GADD45确定化疗耐药和人类胚胎癌的边群细胞浸润性生长

抽象

侧群（SP）细胞是干的富集群体，和SP细胞的存在已经在人癌症细胞系的报道。在这项研究中，我们使用11个人癌症细胞系的SP分析和证实SP细胞在胚胎癌细胞系，NEC8的存在。NEC8 SP细胞显示癌干细胞，如高生长速率，化学抗性和高侵袭性的特性。为了进一步表征NEC8 SP细胞，我们使用了DNA微阵列。在38500个基因，我们确定了12个基因在SP细胞中过表达这一点，1个基因在非SP细胞中过表达。其中13个基因，我们专注于GADD45B。在非SP细胞GADD45B中过表达，但GADD45B的抑制对非SP细胞没有影响。矛盾的是，GADD45B的抑制显著降低NEC8 SP细胞的生存力。ABCG2的抑制，这就决定了SP表型，对NEC8 SP细胞侵袭没有影响，但GADD45B的抑制显著降低侵袭。这些结果表明，GADD45B，但不是ABCG2，可能确定癌症干细胞样表型，如化疗和NEC8 SP细胞的侵袭力高，而且可能是一个很好的治疗靶点。

1.简介

干细胞，其具有通过自我更新和分化延续自己的能力，在正常组织中罕见。一些报告显示，癌细胞中也含有癌症干细胞（CSC）与自我更新潜力无限的一小部分，而这些细胞肿瘤驱动。CSC的特征在于生成新的异质性肿瘤的能力，并开发多药耐药性的能力[<一个href="#B1">1,<一个href="#B2">2]。不过，中信建投的特性仍然不足。CSC和肿瘤发生机制的根部被认为是从突变体干细胞和祖细胞[相互作用来发起<一个href="#B3">3.]。CSC是治疗癌症比其他肿瘤细胞更重要，因为CSC可能会导致癌症治疗后复发。换句话说，明确负责CSC的浸润性生长及化疗耐药的机制是治疗癌症的关键任务，以及CSC可能是一个很好的治疗靶点。

侧群（SP）细胞最初被报告为鼠的富集群体的造血干细胞用Hoechst的33342染料和FACS [鉴定的细胞<一个href="#B4">4]。最近的研究已经表明，这种表型依赖于ABCG2，一个ATP结合盒（ABC）转运体的表达[<一个href="#B5">5]。SP细胞已经从许多种正常人组织的分离：前列腺[<一个href="#B6">6]，角膜缘上皮[<一个href="#B7">7]，乳腺[<一个href="#B8">8,<一个href="#B9">9]，皮肤[<一个href="#B10">10]，和肾脏[<一个href="#B11">11- - - - - -<一个href="#B13">13]。最近，SP细胞也已经从各种人癌细胞系，包括白血病分离[<一个href="#B14">14]， 成神经细胞瘤 [<一个href="#B15">15]，肝细胞瘤[<一个href="#B16">16,<一个href="#B17">17]，结直肠癌[<一个href="#B17">17]， 甲状腺 [<一个href="#B18">18]，鼻咽癌[<一个href="#B19">19]，和肺癌[<一个href="#B20">20]。此外，癌症SP细胞据报道具有干细胞样的功能，如对化疗抗癌药，克隆能力，和致瘤性。换言之，癌症SP细胞是有前途的CSC和可能是癌症治疗的好目标。

在这项研究中，我们第一次尝试，以确定人类癌症细胞系SP细胞和胚胎癌细胞系NEC8发现显著SP人口。相比于非SP细胞中，SP细胞表现不仅迅速增长和化疗，但也迅速浸润性生长。为了阐明化学抗性和SP细胞的浸润性生长的机制，我们进行了微阵列分析。我们确定了SP和非SP细胞之间的差异表达，有13个基因。在13个基因中，我们将重点放在GADD45。GADD45属于生长的人逮捕和DNA损伤诱导蛋白家族并且与NF-kB的，这是众所周知的影响肿瘤发生，肿瘤细胞存活，凋亡，侵袭和转移[<一个href="#B21">21,<一个href="#B22">22]。GADD45过度表达在非SP，但GADD45击倒矛盾的是减少NEC8 SP细胞的细胞活力，但不是非SP细胞。此外，NEC8 SP细胞的侵袭性生长减少了GADD45的抑制的，但不是由ABCG2的抑制，这决定了SP表型。我们的研究结果表明，CSC样表型，如抗癌药和浸润性生长性，不仅可能被ABCG2由GADD45确定，但也。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

几个人癌细胞系：肾（ACHN，将Caki-1，OS-RC-2，RCC10RGB），前列腺癌（DU145，LNCap.FGC，PC3），膀胱（EJ-1，RT4，T24），胚胎癌（NEC8）和乳腺癌（MCF-7）。OS-RC-2，LNCap.FGC和NEC8在RPMI 1640（Sigma-Aldrich公司，圣路易斯中培养，<一个href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank">http://www.sigmaaldrich.com/)。RCC10 RGB是在Dulbecco改良的Eagle氏培养基 - 低葡萄糖（Sigma-Aldrich公司）培养。PC3在F-12营养混合物（Ham氏F-12培养; GIBCO，格兰德岛，NY，<一个href="http://www.invitrogen.com/" target="_blank">http://www.invitrogen.com/)。MCF-7保持在Dulbecco改良的Eagle培养基（Gibco）和剩余的细胞系在最低必需培养基（Gibco）中培养。各培养基补充有10％胎牛血清（Sigma-Aldrich公司）。仅ACHN补充有1％MEM非必需氨基酸溶液（Sigma）。所有细胞在37下温育下在含有5％CO的气氛中。ACHN LNCap。FGC、PC3均由大阪住友制药公司(Dainippon Sumitomo Pharma，<一个href="http://www.ds-pharma.co.jp/" target="_blank">http://www.ds-pharma.co.jp/)。OS-RC-2和RCC10RGB从RIKEN（东京获得<一个href="http://www.riken.go.jp/" target="_blank">http://www.riken.go.jp/)。DU145和MCF-7得自美国典型培养物保藏中心（ATCC获得;马纳萨斯，VA，<一个href="http://www.atcc.org/" target="_blank">http://www.atcc.org/），并从健康科学研究资源库（HSRRB获得的其他细胞系;东京，<一个href="http://www.jhsf.or.jp/" target="_blank">http://www.jhsf.or.jp/)。

2.2。SP细胞分析和细胞分选

将细胞从培养皿中脱落用0.05％胰蛋白酶EDTA（Gibco）中，并在重悬DMEM/F12 (Gibco)细胞/mL, 2%胎牛血清。用5g/mL Hoechst33342 (Sigma-Aldrich)， 37℃保存60分钟C.为了确认SP人口，一个等分试样与hoechst33342的在50存在染色 利血平的M（第一三共，东京）。既维拉帕米和利血平通常用于抑制ABC转运在SP分析[<一个href="#B23">23，但是利血平在我们的染色条件下对SP分析更有效。细胞在Hank’s平衡盐溶液(Gibco)中重悬，该溶液中补充0.2%的胎牛血清，含7AAD (BD Biosciences, San Diego)，最终浓度为0.25g/mL，可区分死细胞。细胞分析和分类使用FACS Vantage (BD Biosciences)进行。在400 nM激发Hoechst33342，分别使用424/44 BP和585/42 BP的赫斯特蓝和赫斯特红滤光片和510 nM的长通二色镜分离发射波长，检测荧光发射。用线性尺度显示了赫斯特蓝和红的荧光。在499 nM氩激光激发后，用675/20 BP测定7AAD荧光。

2.3。药物敏感性测定

排序NEC8 SP和非SP细胞在的密度接种96孔板中有100个细胞L到适当的生长培养基中的好。然后将板在37℃培养下在含有5％CO的潮湿空气气氛48小时。将细胞用顺铂（0.01处理，以10 M）2小时。另一个120小时后，用比色水溶性四唑盐测定中测量的细胞的存活力（细胞计数试剂盒8，CCK-8），（同仁化学，熊本，日本，<一个href="http://www.dojindo.co.jp/" target="_blank">http://www.dojindo.co.jp/）根据制造商的说明书，用ARVO SX（珀金埃尔默，波士顿）检测比色分析。

2.4。入侵检测

BD基质胶BIOCOAT 24孔侵袭室（BD Biosciences公司）中，根据制造商的说明书使用。细胞在孔的密度接种到上部插入每个插入在无血清RPMI1640中。下部孔使用含有10%胎牛血清的培养基作为化学引诱剂。48小时后，用棉签去除膜上表面的未被入侵的细胞。然后用100%甲醇固定膜，用姬姆萨染料染色。细胞的侵袭性是通过使用放大倍数的显微镜来计算穿过孔进入膜底部的细胞数量来确定的100.已通过基质胶的迁移细胞的数量通过在每一侵袭实验中使用与NSC siRNA处理的细胞的平均细胞数归一化。侵袭性表示为细胞在五个随机选择的视野的平均数。入侵的百分率如下测定：％=入侵细胞通过基质胶侵入插入细胞通过控制插入膜迁移的膜/平均数的平均数[<一个href="#B24">24]。该试验进行三个独立的实验。

2.5。RNA提取和寡核苷酸芯片分析

总RNA从NEC8 SP和使用TRIZOL（Invitrogen公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州非SP细胞中提取<一个href="http://www.invitrogen.com/" target="_blank">http://www.invitrogen.com/）根据制造商的方案。RNA的纯度使用Agilent 2100生物分析仪（安捷伦科技帕洛阿尔托，CA）检查。我们使用人类基因组U133A Plus2.0阵列（Affimetrix，圣克拉拉，CA），其包含代表超过47000个转录包括38500充分表征的人类基因几乎54000个探针组。根据制造商的方案进行的的cRNA与探针阵列的杂交的制备。

2.6。实时定量PCR分析

总RNA从使用RNeasy Mini试剂盒（Qiagen公司，瓦伦西亚，CA SP和非SP细胞中提取<一个href="http://www1.qiagen.com/" target="_blank">http://www1.qiagen.com/）根据制造商的方案。cDNA was reverse-transcribed from total RNA (20 ng) using a High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA,<一个href="https://www2.appliedbiosystems.com/" target="_blank">https://www2.appliedbiosystems.com/)和RT反应在GeneAmp PCR System 9700热循环(应用生物系统)中进行。使用TaqMan聚合酶链反应(PCR)，使用TaqMan通用PCR master mix (Applied Biosystems)和TaqMan基因表达检测(Applied Biosystems)，按照厂家说明进行。使用7500 Real-Time PCR系统(Applied Biosystems)进行PCR扩增。各分析基因的TaqMan引物如下:ABCG2, Hs00184979_g1;GADD45，Hs00169587_m1;和GAPDH,Hs99999905_g1。

2.7。siRNA双链和转染

所有的siRNA双链购买了惠普全基因组的siRNA从Qiagen公司，并转用HiPerFect（QIAGEN）。ABCG2 siRNA (50 nM) and GADD45siRNA (50 nM) were transfected 24 hours after seeding. The cells were exposed to cisplatin 48 hours after seeding.

3.结果

3.1。SP表型在人癌细胞系

我们在12个人癌细胞系（ACHN，将Caki-1，OS-RC-2，RCC10RGB，DU145，LNCap.FGC，PC3，EJ-1，RT4进行使用的Hoechst 33342染料染色（SP细胞分析）流式细胞术分析，T24，NEC8和MCF7）（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig1/" target="_blank">1)。的SP栅极被定义为在利血平的存在，阻碍了的Hoechst 33342染料转运蛋白的活性的减少的区域。在MCF7的SP级分已经被报道<一个href="#B23">23]，和我们使用MCF7作为选通的阳性对照。但是，我们证实仅在NEC8和MCF7的SP级分，范围从0.7％至3.7％，使用我们的Hoechst 33342染料染色条件（60分钟）的12个人癌细胞系中。

3.2。肿瘤SP的生长和化疗耐药性

虽然我们找不到在FACS分选NEC8 SP细胞和非SP细胞的任何形态差异，我们接下来比较了这2分的细胞生长和耐药。尽管没有观察到差异，直到72小时接种后，将NEC8 SP细胞表现出快速的细胞生长，相对于非SP细胞，96小时后（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig2/" target="_blank">2(一个))。为了检测NEC8 SP细胞的化疗耐药性，我们检测了在存在顺铂的情况下的细胞存活率(0.01)M至50 M).与非SP细胞相比，SP细胞对顺铂的耐受性显著提高，耐受性范围为0.01M至1.0 M（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig2/" target="_blank">图2（b）)。

3.3。对SP细胞的侵袭性强

为了阐明在SP和非SP细胞侵袭力之间的差异，我们进行的体外基质胶侵袭测定。NEC8非SP细胞几乎没有显示出入侵。然而，NEC8 SP细胞显示侵袭的水平明显高于非SP细胞的大大约10倍（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig3/" target="_blank">3.)。

3.4。SP细胞重生SP和非SP细胞

为了研究NEC8 SP细胞的复育能力，我们培养的FACS分选的细胞五天，再进行第二次SP分析。产生的SP和非SP细胞的NEC8 SP细胞，与SP级分大小，这是比原始群体（4.3％比13.0％的更大;图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig4/" target="_blank">4)。

3.5。使用微阵列分析SP细胞的基因表达谱

为了研究SP细胞的基因表达谱，我们使用基因芯片人类基因组U133加2.0阵列（Affymetrix公司）的基于寡核苷酸的DNA微阵列分析。我们搜寻了的基因具有高信号强度（大于100），并在表达显著差异（SP /非SP> 1.8或非SP / SP> 1.8）。此外，我们选择了NEC8 SP细胞和MCF7 SP细胞都表达的基因。中38500个基因，我们确定了在SP细胞中过表达的是12个基因和1个基因在非SP细胞中过表达（表<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/tab1/" target="_blank">1)。出乎意料的是，ABCG2，它决定了SP表型，未包括在该表中（其SP /非SP比为大于1.8略少），但我们证实，ABCG2在使用实时PCR（图中的SP细胞中过表达<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（c）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（d）)。在13个基因中，我们将重点放在GADD45,使用三种不同的微阵列的探针（图中癌细胞细胞存活，这是在非SP细胞中过表达的一个重要介体<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（a）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（b）)。GADD45的过表达在非SP细胞，使用实时PCR（图证实<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（c）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig5/" target="_blank">图5（d）)。

3.6。ABCG2和GADD45的悖论职能作用在SP细胞

阐明ABCG2和GADD45的功能作用在NEC8 SP细胞，我们处理的NEC8 SP和非SP细胞与基因的小干扰RNA（siRNA），在存在和不存在的顺铂检查细胞存活力（0.1 M）。相较于治疗非沉默对照siRNA，用siRNA治疗ABCG2和GADD45在NEC8 SP和非SP细胞中显著降低基因表达(图)<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（a）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（b）)。治疗用siRNA对ABCG2，其在NEC8 SP细胞中过表达，显著降低NEC8 SP细胞的细胞活力，但对非SP细胞（图没有影响<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（c）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（d）)。奇怪的是，与siRNA转染GADD45治疗，这是在非SP细胞中过表达，显著减少SP细胞的细胞活力，但对非SP细胞（图没有影响<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（c）和<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（d）)。

3.7。GADD45确定SP细胞侵袭，但不是SP表型

如图所示<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig3/" target="_blank">3.中，SP细胞显示非常强的侵入性，与非SP细胞相比。为了澄清侵袭的机制，我们处理的NEC8 SP细胞用siRNA对ABCG2和GADD45。虽然用siRNA进行治疗ABCG2降低显著基因表达（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig6/" target="_blank">图6（a）），它显示出对入侵（无效果图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（a）上部中，图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（b）)。在另一方面，治疗的siRNA对GADD45显著防止入侵（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（a）右上和图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（b）)。作为GADD45属于生长的人逮捕和DNA损伤诱导蛋白家族，我们试图上调GADD45在通过与顺铂的低浓度处理细胞NEC8（0.01 M表示24小时）。的NEC8细胞与车辆或顺铂24小时温育，并然后使用FACS分选。与顺铂的低浓度处理（0.01 M）显著上调GADD45的基因表达在NEC8 SP细胞，但显示出（图上非SP细胞没有影响<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（c）)。虽然与顺铂的低浓度处理上调GADD45的表达在SP细胞（图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（c）），一个FACS分析表明在SP人口（无变化图<一个href="//www.newsama.com/journals/sci/2010/782967/fig7/" target="_blank">图7（d）)。

4。讨论

的SP表型可以被用于富集干细胞级分，并且通过ABCG2 [存在下测定<一个href="#B5">5]。然而，在癌症SP细胞这项ATP结合盒转运的生理作用目前还不清楚。在这项研究中，我们证实在人类胚胎癌细胞系，NEC8 SP细胞的显著存在。NEC8 SP细胞显示癌干细胞样表型，如快速增长，化学抗性，浸润性生长和自我更新。有趣的是我们的结果表明，GADD45但不ABCG2，可能确定顺铂和NEC8 SP细胞的侵袭的高水平抗性。

ABCG2是ABC转运的成员，并且是已知的运输抗癌药物如阿霉素，柔红霉素，米托蒽醌，托泊替康和。GADD45属于生长的人逮捕和DNA损伤诱导蛋白家族，和Zerbini等。报道称，GADD45家族在癌细胞中细胞存活的必要调解员，与癌症化疗和新药物开发的影响<一个href="#B22">22]。换句话说，这两个基因可以防止细胞死亡的细胞。事实上，使用siRNA诱导的细胞死亡中NEC8 SP细胞，这些基因的抑制。GADD45过表达在非SP细胞，用NEC8 SP细胞相比，但GADD45的抑制矛盾的是降低细胞活力和在SP细胞的顺铂的敏感性增强而不是在非SP细胞。而且，顺铂的低剂量上调GADD45的表达在SP细胞，而不是在非SP细胞。这些结果表明，调控和GADD45的职能作用细胞类型中GADD45但不同可以是用于治愈性治疗靶向癌症有用干细胞样细胞，如SP细胞。ABCG2的抑制，这就决定了SP表型，对SP细胞的侵袭没有影响，但该GADD45的强烈抑制它。注意事项是需要解释这两种蛋白质的击倒的效果。作为NEC8 SP细胞与非SP细胞相比表现出快速增长，siRNA的效果可能被在NEC8 SP细胞快速细胞周期由ABCG2确定的表型SP自身增强，而不是。虽然SP人口是异构的，我们的结果表明，有可能是基因的某些层次，确定SP细胞的表型不同。ABCG2可能确定SP细胞的一般常见的表型，而GADD45可能确定这些细胞的核心功能，例如化学抗性和侵袭的部分。

在这项研究中，我们检查了12个癌细胞系（ACHN，将Caki-1，OS-RC-2，RCC10RGB，DU145，LNCap.FGC，PC3，EJ-1，RT4，T24和NEC8），并发现SP细胞仅在NEC8。然而，Patrawala等。和Ning等人。有报告的SP细胞或干样在这些细胞系群体[<一个href="#B23">23,<一个href="#B25">25,<一个href="#B26">26]。我们相信，在他们研究的染色条件的差异，我们或许可以解释这种差异。Patrawala等。[<一个href="#B25">25用CD44&染色的癌细胞21个或染色的细胞用Hoechst 33342 90分钟<一个href="#B23">23]。宁等人。[<一个href="#B26">26]也染色的细胞用Hoechst 33342 90分钟，但我们的孵化时间为60分钟。一般来说，潜伏期长的时间增加了SP的人口。然而，很长的培育时间（90分钟），在某种程度上降低了NEC8的细胞活力，我们优化了我们的孵化时间为60分钟。我们认为，在讨论小SP群体的存在一定的困难，而不规范的染色条件。需要进一步的研究来优化染色条件，但我们相信在癌细胞SP分析可用于预测某些疾病特征，可能是合适的治疗靶。

周某等人。报告说，干细胞样SP细胞的表型是由ABCG2 [确定<一个href="#B5">5]。我们还发现，ABCG2的NEC8 SP和非SP细胞中的基因表达差异显著，但差异微乎其微。作为SP级分根据ABCG2的功能染料流出容量分离，我们推测，有可能是ABCG2的基因表达和ABCG2的在NEC8 SP细胞的功能能力，和用于识别CSC应的替代标准之间的差异被考虑用于NEC8 SP细胞。没有确切的标准来定义癌症干细胞的存在，但一些报告提出CSC [的两大特点<一个href="#B1">1,<一个href="#B2">2,<一个href="#B27">27- - - - - -<一个href="#B30">三十]：（1）自我更新（肿瘤发生）的绝期，以及（2）通过与能力进一步区分异构分裂生产祖细胞。此外，一些其他报告提到的癌症治疗药物的抗性作为另一特征[<一个href="#B2">2,<一个href="#B27">27,<一个href="#B28">28]。在医学文献中，癌症SP细胞据报道显示对经历多向分化在体内和体外的能力[<一个href="#B15">15- - - - - -<一个href="#B20">20]。在我们的研究中，NEC8 SP细胞对进行自我更新并显示出抗肿瘤治疗药物的能力。为了进一步阐明干细胞样NEC8 SP细胞的字符，我们使用利用SCID小鼠，CD 133染色[异种移植物模型的癌症<一个href="#B31">31]和球体形成。然而，我们发现了NEC8 SP细胞和非SP细胞之间没有差异。我们的结果并不足以表征NEC8 SP细胞作为癌症干细胞样细胞，但因为它们显示出对癌症治疗的抗性并且是高度侵入性的，这些细胞可能是一个有用的治疗靶标。

综上所述，我们的研究结果表明，癌细胞并非同质性的，因此应该考虑针对特定细胞群的治疗策略，如SP细胞和非SP细胞。肿瘤SP细胞的csc样表型可能不仅由ABCG2决定，还可能由GADD45决定。虽然SP细胞包括所有癌细胞的较小群体，其完全杀死这些细胞，以实现治愈性疗法，由于SP细胞表现出对癌症治疗的抗性强并且是高度侵入性是非常重要的。总之，我们的研究结果表明，这两个ABCG2和GADD45的抑制可能是通过癌症的靶向被用作根治性治疗的新靶点无复发或转移干细胞样细胞，如SP细胞。

参考

1. T. Reya，S. J.莫里森，M. F.克拉克和I. L.威斯曼，“干细胞，癌症和癌干细胞，”性质卷。414，第105-111，2001。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Stem%20cells,%20cancer,%20and%20cancer%20stem%20cells&author=T. Reya&author=S. J. Morrison&author=M. F. Clarke&author=&author=I. L. Weissman&publication_year=2001" target="_blank">谷歌学术
2. R. Pardal，M. F.克拉克和S. J.莫里森“应用干细胞生物学的原理癌症，”自然评论癌症卷。3，没有。12，第895-902，2003。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Applying%20the%20principles%20of%20stem-cell%20biology%20to%20cancer&author=R. Pardal&author=M. F. Clarke&author=&author=S. J. Morrison&publication_year=2003" target="_blank">谷歌学术
3. K. Polyak和W. C.哈恩，“根和茎：干细胞癌，”自然医学卷。12，没有。3，第296-300，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1038/nm1379">出版商网站|谷歌学术
4. M. A.古德尔，K.博泽，G.天堂，A.S。康纳和R. C.马利根，“分离和鼠的功能性质的造血干在体内复制的细胞，”实验医学杂志卷。183，没有。4，第1797至1806年，1996。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1084/jem.183.4.1797">出版商网站|谷歌学术
5. S.周，J.D. Schuetz，K. D.彩旗等人，“ABC转运BCRP1 / ABCG2在各种各样的干细胞的表达，并且该侧人口表型的分子决定簇，”自然医学卷。7，没有。9，第一零二八年至1034年，2001年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1038/nm0901-1028">出版商网站|谷歌学术
6. K.渡边，K.西田，M.大和等人，“人角膜缘上皮包含表达ATP结合盒转运ABCG2侧群细胞，”FEBS快报卷。565，没有。1-3，第6-10页，2004年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1016/j.febslet.2004.03.064">出版商网站|谷歌学术
7. L. E.帕斯卡，A. J. Oudes，T. W. Petersen等人，“分子和在前列腺ABCG2细胞表征，”BMC泌尿外科卷。7，第6条，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1186/1471-2490-7-6">出版商网站|谷歌学术
8. H. Clayton, I. Titley，和M. M. Vivanco，“人类乳腺祖细胞/干细胞的生长和分化”，实验细胞研究卷。297，没有。2，第444-460，2004。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2004.03.029">出版商网站|谷歌学术
9. R. B.克拉克，K.斯宾塞，E.安德森，A.霍维尔，H.冈野和C. ​​S. Potten，“推定的人乳腺癌干细胞群体富集了类固醇受体阳性细胞，”发育生物学卷。277，没有。2，第443-456，2005。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1016/j.ydbio.2004.07.044">出版商网站|谷歌学术
10. G. Larderet，N. O. Fortunel，P. Vaigot等人，“人的侧群角质形成细胞表现出长期增殖潜力和特定的基因的表达谱，并能形成一多分层表皮，”干细胞卷。24，没有。4，第965-974，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1634/stemcells.2005-0196">出版商网站|谷歌学术
11. G. A. Challen, I. Bertoncello, J. A. Deane, S. D. Ricardo, M. H. Little，“肾侧人群揭示了多血统潜力和肾功能，但也有细胞异质性，”期刊美国肾脏病学会卷。17，没有。7，第1896至1912年，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1681/ASN.2005111228">出版商网站|谷歌学术
12. K.菱川，T. Marumo，S. Miura等人，“白血病抑制因子诱导成人的多谱系分化干细胞样经由肾脏特异性钙粘蛋白16细胞在肾，”生物化学和生物物理研究通讯卷。328，没有。1，第288-291，2005。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2004.12.167">出版商网站|谷歌学术
13. K.菱川，T. Marumo，S. Miura等人，“Musculin / MyoR在肾脏侧群细胞中表达的，并且可以调节它们的功能，”细胞生物学杂志卷。169，没有。6，第921-928，2005。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1083/jcb.200412167">出版商网站|谷歌学术
14. M. Feuring-Buske和D. E. Hogge“的Hoechst 33342个流出识别正常细胞遗传学CD的亚群${34}^{+}$CD${38}^{-}$祖从患有急性髓性白血病细胞，”血液卷。97，没有。12，第3882-3889，2001。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1182/blood.V97.12.3882">出版商网站|谷歌学术
15. C.赫思曼-贾克斯，A. E.福斯特，G. G.沃尔夫等人，“A不同的‘侧群’与人肿瘤细胞高药物流出能力的细胞的，”美国国家科学院院刊卷。101，没有。39，第14228-14233，2004年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1073/pnas.0400067101">出版商网站|谷歌学术
16. T.千叶，K.北，Y.-W.Zheng等人，“侧群从肝细胞癌细胞港口癌症干细胞纯化样性质，”肝病卷。44，没有。1，第240-251，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1002/hep.21227">出版商网站|谷歌学术
17. N.原口，T.宇都宫，H. Inoue等，“癌细胞从人体的胃肠系统的侧群的表征，”干细胞卷。24，没有。3，第506-513，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1634/stemcells.2005-0282">出版商网站|谷歌学术
18. N. Mitsutake，A.岩，永井恒司等人，“在甲状腺癌细胞系侧群的表征：癌干细胞样细胞被部分地但不排他地富集，”内分泌卷。148，没有。4，第1797至1803年，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1210/en.2006-1553">出版商网站|谷歌学术
19. J.王，L. P.郭，L. Z.陈，Y. X.曾和H. L.施，“癌症干细胞样人鼻咽癌细胞株侧群细胞的鉴定，”癌症研究卷。67，没有。8，第3716-3724，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-06-4343">出版商网站|谷歌学术
20. M. M.何，A. V.伍，S. Lam和J. Y.红，“在人肺癌细胞系和肿瘤的侧群富含干细胞样癌细胞，”癌症研究卷。67，没有。10，第4827-4833，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-06-3557">出版商网站|谷歌学术
21. M.卡琳，Y.曹，F. R. Greten和Z W.李，“NF-$\kappa$癌症中的B:从无辜的旁观者到罪魁祸首自然评论癌症卷。2，没有。4，第301-310，2002。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=NF-?B%20in%20cancer:%20from%20innocent%20bystander%20to%20major%20culprit&author=M. Karin&author=Y. Cao&author=F. R. Greten&author=&author=Z. W. Li&publication_year=2002" target="_blank">谷歌学术
22. L. F. Zerbini，Y.王，A Czibere等人，“NF-$\mathrm{吗?}$生长和人逮捕的B-介导的抑制DNA损伤诱导蛋白45$\mathrm{一个}$和$\mathrm{吗?}$对癌细胞的存活至关重要。”美国国家科学院院刊卷。101，没有。37，第13618-13623，2004年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1073/pnas.0402069101">出版商网站|谷歌学术
23. L. Patrawala，T.卡尔霍恩，R.施耐德布鲁萨尔，J.周，K.克莱普尔和D. G.汤，“侧群体富集在致瘤性，干细胞样肿瘤细胞，而ABCG$2^{+}$和ABCG$2^{-}$癌细胞是类似致瘤，”癌症研究卷。65，没有。14，第6207-6219，2005年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-05-0592">出版商网站|谷歌学术
24. A. Albini, Y. Iwamoto, H. K. Kleinman等人，“定量分析肿瘤细胞侵袭性潜能的快速体外实验”，癌症研究卷。47，没有。12，第3239-3245，1987。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=A%20rapid%20in%20vitro%20assay%20for%20quantitating%20the%20invasive%20potential%20of%20tumor%20cells&author=A. Albini&author=Y. Iwamoto&author=H. K. Kleinman et al.&publication_year=1987" target="_blank">谷歌学术
25. L. Patrawala，T.卡尔霍恩 - 戴维斯，R.施耐德布鲁萨尔和D. G.唐，“前列腺癌细胞异种移植瘤的分层组织：光盘${44}^{+}$ $\alpha$2$\beta$ $1^{+}$细胞群体富集在肿瘤起始细胞，”癌症研究卷。67，没有。14，第6796-6805，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-07-0490">出版商网站|谷歌学术
26. Z. F.宁，Y. J.黄，T. X. Lin等人，“亚群干细胞样来自人膀胱移行细胞癌的细胞系在T24侧群细胞的细胞，”[国际医学研究卷。37，没有。3，第621-630，2009。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Subpopulations%20of%20stem-like%20cells%20in%20side%20population%20cells%20from%20the%20human%20bladder%20transitional%20cell%20cancer%20cell%20line%20T24&author=Z. F. Ning&author=Y. J. Huang&author=T. X. Lin et al.&publication_year=2009" target="_blank">谷歌学术
27. C.汤，B. T.昂，和S. Pervaiz，“癌症干细胞：靶抗癌疗法”FASEB杂志卷。21，没有。14，第3777-3785，2007年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1096/fj.07-8560rev">出版商网站|谷歌学术
28. 答Y.尼基京，A Matoso和P.罗伊缅，“前列腺干细胞与癌症”组织学和组织病理学第22卷，第2期。2007年，第1043-1049页。查看在：<一个href="https://scholar.google.com/scholar_lookup?title=Prostate%20stem%20cells%20and%20cancer&author=A. Y. Nikitin&author=A. Matoso&author=&author=P. Roy-Burman&publication_year=2007" target="_blank">谷歌学术
29. M. S. Wicha，S.柳，和G. Dontu，“癌症干细胞：一个老想法-模式的转变，”癌症研究第66卷，no。1883-1890页，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-05-3153">出版商网站|谷歌学术
30. S. J. Morrison和J.金布尔，“非对称和在发展和癌症对称干细胞分裂，”性质卷。441，没有。7097，第1068-1074，2006年。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1038/nature04956">出版商网站|谷歌学术
31. W. A.伍德沃德和E. P.萨勒曼，“癌症干细胞：标记或生物标记？”癌症和转移点评卷。27，没有。3，第459-470，2008。查看在：<一个href="https://doi.org/10.1007/s10555-008-9130-2">出版商网站|谷歌学术