lampen等人没有与我们的发现分享序列。六肽被识别 01:03源于共同的细胞内蛋白像Calprotectin S100A9,丝氨酸/精氨酸基质蛋白2组蛋白H2A ubiquitin-protein连接酶,但不同长度和序列相比肽筛选了 01:01在我们的数据。在最近的研究中,我们组的肽曲目 01:03拼箱721.221细胞被发现(62年]。 01:03衍生肽显示相似之处 01:01衍生肽肽序列长度和多样性;然而pΩ的位置 01:03衍生肽是赖氨酸而受限制 01:01肽没有显示一个守恒AA肽的位置。然而,大多数的 01:03限制肽与长度不在经典里的11至16 AAs,没有共享的肽中被发现 01:01和 01:03限制肽体验相同的蛋白质组。

基于先前的发现,它可能是假定的绑定方式中的肽HLA-E可能效率较低而HLA类我得到信号肽含有肽的序列,使深绑定的PBR HLA-E [57]。支持这种假设实验观察在这项研究中,高浓度的长肽需要稳定的空HLA-E T2E细胞分子在细胞表面,而使用nonameric时所需的浓度信号肽是更少。

四个测试肽代表异构中的HLA-E 36肽被识别的配体选择分歧的长度和序列分析免疫效应细胞的识别。肽是加载在T2E细胞和NK细胞作为目标。T2E细胞随后没有脉冲与肽细胞溶解由于缺少保护HLA-E配体在NK细胞的细胞毒性很可能刺激引发的NK细胞受体表达的NKL和多克隆NK细胞NKG2D或NKp46 [63年,64年]。VMAPRTLFL肽的添加导致预期的保护性反应 前面描述的是与抑制性受体NKG2A / CD94交互(65年]。

HLA-E表达自身多肽分子选择绑定到四个不同的长度和序列显示pHLA-E表面表达的差异,但提供类似HLA-E表面水平相比HLA-G衍生肽而且稳定的表面水平在整个监控时间6小时。然而,并不是所有的四肽可以恢复细胞保护HLA-E导致高增加靶细胞裂解。众所周知,HLA-E是单独配体受体NKG2A / CD94 NK细胞(21)和肽选择性废除HLA-E绑定NKG2A / CD94受体已被证明通过Michaelsson et al。30.],HLA-E肽配体来源于领导者HSP60蛋白序列提供了稳定HLA-E表面表达但没有识别受体NKG2A / CD94和随后被NK细胞的细胞溶解。我们假设的肽构象的变化必将HLA-E将产生重大影响的识别NKG2A / CD94受体。

肽不寻常的长度(4,66年,67年),描述了不同寻常的构象和结构上分析了几个HLA类我亚型(8,66年,68年]。通常这些长肽形成凸出的结构的流动性取决于当地的结构由肽序列。利用一个在网上肽建模方法(Kraemer et al .,在准备手稿)的预测四个长HLA-E限制自身多肽会积聚在PBR显示了可能的构象多肽及其可及表面溶剂(图4)。根据绑定的AA序列肽,糖和n端部分埋在PBR并开始向外凸起的槽中部地区的肽。假设这些肽构象预测将类似的比在活的有机体内这是不足为奇的复合物 , , , 表现出这些不同的构象不认可不变的受体NKG2A / CD94。因此,损失或减少保护与受体NKG2A / CD94交互可以解释观察到的细胞毒性增加保护相比 复杂。之间的相互作用的结构分析 和受体NKG2A / CD94透露,肽的职位p5、p6和p8起到关键作用的识别受体。肽的p5-Arg胍盐集团形成氢键CD94-Gln110和接触p6-Thr主链和CD94-Gln112 CD94单元也由氢键。p8-Phe包围,联系了三极CD94残留Asn156 Asn158, Asn160也与Phe114交互。然而,NKG2A / CD94受体NKG2A单元的复杂专门联系人肽与残渣p5-Arg NKG2A-Pro171通过范德华相互作用[41]。这些微妙的影响某些残基的肽受体识别产生重大影响,因为它展示了肽VMAPRALL来自 07:02的地方 复杂不能防止NK细胞溶菌作用相比 复杂的(37]。考虑到巨大的差异可及表面的区域预测肽构象在我们研究这些pHLA-E复杂最有可能没有暴露AA侧链和方向适合NKG2 / CD94受体识别。每个肽所提出的一个经典HLA分子或HLA-E决定细胞的消失在结构识别或NK细胞受体之间的相互作用。内在的结构不变性HLA-E重链是由结合肽的序列和结构。

综上所述,HLA-E礼物潜水员组肽当没有HLA类我信号肽是可用的。甚至是肽之间的特征差异 01:01和 01:03 [61年可以观察到。在这项工作中,选择不同的四肽序列长度和稳定pHLA-E复合物不支持细胞NK细胞毒性,这可能是基于这些分子的可及表面暴露在NKG2 / CD94受体。的注意,HLA类肽曲目我消极的拼箱721.221细胞系可能不是相同的其他细胞HLA类我时的表情在临床条件下缺席。拼箱721.221细胞被选为一个模型来分析肽特异性HLA-E没有竞争对信号肽。然而,肽介导的平衡从细胞保护转移到细胞溶菌作用非常明显,可能表明HLA-E的作用具有重要的意义。

此外,这些结果强调的可能性HLA-E能够提供一个广泛的肽能突显HLA类的竞争我的假说提出mHAGs作为一种机制来减少GvHD posttransplantation也强调它的作用在感染血巨细胞病毒。

缩写

sHLA: 可溶性人类白细胞抗原
mHLA: 膜固定HLA
AA: 氨基酸
pHLA复杂: 肽HLA复杂
吉珥: 杀伤细胞immunoglobulin-like受体。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

承认

这项工作是支持由德国联邦教育和研究。

补充材料

直方图的HLA-E T2E细胞表面表达。

5的滴定不同HLA-E肽。

  1. 补充材料

引用

  1. c . Bade-Doeding h·A·Elsner Eiz-Vesper, A . Seltsam Holtkamp, r . Blasczyk,“单一氨基酸抗原的多态性在口袋* 6602改变了辅助锚与抗原* 6601配体相比,“免疫遗传学卷,56号2、83 - 88年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  2. c . Bade-Doeding t .更具b Eiz-Vesper, r . Blasczyk”构成抗原* 74 F口袋的生成c端滥交的肽,”组织抗原,卷78,不。5,378 - 381年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  3. Badrinath朝拜,t .更具h·舒马赫,r . Blasczyk和c . Bade-Doeding”位置45 HLA-B肽结合主题的影响∗44:08。”免疫遗传学,卷64,不。3、245 - 249年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  4. 美国Badrinath朝拜,p·桑德斯,t .更具et al ., 156”位置影响肽剧目和tapasin人类白细胞抗原B的依赖∗44球蛋白。”Haematologica,卷97,不。1,第106 - 98页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  5. n . e . Elamin c . Bade-Doeding r . Blasczyk和b . Eiz-Vesper抗原之间的多态性∗0301年,一个∗0302以外口袋F改变了PΩ肽主题,“组织抗原,卷76,不。6,487 - 490年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  6. t .更具:Ladas, h·舒马赫,r . Blasczyk和c . Bade-Doeding”Pocketcheck:我更新HLA类肽特异性路线图,”组织抗原,卷80,不。3、239 - 248年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  7. t .更具h·舒马赫、r . Blasczyk和c . Bade-Doeding“残留81授予限制c端肽在HLA-B绑定的主题∗44:09。”免疫遗传学,卷64,不。9日,第668 - 663页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  8. c . Bade-Doding a . Theodossis美国肝et al .,”影响的人类白细胞抗原(HLA) micropolymorphism HLA-B配体特异性∗41异型的家庭。”Haematologica,卷96,不。1,第118 - 110页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  9. s·j·李,j . Klein m . Haagenson et al .,“高分辨率捐助者与接受者的HLA匹配成功的贡献无关供者骨髓移植,”血,卷110,不。13日,4576 - 4583年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  10. e . w . Petersdorf”,风险评估在造血干细胞移植:组织相容性,”最佳实践与研究:临床血液学,20卷,不。2、155 - 170年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  11. r . Tamouza m,诉罗查et al ., HLA-E“纯合状态∗0103年授予保护急性移植物抗宿主病和transplant-related死亡率在hla兄弟造血干细胞移植,”移植,卷82,不。11日,第1440 - 1436页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  12. e . Hosseini a . p . Schwarer和m . Ghasemzadeh”HLA-E多态性的影响移植物抗宿主病HLA-E匹配同种异体造血干细胞移植后,“伊朗《过敏、哮喘和免疫学,11卷,不。1、15至21,2012页。视图:谷歌学术搜索
  13. g . i Mossallam r·a·法塔赫a .影子和h·k·马哈茂德·“HLA-E多态性和临床结果在埃及同种异体造血干细胞移植后患者,”人类免疫学,卷76,不。2 - 3、161 - 165年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  14. l . p . pontes i o . p .波尔图c t Mendes-Junior et al .,“全球HLA-E核苷酸和单体型变化揭示了一个保守的基因编码和3′未翻译区,“组织抗原,卷83,不。2、82 - 93年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  15. l·c·沙利文·c·s·克莱门茨,j . Rossjohn和a·g·布鲁克斯,“主要组织相容性复合体类Ib分子HLA-E天然免疫与适应性免疫之间的接口,“组织抗原,卷72,不。5,415 - 424年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  16. l·c·沙利文·h·l·霍尔j .竟敢管j . Rossjohn和A·g·布鲁克斯”结构的角度在适应性免疫的MHC分子类Ib,”免疫学的趋势,27卷,不。9日,第420 - 413页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  17. c . Romagnani g .饰面的m . Falco et al .,“识别HLA-E-specific alloreactive T淋巴细胞:细胞子集进行优惠扩张混合淋巴细胞培养和显示广泛的细胞溶解的活动对同种异体细胞,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷99,不。17日,第11333 - 11328页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  18. f·博雷戈,m . Ulbrecht e·h·维斯,j . e . Coligan和a·g·布鲁克斯,“识别人类组织相容性的白细胞抗原(HLA) - e与HLA类我sequence-derived信号肽CD94 / NKG2授予保护自然杀伤细胞介导细胞溶解,”《实验医学杂志》上,卷187,不。5,813 - 818年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  19. 诉m·布劳德·d·j·艾伦,C·a·奥卡拉汉et al .,“HLA-E自然杀伤细胞受体结合CD94 / NKG2A, B和C,”自然,卷391,不。6669年,第799 - 795页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  20. f·a·g·布鲁克斯博雷戈,p . e . Posch et al .,“HLA-E的特定识别,但不是经典,由可溶性HLA分子类我CD94 / NKG2A和NK细胞,”《免疫学,卷162,不。1,第313 - 305页,1999。视图:谷歌学术搜索
  21. n . Lee m .大草原,m . Carretero f·纳瓦罗,m . Lopez-Botet和d·e·格拉提神”HLA-E是一个主要为自然杀伤抑制受体配体CD94 / NKG2A,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷95,不。9日,第5204 - 5199页,1998年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  22. j . Nattermann h·d·Nischalke诉他et al .,“hiv - 1感染导致增加HLA-E表达导致自然杀伤细胞功能受损,“抗病毒治疗,10卷,不。1,第107 - 95页,2005。视图:谷歌学术搜索
  23. g . Terrazzano m·西卡c Gianfrani et al .,”麦胶蛋白调节细胞NK-dendritic相声HLA-E表面稳定,”《免疫学,卷179,不。1,第381 - 372页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  24. p·加西亚,m .大草原,a . b .德埃雷迪亚et al .,“人类T细胞受体介导承认HLA-E”欧洲免疫学杂志,32卷,不。4、936 - 944年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  25. g .饰面的c . Romagnani p Mazzarino et al .,“HLA-E-restricted人类CD8 cytomegalovirus-derived肽的识别+细胞溶解的T淋巴细胞,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷100,不。19日,10896 - 10901年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  26. 李张e·h·沃伦x c, s . et al .,“MHC和non-MHC供体/受体基因差异对同种异体HCT的结果,“血,卷120,不。14日,第2806 - 2796页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  27. d . Pende s Marcenaro m . Falco et al .,“抗白血病活性alloreactive NK细胞在吉珥ligand-mismatched同一性HSCT儿科患者:评价的功能作用抑制吉珥特异性激活吉珥和重新定义,“血,卷113,不。13日,3119 - 3129年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  28. n .李·d·r·Goodlett a . Ishitani h·马夸特医生和d·e·格拉提神”HLA-E表面表达取决于TAP-dependent肽来源于某些HLA类的绑定我的信号序列,”《免疫学,卷160,不。10日,4951 - 4960年,1998页。视图:谷歌学术搜索
  29. t . Kraemer r . Blasczyk, c . Bade-Doeding“HLA-E:一个组织相容性的新球员,”免疫学研究期刊》的研究ID 352160条,卷。2014年,7页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  30. j . Michaelsson c·德·马托斯t . A . Achour l·l·尼尔k . Karre k Soderstrom说,“一个信号肽来源于hsp60结合HLA-E和干扰CD94 / NKG2A识别,”《实验医学杂志》上,卷196,不。11日,第1414 - 1403页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  31. 美国鲍尔、诉Groh j .吴et al .,“激活NK细胞和T细胞NKG2D, stress-inducible云母的受体,”科学,卷285,不。5428年,第729 - 727页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  32. c . Bottino r . Biassoni r·米罗l . Moretta作品和a . Moretta作品“人类自然(NCR)诱导细胞毒性受体HLA类I-independent NK细胞触发,”人类免疫学,卷61,不。1、1 - 6,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  33. l·l·尼尔,“在钢丝:自然杀伤细胞的激活和抑制,”自然免疫学,9卷,不。5,495 - 502年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  34. d . Tortorella辛,d . Schust m·福尔曼和h . Ploegh我类MHC抗原表达的下调,血巨细胞病毒为肿瘤免疫学课程。”免疫学研究卷,29号2、97 - 100年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  35. p . Tomasec诉m·布劳德·c·瑞卡兹et al .,“表面HLA-E的表达,抑制自然杀伤细胞,增强人类巨细胞病毒gpUL40”科学,卷287,不。5455年,第1033 - 1031页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  36. m . Ulbrecht s Martinozzi m . Grzeschik et al .,“前沿:人类巨细胞病毒UL40基因产品包含一个配体HLA-E和防止NK细胞介导细胞溶解,”《免疫学,卷164,不。10日,5019 - 5022年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  37. m . Vales-Gomez Reyburn, h·t·r·a·厄斯金·m·Lopez-Botet和j·l·Strominger”动力学和肽依赖项绑定的抑制NK受体CD94 / NKG2-A和激活受体CD94 / NKG2-C HLA-E,”在EMBO杂志,18卷,不。15日,第4260 - 4250页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  38. 答:罗尔,j . Pollmann e。埃文et al .,“IL-12-producing单核细胞和HLA-E控制HCMV-driven NKG2C+NK细胞扩张。”《临床研究杂志》上,卷124,不。12日,第5316 - 5305页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  39. n . k . Bjorkstrom t·林格伦m . Stoltz et al .,“快速扩张和长期持久提高NK细胞数量的人类感染汉坦病毒,”《实验医学杂志》上,卷208,不。1,13-21,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  40. h·l·霍尔·l·c·沙利文,c·s·克莱门茨et al。“肽构象细微变化深刻影响识别的非经典的MHC分子类我HLA-E CD94-NKG2自然杀手细胞受体,”分子生物学杂志,卷377,不。5,1297 - 1303年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  41. 林·e·j·皮特里,c·s·克莱门茨j . et al .,“CD94-NKG2A承认人类白细胞抗原(HLA)绑定到一个HLA - e类我领袖序列”《实验医学杂志》上,卷205,不。3、725 - 735年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  42. h . Kunze-Schumacher r . Blasczyk, c . Bade-Doeding”可溶性HLA技术作为战略评价HLA不匹配的影响,“免疫学研究期刊》的研究ID 246171条,卷。2014年,8页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  43. h·g·德雷克斯勒和y .松尾”恶性造血细胞系:体外模型研究自然杀手细胞leukemia-lymphoma,”白血病,14卷,不。5,777 - 782年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  44. m·j·罗伯逊k·j·科克伦,c·卡梅隆,人类。勒、r . Tantravahi和j·里兹,”表征的细胞系,NKL,源自积极的人类自然杀手细胞白血病,”实验血液学,24卷,不。3、406 - 415年,1996页。视图:谷歌学术搜索
  45. c . Bade-Doeding·卡诺t更具et al .,“外外显子2和3不匹配不改变肽等位基因B组的主题∗44:02P。”人类免疫学,卷72,不。11日,第1044 - 1039页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  46. m . Hirosawa m . Hoshida m .石川,t·托雅”吉祥物:多个蛋白质序列对齐系统基于三方动态规划,“计算机应用在生物科学,9卷,不。2、161 - 167年,1993页。视图:谷歌学术搜索
  47. v . s . g . g . Kim Donnenberg,公元Donnenberg, w•古丁和t·l·怀特塞德,“小说multiparametric流cytometry-based细胞毒性试验同时immunophenotypes效应细胞:比较4 h 51 cr-release分析,“《免疫学方法,卷325,不。1 - 2日,51 - 66,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  48. p . Emsley b . Lohkamp w·g·斯科特和k .卡谭”特性和发展傻瓜”,晶体学报:D:卷生物晶体学第4部分,卷。66年,第501 - 486页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  49. 答:萨利·t·l·Blundell”满意度比较蛋白质造型的空间限制,”分子生物学杂志,卷234,不。3、779 - 815年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  50. 林s . l . Heatley g .饰面的j . et al .,“人类巨细胞病毒UL40多态性影响识别人类白细胞antigen-E自然杀伤细胞(HLA-E),“生物化学杂志,卷288,不。12日,第8690 - 8679页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  51. m . Allard p .潜水鸟,s Nedellec et al .,“HLA-E-restricted cross-recognition CMV-associated CD8 T细胞的同种异体内皮细胞:一个潜在的危险因素移植后,“《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。11日文章ID e50951, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  52. s . l .木制s·r·卡尔布r . j .销和m . j . Soloski“前沿:HLA-E结合肽来源于磷酸腺苷盒式运输车多resistance-associated蛋白质7和抑制NK细胞介导细胞溶解,”《免疫学,卷175,不。3、1383 - 1387年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  53. b . k . Kaiser j·c·皮萨罗j . kern和r·k·强,“结构性基础NKG2A / CD94 HLA-E承认,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷105,不。18日,第6701 - 6696页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  54. 诉布劳德、e·y·琼斯和a·麦克迈克尔“人类主要组织相容性复合体类Ib分子HLA-E sequence-derived结合信号肽与主锚残留在位置2和9日”欧洲免疫学杂志,27卷,不。5,1164 - 1169年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  55. j·史蒂文斯,大肠乔利,j . Trowsdale g . w .屠夫”肽结合特征的非经典的类Ib MHC分子HLA-E评估随机肽重组的方法,”BMC免疫学,卷2,第二十五条,2001年。视图:谷歌学术搜索
  56. j·d·米勒·d·a·韦伯c . Ibegbu j .波尔j·d·奥特曼和p·e·延森”分析HLA-E peptide-binding特异性和接触残留在识别CD94 / NKG2所需结合肽,”免疫学杂志,卷171,不。3、1369 - 1375年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  57. c·a·奥卡拉汉j . Tormo b . e . Willcox et al .,“模的结构特点实施紧密绑定特异性肽MHC分子HLA-E,”分子细胞,1卷,不。4、531 - 541年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  58. h·l·霍尔·l·c·沙利文饰面的g . et al .,”是一个主要组织相容性复合体结构基础类Ib-restricted T细胞反应,”自然免疫学,7卷,不。3、256 - 264年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  59. r·k·强,m·a·福尔摩斯·李·l·布劳恩,n . Lee)和d·e·格拉提神”HLA-E等位变异:相关微分表达式,肽亲和力,晶体结构,热稳定性,”《生物化学》杂志上,卷278,不。7,5082 - 5090年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  60. m . Ulbrecht s Modrow r·斯利瓦斯塔瓦·a·彼得森和e·h·维斯”互动HLA-E多肽和肽转运蛋白在体外:影响其功能在抗原表示,“免疫学杂志,卷160,不。9日,第4385 - 4375页,1998年。视图:谷歌学术搜索
  61. m·h·Lampen c·哈桑·m·Sluijter et al .,“替代肽的HLA-E揭示了一个绑定的主题与hla a2惊人地相似,”分子免疫学,53卷,不。1 - 2、126 - 131年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  62. a·侯赛因·t·Kraemer t .更具r . Blasczyk和c . Bade-Doeding hla-e的分子基础∗01:01 / arg107和e∗01:03 / gly107免疫功能”,组织抗原,卷85,不。5,326年,页2015。视图:谷歌学术搜索
  63. 陈x, p . p . Trivedi通用电气,k . Krzewski和j·l·Strominger”许多NK细胞受体激活ERK2 JNK1触发微管组织中心和颗粒极化和细胞毒性,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷104,不。15日,第6334 - 6329页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  64. p .安德烈·r·Castriconi m . Espeli et al .,“比较分析NKG2D和自然人类NK细胞活化诱导的细胞毒性受体,”欧洲免疫学杂志,34卷,不。4、961 - 971年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  65. b . k . Kaiser f . Barahmand-Pour w . Paulsene混合泳,d·e·格拉提神和r·k·强劲,”之间的交互NKG2x immunoreceptors HLA-E配体显示重叠的亲和力和热力学,”《免疫学,卷174,不。5,2878 - 2884年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  66. k·j·格林,j。j英里,j . Tellam w·j·m·范·Zuylen g·康诺利和s . r .洞穴”强大的T细胞反应类I-binding 13-mer病毒表位和HLA micropolymorphism控制抗原决定基长度的影响,“欧洲免疫学杂志,34卷,不。9日,第2519 - 2510页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  67. m . Probst-Kepper诉Stroobant r . Kridel et al .,”另一个开放阅读框的人类巨噬细胞集落刺激因子基因独立翻译和编码的抗原肽14个氨基酸被肿瘤浸润CD8 T淋巴细胞,”实验医学杂志,卷193,不。10日,1189 - 1198年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
  68. f . e . Tynan: a . Borg j。j英里et al .,“高分辨率结构高度膨胀的病毒抗原表位与主要组织相容性复合体类即影响t细胞受体参与和t细胞immunodominance,”生物化学杂志,卷280,不。25日,第23909 - 23900页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权©2015年托马斯Kraemer et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。

更多相关文章

PDF 下载引用 引用
下载其他格式更多的
ePub
XML
订单打印副本订单
的观点2497年
下载1064年
引用

相关文章

文章奖:2020年杰出的研究贡献,选择由我们的首席编辑。获奖的文章阅读。