C D 3 4 p o s cells, suggesting that MNC may also contain C D 3 4 n e g HPC. To clarify the phenotype of AB HPC which generate EBs in these cultures, flow cytometric profiling for CD34/CD36 expression, followed by isolation and functional characterization (colony-forming-ability in semisolid-media and fold-increase in HEMA) were performed. Four populations with erythroid differentiation potential were identified: C D 3 4 p o s C D 3 6 n e g (0.1%); (barely detectable-0.1%); (2%) and (75%). In semisolid-media, cells generated BFU-E and CFU-GM (in a 1 : 1 ratio), cells mostly BFU-E (87%) and and C D 3 4 n e g C D 3 6 l o w cells were not tested due to low numbers. Under HEMA conditions, C D 3 4 p o s C D 3 6 n e g , C D 3 4 p o s C D 3 6 p o s , C D 3 4 n e g C D 3 6 l o w and C D 3 4 n e g C D 3 6 n e g cells generated EBs with fold-increases of ≈9,000, 100, 60 and 1, respectively, and maturation times (day with >10% C D 3 6 h i g h C D 2 3 5 a h i g h cells) of 10–7 days. Pyrenocytes were generated only by C D 3 4 n e g / C D 3 6 n e g cells by day 15. These results confirm that the majority of HPC in AB express CD34 but identify additional C D 3 4 n e g populations with erythroid differentiation potential which, based on differences in fold-increase and maturation times, may represent a hierarchy of HPC present in AB."> 祖细胞的表型定义与人成年血液中红细胞分化潜力的祖细胞gydF4y2Ba - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果
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干细胞国际gydF4y2Ba
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干细胞国际gydF4y2Ba/gydF4y2Ba2011gydF4y2Ba/gydF4y2Ba文章gydF4y2Ba
特殊的问题gydF4y2Ba

体外生成红细胞作为输血产品gydF4y2Ba

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体积gydF4y2Ba 2011gydF4y2Ba |gydF4y2Ba文章的IDgydF4y2Ba 602483gydF4y2Ba |gydF4y2Ba https://doi.org/10.4061/2011/602483gydF4y2Ba

Valentina Tirelli, Barbara Ghinassi, Anna Rita Migliaccio, Carolyn Whitsett, Francesca Masiello, Massimo Sanchez, Giovanni MigliacciogydF4y2Ba，gydF4y2Ba ＂gydF4y2Ba祖细胞的表型定义与人成年血液中红细胞分化潜力的祖细胞gydF4y2Ba"，gydF4y2Ba干细胞国际gydF4y2Ba，gydF4y2Ba 卷。gydF4y2Ba2011gydF4y2Ba，gydF4y2Ba 文章的IDgydF4y2Ba602483gydF4y2Ba，gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba 页面gydF4y2Ba，gydF4y2Ba 2011gydF4y2Ba．gydF4y2Ba https://doi.org/10.4061/2011/602483gydF4y2Ba

祖细胞的表型定义与人成年血液中红细胞分化潜力的祖细胞gydF4y2Ba

瓦伦蒂娜Tirelli.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba1gydF4y2Ba 芭芭拉GhinassigydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba 安娜丽塔阶段gydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba 卡洛琳WhitsettgydF4y2Ba，gydF4y2Ba2gydF4y2Ba 弗朗西斯卡马塞罗说道gydF4y2Ba，gydF4y2Ba1gydF4y2Ba 马萨姆桑切斯gydF4y2Ba，gydF4y2Ba1gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 乔凡尼阶段gydF4y2Ba1gydF4y2Ba

1gydF4y2Ba细胞生物学和神经科学，高级健康研究所，00161，意大利罗马gydF4y2Ba

2gydF4y2Ba西奈山医学院Tisch癌症研究所，纽约NY 10029，美国gydF4y2Ba

学术编辑器:gydF4y2Ba米歇尔SadelaingydF4y2Ba
收到了gydF4y2Ba 2011年5月23日gydF4y2Ba
接受gydF4y2Ba 2011年6月22日gydF4y2Ba
发表gydF4y2Ba 2011年9月26日gydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

在人红细胞大量扩增(HEMA)培养中，AB单核细胞(MNC)产生的红细胞(EBs)比相应的多1-loggydF4y2Ba 细胞，提示MNC也可能含有gydF4y2Ba 高性能计算。为了明确在这些培养物中产生EBs的AB HPC的表型，我们使用流式细胞术分析CD34/CD36的表达，然后进行分离和功能鉴定(在半固体介质中菌群形成能力和HEMA的倍数增加)。确定了四个具有红系分化潜能的群体:gydF4y2Ba (0.1%);gydF4y2Ba 难以觉察的(- 0.1%);gydF4y2Ba (2%)和gydF4y2Ba (75%)。在semisolid-media,gydF4y2Ba 细胞产生BFU-E和CFU-GM(比例为1:1)，gydF4y2Ba 细胞以BFU-E(87%)和gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 由于细胞数量少，未进行检测。在丙烯酸-条件下,gydF4y2Ba ，gydF4y2Ba ，gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 细胞产生EBs，其倍数增加gydF4y2Ba≈gydF4y2Ba分别为9,000,100,60和1，和成熟时间(日>10%gydF4y2Ba 细胞)10-7天。核细胞仅由gydF4y2Ba /gydF4y2Ba 第15天的细胞。这些结果证实AB表达CD34中的大多数HPC，但识别了额外的gydF4y2Ba 根据倍增长和成熟时间的差异，这可能代表AB中存在的HPC的层次。gydF4y2Ba

1.介绍gydF4y2Ba

造血作用被定义为每天补充血液细胞成分的有序过程[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba］．在稳态条件下，骨髓提供微环境线索，允许造血干细胞产生一个层次细胞(造血祖细胞，HPCs)，其增殖和谱系成熟潜力逐渐受到限制[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．此外，骨髓中含有非常罕见的具有生成造血干细胞潜能的前体细胞[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．人类干细胞前体和干细胞的功能由动物模型中的替代试验定义[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]，而具有不同增殖/成熟潜力的HPCs由体外模拟造血过程的半固体培养物定义[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba］．这些功能性体外试验为鉴定和前瞻性分离骨髓中存在的不同造血人群提供了基础[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．根据产生的细胞的数量和谱系以及产生它们所需的时间，半固体试验确定了一系列的HPCs:HPCs能够在15-18天产生大的菌落(>30,000个细胞)，包括多个谱系的细胞(菌落形成单位，粒细胞-红细胞-巨核细胞-单核细胞，CFU-GEMM)，这些细胞产生红细胞爆裂(大约5000个细胞，红细胞爆裂形成单位BFU-E)和肉芽肿菌落(菌落形成单位，CFU-GEMM)。在第12-15天，最后是由红细胞(菌落形成单位，红细胞，CFU-E)、粒细胞(CFU-G)或单核细胞(CFU-M)细胞组成的细胞簇(50-200个细胞)[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

CD34是所有类型HPCs表达的抗原，其在CFU-E水平表达缺失[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．cfu-gemm表达CD38，但不要表达gydF4y2BaαgydF4y2Ba白介素-3 (IL-3)受体的亚基，在这些细胞向BFU-E、CFU-GM和CD45RA的转变过程中获得[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba，gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]，具体由BFU-E表达[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba，gydF4y2Ba6gydF4y2Ba］．CD36是一种抗体，可以识别血小板反应蛋白，疟疾寄生虫的受体，其表达在暴露于红细胞生成素(EPO)几个小时内被激活[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba］．尽管可以想象，所有类型的红细胞都表达CD36，但在CFU-GEMM向CFU-E过渡期间，其表达如何被调节尚不清楚。HPCs可能从骨髓进入循环[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．然而，由于成熟改变了细胞的粘附受体谱和它们对骨髓龛的亲和性，HPCs以不同的效率从骨髓中释放出来，它们在血液中的频率可能与骨髓的频率不一致[gydF4y2Ba10.gydF4y2Ba］．骨髓中红细胞型HPCs以CFU-E为主，血液中以BFU-E为主(>90%)[gydF4y2Ba11.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

在为输血准备红细胞的白细胞提取过程中，存在于成人外周血(AB)中的HPCs被丢弃。丢弃的AB型HPCs被用于几种液体培养系统，以产生大量谱系限制的前体，用于研究造血[gydF4y2Ba12.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13.gydF4y2Ba］．最近，人们意识到，在地塞米松(DXM)和雌二醇(ES)的存在下，以及干细胞因子(SCF)、IL-3和EPO (human erythroid massive amplification, HEMA, culture)的单次捐赠中，在泛白涂层中丢弃的AB HPCs [gydF4y2Ba14.gydF4y2Ba]可产生足够3-50次输血的成红细胞(EBs) [gydF4y2Ba15.gydF4y2Ba，为转化医学的一个重要领域铺平了道路:体外替代输血产品的生产。尽管AB单核细胞(MNC)和gydF4y2Ba 细胞在HEMA培养中产生大量的EBs，产生的红细胞总数gydF4y2Ba 细胞比MNC生成的细胞平均低1-log [gydF4y2Ba13.gydF4y2Ba］．这种现象归因于CD34选择过程中具有红系分化潜能的HPCs(红系前体细胞，EPC)的丢失和/或循环的存在gydF4y2Ba EPC。第二种假设得到了最近一份报告的支持，该报告指出ABgydF4y2Ba 细胞在HEMA条件下可能分化为EBs，产生比相应的EBs更多的EBsgydF4y2Ba 细胞(gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba］．的表型gydF4y2Ba 含有AB霜涂层的红细胞潜力的细胞尚不清楚。gydF4y2Ba

本研究的目的是进一步阐明AB MNC中HPCs/EPC的表型，并评估其在HEMA条件下产生EBs的贡献。流式细胞分析AB MNC的CD34和CD36表达，然后对预期分离群体进行功能表征(在半固体培养基中菌落形成能力和HEMA中倍增)。研究结果表明，CD34/CD36谱图可以识别AB细胞中EPC的层次结构。gydF4y2Ba

2.材料和方法gydF4y2Ba

２.１.人类被试gydF4y2Ba

根据机构伦理委员会制定的指导方针，研究人员从意大利罗马“La Sapienza”大学输血中心的10名正常成年献血者身上采集了外周血。gydF4y2Ba

２.２.细胞分离gydF4y2Ba

单核细胞(MNCs)在Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotec, Uppsala, Sweden)上离心分离。首先使用标准的流式细胞技术对CD34/CD36表达的MNC进行抗原分析，然后使用磁珠分离和分类相结合的方法对不同CD34/CD36表达的MNC群体进行分离，如图所示gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．流式细胞术中，MNC悬浮于CagydF4y2Ba2 + /gydF4y2Ba毫克gydF4y2Ba2+gydF4y2Ba无磷酸盐,补充1% BSA 2 L更易与乙二胺四乙酸(EDTA),和0.01% NaN3,沾allophycocyanin - (APC)共轭CD36,藻红蛋白——(PE)共轭CD14(单核细胞分化抗原抗体14日),或异硫氰酸荧光素(FITC)共轭CD42a(识别GPIb) (gydF4y2Ba17.gydF4y2Ba，或适当的同型对照(均来自Becton Dickinson Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA)，并使用FACS Aria (Becton Dickinson Biosciences)进行分析，该Aria配备3个气冷和固态激光器(488-nm, 633-nm和407-nm)。SYTOX Blue (0.002 mM, Molecular Probes, Carlsband, california, USA)染色排除死亡细胞。跨国公司被分为gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 人群使用磁性多分类微珠(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach，德国)。的gydF4y2Ba 馏分被进一步分解gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 通过与FACS咏叹调排序的gydF4y2Ba 馏分富集为gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 细胞用涂有CD36的磁性多分类微珠。所有的珠状细胞富集都按照制造商的描述进行。gydF4y2Ba 细胞进一步分裂gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 通过排序。当细胞数量允许时，对纯化的群体进行纯度分析，发现>纯度为90%。结果采用BD FACSDiva软件5.0.3版本进行分析。gydF4y2Ba

（一种）＂n一个米e=
（一种）gydF4y2Ba
（b）＂n一个米e=
（b）gydF4y2Ba
图1gydF4y2Ba
（gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 1 (b)gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba /gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ggydF4y2Ba hgydF4y2Ba 2(一个)gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ggydF4y2Ba hgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba AB MNC的CD36/CD34表达谱。一个）从一种具有代表性的AB中对MNC的CD36/CD34表达进行具有代表性的coulter图分析，并总结分析所鉴定的不同群体的频率。CD36/CD34基因分析鉴定出5个群体:gydF4y2Ba细胞(种群A，红色)，gydF4y2Ba细胞(种群B，黑色)和gydF4y2Ba单元格(总体E，绿色)。第四个gydF4y2Ba人体内都含有大量的gydF4y2Ba细胞，由单核细胞表示(见图)gydF4y2Ba）.排除这些gydF4y2Ba分析的细胞显示了两个gydF4y2Ba表达CD36 al低的人口（gydF4y2Ba，人口C，紫色)和高(gydF4y2Ba细胞，种群D，蓝色)水平。右表总结了从3种不同供体获得的跨国公司中每个群体的平均频率(±SD)。所有的结果都显示在这个图和图中gydF4y2Ba呈现相同的颜色代码。（b）基于CD34 / CD36表达的AB MNC的预期分离。MNC首先分为两名富集或剥夺的人群gydF4y2Bacd34涂层磁珠吸附细胞。的gydF4y2Ba种群进一步纯化并划分gydF4y2Ba和gydF4y2Ba细胞分类。CD34珠流动通过馏分(富集gydF4y2Ba细胞)进一步分裂gydF4y2Ba和gydF4y2Ba细胞采用磁珠隔离。根据CD14表达不足和CD36表达水平较低(群体C，紫色)，对从珠粒中分离出来的细胞进行分类纯化。的gydF4y2Ba细胞(群体D，蓝色)没有被分离出来，因为它表达了高水平的巨核细胞标志物CD42a。最后，对CD36珠流过部分进行富集gydF4y2Ba细胞分类。这些gydF4y2Ba细胞也gydF4y2Ba重新分析(未显示)。在可行的情况下，对预期分离的细胞重新分析纯度。结果具有3种独立纯化的代表性。gydF4y2Ba
２.３.克隆形成实验gydF4y2Ba

未分离和分类细胞的集落形成能力评估标准半固体的甲基纤维素文化(40%,丙烯酰胺Biochemika)刺激与人类自洽场(10 ng / mL), IL-3 (10 ng / mL),集落刺激因子(gm - csf, 10 ng / mL),粒细胞集落刺激因子(g - csf, 100 ng / mL)和促红细胞生成素(5 U /毫升)gydF4y2Ba18.gydF4y2Ba］．培养物在37°C完全湿润的5% pCO中培养gydF4y2Ba2gydF4y2Ba14天后在空气中评分，以观察造血菌落的生长。CFU-GEMM-、BFU-E-和cfu - gm来源的菌落根据标准形态学标准进行识别[gydF4y2Ba18.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba19.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

２.４.人eb在HEMA条件下的体外扩增gydF4y2Ba

跨国公司(10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞/mL)和预分离细胞(gydF4y2Ba 细胞/mL)在HEMA条件下培养，如所述[gydF4y2Ba14.gydF4y2Ba］．简单地说，培养包含Iscove的改良Dulbecco培养基(IMDM, Lonza Group Ltd, Basel, Switzerland)，补充胎牛血清(FBS, Sigma-Aldrich) (20% v/v)，解毒人血清白蛋白(25%，Baxter International Inc, Deerfield, iLL, USA) [gydF4y2Ba15.gydF4y2Ba]、人SCF (50 ng/mL, Sigma-Aldrich)、EPO (3 U/mL, Neorecormon, Auckland, New Zealand)和IL-3 (10 ng/mL, Biosource, San Jose, california, USA)、DXM (10gydF4y2Ba−6gydF4y2BaM)和ES (10)gydF4y2Ba−6gydF4y2BaM) (both from Sigma-Aldrich)， l -谷氨酰胺(200mm, Euroclone SpA, Siziano，意大利)，抗生素[青霉素(10,000单位/mL)，硫酸链霉素(10,000gydF4y2BaμgydF4y2Ba二性霉素b (25 g / mL)gydF4y2BaμgydF4y2Bag/mL)，龙沙集团有限公司]和gydF4y2BaβgydF4y2Ba巯基乙醇(10gydF4y2Ba−6gydF4y2Ba M). The cultures were kept for up to 10–15 days at 37°C and 5% pCO2gydF4y2Ba在完全湿润的培养箱中。gydF4y2Ba

2．5．细胞活力，表型分析和分类gydF4y2Ba

台台蓝(Boston Bioproducts, Ashland, Mass, USA)染色后，通过显微镜评估细胞数量和活力。流式细胞术中，细胞悬浮在CagydF4y2Ba2 + /gydF4y2Ba毫克gydF4y2Ba2+gydF4y2Ba无磷酸盐,补充1% BSA 2 L更易与乙二胺四乙酸(EDTA),和0.01% NaN3,沾allophycocyanin——(APC)共轭CD36或藻红蛋白——(PE)共轭CD235a (antiglycophorin),或适当的同形像控制(所有正欲从生物科学)与流式细胞仪分析咏叹调。SYTOX蓝(0.002 mM，分子探针)染色排除死亡细胞。表达成熟细胞的正向和侧向散射分析gydF4y2Ba 用显型和小体积来鉴定脾细胞[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

2.6。统计分析gydF4y2Ba

结果以每组数据中至少三次实验的平均值(±SD)表示。均数(±SD)用Microcal software, Inc.， Northampton, Mass, USA的Windows软件Origin 5.0进行计算。gydF4y2Ba

3.结果gydF4y2Ba

３.１.AB MNC的抗原分析gydF4y2Ba

CD34/CD36分型将AB MNC分为4个群体:gydF4y2Ba (人口,gydF4y2Ba %),gydF4y2Ba （人口B，通常存在于几乎没有可检测的数字中，但在一些捐赠者达到频率gydF4y2Ba～gydF4y2Ba0.1%),gydF4y2Ba （gydF4y2Ba～gydF4y2Ba23%),gydF4y2Ba (人口E,gydF4y2Ba～gydF4y2Ba74%)(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba 细胞又可分为三种群体:大多数表达CD14，因此以单核细胞(单核细胞表达CD36)为代表[gydF4y2Ba21.gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba）.通过斑点杂交和CD42a染色，剩余的可以分为两个额外的群体:gydF4y2Ba (人口C,gydF4y2Ba～gydF4y2Ba2%)，不表达CD42agydF4y2Ba (人口D,gydF4y2Ba～gydF4y2Ba1.0)，表达高水平CD42a(平均荧光强度，gydF4y2Ba )(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

３．２．基于CD34和CD36表达的MNC群体的前瞻性分离gydF4y2Ba

在CD34和CD36表达的基础上，通过磁珠富集和细胞分选相结合的方法纯化AB跨国公司，如图所示gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba．首先,gydF4y2Ba 细胞被cd34包被微珠富集。的gydF4y2Ba 馏分(再分析纯度为12%)然后进行分类gydF4y2Ba 表达细胞（gydF4y2Ba ，人口)或不是(gydF4y2Ba ， B人群)CD36。大约75000个A细胞和10000个B细胞从平均捐赠的浅棕色外套中被回收(见表)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.A种群的>纯度为98%，而B种群的纯度由于细胞回收率低而不能确定。gydF4y2Ba
细胞群gydF4y2Ba 从1个泛黄涂层中获得的细胞gydF4y2Ba 恢复(%)*gydF4y2Ba FI -在-gydF4y2Ba
(14天)gydF4y2Ba		 HEMAat第14天产生的EBs理论总数**gydF4y2Ba
跨国公司gydF4y2Ba 272.gydF4y2Ba （gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ）gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba 100％gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba
602483. tab.004a＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba 75gydF4y2Ba （gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ）gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 27.5%gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba ，gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba
602483. tab.004b＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 9,500gydF4y2Ba 3.5％gydF4y2Ba 113.gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba
602483. tab.004c＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba lgydF4y2Ba ogydF4y2Ba wgydF4y2Ba 7500年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba -gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba ％gydF4y2Ba 62.5gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba
602483.tab.004e.＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba 2-gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba 1.0 - -4.9%gydF4y2Ba 1.14 - -3.5gydF4y2Ba 0.2 -gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba
*回收率是用纯化后得到的细胞总数除以MNC中存在的理论细胞数来计算的。每个馏分的理论细胞数乘以总体的频率，如图所示gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba，按从AB泛白涂层获得的跨国公司平均数量(gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ）.gydF4y2Ba
**每个馏分在第14天可获得的EBs的理论总数是通过与相应的FI的馏分的细胞总数相乘来计算的。gydF4y2Ba
表格1gydF4y2Ba
总结基于CD36/ cd34的纯化后各部分恢复的细胞数量以及它们在HEMA培养中的生长情况。跨国公司和群体A的结果以三次单独实验的平均值(±SD)表示。E群体的结果代表了两个独立的实验，而B和C群体的完整数据集只能从一个实验中获得。gydF4y2Ba

对cd34涂层磁珠流过部分的CD36和CD14表达的重新分析显示，大量(gydF4y2Ba～gydF4y2Ba78%)的gydF4y2Ba 细胞也表达CD14。通过cd36 -磁珠分离，将该流动部分进一步分为cd36富集和cd36缺失部分。将吸附在不表达CD14和CD42a且表达低水平CD36的珠粒上的细胞进行分类(gydF4y2Ba C)(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba）.大约7500个C细胞从一次献血的浅黄色表层中被回收gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.这个低数值阻止了对该细胞群纯度的重新分析，并限制了其功能特性。的gydF4y2Ba 高水平表达CD36的细胞(gydF4y2Ba ，种群D)由于CD42a的高表达而没有被分类，这表明可能已经由巨核细胞前体所代表[gydF4y2Ba17.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

CD36磁珠的流动部分通过分选进一步纯化(种群E)，共1000万gydF4y2Ba 细胞从平均AB染色的白外套中回收(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

３．3.基于CD34/CD36基因分析的AB群体克隆效率研究gydF4y2Ba

表中介绍了群体A和E半固体测定中的祖细胞活性gydF4y2Ba2gydF4y2Ba．AB跨国公司并行分析作为对照。如预期的那样，种群A获得了大量的菌落形成细胞(克隆效率16%)，并产生了BFU-E-和cfu - gm来源的菌落(比例为1:1)。它也含有少量(0.001%)CFU-GEMM。E种群的克隆效率比MNC低40%，主要产生红细胞爆裂(80%)。来自A、E和MNC群体的红细胞爆发在大小和形态上没有差异(插入表中)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)，说明不同部位的BFU-E具有相似的增殖/成熟潜力。gydF4y2Ba
氯氟化碳/板gydF4y2Ba 每馏分含氯氟烃总量*gydF4y2Ba 复苏gydF4y2Ba
细胞群gydF4y2Ba BFU-EgydF4y2Ba CFU-GMgydF4y2Ba CFU-GEMMgydF4y2Ba
跨国公司gydF4y2Ba
（10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞/板)gydF4y2Ba		 602483. tab.003a＂年代rc= 7gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 100％gydF4y2Ba
602483. tab.004a＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba
(500个细胞/板)gydF4y2Ba		 602483. tab.003b＂年代rc= 9gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 8.1%gydF4y2Ba
602483.tab.004e.＂年代rc= CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba
（10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞/板)gydF4y2Ba		 602483. tab.003c＂年代rc= 3.gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ．gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 0.8%gydF4y2Ba
＊gydF4y2Ba将表中各馏分中CFC (BFU-E + CFU-GM + CFU-GEMM)与总细胞数相乘，计算每个馏分中CFC总数gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．gydF4y2Ba
表2gydF4y2Ba
AB MNC和AB细胞群的克隆效率在CD34 / CD36表达的基础上进行了前瞻性孤立。结果呈现为三个独立实验中观察到的平均值（±SD）。插入物存在在相应的半固体培养物（原始倍率10x）中获得的代表性BFU-E-衍生菌落的形态。gydF4y2Ba
3．4．基于CD34/CD36分析的AB群体在HEMA条件下的扩增潜力gydF4y2Ba

根据CD34/CD36谱预测分离的AB群体在HEMA条件下的扩增潜力如图所示gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba和表格gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．AB跨国公司并行分析作为对照。如预期，在HEMA条件下，种群A有很大的增殖潜力，表达900个之间的FIs(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)和24000(平均)gydF4y2Ba 、表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)相比,gydF4y2Ba 相应的跨国公司。在第13天，B和C群体也产生了大量的细胞，它们表达了100和60的FI(图)gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba和表格gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.相比之下，E组的FI低至1-3。然而，考虑到在这部分(>10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)，种群E产生许多细胞(gydF4y2Ba～gydF4y2Ba10.gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)在HEMA条件下(gydF4y2Ba ）.gydF4y2Ba

（一种）＂n一个米e=
（一种）gydF4y2Ba
（b）＂n一个米e=
（b）gydF4y2Ba
图2gydF4y2Ba
．gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba ngydF4y2Ba egydF4y2Ba ggydF4y2Ba /gydF4y2Ba lgydF4y2Ba ogydF4y2Ba wgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba /gydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 米gydF4y2Ba egydF4y2Ba dgydF4y2Ba /gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ggydF4y2Ba hgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba lgydF4y2Ba ogydF4y2Ba wgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ggydF4y2Ba hgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba lgydF4y2Ba ogydF4y2Ba wgydF4y2Ba CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba lgydF4y2Ba ogydF4y2Ba wgydF4y2Ba 在HEMA条件下，基于CD34/CD36谱预测分离的MNC的生长和红细胞成熟（一种）在HEMA条件下从AB MNC中预期分离的细胞生长曲线(与图中的颜色代码相同)gydF4y2Ba）.MNC（灰色虚线）并将其作为对照培养。培养物中存在的细胞数量表示为倍数（FI）。显示了代表性实验的结果。在另外2个实验中观察到类似的结果（另见表gydF4y2Ba）.(b)在AB MNC或A、b、C或E群体的HEMA培养中，如所示EBs成熟的时间进程。CD36/CD235a基因分析将EBs划分为三个群体:（原红细胞,蓝色);（嗜碱性成红细胞，紫色)（正色的成红血球细胞,红色)。前边散点分析确定了第四个小种群gydF4y2Ba细胞，可能由芘细胞（黄色）表示。不表达EB标记的细胞以绿色表示。每个象限内的数字表示不同亚步骤的频率。结果代表了三个独立实验中获得的那些。由于低电平指数，ND =未完成。gydF4y2Ba
3.5。AB MNC群体的成熟潜力在CD34 / CD36分析的基础上进行了前瞻性孤立gydF4y2Ba

根据CD36/CD34谱预测分离的AB MNC后代和AB群体的谱系和成熟阶段如图所示gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba．CD36/CD235a基因分析将EBs划分为三个群体:gydF4y2Ba (pro-erythroblasts);gydF4y2Ba (嗜碱成红血球细胞),gydF4y2Ba (正色的成红血球细胞)[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba］．第四人口gydF4y2Ba 正向和侧向低散点的细胞由pyrenocyte组成[gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

在MNC的培养物中，具有未成熟的EBS表型的细胞（gydF4y2Ba )很快被检测到(第2天检测到2%)，而非ebs在第10天检测到的人数不多(6-7%)。成熟的EBs (gydF4y2Ba )在第6天被检测到(15%)，在第10天达到频率>70%。第15天，未成熟的EBs几乎无法被检测到，并且有大量的细胞gydF4y2Ba 表型(大细胞对应正色EBs, 18%，小细胞对应pyrenocyte, 40%)均被检测到(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

在A群体的HEMA培养中，未成熟EBs的检出率也非常早(第2天为10%)，但成熟EBs的检出率仅在第8天达到10%。到第15天，培养物中含有大量的(22%)gydF4y2Ba 正色EBs，但无核细胞(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

在B群体的HEMA培养中，第6天获得了足够进行抗原分析的细胞数量。gydF4y2Ba 单元格代表多数(gydF4y2Ba～gydF4y2Ba83％）来自第6天至第8天的细胞8.在这些培养物中，成熟gydF4y2Ba 在较早的时间点观察到EBS关于人口培养物（3％和10％）gydF4y2Ba B组和A组培养6-7天的细胞数量与7-8天的细胞数量比较gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba）.到第15天，群体B和群体A的后代成熟表型相同。gydF4y2Ba

群体C的HEMA培养物最初接种的细胞数量与群体A和群体B的细胞数量相当(gydF4y2Ba～gydF4y2Ba7 500个牢房，而用于其他两个人口的9 500 - 10 000个牢房)。然而，人口C的文化增长非常缓慢(见图)gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)，细胞数量仅在第8天达到足够的抗原分析值。在第8天，大部分(39%)EBs已经成熟gydF4y2Ba 表现型。然而，C种群的后代发育不良，只有6%的后代获得了正色期gydF4y2Ba 第15天显型。gydF4y2Ba

最后，E人口没有产生显著的数字(26%)gydF4y2Ba 直到第6天。然后细胞迅速发展到gydF4y2Ba 阶段(10%gydF4y2Ba 细胞7天)和gydF4y2Ba 阶段(第13天7.5%)。这些培养物中可检测到的核细胞水平与MNC培养物(24%)相似。gydF4y2Ba

综上所述，尽管动力学存在差异，但本研究分析的所有种群均在HEMA条件下产生EBs。gydF4y2Ba

4.讨论gydF4y2Ba

CD36/CD34基因分析鉴定出至少有4个群体存在于AB MNC中，能够在半固态检测和HEMA条件下产生菌落。gydF4y2Ba

在半固态检测中，纯化组分中只有9%的原HPCs活性恢复(A种群为8.1%，B种群为0.8%)。gydF4y2Ba～gydF4y2Ba总共15,000个细胞，表格gydF4y2Ba1gydF4y2Ba），它们可能含有最多5％的MNC HPCS活动。因此，在净化程序期间，MNC中存在的80％的HPCS活性损失。该结果表明，MNC的一些HPCS活性的假设是由于HPCS细胞，其响应于辅助细胞释放的因子而成为半固体测定的HPC。gydF4y2Ba

与Van Den Akker等人报告的数据一致。[gydF4y2Ba16.gydF4y2Ba]，我们确定在HEMA条件下eb由gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba AB细胞(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.因此，两个种群都包含EPC。CD34CD36基因分析识别出除了两个gydF4y2Ba EPC数量(gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba )， AB跨国公司包含2gydF4y2Ba EPC人口(gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba ）.抗原概况定义了gydF4y2Ba 虽然初步结果显示这些细胞可能表达CD44 [gydF4y2Ba22.gydF4y2Ba]，透明质酸的受体也与骨桥蛋白和胶原蛋白相互作用[gydF4y2Ba23.gydF4y2Ba(数据未显示)。gydF4y2Ba

与此相反，在AB MNC的纯化过程中观察到大量菌落形成细胞的损失(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)，纯化过程并没有导致EPC的巨大损失，观察到四个纯化馏分生成的EBs的数量之和只有很小的(gydF4y2Ba 与gydF4y2Ba )低于MNC生成的(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.在HEMA条件下，产生EBs最多的种群是种群A，只有27%的种群在净化过程中得到了恢复(表2)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba）.在HEMA条件下培养一个包含所有的种群agydF4y2Ba 一次捐献的细胞(100%恢复)可以产生多达gydF4y2Ba EBs，这个数字与在MNC培养中观察到的数字非常相似。这些数据表明细胞在纯化过程中损失，而不是巨大的EBs产生gydF4y2Ba HPCs是跨国公司EBs总体产量高于跨国公司的主要原因gydF4y2Ba 细胞在HEMA培养。gydF4y2Ba

根据FI和培养成熟所需的时间，将AB中识别的四个EPC种群按照图中所示的层次模型进行分类gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba．gydF4y2Ba 细胞可能代表早期细胞，可能是HPCs(它们同时包含BFU-E和CFU-GM)，而gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 细胞可以分别代表早期和晚期红细胞限制祖细胞（EPC）。这些细胞群体可能是在母女性关系中联系在一起。在此模型中难以对人口e进行分类。由于该群体中的大多数细胞可能由分化的前体表示，因此可以想到，该级分中的祖细胞代表是具有如此巨大增殖潜力的稀有群体gydF4y2Ba ．E种群是产生EBs最慢的种群，这一观察也支持了这一假设(gydF4y2Ba 在第6天前未检测到细胞。这表明该群体可能含有能够产生细胞的前体细胞gydF4y2Ba 细胞。进一步的研究涉及到CD34在后代中的表达的时间进程分析gydF4y2Ba 需要E细胞来澄清这一点。由于用于刺激HEMA培养的生长因子被选择为最佳EB，而不是CD34细胞，产生[gydF4y2Ba15.gydF4y2Ba]，有可能前培养的gydF4y2Ba 促进CD34细胞增殖条件下的E细胞(使用生长因子组合，包括FLT3配体或血小板生成)[gydF4y2Ba24.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba25.gydF4y2Ba，当它们的后代在HEMA条件下培养时，就可以产生更多的EBs细胞。同样有趣的是，观察到种群E是唯一在第15天产生大量pyrenocyte的纯化种群，这表明其后代经历了显著水平的HEMA摘除。巨噬细胞的存在极大地促进了摘除过程[gydF4y2Ba26.gydF4y2Ba］．在HEMA培养中，巨噬细胞作为污染物出现在MNC培养中，MNC通常在第15天生成pyrenocyte(图)gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba）.这些细胞在第15天通过纯化过程从所有其他未产生pyrenocyte的种群中去除。E组虽然不包含巨噬细胞(gydF4y2Ba 细胞)可能含有它们的前体，这些前体可能在培养中成熟，有利于EBs的去核。需要进一步的研究来澄清污染巨噬细胞和/或其前体细胞在HEMA条件下产生的人类EBs去核中的作用。gydF4y2Ba


图3.gydF4y2Ba
CgydF4y2Ba DgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 3.gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ogydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 在AB MNC中存在的具有红细胞增殖潜能的祖细胞之间的层次关系模型。该模型基于增殖潜力(由FI显示)和成熟速度(由产生大量成熟细胞>25%所需的时间显示)（EBs)。详情见正文。gydF4y2Ba

综上所述，CD34/CD36谱分析确定了AB中EPC的层次结构gydF4y2Ba 细胞，有可能进一步改善培养体系，有利于增殖gydF4y2Ba 细胞，可以进一步增加AB产生的EB的数量。gydF4y2Ba

资金gydF4y2Ba

这项研究得到了NY-STAR基金会(C-06066)、意大利罗马国家桑格中心(Centro nationale Sangue)以及意大利西奈山医学院(Mount Sinai School of Medicine)和Superiore Sanità机构基金的资助。gydF4y2Ba

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