文摘

背景。癌症模型神经病变是由注射癌细胞周围神经附近。tissue-resident免疫细胞的干扰不允许直接接触神经纤维,影响肿瘤微环境和入侵过程。方法。未分化tumor-1(1)细胞接种在哥本哈根大鼠坐骨神经(SNs)的男性。腰背根神经节(drg)和SNs收集天3、7、14和21。SN组织进行形态学变化和按组织免疫荧光,电泳倾向,信使rna量化。糖甙对寒冷、机械和热刺激测定。hc - 030031,选择性TRPA1拮抗剂,用于治疗冷触诱发痛。结果。痛觉阈值确定了6天。Immunofluorescent显微图显示超表达TRPA1的天7和14和CGRP怎样在14天到21天。TRPA1和CGRP怎样都coexpressed在同一细胞。免疫印迹表达TRPA1在14天的增加展出。TRPA1信使rna进行了增加7天18岁(归一化)。注入hc - 030031是暂时性的逆转寒冷的异常性疼痛。结论。一本小说和一个有前途的癌症模型,建立了神经病变,TRPA1的角色和CGRP怎样痛苦转导是检查。

1。介绍

肿瘤扩散到血管,淋巴和/或神经路线。后者的特点是在头部和颈部的情况下,胰腺、结肠、直肠、前列腺癌、胆道、和胃癌症(1]。在这些情况下,30%到50%的病人患有中度到重度的疼痛(2]。神经元的入侵类型不同类型。例如,在胰腺癌,频率是90%或100%3]。神经性疼痛的第一个模型是在1979年开发的周围神经损伤(4]。两年后,慢性收缩损伤“CCI”[5],它仍然是最受欢迎的模型为研究神经性疼痛在周围神经。

癌症之前,神经病变模型注射癌细胞在邻近的坐骨神经(SN) [6,7),促进这样的模型来研究恶性肿瘤细胞的入侵。然而,居民免疫细胞位于周围的组织,如臀部、会干扰评估侵袭性肿瘤微环境内的分子机制和调查。为了克服这些tissue-resident免疫细胞的干扰,从而影响癌症疼痛的发生和调控的蛋白质参与入侵的过程中,我们引入一个新的癌症神经性疼痛模型。在这个模型中,我们直接接种肿瘤细胞在神经鞘内,允许一个神经纤维直接接触时间的注入。

建立这个模型,我们注入前列腺癌细胞adenocarcinoma-derived哥本哈根SN的老鼠。癌细胞扩散和生成的自发痛行为和超敏反应,后来引起神经损伤。我们评估了肿瘤的生长,并测量了诱导冷触诱发痛和机械和热痛觉过敏的痛苦发展指标。组织收集的背根神经节(drg)量化pain-recognition受体,TRPA1,与肿瘤进展的标志和疼痛换能器,CGRP怎样,研究潜在的分子机制。

瞬时受体电位锚蛋白1 (TRPA1)扮演了一个角色在寒冷、机械和热疼痛的认可。是生产各种各样的组织如在中央(中枢神经系统)8和外围(pn)9- - - - - -12)神经系统,眼13)、肺(14),胃肠道(15),生殖系统(16)、皮肤(17),心血管系统(18),泌尿系统(9,10),和牙齿19,20.]。在某些炎症条件,如体外I型糖尿病大鼠(9)和cyclophosphamide-induced膀胱炎和痛觉过敏小鼠膀胱(10),TRPA1由DRG神经元中。在这些组织中,激活和炎症TRPA1通过当地的监管机制都进行了广泛的调查。然而,TRPA1调控在癌症周围神经病变尚未研究。

降钙素相关基因肽(CGRP怎样),37-residue神经肽产生感觉,电机,和自主神经细胞,是一种强有力的血管舒张药21]。血管舒张增强癌症的发展主要是通过血管生成和淋巴血管生成22]。CGRP怎样扮演另一个角色在体细胞传输信号,内脏和神经性疼痛23,24]。产生相关的表达TRPA1在多种炎症性疾病,如结肠扩张25],carrageenan-induced慢性前列腺炎和盆腔疼痛综合征(26),和lipopolysaccharide-induced炎症(27]。

确认TRPA1的疼痛的作用冷触诱发痛在我们的模型中,我们使用了hc - 030031与TRPA1通道。hc - 030031为TRPA1受体高选择性和用于治疗cyclophosphamide-produced痛觉过敏10)、前列腺素E₂冲击波(11],carrageenan-produced [12疼痛模型。

2。方法

哥本哈根会议在我们的模型中,我们使用近亲交配的雄性大鼠(项目代码:G 0314/13)为他们的主要组织相容性复合体单体型RT1也^av1。这允许之前报道的移植肿瘤细胞增长100% (28]。这些肿瘤细胞未分化tumor-1(1),是由邓宁R3327细胞系和雄激素独立、nonmetastasizing,拥有一个非常快速的增长率(29日]。父母的邓宁R3327本身是来自男性哥本哈根老鼠(参看胸腺肿瘤更常见于女性)(30.),发现在哥本哈根22个月大的雄性大鼠自发肿瘤。首次观察到的验尸第54弟弟×妹妹代之前的细胞株233131日- - - - - -33]。

批准这项研究是由国家卫生和社会事务办公室(LAGeSo,柏林,德国)和指导方针和标准的遵守医学Charite-University柏林。

2.1。哥本哈根老鼠(COP / CrCrl)

老鼠获得,通过实验医学研究机构“有限元”,医学Charite-University柏林,从查尔斯河实验室国际公司,德国科隆。他们到达最初的重量在230 - 250年间g和被安置在标准条件下的数量每笼,食物和水的供应,以及曝光时间。每天进行检查,以确保正常的生命活动,比如运动,散步,玩耍,躺着,上升,和跳跃。疼痛的程度在整个研究期间。

2.2。肿瘤细胞注射和组织收集

我们寻找不同的癌症细胞系在哥本哈根能够开发肿瘤的老鼠。初步测试执行AR42J(英国索尔兹伯里ECACC;猫。#:93100618)和1 (ECACC;猫。#:94101449)细胞系。

每个老鼠最初与异氟烷麻醉,然后维持在2%异氟烷O₂在整个操作时间吸入。右后腿(侧)剃消毒用酒精和碘酒。公开SN,臀肌之间的皮肤切口是superficialis和股二头肌肌肉。

慢慢的amphicrine AR42J细胞接种(0.5×10⁶神经束膜鞘)的两个连续的SN组大鼠(n= 5)使用25μL汉密尔顿®不漏气的®注射器,1702 lt系列(Sigma-Aldrich化学GmbH),看着40天。行为测试是测量在头两个星期,然后每天每隔5 - 7天直到观察期结束。我们没有注意到任何肿瘤生长在SNs,和所有的动物从手术中恢复过来。

1细胞(1.0×10⁶)被注入在另一组老鼠。第一周期间,动物发明了一种自发痛行为和表现出不同程度的瘙痒注射部位。牺牲后,1细胞表现出严重的恶性生长在SN和固体对肌肉和皮肤的内部层。因此,我们减少了注射的次数在1细胞(0.5×10⁶)。肿瘤细胞的生长速率下降,没有侵犯到周围组织。这种细胞的数量保持连续注入整个研究。Metamizole钠注射手术后的镇痛和添加到饮用水后3天。组织的腰椎L3-5 drg被收集并存储在−80°C组的骗局在7、14、21天。

未分化肿瘤1细胞培养介质的RPMI 1640年,谷酰胺,地塞米松,10%胎牛血清的边后卫。然后,他们保持在37°C和5%的股份有限公司₂大气和统计光学显微镜下使用最高™血细胞计数器幻灯片(Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim,德国)。暂停后细胞ph - 7.4磷酸盐(PBS)作为工具,sham-operated老鼠注射这PBS和用作控制连续化验。

2.3。化学品和设备

多克隆兔anti-TRPA1和单克隆抗体鼠标anti-CGRP从圣克鲁斯生物技术、购买公司,德国海德堡(猫。#:sc - 66808)和Sigma-Aldrich化学GmbH(产品#:C7113),分别;相应的二次抗体,Alexa萤石®594驴anti-rabbit免疫球蛋白(猫。#:488 - 21207)和Alexa萤石驴anti-mouse免疫球蛋白(猫。#:- 21202),从热科学™,美国;辣根过氧化物酶-(合)共轭anti-rabbit从杰克逊实验室”Jax®,都“Sulzfeld,德国(猫。#:111-035-144)。

其他化学物质包括异氟烷”Forene®”AbbVie德国GmbH & Co .公斤,德国路德维希港(Zul.-Nr。:2594.00.00);多聚甲醛从Sigma-Aldrich化学GmbH (p6148 - 500 g);D(+)蔗糖从卡尔罗斯GmbH +有限公司公斤,德国卡尔斯鲁厄(Art.-Nr。:4621.1);从Bio-Rad精度+蛋白质™万花筒™,慕尼黑,德国(猫。#:161 - 0375);从Sigma-Aldrich牛血清白蛋白(BSA),有限公司,密苏里州,美国(PCode: 1001561418);4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI);乙醇和“99%”β巯基乙醇从卡尔罗斯GmbH +有限公司公斤,卡尔斯鲁厄,德国;Novaminsulfon®李奇登斯坦“500毫克metamizole钠滴从温斯洛普Arzneimittel GmbH德国Mulheim-Karlich (Zul.-Nr。6867259.00.00);1、2、3、6-tetrahydro-1 3-dimethyl-N -[4 -(1 -甲基乙基)苯基]2,6-dioxo-7H-purine-7-acetamide (hc - 030031®) Sigma-Aldrich化学GmbH (PCode: H4415);皮尔斯™BCA蛋白质从热科学分析工具;增强化学发光“发射极耦合逻辑”工具包Amersham法玛西亚生物技术,新泽西,美国;和Novaminsulfon-ratiopharm®“1 g / 2毫升metamizole钠安瓶”从ratiopharm GmbH德国乌尔姆。

设备用于本研究Axiovert 25倒置显微镜(卡尔蔡司、哥廷根、德国);触摸测试®感官评估者(美国北海岸的医疗公司,CA);Trans-Blot®涡轮™传输系统和硝化纤维素膜(美国CA Bio-Rad);ChemiDoc™议员成像系统(Bio-Rad);CryoStar™NX70(热费希尔科学™Inc .);Mastercycler®Pro热循环(股份公司、德国汉堡);TaqMan™7500实时PCR系统(应用生物系统公司、热科学);尤格BASILE足底测试37370(意大利瓦雷泽,尤格BASILE®SRL);和蔡司®LSM 510激光扫描显微镜(卡尔蔡司)。

2.4。行为分析

2.4.1。冷触诱发痛

丙酮的测试是用来评估寒冷暴露异常性疼痛的动物(n为每个组= 6)对冷刺激和计算他们的反应作为移动的数量或舔。每一个测量进行复制,以5分钟间隔之间,平均计算(34,35]。执行的测试是在cancer-injected基线测量和虚假的动物。也表现在皮下注射后的第七天选择性TRPA1拮抗剂hc - 030031(15、30、60、90和120分钟)。hc - 030031在DMSO溶液溶解,然后稀释在乙醇:水混合物(10:90 v / v)给的最终浓度25 - 50毫克/公斤。

2.4.2。机械痛觉过敏

冯·弗雷测试进行测量对机械刺激过敏通过触摸测试感觉评价者(北海岸医药有限公司)。评估包括丝与对数增量力应用于大鼠后爪(n为每个组= 7)。测试申请的评估机械敏感性骗局和癌症的老鼠。50%的g使用上下阈值计算方法X =积极-和O =负面的反馈根据Dixon的公式: 在哪里X_f=最后灯丝使用的价值(在对数单位),K牛系列=表常数,δ=平均间隔(日志单元;这里= 0.229)(36,37]。

计算时间间隔(δ),我们校准丝通过为每一个10度量值的平均值。表格的值(K根据迪克森()作为常量提供38)和Chaplan et al。37]。

2.4.3。热痛觉过敏

动物应对有毒热刺激被哈格里夫斯评估方法(39)使用尤格Basile足底测试。虚假的撤军延迟测量和cancer-inoculated动物(n为每个组= 8)的意思是重复的测量值(以秒为单位)。

2.5。形态和光学显微镜

身体的同侧的后爪的形状在cancer-injected老鼠相比sham-operated老鼠的身体的同侧的后爪和侧侧相同的老鼠。SNs的去除后,他们在不同的时间点进一步检查形成恶性肿块逐渐增厚和体重增加。

入侵过程和形态变化在SNs组织学检查的光学显微镜。组织每组的SNs骗局和癌症的动物被切成段(部分2.7),并通过苏木精和伊红染色。我们可视化SNs的纵向部分使用一个Axiovert 25倒置显微镜和CCD相机组装(AxioCam HRc)。

2.6。凝胶电泳和免疫印迹

用免疫印迹TRPA1半定量的评估。双边腰椎drg、L3-5收集从每组动物和均质。DRG蛋白质被提取和测量使用皮尔斯BCA蛋白质化验设备。他们添加到2-mercaptoethanol和溴酚蓝的混合物,然后分开钠十二烷基硫酸聚丙烯酰胺凝胶(8%),使用7.5每车道μg蛋白质。硝化纤维膜上的蛋白质被涂抹使用Trans-Blot涡轮增压传输系统。

90分钟的墨迹都沉浸在BSA阻止任何非特异性结合。然后,一夜之间他们孵化在4°C anti-TRPA1 BSA抗体(1:100)。我们再次孵化这些墨迹120分钟在室温下与二次抗体。二次抗体用辣根过氧化物酶,(合)共轭anti-rabbit BSA (1: 40000)。然后,抗原抗体复合物可视化使用ECL工具包。捕捉到的图像ChemiDoc MP成像系统。查看管家蛋白带(40),我们使用了单克隆抗-β在BSA -actin-peroxidase (1: 25000)。斐济软件被用来调整图像的亮度和对比度,减去背景和反转颜色(41]。感兴趣的区域(roi)然后选择所有乐队(n为每个组= 11)的集成密度测定。集成密度然后按照百分比计算相应的控制和比较。

2.7。免疫荧光Double-Staining

量化TRPA1在drg CGRP怎样,我们使用double-staining免疫组织化学。异氟烷用于使麻醉大鼠,然后灌注transcardially 100毫升的ph值- 7.4 PBS然后500毫升的4% (w / v)多聚甲醛在PBS。腰椎L3-5 drg收集相同的固定剂和保持台式90分钟。然后,他们用PBS和存储在一夜之间在10%蔗糖溶液在4°C PBS作为冷冻保护剂。接下来,他们是嵌入在一个optimal-cutting-temperature(10月)介质和储存在−cryostasis前20°C。

组织被切成超薄部分介于5和7µm CryoStar NX70。的部分被安装到gelatin-precoated幻灯片和孵化一夜之间在室温下与主anti-TRPA1和anti-CGRP抗体。然后,他们再次清洗和孵化与相应的二次抗体(Alexa萤石594驴anti-rabbit免疫球蛋白和Alexa萤石488驴anti-mouse免疫球蛋白,职责)。核DNA用DAPI标记根据Chazotte协议(42]。激光扫描显微镜,蔡司LSM 510,用于查看幻灯片和捕捉照片(n为每个组)= 10。这些照片被用来计数阳性免疫反应性的(+ IR)细胞相对于总数(百分比)。

2.8。测量mRNA(存在)

RNA提取从L3-5 drg的动物(n为每个组= 9)使用一个RNeasy工具包(试剂盒、希尔登,德国)。特定的正向和反向引物被用于互补脱氧核糖核酸的合成。进行量化的步骤,通过TaqMan 7500实时PCR系统,使用18 s核糖体RNA作为参考正常化看家基因(43]。

2.9。统计数据分析

SigmaPlot 12.5 (Systat软件有限公司、钙、美国),GraphPad棱镜(GraphPad软件有限公司、钙、美国),和微软Excel 2016(微软)被用于做统计,图表,表格数据描述。数据表示为均值的平均值±标准误差(SEM)。结果检测潜在的离群值。单向方差分析(方差分析)其次是图基或Dunnett事后测试被用于制造成对或与控制比较,分别。克鲁斯卡尔-沃利斯测试被用于分析方差排名如果正常测试失败了。的值至少被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。感应的神经性疼痛

接种的肿瘤细胞后,我们评估了宏观和微观神经人物和痛苦的行为。正如预期的那样,只有cancer-inoculated发生肿瘤的生长,而不是虚假的组(图1(一))。此外,逐渐扩散的肿瘤是在侧,而不是只注意到对侧的后爪(数字1 (b)- - - - - -1 (e))。

SNs的组织学检查对肿瘤生长的证据,神经变性,以及免疫细胞的渗透。在虚假的动物,SN显微图显示正常神经束神经纤维的特征曲线优美的外观和棒状链。雪旺细胞和纤维细胞的细胞核是他们之间没有明确的区别(图所示2(一个))。

在cancer-inoculated动物,SNs被单核细胞渗透。此外,逐渐增长的肿瘤从每天3 - 21所示的完整性和神经纤维变性和随着时间的推移越来越多的核(数字2 (b)- - - - - -2 (e))。

注射引起的神经病变是1癌细胞。机械和热冷触诱发痛和痛觉过敏估计从天零,“基线”,天14侧方sham-operated和cancer-injected老鼠(图3)。侧方没有任何程度的神经性疼痛。

冷触诱发痛测量随着反应数量的骗局和癌症动物(n为每个组)= 6。虚假的集团,冷触诱发痛在观察期间并没有改变。癌症动物过敏并没有改变,直到第五天然后显著增加6天(18±1.3),8(±1.4)19日,10(18±1.3),12(±1.3)19日,14(20±1.7)和(3.5±0.93)相比,天零(图3(一个))。

机械疼痛测量(n为每个组= 7)并没有改变在虚假的动物。在癌症的动物,从第一天到第五天没有变化。然而,观察疼痛的程度大幅提高从14天6天。疼痛的程度表示作用力下降。g阈值降至50%(5.6±1.9)6天,然后在天(0.84±0.12)7和8和达到最小值(0.40±0.0)/天9到14。所有的值都比天零(10±0.32)(图3 (b))。

哈格里夫斯测试执行(n为每个组= 8)骗局和癌症动物(图3 (c))。在虚假的动物,减少伤害感受的程度(即。,增加宽容时间)在第二天(20±1.0)()和控制(16±0.7)。然后,它并没有改变直到结束的观察期。在癌症的老鼠,对热刺激敏感性降低了在第二天(±0.86)19日(),并没有改变在第四天,然后增加6天(5.7±0.68),(4.9±0.29)8例,10 (4.5±0.18),12 (3.9±0.23),14 (4.6±0.26)()比天零(15±0.77)。

3.2。Upregulation TRPA1和CGRP怎样传入DRG神经元

Immunofluorescent背根神经节组织被double-stained TRPA1展示的图片,CGRP怎样表达以及细胞核增殖。卫星细胞在这些图像的形态学特征外围神经胶质。尽管展示upregulation相似,都有一个不同的表达模式。

一方面,TRPA1表达式,所表示的+ IR细胞,直到第三天并没有改变。然后,它大幅增加,直到达到顶峰在第七天()和保持重要直到第14天()。14天之后,它以同样的速度下降,直到恢复正常水平在21天。另一方面,CGRP怎样开始的速度较慢,表达式。它达到最大14天,呆在同一水平直到21天()。细胞核与DAPI染色后越来越扩散模式类似于CGRP怎样。它慢慢地从第一天到第七天增加。然后,它极大地提高了在14天、21(图4)。

TRPA1的upregulation CGRP怎样和增殖细胞核的应对不断增长的肿瘤经的相对计数+ IR细胞(图5)。TRPA1的平均+ IR细胞是42±2.8假组,55±3.4 ()一天的7组和53±2.5 (天14组(图)5(一个))。

CGRP怎样+ IR细胞的平均35±2.2假集团52±3.2 ()一天14组和52±3.3 (天21组(图)5 (b))。核数显示显著增加7天(213±17;)、14 (225±11;),21 (244±12;)比(168±11)的虚假的组(图5 (c))。

结合这三个污点的形象显示coexpression TRPA1和CGRP怎样在同一细胞(图S1在补充文件)。与虚假的组(9.3±1.2),coexpression增加第三天(19±1.9;),成为更重要的在7天(38±4.9;)。然后减少14天(28±3.0;)和21天(23±2.4;)。

TRPA1的墨迹显示一种趋势表达类似于免疫荧光图像(见图S2和S3在补充文件)。他们并没有改变在天3和7,然后在第14天显著增加(154±25;)和逆转天21(110±8.34)相比骗局(100±0.0)(图6)。

实时聚合酶链反应结果显示免疫组织化学图像相同的模式。TRPA1 mRNA的表达值增加7天(3.6±0.55;在第14天),然后成为低(图21和恢复的一天7)。

3.3。瞬态的逆转冷触诱发痛

研究TRPA1的影响选择性拮抗剂hc - 030031,我们给动物注射两剂hc - 030031(25 - 50毫克/公斤)。响应测量的数量在15、30、60、90和120分钟,相比最大的超敏反应达到之前6天(图3(一个))。

25毫克/公斤的剂量,反应的数量下降到(13±0.9;在15分钟。疼痛复发迅速在30分钟,反应的数量再次增加(21±1.0)和趋于稳定的测量。

50毫克/公斤剂量有更长的寿命随着反应的数量显著下降(7.0±0.8;)15分钟,待重要直到30分钟(9.0±0.5;)。再次疼痛复发,反应的数量增加到60分钟(17±1.0),这是低于25毫克/公斤剂量在同一时间点(图8)。

4所示。讨论

大多数的癌症疼痛模型是骨癌。疼痛行为报告了这些模型在三44)、四(45,46周后注射时间在老鼠和老鼠在一个星期47]。据我们所知,没有癌症神经性疼痛模型设计的直接接种肿瘤细胞在周围神经。在最近的研究中,我们引入一个新的癌症模型,神经病变由肿瘤细胞直接注入到坐骨神经的神经鞘。

在先前的研究中,癌症细胞注入小鼠坐骨神经接近附近的。机械和热痛觉过敏在天10到14报道。这种痛觉过敏与髓鞘的轻度退化第十天之后逐渐退化到第14天(6]。类似的模型报告重大机械痛觉过敏,每天14和17岁。在这项研究中,感觉失去了在21天7]。

在我们的模型中,肿瘤的生长形态验证了不断增加的大小和厚度未分化tumor-1 (1) cell-injected坐骨神经和连续形成恶性肿块。细胞的侵袭性最小,与其他模型相比,因此,疼痛持续时间长(6,7]。显微镜检查证实浸润的单核细胞成束的质量以及神经纤维的变性。神经性疼痛的证据显示了进步的机械和热冷触诱发痛和痛觉过敏相比sham-operated动物。

在这样一个地方nonmetastasizing恶性肿瘤的发展,背根神经节感觉神经元传入显示重大变化在分子水平上。一方面,过度的瞬时受体电位锚蛋白1 (TRPA1)按自身调节分子反应癌症发展(19,20.)和伤害感受器能传感冷刺激感觉神经元。我们发现这个超表达是更重要的在接种肿瘤细胞在神经鞘内。另一方面,降钙素相关基因肽(CGRP怎样)+ IR细胞显示了一个几乎类似的增加表达的态度应对遥远的肿瘤生长。这与之前的研究一致确认其发布在癌症和其他慢性炎性疼痛48- - - - - -50]。延迟释放CGRP怎样(14天)比TRPA1(第七天)TRPA1表明CGRP怎样生产的依赖。

CGRP怎样的并发表达TRPA1 + IR神经元增加而连续的肿瘤生长和神经损伤。这意味着疼痛传导的相互协同功能。虽然《和他的同事报道之前,大多数的TRPA1 + IR细胞CGRP-negative [51),与其他研究结果一致显示高共存的TRPA1和CGRP怎样+ IR神经元在同一细胞(52- - - - - -54]。

TRPA1 + IR细胞的荧光图像符合显著增加TRPA1 mRNA在同一时间点以及一个类似的趋势,用免疫印迹蛋白质定量分析。

核的数量明显增加荧光图像是由于免疫细胞的招募疼痛的神经元。似乎大部分的染色细胞核nonneuronal因为复染色的特异性的性质DAPI,标签TRPA1和CGRP怎样+ IR细胞以及nonneuronal细胞(55,56]。

与肿瘤细胞的持续增长,压力逐渐对坐骨神经的注射部位。这种压力会导致超敏反应的增加对寒冷刺激如上所述。皮下注射后的选择性TRPA1拮抗剂hc - 030031,寒冷异常性疼痛明显抑制,以及癌症的影响神经病变是剂量依赖性的方式是暂时性的逆转。瞬变恢复疼痛曾通过使用相同的对手在其他类型的超敏反应10- - - - - -12,19]。

5。结论

我们成功地建立了一个新的和有前途的动物模型神经周的老鼠在哥本哈根癌细胞的入侵。这个模型被用于评估癌症神经性疼痛(即。,cold allodynia and mechanical and thermal hyperalgesia) dependent on the degree of invasion. We also investigated the molecular mechanisms underlying the perineural invasion process and identified the role of the pain recognition receptor TRPA1 and the pain transmitter and vasodilator CGRP and highlighted their upregulation and coexpression in the dorsal root ganglionic neurons. Finally, we evaluated a therapeutic strategy for the relief of this perineural cancer pain by blocking the TRPA1 channel.

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Ahmad Maqboul设计研究中,进行了实验,分析结果,并写了手稿。Bakheet Elsadek贡献的研究设计和编写和审查手稿。

确认

由于是由于医学Charite-University柏林提供研究实验室的麻醉和手术重症监护医学。爱资哈尔大学也承认支持本研究。这项工作为埃及外交部资助高等教育(文化事务和任务部门)和德国两年基础教授k . h . Rene Koczorek(批准号:IA89838780)一年。

补充材料

图S1: TRPA1的量化和CGRP怎样coexpression。图S2: Anti-TRPA1抗体(圣克鲁斯,sc - 66808), 130 kDa。图S3:反β肌动蛋白抗体(σ,A3854), 42 kDa。(补充材料)