文摘
激活肾素-血管紧张素系统(RAS)参与代谢综合征的发展(大都会)和心脏衰竭。PPAR-alpha激活的非诺贝特恢复一些影响引起的这些症状。最近,模拉组件都牵连到高血压和心肌功能障碍的发病机制;然而,他们的心脏功能仍有争议。我们评估如果模拉信号通路,由血管紧张素III和血管紧张素-(1 - 7),参与缺血期间非诺贝特大都会大鼠的保护作用。控制(CT)和大都会老鼠被分成以下组:(a)骗局,(b) vehicle-treated心肌梗死(MI-V)和(c) fenofibrate-treated心肌梗死(MI-F)。第四第三血管紧张素和血管紧张素和胰岛素水平增加了氨基肽酶(IRAP)表达和减少血管紧张素转换酶2 (ACE2)表达在大都会老鼠的心。缺血激活血管紧张素转换酶(ACE) /血管紧张素ⅱ/血管紧张素受体1 (AT1R)和血管紧张素ⅲ/血管紧张素IV /血管紧张素受体4 (AT4R) -IRAP轴。非诺贝特治疗预防缺血造成的损失,在大都会老鼠支持血管紧张素-(1 - 7)/血管紧张素受体2 (AT2R)轴和抑制血管紧张素ⅲ/血管紧张素IV / AT4R-IRAP信号通路。此外,非诺贝特表达下调neprilysin表达和增加缓激肽的生产。 These effects of PPAR-alpha activation were accompanied by a reduction in the size of the myocardial infarct and in the activity of serum creatine kinase. Thus, the regulation of the nonclassical axis of RAS forms part of a novel protective effect of fenofibrate in myocardial ischemia.
1。介绍
肾素-血管紧张素系统(RAS)是一个复杂的激素系统,心血管生理学中起关键作用。事实上,拉起中心作用在代谢综合征(大都会)的发展,胰岛素抵抗,和心脏衰竭1]。
RAS系统由不同的血管紧张素多肽与不同的生物行为由不同受体亚型。经典的RAS包括肾素血管紧张素转换酶(ACE) /血管紧张素ⅱ(Ang II) /血管紧张素受体1 (AT1R)轴和促进血管收缩,增加氧化应激,纤维化,细胞增长,炎症(1]。相比之下,模拉,由主要由血管紧张素转换酶2 (ACE2) /血管紧张素- (1 - 7)(Ang - (1 - 7)) / Mas受体(MasR) /血管紧张素受体2 (AT2R)途径,改善心脏功能的心受到心肌梗死(MI)在胰岛素抵抗和有有益的作用,高甘油三酯血症、脂肪肝、肥胖(1- - - - - -4]。
目前,额外的RAS代谢物和他们的一些生物功能描述。Ang三世,由Angⅱ氨基肽酶(APA),是由氨基肽酶裂解N (APN)形成和IV。和静脉血管紧张素类型4受体结合(AT4),确定为一个调节胰岛素氨基肽酶(IRAP),它发挥着潜在的作用在调节葡萄糖稳态和炎症过程和各种激素的代谢包括血管加压素、催产素、生长抑素(5,6]。Ang三世和APA的潜在治疗靶点治疗高血压;然而,Ang三世的角色和第四盎在心脏功能仍有争议7- - - - - -10]。
另一方面,neprilysin RAS (NEP)是一个无处不在的肽链内切酶,具有生物活性的代谢所必需的利钠肽和其他血管活性的化合物,包括adrenomedullin,内皮素1,血管舒缓激肽(11]。此外,血浆的棉结水平一直积极与心力衰竭相关,肥胖,大都会(12,13]。这种酶是一个目标的多个临床试验它的重要性在心血管疾病,和一个新类的药物称为“ARNI”(血管紧张素受体blocker-neprilysin抑制剂)是目前被用作治疗高血压和心力衰竭(14,15]。
非诺贝特作为受体激动剂的过氧物酶体proliferator-activatedα受体(PPAR -α),调节靶基因的表达,包括一些组件的RAS。非诺贝特有多效性的影响除了降低脂质,如改善血管内皮功能,降低氧化应激,炎症和纤维化心肌缺血期间(1,16,17]。然而,有利的确切机制非诺贝特对心血管疾病的影响仍不确定。
我们以前的工作表明,非诺贝特治疗缺血性损害降低了支持抗氧化剂环境由于减少了Angⅱ/ AT1R信号通路和重建心肌胰岛素信号通路。尽管众多实验研究都集中在另一个拉级联,据我们所知,没有报告的影响非诺贝特对这些小说RAS在心肌缺血的重要组成部分。因此,当前研究的目的是评估如果模拉信号通路,由《三世,Ang -(1 - 7),和新表达,参与缺血期间非诺贝特大都会大鼠的保护作用。
2。方法
2.1。动物和外科手术
所有的实验按照我们的制度伦理指南(农业部、SAGARPA笔名动物园- 062 - 1999,墨西哥)。男性25-day-old Wistar鼠称重 10 - 12动物被随机分为两组:第1组,控制老鼠喂食自来水喝;组2、大都会老鼠收到30%饮用水中的糖在24周。动物们保持在标准条件下的光和温度与水和食物随意(LabDiet 5001;美国在里士满)。收缩期动脉血压测定在有意识的动物plethysmographic前面描述的方法(1]。
从每个实验组动物都分成接收subchronic之一(两周)口服填喂法治疗:(a)车辆(氯化钠0.9%)或(b)非诺贝特(100毫克/公斤/天)。选择这个剂量是基于以前的出版物和剂量反应曲线的非诺贝特(1,16,17]。在治疗结束后,动物麻醉(盐酸氯胺酮80毫克/公斤,甲苯噻嗪盐酸10毫克/公斤,即时消息),他们被分配到sham-operated (Sh)或心肌梗死(MI) 60分钟。之前报道,MI是实现阻塞的冠状动脉左前降枝7缝线®聚丙烯缝线(Ethicon、圣荷西dos坎波斯、巴西)(1]。老鼠牺牲,心脏被切断,缺血区分开进行分析。此外,腹部白色脂肪组织被免职,重。
2.2。测量血清生化参数
non-HDL-C,禁食的测量葡萄糖,高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯和商业酶试剂盒进行。血清胰岛素水平测量使用rat-specific胰岛素放射免疫检定法(Linco研究,Inc .,密苏里州,美国)。从稳态模型胰岛素抵抗估计(HOMA-IR) [18]。
肌酸激酶(CK)活性spectrophotometrically决定在340 nm(紫外线测试,罗氏Cobas c - 501,罗氏诊断,印第安纳波利斯,美国)后MI过程。CK的确定进行了使用逆反应和激活在37°C (NAC)的防治作用。克分子数相等的数量的NADPH和ATP形成以同样的速度。光度计的测量NADPH的生成速率成正比CK活性(19]。
2.3。电泳决定
Angⅱ,Ang三世,Ang IV, Ang -(1 - 7)浓度进行评估心肌缺血性领域从不同的实验组,每组毛细管区带电泳(CZE、P / ACE最小检测量毛细管电泳系统、贝克曼库尔特,Inc .富勒顿、钙、美国)根据以前描述的方法(1,18]。缓激肽是评估通过毛细管电泳激光诱导荧光检测器,如前所报道(20.]。
2.4。免疫印迹分析
冰冻的心肌缺血面积与polytron均质(模型PT-MR2100;Kinematica AG)、瑞士琉森(25%) )在裂解缓冲 (Tris-HCl 250毫米,氟化钠0.2 M, Na3签证官410毫米,NP40 1%)和蛋白酶抑制剂鸡尾酒(完整®平板电脑,罗氏应用科学,曼海姆,德国)在4°C。总共有100μg蛋白在sds - page分离(12% bis-acrylamide-Laemmli凝胶)和转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)。墨迹被封锁3 h在室温下使用Tris-buffered盐水和0.05%的渐变(TBS-T)和5%的脱脂脱水牛奶。一夜之后,膜被孵化主要抗体在4°C。王牌,ACE2, AT1R AT2R MasR, APA,比例导引,和棉结主要抗体从圣克鲁斯生物技术获得的(美国圣克鲁斯,CA);IRAP抗体从细胞信号技术(丹弗斯、马、美国)。二次辣根peroxidase-labeled抗体来自杰克逊ImmunoResearch(英国萨福克郡)。所有的屁股被孵化β肌动蛋白抗体作为负载控制。孵化后,这些墨迹被可视化使用止动剂化学发光系统(美国马止动剂西方,微孔)(1]。电影数字化的图像获得的gs - 800密度计使用数量一个软件(Bio-Rad实验室,Inc .),并作为任意单元(AU)。
2.5。测定梗死大小
缺血60分钟后,老鼠安乐死,心被迅速切除。灌注后,心被1.5毫升的0.05%伊文思蓝染料Langendorff系统;这个过程是执行大纲缺血性心肌(和区域风险)。心被冻结在-20°C 1小时,然后2毫米厚截面。片都淹没了完全与2、3、5-triphenyl四唑盐酸盐(TTC) 1%,磷酸盐(PBS) (1 M, pH值7.2)和孵化为20分钟37°C区分可行的心肌坏死组织。片后孵化10%福尔马林在PBS,直到一个小时和维护形象。片拍摄显示缺血区Multiphot佳能相机拍摄的EOS 6 d(日本东京)17]。
2.6。统计分析
结果表示为 。实验数据是使用单向方差分析其次是Newman-Keuls检查事后测试。时被认为是具有统计学意义的差异 。所有分析使用统计软件包GraphPad Prism 5.03版本(GraphPad软件,拉霍亚,CA)。
3所示。结果
大都会模型的特征是由分析动物的体重,血压,和腹腔脂肪和血清生化分析。如表所示1大都会动物发达中央型肥胖、高血压、血脂异常(高甘油三酯和non-HDL-C和低水平的高密度脂蛋白胆固醇水平),高胰岛素血症和胰岛素抵抗(HOMA-IR)。
正如所料,与非诺贝特治疗显著降低甘油三酯的浓度和non-HDL-C水平,恢复了胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)大都会集团。CT组、非诺贝特管理显著降低non-HDL-C的浓度,不影响其他参数。
在所有组血清CK活性测定。没有发现显著差异之间的CT和大都会sham-operated组( vs。 )。MI后,大都会的CK活性明显高于CT老鼠处理车辆(表中1)。非诺贝特治疗显著降低血清CK活动从CT和大都会动物(分别为23%和14%)。
图1显示了匀浆中ACE和ACE2的表达从每个实验组从左心室。在大都会组ACE表达略高于CT。缺血推广增加CT组ACE表达,而表达的心从大都会老鼠基本上保持不变。非诺贝特治疗显著降低ACE表达相同的比例在两个实验小组(数字1(一)和1 (b))。
(一)
(b)
(c)
由于相关性ACE2生产Ang -(1 - 7),我们研究了非诺贝特是否施加影响这种酶。ACE2表达显著减少大都会集团相比CT组(图1 (c))。当心脏受到缺血,ACE2增加大都会集团和没有改变在CT观察到的老鼠。管理的非诺贝特显著增加ACE2表达CT组和没有影响大都会的动物。
根据病理生理学,大都会大鼠左心室Angⅱ水平增加CT相比,老鼠(图2(一个))。心中在缺血条件下时,Angⅱ水平增加CT和大都会有进一步提高大鼠;然而,非诺贝特政府大幅减少和II浓度。Ang -重要的是,在大都会集团(1 - 7)水平明显高于基础条件,但在缺血条件下,Ang -(1 - 7)水平降低(图2 (b))。非诺贝特治疗显著增加的浓度这两组肽(图2 (b))。
(一)
(b)
免疫印迹分析揭示AT1R的表达的差异,AT2R, MasR心脏的CT和大都会组(数字3(一个)- - - - - -3 (d))。正如所料,AT1R表达高大都会老鼠老鼠CT相比。缺血推广增加AT1表达式在CT和大都会组。非诺贝特治疗显著降低AT1R表达两组,尽管这种效应更加明显在大都会老鼠(数字3(一个)和3 (b))。结果表明,AT2R表达式sham-operated两组之间没有差别。心受到缺血时,明显降低CT和大都会AT2R表达的组织观察。管理的非诺贝特显著增加这种受体的表达在两组数据3(一个)和3 (c))。相比MasR表达明显高于MetS-Sh CT-Sh动物;这种受体的表达在缺血条件下从虚假的实验与值组。非诺贝特治疗促进MasR表达增加CT老鼠,而其表达式保持不变的心从大都会(数字3(一个)和3 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
Ang以来第三和第四和被确认为RAS的新生物活性肽,我们研究了非诺贝特对这些代谢物的产量的影响。数据4(一)- - - - - -4 (c)表明,APA的表达(主要酶代谢和II和III)和第三和浓度显著增加左心室的MetS-Sh动物CT-Sh相比。这种效应也在缺血条件下观察到的。非诺贝特能够防止APA的增加和Ang第三大都会动物的水平。
(一)
(b)
(c)
我们也调查如果非诺贝特诱导Ang三世浓度的变化可能与盎IV-IRAP通路有关。我们的结果表明,心从MetS-Sh拥有更高水平的比例导引,Ang IV, IRAP相比,相应的CT组(数据5(一个)- - - - - -5 (d))。缺血是伴随着减少组件分析从大都会大鼠心;然而,APN的水平和第四和CT组没有明显变化。非诺贝特治疗能够预防的激活和IV-IRAP轴从大都会大鼠左心室(数字5(一个)- - - - - -5 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
由于有利影响棉结的心血管效应的抑制缓激肽,我们评估了非诺贝特对棉结的影响表达和血管舒缓激肽生产。数据6(一)和6 (b)显示基底条件下,大都会的心表达更多的棉结相比,CT的心。
(一)
(b)
(c)
在CT-MI vehicle-treated动物,这种酶的表达在缺血条件下增加;然而,在MetS-MI vehicle-treated集团,棉结水平没有修改。缓激肽的浓度显示相反的效果(图6 (c))。非诺贝特的管理与表达显著减少棉结和随之增加缓激肽生产两组。
梗塞大小使用伊文思蓝染料+ TTC评估为1%。Blue-dyed心肌组织代表可行的组织。从CT-Sh获得左心室组织展示一个广泛的蓝色区域。MetS-Sh组织显示蓝色外围信号中央区域的边界颜色为红色。红色区域代表区域风险(图7)。MI组处理车辆,TCC-stained心脏切片证实梗塞的地区(白色斑点在可行区域内);然而,危险区域(红色区域)是更大的心从大都会老鼠。组织损伤的非诺贝特治疗减毒的缺血区域大都会和CT老鼠。CT组改善更大的区域和缺血区域风险降低(在中央区域有限)。然而,这些地区广泛分布在心脏组织从大都会老鼠(图7)。
4所示。讨论
这项工作表明,非诺贝特治疗产生心脏保护大都会受到缺血的实验模型,通过调节模RAS途径。我们的研究表明,药物治疗相关的激活Ang - (1 - 7) / AT2R和抑制和III和IV / IRAP通路。此外,本研究的另一个新发现是与非诺贝特治疗可能减少棉结与顺向的表达增加缓激肽的生产。
广泛的研究表明,特定分子的活化RAS参与发展的大都会和心脏衰竭。非诺贝特治疗恢复的一些这些疾病通过调节几个过程造成的影响由Angⅱ/ AT1、能量代谢、氧化应激、炎症和细胞分化[1]。另一方面,一个积累的数据量信号RAS的另一种途径的重要性,例如Ang -(1 - 7)及其心血管属性。我们的数据与以往研究结果;然而,没有报告的影响非诺贝特重要的同行的RAS途径分析了我们所知。
数据表1表明,非诺贝特治疗逆转的迹象大都会如血脂异常和胰岛素抵抗,也不影响其他参数。这些数据是按照以前公布的(1]。
血清CK活性是众所周知的心脏风险生物标志物在人类和动物模型;然而,这个参数是不具体的21- - - - - -23]。结果在表1显示从MetS-MI大鼠血清CK活性高于CT-MI组处理车辆。此外,我们表明,非诺贝特治疗显著降低血清中CK的增加CT和大都会的老鼠。然而,这种效应在CT组更明显。因此,我们的结果表明,CK活动是一个很好的实验模型心肌损伤的生物标志物。
在这项研究中,古典和模拉轴进行了研究。ACE / Angⅱ/ AT1R轴主要RAS途径研究,和它的角色在心脏损伤和治疗意义都进行了广泛的审查(1]。正如所料,ACE表达和Angⅱ的浓度高(分别略和显著)心从大都会动物相比CT-Sh组。缺血相关条件的增加酶的表达及其产品(数字1(一)和2(一个))。非诺贝特治疗预防ACE表达的增加在CT和大都会组。与这些研究结果一致,Angⅱ的浓度,减少实验两组(数字1 (b)和2(一个))。据我们所知,没有报告的决心和二世在患者接受非诺贝特治疗水平。有冲突的数据关于PPAR受体激动剂对血压的影响在人类中,由于人口的异质性,高血压,背后的机制和治疗并发的差异或膳食盐摄入量(24]。然而,沃克et al。25)表现出有益的非诺贝特对血管内皮功能的影响。非诺贝特减少氧化应激和增加以挪士表达式。这些效应可能与减少Angⅱ的浓度和同意我们之前报道的结果(1]。
另一方面,ACE2高效水解Angⅱ形成Ang -(1 - 7),肽产生相反的行为和二世。我们的结果表明,基底条件下,ACE2的表达并不是伴随着类似的Ang -(1 - 7)浓度的变化。令人惊讶的是,缺血性侮辱了ACE2表达而增加Ang -(1 - 7)的水平减少大都会集团(数字1 (c)和2 (b))。ACE2表达在缺血条件下的增加表明这种酶的保护作用和在协议与数据发布的其他作者在人类和动物模型26,27]。然而,ACE2的活动应该评估解释ACE2表达之间的差异和Ang -(1 - 7)浓度。这构成了本研究的局限性。Ang -(1 - 7)的水平明显高于缺血性心脏的非诺贝特的存在在CT和大都会动物(图2 (b))。Ang -(1 - 7)减少高血压、心脏肥大、氧化应激和胰岛素抵抗28,29日]。此外,在以前的报告中,我们表明,安妥明治疗Ang -(1 - 7)浓度增加缺血性心肌(20.]。
图3显示有一个过度的AT1R和MasR心从大都会基底条件下大鼠。在缺血条件下,AT1R水平增加和AT2R水平减少实验两组;非诺贝特治疗逆转了这一效应。Mas的表达增加只有CT-MI-F组(数字3(一个)- - - - - -3 (d))。据报道,Ang -(1 - 7)与MasR和AT2R [30.- - - - - -32]。因此,它是合理的认为心血管行为可以通过这些受体介导。
总之,我们的结果表明缺血促进ACE / Angⅱ/ AT1R的激活途径的激活,Ang - (1 - 7) / MasR-AT2信号通路参与非诺贝特的心血管作用。
随后,我们研究了非诺贝特治疗的影响模组件的RAS途径。两个小血管紧张素肽,Ang III和IV,已报告有有害影响通过AT1R激活(33,34]。和第三和第四和水平增加左心室MetS-Sh老鼠(数据4 (c)和5 (c))。缺血性侮辱后,Ang三世浓度显著增加,而盎在大都会vehicle-treated心中静脉水平下降。我们认为这可能是一个补偿效应的缺血性损害。这些结果与APA和APN的表达一致,分别为(数字4 (b)和5 (b))。非诺贝特的政府阻止了小肽在大都会老鼠,而CT值保持不变的动物。显然,减少小肽的浓度直接相关的减少它的前体,Angⅱ;然而,我们的研究结果表明,非诺贝特的管理有直接联系的表达APA和导引。此外,受体和四世在几个组织作为IRAP已被确认。IRAP的存在很重要的易位刺激GLUT4和催产素的代谢33,35,36]。大都会和缺血性条件IRAP过度,而与非诺贝特治疗降低了这种蛋白质(图的水平5 (d))。
和第四是内源性抑制剂IRAP催化结合位点的防止各种IRAP基质的代谢,包括催产素。催产素对心脏保护,直接或通过刺激等介质的利钠肽和一氧化氮37]。此外,这种激素增强葡萄糖吸收通过易位GLUT4的细胞表面(36,38]。因此,我们推测,Ang IV / AT4R IRAP轴还参与心肌胰岛素抵抗在缺血条件下,调节催产素浓度。非诺贝特治疗可能改善葡萄糖摄取增加催产素水平的差别的结果对这些IRAP表达式。这些建议是符合我们之前的研究中,我们显示,缺血损害心肌胰岛素行动这一类重建心脏胰岛素信号通路(1]。很少有研究报道,缺IRAP /抑制防止心脏损害;因此,进一步的研究证明的病理生理作用和IV / AT4R IRAP轴是必要的。
我们研究了非诺贝特的管理是否影响棉结和缓激肽的表达水平,由于RAS和棉结系统之间的交互和肽的作用,如缓激肽,在心脏内稳态。我们观察到大都会和缺血性条件是伴随着新超表达与顺向减少缓激肽的浓度(数字6 (b)和6 (c))。非诺贝特治疗有利于生产的缓激肽通过抑制棉结表达心中的CT和大都会老鼠。我们的研究结果表明,棉结参与非诺贝特的保护作用,这种作用可能是由基因组行动通过之前报道PPAR激活(39]。因此,增加缓激肽水平可能调解几个心脏功能,其他作者(之前已经报道过了40,41]。还需要进一步的研究来证明预处理的效果与非诺贝特生产其他激素代谢的棉结在心力衰竭,如利钠肽。
最后,为了评估治疗的疗效,我们分析了缺血性大小的TTC染色分析。伊文思蓝染料染色的心,被广泛使用,它准确地反映了可行的区域和不可逆心肌缺血性损伤的程度。图7表明,心从MetS-Sh老鼠现在更大区域的风险相比,CT组。我们的结果与实验和临床试验证据表明,大都会与心肌梗死(42]。MI侮辱后,大都会的心有一个面积较大风险和梗塞的面积相比,老鼠的心脏CT。非诺贝特治疗能够减弱MI-induced证明的损害减少风险和缺血区面积(红色,是地区)。这种效应在CT组更明显。我们工作的结果是在协议与莫et al。22),表明非诺贝特减少心肌梗塞大小。
在缺血区心肌细胞死亡的凋亡和坏死心肌梗塞;然而,每个细胞死亡形式的大小尚不清楚。Krijnen et al。43描述,在永久闭塞冠状血管的老鼠,细胞凋亡发生缺血性地区,在该地区立即与缺血性地区接壤,缺血的偏远地区。因此,细胞凋亡是梗塞大小的主要决定因素。坏死发生较少,只有在缺血性地区。
然而,我们没有执行一个分析的细胞坏死和细胞凋亡在目前的研究。在我们组的以前的报告中,我们发现,PPAR -α刺激与安妥明增强凋亡bcl - 2蛋白的表达和14-3-3ε和减少的表达proapoptotic蛋白质伯灵顿和坏的磷酸化44]。此外,氧化应激与细胞凋亡在心肌梗死[共存43]。我们的模型还提出了氧化应激(1),因此,我们不能排除效果类似于我们以前报道的一个群体。
5。结论
总的来说,我们的结果表明,PPAR-alpha激活非诺贝特防止损害由于大都会缺血大鼠通过改变血管紧张素代谢物及其受体的概要文件。它有利于Ang - (1 - 7) / at₂轴,抑制和III和IV / IRAP信号通路。此外,PPAR-alpha信号会使棉结的表达,增加缓激肽的生产。因此,模轴的RAS的规定是一种新型的非诺贝特的心肌缺血的保护作用。
数据可用性
的数据在我们的研究可从相应的作者在合理的请求。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
m .年代。和l .我。负责计划和执行的实验和数据分析;l . dv m。负责执行电泳分析;大肠S-C。和m .年代。负责组织化学分析;J.C. sn。负责执行一些生理实验; E. C-T. was responsible for serum biochemical analysis; A. S-M. obtained financial support to partly cover expenses and reviewed the manuscript; M.E. R-R. was responsible for planning the experiments, performing the physiological experiments and data analysis, and writing the paper. M. S-A. and L. I-L. contributed equally to this work.
确认
作者要感谢杂志。奥斯卡亲王(Departamento de Instrumentacion Electromecanica)对他有用的建议和专业知识对血压的决心。作者还要感谢杂志。阿曼德塞罗德里格斯和弗朗西斯科出来纳胡拉支持获取照片和穆索尔卡伦塞万提斯,马里奥•佩雷斯和佩雷斯Jhony优秀的技术援助。这项工作是支持Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia (CONACyT)(批准号222720和280458艾丽西亚Sanchez-Mendoza)。