文摘gydF4y2Ba

客观的gydF4y2Ba。Obesity-induced内质网(ER)压力有助于提高对急性肺损伤(ALI) /急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。过氧物酶体的激活proliferator-activated受体-gydF4y2BaγgydF4y2Ba(PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba)与肺有关保护和有效地改善ER应激和线粒体功能障碍。本研究的目的是调查PPAR的表达gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖小鼠的肺组织和探索PPAR是否gydF4y2BaγgydF4y2Ba端依赖途径可以通过调节调解ALI / ARDS降低ER压力和线粒体生物起源。gydF4y2Ba方法gydF4y2Ba。我们确定PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba表达在正常肺组织和肥胖的老鼠。ALI模型肺泡上皮细胞和肥胖的老鼠PPAR使用和处理gydF4y2BaγgydF4y2Ba激活剂罗格列酮或PPAR(显示)gydF4y2BaγgydF4y2Ba抑制剂GW9662。肺组织和细胞样本收集评估肺部炎症和细胞凋亡,ER应激和线粒体生物起源被检测到。gydF4y2Ba结果gydF4y2Ba。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba肺组织的表达明显减少肥胖小鼠与正常小鼠。体内和体外研究表明,PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba导致降低ER应激标记蛋白的表达78 kda glucose-regulated蛋白质(GRP78), C / EBP同源蛋白质(切),和Caspase12。相反,线粒体biogenesis-related蛋白的表达过氧物酶体proliferator-activated受体gydF4y2BaγgydF4y2Ba共激活剂1 (PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba)、核呼吸因子- 1 (NRF-1)和线粒体转录因子(TFAM)增加。此外,PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba与减少肺部炎症和上皮细胞凋亡水平和表达的增加脂联素(APN)和mitofusin2(进行MFN2)。GW9662绑定到PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba和阻止其转录活性,然后减少PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba肺组织。gydF4y2Ba结论gydF4y2Ba。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞的激活产生抗炎效应减轻ER应激、促进线粒体生物起源。因此,低水平的PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖小鼠的肺组织可能会导致对阿里的易感性增加。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

全球肥胖患病率急剧上升是一个日益严重的健康问题,严重影响生活质量,降低预期寿命(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。一系列特有的并发症与肥胖有关,包括睡眠呼吸暂停综合症、糖尿病、高血压、高脂血症和心脏病(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。也认识到,肥胖是一种慢性炎症状态,与风险增加相关的急性肺损伤(ALI)甚至急性呼吸窘迫综合征(ARDS) [gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。恶化的机制阿里在肥胖个体尚未阐明。现有的证据认为这对阿里由于adipocytokine分泌障碍或异常内质网(ER)压力(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

>过氧物酶体proliferator-activated受体配体依赖性转录因子(PPARs)是核受体超家族的成员。PPAR的PPAR总科由三个亚型gydF4y2BaαgydF4y2Ba,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba,PPARgydF4y2BaβgydF4y2Ba/gydF4y2BaδgydF4y2Ba与微分组织分布(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。作为一个三PPAR亚型,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba可以表示在肺泡上皮细胞,血管内皮细胞,巨噬细胞(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba参与过程,如脂肪生成、胰岛素敏感性,线粒体生物起源、抗炎和神经保护gydF4y2Ba12gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。此外,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba起着保护作用在阿里gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),肺癌gydF4y2Ba17gydF4y2Ba)、慢性阻塞性肺疾病和其他呼吸系统疾病gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba配体包括合成和天然配体。合成配体包括thiazolidinedione抗糖尿病的药物,如显示、吡格列酮和troglitazone。其中,PPAR显示是一个代表gydF4y2BaγgydF4y2Ba受体激动剂(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba存在于细胞质和细胞核。Ligand-activated PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba调节目标基因通过heterodimerization类维生素a X受体(RXR) [gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。GW9662是PPAR的特定的对手gydF4y2BaγgydF4y2BaPPAR共价结合gydF4y2BaγgydF4y2Ba配体结合口袋,防止配体的激活绑定和PPAR中断gydF4y2BaγgydF4y2Ba信号(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba可以减少炎症因子的释放,但其表达总是抑制在阿里(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。到目前为止,PPAR的水平gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖小鼠的肺组织仍然是未知的,它的作用也在阿里的进展。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba有利于促进线粒体生物起源和抑制ER应激,突出功能与糖尿病有关,肥胖和慢性炎症gydF4y2Ba23gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。先前的研究已经表明,ER应激和线粒体功能障碍调解肥胖小鼠肺损伤中起重要作用[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。在这项研究中,我们假设PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活能防止肥胖老鼠阿里通过调节压力和线粒体生物起源。因此,我们调查了PPAR的表达gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖小鼠的肺组织和探索PPAR的角色gydF4y2BaγgydF4y2Ba在LPS-induced损伤肺组织和肺上皮细胞。gydF4y2Ba

2。方法gydF4y2Ba

2.1。实验动物gydF4y2Ba

动物实验动物伦理委员会批准的协议是重庆医科大学第一附属医院(2021 - 527)。这个实验进行按照实验动物保健和使用指南。六个雄性C57BL / 6 J小鼠,重15克,从重庆医科大学实验动物中心购买。在研究过程中,所有的老鼠都保持在12/12 h光/暗周期。动物喂养正常食物的饮食或高脂肪的饮食以60%的热量来自脂肪(TP2330055A,营养饲料高科技有限公司,中国)为12周。在这项研究中,老鼠是尽一切努力来减少痛苦。gydF4y2Ba

老鼠被戊巴比妥钠麻醉(50毫克/公斤)(Sigma-Aldrich),腹腔内注射(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。阿里是100年由管理gydF4y2BaμgydF4y2Bag(1毫克/毫升)的脂多糖(LPS、L8880 Solarbio,北京,中国)麻醉小鼠的气管和舌头轻轻地退出钳促进流体进入肺部(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。两个PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活显示(MedChemExpress hy - 17386年,中国上海)和PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba抑制剂GW9662 (hy - 116578, MedChemExpress)溶解在10%二甲亚砜(DMSO溶液;D8371 Solarbio,北京,中国)。显示和GW9662腹腔注射相应剂量的10毫克/公斤,1毫克/公斤。显示和GW9662剂量测定基于以前的研究(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。同等体积的DMSO溶液被注入腹腔内所有老鼠实验的车辆控制。gydF4y2Ba

2.2。动物实验设计gydF4y2Ba

根据我们的实验计划,老鼠分为以下8组(gydF4y2Ba ):gydF4y2Ba(1)精益集团(正常饮食小鼠):100gydF4y2BaμgydF4y2BaL无菌生理盐水进行气管内的;(2)戴奥集团(食源性肥胖老鼠):100gydF4y2BaμgydF4y2BaL无菌生理盐水气管内的管理;(3)lean-ALI组:有限合伙人(100gydF4y2BaμgydF4y2Bag)气管内的管理;(4)DIO-ALI组小鼠接种100gydF4y2BaμgydF4y2Bag有限合伙人气管内的;(5)DIO-DMSO组:小鼠腹腔注射10% DMSO, 30分钟后,100年gydF4y2BaμgydF4y2Ba介绍了L无菌生理盐水的老鼠气管;(6)DIO-ALI-DMSO组小鼠腹腔注射10% DMSO, 30分钟后,100年gydF4y2BaμgydF4y2Ba介绍了g(有限合伙人在小鼠气管;(7)DIO-ALI-RSG组小鼠腹腔注射显示(10毫克/公斤),30分钟后,100年gydF4y2BaμgydF4y2Ba介绍了g(有限合伙人在小鼠气管;(8)DIO-ALI-RSG-GW9662组:DIO-ALI-RSG组的老鼠一样的对待,但腹腔内注射GW9662(1毫克/公斤)显示管理前30分钟,而另一组获得等量的生理盐水。一个示意图如图的实验协议gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

2.3。的支气管肺泡灌洗液(BALF)gydF4y2Ba

在24小时内被实施安乐死老鼠LPS处理后,和右主支气管的结扎。左肺受到管理无菌生理盐水冲洗(gydF4y2Ba 毫升)进入气管。收集到的BALF离心机在200×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟分离颗粒和上层清液,和上层的获得是储存在−80°C。肿瘤坏死因子-α(TNF -的水平gydF4y2BaαgydF4y2Ba)和Interleukin-1gydF4y2BaβgydF4y2Ba(il - 1gydF4y2BaβgydF4y2BaBALF中)使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(Neobioscience科技公司、深圳、中国)根据制造商的指示。gydF4y2Ba

2.4。肺湿/干重量比(W / D)gydF4y2Ba

右顶叶肺组织重确定湿重。样品是在烤箱干80°C 48 h,得到干重又重。最后,W / D的肺。gydF4y2Ba

2.5。组织病理学gydF4y2Ba

右肺下叶的固定在4%多聚甲醛和嵌入在石蜡。石蜡包埋组织切片苏木精和伊红染色())。肺泡水肿、出血,肺泡间隔增厚,浸润白细胞计数记录评估肺损伤的程度。这些组织病理学元素分配四个等级从0到3(0 =正常,1 =轻微,2 =温和,和3 =严重)(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.6。免疫组织化学染色gydF4y2Ba

免疫组织化学染色进行如下。石蜡包埋标本切片在5gydF4y2BaμgydF4y2Ba米,deparaffinized和水化。3%的部分被孵化HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba10分钟,冲洗磷酸盐(PBS)。主要抗体GRP78 (ab21685 Abcam)和PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba(ab191838 Abcam)。幻灯片被清洗和孵化与二次抗体在室温下30分钟。光学显微镜下观察到的部分。gydF4y2Ba

2.7。TUNEL染色gydF4y2Ba

评估LPS-induced在肥胖小鼠肺泡上皮细胞的凋亡,终端原位dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色进行根据制造商的指示(G1507 Servicebio,武汉,中国)。gydF4y2Ba

2.8。细胞培养和治疗gydF4y2Ba

A549人肺上皮细胞被用来研究PPAR的影响gydF4y2BaγgydF4y2Ba肺泡上皮细胞。A549细胞株通常用于研究炎症和LPS诱导细胞凋亡gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba],PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba已被证明是这个细胞系中表达(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。A549细胞被播种到塑料培养皿RPMI 1640介质(美国Gibco C11875500BT)含10%胎牛血清(10099 - 141 C, Gibco,美国),100 U /毫升青霉素和链霉素0.1毫克/毫升(美国HyClone SV30010)和放置在37°C公司为5%gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在孵化器。这些细胞被分为四组:控制、有限合伙人,LPS-RSG, LPS-RSG-GW9662。LPS组治疗10gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升有限合伙人。LPS-RSG集团10gydF4y2BaμgydF4y2BaM显示添加的有限合伙人之前30分钟。LPS-RSG-GW9662组20gydF4y2BaμgydF4y2BaM GW9662添加添加显示前30分钟。同等体积的增加了PBS对照组。基于先前的研究这些药物剂量的测定(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba,gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。显示和GW9662体外孵化在最后0.1% DMSO溶液的浓度。在有限合伙人治疗后24小时,细胞进行进一步的实验。gydF4y2Ba

2.9。细胞因子检测gydF4y2Ba

收集细胞培养上清液,加入无菌管,以及离心机560×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟。上层清液的收集储存在−80°C。肿瘤坏死因子的水平gydF4y2BaαgydF4y2Ba和il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba在细胞培养上清液测定使用酶联免疫试剂盒。gydF4y2Ba

2.10。免疫荧光gydF4y2Ba

PGC-1的表达gydF4y2BaαgydF4y2Ba使用免疫荧光和GRP78在A549细胞检测。从每组盖玻片轴承A549细胞收集。这些细胞被固定和permeabilized 4%多聚甲醛和0.5% Triton x - 100。细胞被封锁1%正常山羊血清(Beyotime生物技术,中国上海)在室温下30分钟然后孵化PGC-1主要抗体gydF4y2BaαgydF4y2Ba(1:400)和GRP78在一夜之间(1:200)在4°C。Cy3-conjugated Affinipure山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L) (SA00009-2 Proteintech,武汉,中国)被用作二次抗体和孵化1 H在黑暗中在室温下。不变色的细胞被固定安装介质包含DAPI (P0131, Beyotime生物技术、上海、中国)。显微照片获得使用共焦显微镜(蔡司、从、德国)。gydF4y2Ba

2.11。流仪结果gydF4y2Ba

细胞被胰蛋白酶化和洗两次收获冷PBS。凋亡细胞被量化使用膜联蛋白V-FITC检测设备(Elabscience,武汉,中国)。我们进行了流式细胞仪(美国Cytoflex)使用Cytoflex软件和分析结果。凋亡细胞的总比例计算通过添加晚,早期凋亡细胞的数量。gydF4y2Ba

2.12。定量实时聚合酶链反应gydF4y2Ba

从肺组织总RNA被隔离,A549细胞使用试剂盒试剂(豆类生物技术)。总RNA reverse-transcribed进cDNA使用逆转录工具包(HY-K0511A;中国上海MedChemExpress)。PCR扩增量化使用SYBR绿色qPCR主混合(HY-K0523;中国上海MedChemExpress)。gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白是作为内部控制。引物在表列出用于这项研究gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

2.13。西方墨点法gydF4y2Ba

A549细胞和肺组织样本收集、均质和细胞溶解使用里帕裂解缓冲(P0013B Beyotime生物技术,中国上海)含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂(P1045 Beyotime生物技术,中国上海)30分钟在冰上。离心后12000×gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟在4°C,上层的收集和蛋白质浓度检测采用BCA法(P0010, Beyotime生物技术、上海、中国)。蛋白质sds - page凝胶上分离和转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(美国Billerica的微孔,MA),它被封锁在室温下用5%的脱脂牛奶1 h,然后孵化一夜之间在4°C主要PPAR抗体gydF4y2BaγgydF4y2Ba(2435年,细胞信号技术),PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba(ab191838 Abcam), NRF-1 (ab175932 Abcam) TFAM (ab47517 Abcam),进行MFN2 (ab124773 Abcam), GRP78 (ab21685 Abcam)、切(ab11419 Abcam) Caspase12 (ab8118 Abcam) Caspase3(9662年,细胞信号技术),比例导引(21613 - 1 - ap, Proteintech)gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白(20536 - 1 - ap, Proteintech)。洗涤三次后,膜与二次孵化的抗体(SA00001-2 Proteintech)在室温下1 h。蛋白质的相对强度乐队使用Bio-Rad数量一个软件进行了分析。结果被规范化gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白的水平。gydF4y2Ba

2.14。统计分析gydF4y2Ba

所有数据都表示为gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba统计分析使用GraphPad Prism 8.0软件(美国GraphPad软件)。学生的gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba测试是用于群比较,和单向方差分析被用于多集团比较。是在所有分析,统计意义gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba减毒LPS-Induced在肺泡上皮细胞凋亡和炎症gydF4y2Ba

确认PPAR的效果gydF4y2BaγgydF4y2Ba肺泡上皮细胞上,我们选择了人类II型肺泡上皮细胞A549的体外实验。我们的研究结果表明,有限合伙人显著增加炎症和细胞凋亡在肺泡上皮细胞(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。显示治疗显著降低TNF - LPS-induced表达式gydF4y2BaαgydF4y2Ba和il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞(数字gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。免疫印迹显示,显示治疗减少了半胱天冬酶3(图的乳沟gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba),和流式细胞术结果还显示,显示政府显著降低的速率在A549细胞凋亡和坏死(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2Ba)。然而,我们发现RSG-stimulated被GW9662阻止(图的变化gydF4y2Ba2gydF4y2Ba),表明这些影响被PPAR介导gydF4y2BaγgydF4y2Ba信号通路。我们的研究结果表明PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活减弱LPS-induced在肺泡上皮细胞凋亡和炎症。gydF4y2Ba

3.2。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞抑制LPS-Induced ER应激gydF4y2Ba

调查是否PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba直接降低ER应激在肺泡上皮细胞,我们测量的表达在肺泡上皮细胞ER应激相关指标。结果表明,有限合伙人显著调节ER应激相关蛋白的表达(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。管理显示抑制GRP78的mRNA和蛋白表达,排骨,Caspase12肺泡上皮细胞(数字gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba)。免疫荧光分析表明,显示降低ER应激标记蛋白GRP78的表达在肺泡上皮细胞(图gydF4y2Ba3 (c)gydF4y2Ba)。的PPARgydF4y2BaγgydF4y2BaGW9662特殊拦截器,使显示的影响(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。这些结果表明,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活可能在肺泡上皮细胞抑制LPS-induced ER应激。gydF4y2Ba

3.3。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba提升在肺泡上皮细胞线粒体生物起源gydF4y2Ba

PPAR的影响进行调查gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞线粒体生物起源,我们检查了线粒体biogenesis-related指标在肺泡上皮细胞的表达。结果表明,有限合伙人显著降低线粒体biogenesis-related蛋白质(图的表达gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。然而,显示政府抑制LPS的破坏性影响线粒体生物起源。显示调节PPAR的mRNA和蛋白表达gydF4y2BaγgydF4y2Ba,PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba、NRF-1 TFAM(数字gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。免疫荧光显示,显示增加了表达蛋白质PGC-1线粒体生物起源的标志gydF4y2BaαgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba)。然而,RSG-stimulated改变被GW9662预防治疗(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。这些结果表明,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活可以促进肺泡上皮细胞的线粒体生物起源。gydF4y2Ba

3.4。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba推广进行MFN2肺泡上皮细胞中表达gydF4y2Ba

进行Mfn2嵌入在线粒体外膜。它介导线粒体融合两个相邻的拘束线粒体和线粒体参与之间的联系和ER。我们的研究表明LPS抑制进行MFN2在肺泡上皮细胞的表达。显示管理能促进进行MFN2的表达,但显示的效果是预防GW9662(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。我们的研究结果表明,由PPAR监管进行MFN2表达式gydF4y2BaγgydF4y2Ba端依赖途径。gydF4y2Ba

3.5。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba表达式是减少肥胖小鼠的肺组织gydF4y2Ba

确定PPAR的表达gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖小鼠的肺组织中,我们构造了一个肥胖小鼠模型和检测PPAR的表达gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺组织。12周后,两组体重增加。高脂肪饮食的老鼠体重明显高于正常饮食的老鼠(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。我们的研究结果表明,PPAR的mRNA和蛋白表达水平gydF4y2BaγgydF4y2Ba戴奥和DIO-LPS组低于精益和lean-LPS组。精益和戴奥组相比,有显著降低肺PPARgydF4y2BaγgydF4y2Balean-LPS mRNA和蛋白表达,DIO-LPS组(数字gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba1 (d)gydF4y2Ba)。我们的研究显示,肥胖会导致PPAR下降gydF4y2BaγgydF4y2Ba表达在肺组织和有限合伙人干预可以降低PPAR加剧gydF4y2BaγgydF4y2Ba表达式。gydF4y2Ba

3.6。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba减毒LPS-Induced肥胖老鼠的肺损伤gydF4y2Ba

评估PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肥胖老鼠的阿里,我们执行他的肺部组织的染色,肺W / D重量比的测量,检测肺组织炎症因素和BALF。我们的研究结果显示,显示政府减毒LPS-induced肺组织损伤。他染色结果表明,显示LPS-induced减少炎性细胞浸润、出血,间质水肿,肺泡间隔增厚在肥胖小鼠的肺组织(图gydF4y2Ba6(一)gydF4y2Ba)。同时,显示减少肥胖小鼠的肺W / D重量比(图gydF4y2Ba6 (b)gydF4y2Ba),信使rna表达和TNF水平gydF4y2BaαgydF4y2Ba和il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba在肺组织和BALF下降(数字gydF4y2Ba6 (c)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6 (d)gydF4y2Ba)。然而,显示的效果都被GW9662治疗(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。这些观察建议PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba从阿里激活保护肥胖老鼠。gydF4y2Ba

3.7。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba抑制LPS-Induced ER应激在肥胖小鼠的肺组织gydF4y2Ba

调查PPAR的影响gydF4y2BaγgydF4y2Ba在阿里的ER应激肥胖老鼠,我们发现在肺组织ER应激相关蛋白的表达。结果表明,有限合伙人显著调节ER应激相关蛋白的表达(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。管理显示mRNA和蛋白GRP78的表达减少,排骨,Caspase12(数字gydF4y2Ba7(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba7 (b)gydF4y2Ba)。同时,免疫组织化学显示,显示减少GRP78的表达在肺组织(数字gydF4y2Ba7 (c)gydF4y2Ba)。然而,GW9662阻止这些效果的显示(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)。这些结果与细胞的研究是一致的。因此,我们的研究结果证实,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活能抑制LPS-induced ER应激在肥胖小鼠的肺组织。gydF4y2Ba

3.8。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba促进肺组织线粒体生物起源的阿里肥胖老鼠gydF4y2Ba

自从PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞促进线粒体生物起源,我们推测PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba在阿里肥胖老鼠也有积极影响。我们检查了的表达在肺组织线粒体biogenesis-related标记。结果表明,与DIO-LPS-DMSO组相比,PPAR的mRNA和蛋白表达水平gydF4y2BaγgydF4y2Ba,PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba、NRF-1 TFAM DIO-LPS-RSG组显著增加(数据gydF4y2Ba8(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba8 (b)gydF4y2Ba)。免疫组织化学显示,显示调节PGC-1线粒体生物起源标记蛋白的表达gydF4y2BaαgydF4y2Ba在肺组织(图gydF4y2Ba8 (c)gydF4y2Ba)。显示的效果(图被GW9662预防治疗gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。这些结果也符合这些细胞的研究中,他们建议PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活可以促进线粒体生物起源与阿里小鼠的肺组织。gydF4y2Ba

3.9。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba抑制LPS-Induced凋亡肥胖小鼠的肺组织gydF4y2Ba

我们研究了PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba激活在肥胖小鼠肺组织细胞。有限合伙人显著调节肺组织中细胞凋亡蛋白酶3的乳沟,显示政府减少了半胱天冬酶3的乳沟;然而,GW9662阻止这种效果(数字gydF4y2Ba9(一个)gydF4y2Ba)。TUNEL染色显示LPS-induced肺泡上皮细胞的凋亡明显增加肥胖的老鼠。管理显示减少肺泡上皮细胞凋亡在TUNEL-stained肺部分,但这种效应被GW9662阻止(图gydF4y2Ba9 (b)gydF4y2Ba)。这是符合我们的体外研究PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba肺泡上皮细胞。我们的研究结果表明,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活抑制LPS-induced肺泡上皮细胞凋亡和防止肥胖老鼠的阿里。gydF4y2Ba

3.10。激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba表达式中进行MFN2晋升比例导引和肥胖小鼠的肺组织gydF4y2Ba

PPAR的影响进行调查gydF4y2BaγgydF4y2Ba进行MFN2比例导引和表达,我们检查了比例导引和表达式中进行MFN2肥胖小鼠的肺组织。我们的研究表明,有限合伙人进行MFN2 APN的mRNA和蛋白表达减少,肥胖小鼠的肺组织。显示管理提升的APN进行MFN2表达式;然而,显示的效果被GW9662阻止(图gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)。我们的研究结果表明,比例导引和表达式中进行MFN2 PPAR监管gydF4y2BaγgydF4y2Ba端依赖途径。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

在这项研究中,几个观测是改善我们目前的PPAR的角色的理解gydF4y2BaγgydF4y2Ba在阿里端依赖途径。我们发现,肥胖是PPAR较低有关gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺组织中表达及其在阿里水平进一步降低。肺泡上皮细胞的研究表明,PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba有利于减轻炎症和细胞凋亡,伴随着改善线粒体生物起源和降低ER应激。肥胖老鼠体内研究也证实了PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba反对阿里。此外,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba可以诱导生产比例导引和肺组织中进行MFN2升高,这可能促进其抗炎功效。gydF4y2Ba

PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba主调节器的线粒体生物起源和最初发现棕色脂肪组织的co-activator PPAR吗gydF4y2BaγgydF4y2Ba(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。它可以激活PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba目标基因诱导PPAR的绑定gydF4y2BaγgydF4y2Ba配体,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。此外,PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba基因表达是PPAR的直接目标gydF4y2BaγgydF4y2Ba激活。PPAR的存在gydF4y2BaγgydF4y2Ba响应PGC-1远地区的元素gydF4y2BaαgydF4y2Ba基因启动子结合PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba/ RXR形成(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。先前的研究已经证明了PPAR的角色gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba途径抑制肥胖、延缓慢性阻塞性肺疾病的恶化,衰减肺水肿(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。目前的研究证实PGC-1的角色gydF4y2BaαgydF4y2Ba在调停PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba肺泡上皮细胞。它是合理的假设PPAR的减少活动gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba在肥胖个体可能会促使肺加重损伤。gydF4y2Ba

损伤的线粒体生物起源和功能与衰老、神经退行性疾病和代谢疾病,如2型糖尿病和肥胖gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。先前的研究已经记录在不同的发病机制,PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba和下游蛋白可以诱导改善线粒体功能(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba,gydF4y2Ba42gydF4y2Ba]。我们的研究证实了PPAR的保护作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba针对LPS-induced在肺泡上皮细胞线粒体功能障碍。此外,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba还有助于减少进行MFN2生产的障碍在阿里,这是影响ER和线粒体和之间的相互作用在调节线粒体动力学中发挥着关键作用。gydF4y2Ba

之前的研究在巨噬细胞和胰腺gydF4y2BaβgydF4y2Ba肽表明PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba明显变弱ER应激(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。我们的体外和体内的研究还证实PPAR肺肺泡细胞gydF4y2BaγgydF4y2Ba端依赖调制的ER应激。减少PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba被认为是上游的增强ER应激(gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]。然而,激活后切ER PGC-1的差别能导致对这些压力gydF4y2BaαgydF4y2Ba和细胞凋亡增加gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]。这些结果表明存在反向信号转导的细胞炎症反应的进展。因此,一个受损的PPAR之间的平衡gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba和ER应激可能加剧肺损伤中发挥作用。gydF4y2Ba

肥胖还与APN水平较低有关。研究已经证实,APN表达式在肥胖小鼠的肺组织低于在正常小鼠gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]。比例导引的adipokine杰出的抗炎作用[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba]。已经观察到小鼠的目标删除APN基因表现出自发性肺血管内皮细胞的激活和阿里是更容易gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。在目前的研究中,upregulation APN之后发现PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba,这表明在调解PPAR发病的潜在作用gydF4y2BaγgydF4y2Ba全身的防备,阿里。PPAR之间的联系gydF4y2BaγgydF4y2Ba在先前的研究和APN已经提出。比例导引,PPAR的目标基因gydF4y2BaγgydF4y2Ba诱导PPAR -gydF4y2BaγgydF4y2Ba通过直接绑定的PPAR -配体gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ RXR异质二聚体PPAR响应元素(APN PPRE)启动子(gydF4y2Ba47gydF4y2Ba]。PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活可以调节APN生产在转录和翻译水平gydF4y2Ba48gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba50gydF4y2Ba]。然而,他们是如何导致肺泡上皮细胞的抗炎功效需要进一步调查。gydF4y2Ba

目前的研究也有一些局限性。首先,A549细胞代替主肺泡II型肥胖老鼠细胞。A549细胞株广泛用作体外模型II型肺上皮细胞。我们的研究证实,PPAR的激活gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba引发对LPS-induced上皮损伤的保护作用缓解压力和改善线粒体生物合成。然而,PPAR的水平gydF4y2BaγgydF4y2Ba肥胖老鼠的肺上皮细胞在炎症及其变化尚不清楚。第二,尽管目前的证据表明,低水平的PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba和APN肥胖老鼠可能导致对阿里,这不足以证明APN ER压力和线粒体功能的影响。进一步的研究需要阐明PPAR之间的交互gydF4y2BaγgydF4y2Ba/ PGC-1gydF4y2BaαgydF4y2Ba和APN在介导肺保护。第三,我们的实验证实,PPARgydF4y2BaγgydF4y2Ba激活具有预防效果在肥胖老鼠ALI / ARDS。但同样重要的是确定PPAR的能力gydF4y2BaγgydF4y2Ba激活恢复肺中预先存在的炎症状态。因此,我们在未来将继续研究这个问题。gydF4y2Ba

5。结论gydF4y2Ba

总之,目前的研究表明,PPAR的差别obesity-induced对这些gydF4y2BaγgydF4y2Ba可能会增加对阿里的易感性。PPAR的抗炎功效gydF4y2BaγgydF4y2Ba在肺泡上皮细胞是由ER的减轻压力和促进线粒体生物起源。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

在这项研究中使用的所有数据都可以从相应的作者的请求。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

作者感谢郭Shuliang教授的研究小组(呼吸道医学系,重庆医科大学第一附属医院)捐赠A549细胞株和实验室提供的实验条件研究中心,重庆医科大学第一附属医院。这项工作是支持由重庆科技局(项目号CSTC2019jscx-msxmX0214)和重庆卫生委员会(项目没有。2017 hbrc001)。gydF4y2Ba