文摘

调查的影响fimasartan hyperlipidemic非酒精性脂肪肝病和高血压状况,脂肪酸代谢相关生物标志物的水平测定在HepG2细胞和分化3 t3-l1治疗高脂肪酸和自发性高血压大鼠的肝脏和内脏脂肪组织样本(月)给予高脂肪饮食。HepG2细胞和肝组织,fimasartan显示增加蛋白质含量的过氧物酶体proliferator-activatedδ受体(PPARδ),磷酸化5′腺苷单磷酸盐激活蛋白激酶(p-AMPK)磷酸化乙酰辅酶a羧化酶(p-ACC) malonyl-CoA脱羧酶(MCD),中链酰coa脱氢酶(MCAD)和过氧物酶体proliferator-activated受体γ共激活剂1α(PGC-1α),它导致了蛋白质含量的减少11 beta-hydroxysteroid脱氢酶1 (11β-HSDH1),脂肪酸合酶(FAS)和肿瘤坏死因子-α(TNF -α)。Fimasartan减少脂质含量HepG2和分化3 t3-l1细胞和肝脏组织。此外,fimasartan增加内脏脂肪组织中脂联素水平。的antiadipogenic影响fimasartan被PPAR所抵消δ拮抗剂(GSK0660)。因此,fimasartan改善非酒精性脂肪肝病主要是通过激活氧化代谢由PPAR表示δ-AMPK-PGC-1α途径。

1。介绍

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是一种普遍的疾病定义为过多的脂肪堆积在肝脏中甘油三酯(脂肪变性)的形式(组织学检查,超过5%的肝细胞)。在一些患者中,非酒精性脂肪肝会进一步发展为肝硬化和肝癌。非酒精性脂肪肝患者属于一个小组有肝细胞损伤和炎症,除了过量脂肪(肝病)。后者的条件,指定非酒精性脂肪肝炎(纳什),实际上是没有区别的组织学检查从酒精性脂肪肝(灰),它代表了一个发展非酒精性脂肪肝。据报道,各种疾病,如肥胖,糖尿病和高脂血症,能诱导非酒精性脂肪肝的发展和纳什1- - - - - -3]。此外,纳什可以用作代表临床指标与高血压、心血管疾病和糖尿病并发症4]。

几个化合物如非诺贝特、过氧物酶体proliferator-activatedα受体(PPARα)受体激动剂,或他汀类药物可能有助于非酒精性脂肪肝和纳什治疗(5- - - - - -7]。

代表血管紧张素ⅱ1型受体(AGTR1)拦截器,替米沙坦,改善非酒精性脂肪肝和纳什通过抑制巨噬细胞浸润到肝脏,减少脂肪细胞大小和血清脂联素的海拔8]。

Fimasartan (2-n-butyl-5-dimethylaminothiocarbonylmethyl-6-methyl-3 -(2 - (1 h-tetrazole-5-yl) biphenyl-4-yl)甲基}pyrimidine-4 (3 h)——三水合盐钾)代表一个nonpeptide血管紧张素受体阻断剂,选择性AGTR1阻塞的影响,韩国食品与药品管理局在2010年批准的用于治疗原发性高血压(9,10]。

虽然属于sartan类的其他药物的影响,如替米沙坦,在肝脏脂质代谢研究相对较好,fimasartan在这种情况下的影响尚未完全阐明。

在这项研究中,调查潜在的fimasartan在hyperlipidemic治疗非酒精性脂肪肝,高血压条件,各种生物标志物的表达水平与脂肪酸代谢测定3 t3-l1 HepG2和分化细胞和肝脏、内脏脂肪组织从自发性高血压大鼠(月)给予高脂肪饮食。

此外,研究核受体如PPARγ和PPARα非酒精性脂肪肝的研究相对较好,研究非酒精性脂肪肝和PPAR之间的关系δ非常缺乏。

此外,降低分解代谢参与非酒精性脂肪肝和肥胖等代谢疾病,和PPAR众所周知δ激活细胞内分解反应。因此,我们的研究主要是集中在fimasartan和PPAR之间的关系δ在非酒精性脂肪肝。这份报告提出了新颖的发现显示脂肪酸代谢之间的关系,脂肪肝,,fimasartan AGTR1拦截器。

2。材料和方法

2.1。材料

HepG2(人类肝癌细胞)和3 t3-l1(小鼠胚胎成纤维细胞)细胞系从韩国购买细胞株银行(首尔,韩国)。等细胞培养试剂媒体、胎牛血清(的边后卫)和antibiotic-antimycotic解决方案(AA)从WELGENE购买,Inc .(韩国大邱)。试剂盒®试剂购买从英杰公司(美国纽约大岛)。权力互补脱氧核糖核酸合成工具,马克西姆™PCR预混料包、蛋白质提取的解决方案,和prestained蛋白质标记基因内区获得生物技术(Seongnam-si、京畿道、韩国)。引物聚合酶链反应(PCR)是购自Bioneer(大田、韩国)。棕榈酸酯、苏木精和伊红()),油红O,琥珀酸钠,氮蓝四唑(电视台)和蛋白酶抑制剂鸡尾酒从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。柯达GBX开发者和固定器试剂都是从Carestream买健康,Inc .(美国罗彻斯特,纽约)。Fimasartan是由Boryung有限公司。(首尔,韩国)。纯种京都WKY大鼠和自发性高血压大鼠(月)从Doo-Yeol购买生物技术(首尔,韩国),而购买动物的饮食从中央实验室。动物Inc .(首尔,韩国)。主要抗体anti-11 beta-hydroxysteroid脱氢酶1 (11β-HSDH1)、中链酰coa脱氢酶(MCAD)和anti-glyceraldehyde 3 -磷酸脱氢酶(GAPDH)和二级抗体购自圣克鲁斯生物技术有限公司(美国达拉斯,TX)。主要抗体5′腺苷酸激酶(AMPK)磷酸化AMPK (p-AMPK)、乙酰辅酶a羧化酶(ACC),和磷酸化ACC (p-ACC)从细胞信号技术,Inc .(丹弗斯、马、美国)。主要抗体过氧物酶体proliferator-activatedδ受体(PPARδ)、过氧物酶体proliferator-activatedα受体(PPARα),malonyl-CoA脱羧酶(MCD)和过氧物酶体proliferator-activated受体γ共激活剂1α(PGC-1α)和大鼠脂联素酶联免疫试剂盒提供从Abcam(英国剑桥)。主要抗体抗肿瘤坏死因子-α(TNFα)和anti-fatty酸合成酶(FAS)购买的罗福斯(美国利特尔顿有限公司)。化学发光底物和增强器解决方案获得Bio-Rad(美国大力神,CA)。免疫组织化学试剂购买从向量实验室(美国伯林盖姆,CA)。试剂的浓度测量总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(高密度脂蛋白胆固醇)和低密度脂蛋白胆固醇(低密度脂蛋白胆固醇)从Kyowa助理医生有限公司有限公司(日本东京)。

试剂估计活动谷氨酸草酰乙酸的转氨酶(了)和谷氨酸丙酮转氨酶(GPT)购买DENKA SEIKEN有限公司有限公司(日本东京)。鼠三磷酸腺苷(ATP)酶联免疫试剂盒获得MyBioSource(美国圣地亚哥,CA)和甘油三酯比色测定装备从开曼群岛买化学公司(美国安阿伯市MI)。

2.2。细胞培养

HepG2细胞培养在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)包含10%的边后卫和1% AA解决方案在37°C, 5%的公司₂孵化器。中被新的取代每48 - 72 h。HepG2细胞间通道45-56镀在1×10的密度⁴细胞每口井在96年文化的菜肴或1×10⁶细胞在DMEM /在six-well文化板块包含10%的边后卫和1% AA。细胞培养24 - 48 h在37°C, 5%的公司₂孵化器,然后媒体改变DMEM包含1%的边后卫。此后,细胞治疗高脂肪酸(0.1 mmole棕榈酸酯),连同fimasartan (0.14 mmole)和PPARδ拮抗剂,GSK0660 (50μ摩尔),治疗24小时。3 t3-l1 preadipocytes在含10%小牛血清DMEM培养在37°C和1% AA解决方案有限公司5%₂孵化器。媒介取代每48 - 72 h。镀3 t3-l1细胞仅8通道之间的密度5×10⁴每口井的细胞在DMEM 24-well文化菜含10%小牛血清和1% AA的解决方案。当达到3 t3-l1细胞融合、分化培养基用于细胞,连同fimasartan (0.14 mmole)和PPARδ拮抗剂(50μ摩尔)。分化培养基含有0.0125μ12.5摩尔/毫升地塞米松μ摩尔/毫升3-isobutyl-1-methylxanthine 10μg / mL胰岛素,和10%的边后卫。分化了两天之后,媒介是胰岛素中含有10所取代μg / mL胰岛素和10%的边后卫。在胰岛素媒体孵化后2 - 4天,媒介改变了维护中只包含10%的边后卫。

2.3。动物实验

七WKY大鼠喂养正常控制饮食含有10%的脂肪和24自发性高血压大鼠(月)被分成四组;组1是美联储正常控制饮食(10%的脂肪),第二组是正常控制饮食和fimasartan收到10毫克/公斤/天,3组喂高脂肪饮食脂肪(60%),和组4喂养高脂肪饮食和动物收到fimasartan 8周。六个动物采用7天,8周后所有的老鼠都牺牲在同一天的上午。动物实验都是依照古鲁的动物实验伦理指导医院,韩国大学。所有动物实验符合韩国大学动物科学规章制度和协议批准机构韩国大学动物保健和使用委员会(批准文号:kuiacuc - 2011 - 176)。

2.4。半定量逆转录聚合酶链反应(rt - pcr)

总RNA提取使用试剂盒试剂根据制造商的指示。互补DNA合成使用电源互补脱氧核糖核酸合成装备,从总RNA和PPAR的聚合酶链反应δ,PPARα,PPARδ,β肌动蛋白进行使用PCR预混料设备。使用的引物序列如下:向前5′-AAGGCCTTCTCCAAGCACAT-3′和反向5′-AAGACGTGCACGCTGATCTC-3人类PPAR′δ(产品尺寸,212个碱基对);向前5′-CAAACTTGGACCTGAACGAT-3′和反向5′-GAACGGTTTCCTTAGGCTTT-3 PPAR′α(产品尺寸,161个碱基对);向前5′-TGGAGTTCATGCTTGTGAAG-3′和反向5′-GCATTATGAGACATCCCCAC-3 PPAR′γ(产品尺寸,168个碱基对);向前5′-GCTTGGTCACTTCGTGGCTA-3′和反向5′-CAAACCGCTTCCAACTCAAA-3′β肌动蛋白(产品尺寸,281个碱基对)。反应混合物cDNA预热5分钟在95°C作为初始变性步骤。聚合酶链反应包括变性步骤20秒在95°C,退火步骤10秒55°C,扩展一步30秒72°C,和最终扩展步骤5分钟在72°C。

2.5。免疫印迹分析

细胞和肝脏组织中均质蛋白提取的解决方案,和蛋白质的细胞和组织中提取被布拉德福德估计方法。提取的蛋白质(10μg)加载到10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)凝胶。蛋白质印迹硝化纤维膜进行90分钟在100伏特,和5%脱脂奶膜被封锁在一夜之间解决方案和洗了三次10分钟Tris-buffered盐水含0.05%渐变20 (TBS-T)。主要抗体与膜在室温下孵化2 h。主要抗体稀释条件如下:PPARδ,PPARαAMPK, p-AMPK (Thr172)、ACC, p-ACC (Ser79),价格上调,PGC-1α1:1000,11吗β-HSDH1 1: 500年,TNFα1:500年,MCAD、FAS和GAPDH是1:200。额外的洗涤三次10分钟后,与膜TBS-T孵化了辣根过氧化物酶共轭二次抗体室温1小时。二次抗体稀释条件如下:anti-rabbit PPAR的抗体免疫球蛋白δ,AMPK p-AMPK ACC, p-ACC MCD, MCAD, PGC-1α1:4000,anti-rabbit FAS和11个免疫球蛋白抗体吗β-HSDH1 1: 5000年,anti-rabbit IgG抗体对肿瘤坏死因子α1:3000年,抗体IgG抗体GAPDH是1:5000。之后,膜清洗三次10分钟与TBS-T一旦TBS 10分钟,和膜处理化学发光底物和增强器解决方案。图像得到手动使用开发人员和固定器试剂,结果被ImageJ分析程序。

2.6。总胆固醇的水平,高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,以及血清GPT

总胆固醇的水平,高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,和GPT血清样本估计东芝稍后通知- 2000 fr(东芝医疗系统公司、枥木、日本)根据制造商的指示在实验室医学系(诊断测试),高丽大学,古鲁医院(首尔,韩国)。

2.7。免疫组织化学

组织幻灯片顺序被浸泡在二甲苯和100%到75%乙醇分级方案把石蜡和再水化。Deparaffinized和水化幻灯片孵化H为3%₂O₂解决方案10分钟,水洗,和阻止使用正常血清1人力资源解决方案。随后,幻灯片主要抗体治疗,疗程1小时和TBS-T洗。这之后,幻灯片和二次孵化抗体与TBS-T 30分钟,洗,和预拌VECTASTAIN ABC的解决方案是孵化30分钟的幻灯片。幻灯片是TBS-T清洗和孵化3,3′-diaminobenzidine (DAB)底物溶液,直到颜色的发展。此外,幻灯片5分钟用自来水洗净,用苏木精复染色,清洗再用自来水,风干,最后安装。

2.8。苏木精和伊红染色())

肝脏和内脏脂肪组织,分离出老鼠,都是收获和固定在4%多聚甲醛。样本嵌入在石蜡和切成薄片(4 - 5μ米厚的)使用切片机,切片都沾染了)。他们进一步可视化使用光学显微镜(奥林巴斯BX51、东京、日本)和拍照。

2.9。油红O染色

细胞培养基是完全移除,细胞与磷酸盐缓冲盐水冲洗(PBS)。后来,PBS完全是吸气,10%甲醛溶液添加到细胞,他们在室温下培养30分钟。去除甲醛溶液后,固定细胞被轻轻地用PBS。油红O的解决方案是添加到井,样本和孵化60分钟在室温下,紧随其后的是洗PBS和拍摄使用光学显微镜(奥林巴斯BX51)。油红O染色筛选了由异丙醇和吸光度测量使用SpectraMax + 384标(分子设备有限责任公司,桑尼维尔,美国)在530海里。

2.10。脂联素浓度在内脏脂肪

内脏脂肪组织50μ500 g是均质蛋白提取的解决方案μl .−20°C的提取是孵化20分钟,然后在13000转离心5分钟在4°C。上层清液的化验。50的脂联素标准或样品μL是添加到每个的96孔板,井与密封带盖后,在室温下培养1小时。洗后与200年的5倍μL 1 x洗缓冲区,50μL 1 x生物素化的脂联素抗体被添加到每个好,培养1小时。5次洗涤后200年μL 1 x洗缓冲区,50μL 1 x streptavidin-peroxidase共轭被添加到每个,孵化了30分钟。5次洗涤后200年μL 1 x洗缓冲区,50μL的发色体基质添加到每个好,并孵化到最优蓝色密度发展。50μL停止的解决方案是添加到每个好,然后吸光度估计标在波长为450 nm。

脂联素浓度的样品是由插值从标准曲线用标准样品由制造商提供,并表示在ng / mL。

2.11。肝脏中甘油三酯和ATP含量

酶比色测定工具是用来测量肝组织甘油三酯浓度,根据制造商的指示。样品制备过程如下。肝组织在冰冷的PBS冲洗以去除多余的血液。切碎的肝组织的300毫克是均质2毫升的标准稀释剂稀释。提取离心机在10000 g×10分钟在4°C,然后是浮在表面的被转移到另一个管。上层清液样本稀释的比例1:在使用前5。标准和样品的解决方案(10μL)被添加到井,稀释酶缓冲溶液(150μL)被添加到每个。之后,盘子小心地动摇了几秒钟,覆盖着一个密封带,在室温下孵化15分钟。540纳米的吸光度测量使用标。甘油三酯浓度标准曲线的样本由插值准备使用标准的解决方案,并表示在mg / dL。

ATP浓度使用酶联免疫试剂盒在肝脏组织进行了分析,根据制造商的指示。多余的血液肝组织被冰冷的PBS冲毁。300毫克的切碎的肝脏组织在500年被均质μPBS的L。提取受到两个冻融周期进一步破坏细胞膜。匀浆是离心机15分钟在1500×g,然后立即上层清液的化验。简单地说,标准和样品(100μL)被添加到井,紧随其后的是共轭的解决方案(50μL),板上覆盖和孵化1 h在37°C。洗板后,底物溶液(100μL)被添加到每个好,板上覆盖和孵化10分钟37°C。之后,停止的解决方案是添加,吸光度测量使用标在450海里。ATP浓度样本是由插值从标准曲线用标准样品由制造商提供,并表示在ng / mL。

2.12。琥珀酸脱氢酶(SDH)活性测定

肝组织均质在PBS含有1%蛋白酶抑制剂鸡尾酒。均质提取在13000转离心5分钟在4°C,和上层清液转移到新管。孵化解决方案包括25μ125年1 mol磷酸盐缓冲剂,LμL(0.2摩尔琥珀酸钠,25岁μL 10毫克/毫升氮蓝四唑(电视台),和235年μL的蒸馏水,每个反应,样本与它孵化20分钟在37°C。酶解(90μL)被添加到410μL prewarmed孵化解决方案的,反应混合物在孵化37°C。反应后,吸光度测量在550海里。

2.13。统计分析

数据提出了均值±SEM(标准误差的手段)。统计上显著的差异未配对的两组计算t以及,单向方差分析测试是用来比较的三个或更多组。当值小于0.05,它被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。rt - pcr结果PPARδ,PPARα,PPARδ与棕榈酸酯和Fimasartan HepG2细胞治疗

Fimasartan治疗增加了PPAR的信使rna表达水平δ而高脂肪酸控制。但PPAR的mRNA水平α和PPARγ没有改变了fimasartan正常和高脂肪酸条件(图1)。

3.2。免疫印迹分析PPARδAMPK, ACC FAS 11β-HSDH1,肿瘤坏死因子-α,MCD MCAD, PGC-1α与棕榈酸酯和Fimasartan HepG2细胞治疗

PPARδ广泛表达在很多组织如肝,心,冒号,骨骼肌,及其功能可能与一些慢性疾病,包括糖尿病、肥胖症、动脉粥样硬化和癌症(11,12]。

HepG2细胞治疗PPAR棕榈酸酯表现出下降趋势δ的价格水平,相比之下控制;然而,水平升高了fimasartan cotreatment(图2(一个))。

AMPK参与许多病理生理反应如糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化、血脂异常、炎症和癌症,以及调节细胞能量体内平衡(13,14]。磷酸化AMPK活性形式的AMPK,磷酸化AMPK水平相比是更增加了fimasartan只棕榈酸酯治疗组在HepG2细胞(图2 (b))。

ACC催化生产malonyl-CoA乙酰辅酶a,然后malonyl-CoA运送到了脂肪酸合成途径。通过ACC AMPK调节脂肪酸合成反应,这种蛋白质的磷酸化形式是不活跃的。Fimasartan显著增加蛋白质的磷酸化水平相比ACC棕榈酸酯治疗控制HepG2细胞(图2 (c))。

FAS的主要功能是促进棕榈酸酯的合成乙酰辅酶a和malonyl-CoA NADPH的存在(15]。

FAS蛋白表达的增加引起的棕榈酸酯被fimasartan回到正常水平的治疗(图2 (d))。

皮质醇释放的控制下hypothalamus-pituitary gland-adrenal腺(HPA)轴。促肾上腺皮质激素释放激素以应对压力,(CRH)从下丘脑分泌,CRH刺激释放从垂体前叶促肾上腺皮质激素(ACTH),然后ACTH诱发肾上腺皮质分泌的皮质醇。皮质醇浓度由11严格监管β-hydroxysteroid脱氢酶类型1和2。11β-hydroxysteroid脱氢酶1型,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)还原酶的依赖,产生皮质醇和可的松,而2型同工酶,NAD-dependent脱氢酶,将皮质醇可的松(16]。这也发生在局部组织,包括肝脏和脂肪组织。11的表达β-HSDH1蛋白质增加了棕榈酸酯治疗,但抑制fimasartan治疗后(图2 (e)),这已经证明在这里第一次。

肿瘤坏死因子-α是一个代表炎性细胞因子;在我们的研究中,其表达式显示增加趋势,棕榈酸酯。然而,fimasartan治疗抑制TNF的表达α以下HepG2细胞(图的控制水平2 (f))。

当malonyl-CoA脱羧酶(MCD)是激活AMPK,它能抑制脂肪酸合成(17]。中链酰coa脱氢酶(MCAD)是参与脂肪酸氧化,并由AMPK [18]。价格上调的蛋白水平和MCAD比高更增加了fimasartan脂肪酸治疗组,和PPARδ拮抗剂(GSK0660)治疗降低这些表达式(图显示,趋势2 (h))。

PPARδ拮抗剂,GSK0660,导致减少p-AMPK PGC-1α表达水平,增加了fimasartan治疗。这表明,PPARδ可以调节AMPK和PGC-1吗α表达式(数据2 (g)和2 (h))。

3.3。油红O染色HepG2细胞和分化3 t3-l1处理棕榈酸酯,Fimasartan, PPARδ拮抗剂,GSK0660

HepG2细胞和分化3 t3-l1棕榈酸酯显示处理强度的增加油红O染色相比,参与细胞。然而,fimasartan治疗后,染色强度降低(数字3(一个)和3 (c))。吸光度测量证实这些结果(数据3 (b)和3 (d))。

3.4。浓度的总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,GPT与WKY大鼠血清样本和萎缩

总胆固醇的浓度,高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇与fimasartan治疗(数据没有显著改变4(一)- - - - - -4 (c))。但是,在得到的情况下,浓度显著升高血清样本的萎缩与WKY大鼠相比,血清中浓度的增加和萎缩的规范化水平(图fimasartan WKY大鼠的治疗4 (d))。GPT水平增加在萎缩10%的脂肪饮食与WKY大鼠相比,和增加水平下降了fimasartan治疗。高脂肪饮食在萎缩60%,GPT水平更增加了与WKY大鼠相比,和fimasartan治疗组显示(图的趋势降低水平4 (e))。

3.5。PPAR的确定δAMPK, PGC-1α蛋白质含量、SDH活性和肝组织ATP浓度样品与WKY大鼠隔离和萎缩

PPARδ、p-AMPK PGC-1α蛋白质水平是显著增加肝脏组织中分离出月喂食高脂肪的饮食和fimasartan隔绝与样品相比对照组喂食高脂肪的饮食(数字5(一个)- - - - - -5 (c))。琥珀酸脱氢酶位于内线粒体膜的哺乳动物,它构成了三羧酸循环和电子传递系统。SDH活性和ATP水平被证明是减少肝组织样本来自月喂食高脂肪的饮食,与这些相比,测量样品来自WKY大鼠。然而,fimasartan治疗后,SDH活性和ATP浓度显著增加,与未经处理的高脂肪饮食控制(数字5 (d)和5 (e))。

3.6。他走时染色和内脏脂肪组织中脂联素浓度与WKY大鼠和萎缩

作为单位平方在脂肪组织中脂肪细胞的大小增加,脂肪细胞的数量减少。因此,计算单位面积上的脂肪细胞的数量能代表间接脂质积累的程度。

内脏脂肪组织幻灯片)染色后,脂肪细胞的数量单位平方(5461.06μ米²)是减少月美联储正常饮食含有10%的脂肪与WKY大鼠相比,而数量却降低了更多高脂肪饮食在萎缩60%。但fimasartan治疗增加脂肪细胞的数量在这两个月美联储10%的脂肪饮食和萎缩60%高脂肪饮食(数据6(一)和6 (b))。

内脏脂肪组织中脂联素浓度的萎缩60%高脂肪饮食与WKY大鼠相比下降;然而,浓度增加fimasartan(图6 (c))。

3.7。表达水平的11β-HSDH1、圆)染色强度和甘油三酯浓度与WKY大鼠肝组织样本和萎缩

Fimasartan治疗是减少11所示β-HSDH1表达肝脏组织样本隔绝月美联储正常或高脂肪的饮食(数字7(一)和7 (b))。脂质含量,证明是增加老鼠喂食高脂肪的饮食,减少了fimasartan治疗肝萎缩的样本。然而,没有区别在脂滴观察内容属于正常饮食组大鼠与正常饮食和fimasartan治疗月组(图7 (c))。甘油三酸酯水平治疗后肝组织中明显减少fimasartan月美联储高脂肪饮食(图7 (d))。这表明fimasartan展的降血脂药活动只有在hyperlipidemic条件。

4所示。讨论

有氧运动可以导致各种有益身体的变化,如减少体重,脂肪,和血压,增加高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平。此外,它可以在静息心率有好处,身体健康,动脉硬化患者中代谢综合征(19]。在分子生物学方面,运动增加氧化代谢通过PGC-1的规定α、柠檬酸合成酶和SDH。和运动所施加的影响调制AMPK [20.]。

代谢综合征通常是由营养过剩和缺乏身体活动,它可以最终发展一些与生活方式有关的疾病,如2型糖尿病和心血管疾病。大鼠模型中的表达代谢综合症(月/ NDmcr -cp),跑步运动的骨骼肌纤维类型转变成高度氧化的形式。此外,锻炼PGC-1增加α信使rna表达和SDH活性在骨骼肌21]。

PPARδ和AMPK 1型肌纤维的关键调节规范和耐力适应在运动。换句话说,PPAR的激活δAMPK可以诱导氧化代谢的海拔20.,22]。

氧化代谢缺陷代表非酒精性脂肪肝的可能原因之一。例如,PGC-1的肝细胞α缺乏的老鼠已经减少脂肪酸氧化和线粒体呼吸率(23),和非酒精性脂肪肝与线粒体功能障碍(24]。

基于这些研究结果,我们推测锻炼的有利影响是对通过氧化代谢的增加PGC-1的调制α、柠檬酸合成酶和SDH。这些生物标记被PPAR监管δ因此,AMPK,氧化代谢的激活可以通过刺激PPAR诱导δAMPK, PGC-1α活动。

在这里,我们表明,PPAR fimasartan增加δ,PGC-1αp-AMPK p-ACC, MCD, MCAD水平HepG2细胞治疗高脂肪酸和FAS表达水平的降低,11β-HSDH1, TNF -α,增加了高脂肪酸治疗。此外,fimasartan PPAR的蛋白质含量增加δ、p-AMPK PGC-1α在肝脏样本月喂食高脂肪的饮食,和治疗这种化合物的活性升高SDH和ATP水平;也显著降低甘油三酸酯水平在肝脏样本来自这些老鼠。

PPARδ拮抗剂,GSK0660显示抑制fimasartan影响p-AMPK PGC-1α与高脂肪酸水平HepG2细胞治疗。此外,它阻止脂质含量的减少HepG2细胞和3 t3-l1 fimasartan对待。

这些结果表明,fimasartan改善脂质代谢在肝脏主要通过氧化代谢的激活hyperlipidemic条件,以及fimasartan的影响主要是对PPAR的调制δ。

以前的一些研究报道,11β-HSDH1参与脂肪酸的新陈代谢。抑制11β-HSDH1体重增加,减少食物摄入,脂肪垫重量在食源性肥胖小鼠模型(戴奥)和2型糖尿病和动脉粥样硬化小鼠模型,载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE) (25]。另外,11β-HSDH1基因敲除小鼠被证明是抗高血糖引起的肥胖和压力,他们抵抗素和TNF -较低α水平和高PPARγ解偶联蛋白2 (UCP2)水平与这些相比在控制(26]。此外,PPAR (α,γ,δ)锅受体激动剂,苯扎贝特,是导致减少11所示β-HSDH1基因表达在db / db的老鼠的肝脏和骨骼肌组织(27]。在这项研究中,我们表明,fimasartan减少11的水平β-HSDH1、FAS和TNF -α增加高脂肪酸的条件下和诱发p-ACC的表达。

脂联素水平之间的相互关系,脂质代谢,代谢疾病研究相对较好。几个例子如下:脂联素治疗减少脂质积累在人类巨噬细胞细胞28),脂联素调节能量代谢调控AMPK-ACC通路(29日],在肥胖人群中血清脂联素浓度较低的2型糖尿病患者和非酒精性脂肪肝(30.]。

在先前的研究中,替米沙坦诱导血清脂联素水平的增加和形态学的改变(减少的细胞大小)附睾的脂肪细胞在高脂饮食的老鼠31日],irbesartan治疗减少了水平和脂肪细胞直径的载脂蛋白E基因敲除小鼠(32),肝脂肪变性的增加,循环转氨酶的活动如有和GPT增加比例(33,34]。通过这些文章,可以推测脂联素参与改善血脂异常,和脂肪细胞的大小代表一个健康的脂质代谢指标。

在我们的研究中,fimasartan治疗内脏脂肪组织的脂联素水平增加月给予60%的高脂肪饮食;然而,在参与月美联储60%的高脂肪饮食,水平降低与WKY大鼠相比。此外,内脏脂肪细胞的大小被fimasartan较小的治疗。因此,人们猜测fimasartan通过脂联素调节部分改善脂质代谢。此外,在我们的研究中,有和GPT活动的减少fimasartan另外一个明确的证据表明fimasartan改善非酒精性脂肪肝。

总之,fimasartan可能改善非酒精性脂肪肝主要通过氧化代谢的激活由PPAR表示δ-AMPK-PGC-1α通路,其影响可能是另外来自抑制脂肪酸合成(11β-HSDH1、FAS和ACC)和炎症(TNFα),脂肪酸氧化的海拔(MCD和MCAD)和脂联素水平(图8)。

在我们的研究中,PPAR的mRNA水平α和PPARγ没有改变了fimasartan治疗(图1),PPARα蛋白表达减少fimasartan HepG2细胞(附加图在网上补充材料https://doi.org/10.1155/2017/8048720),其水平是没有改变与肝组织的萎缩60% fimasartan高脂肪饮食(附加图)。因此,它可以建议PPARδ的主要目标是fimasartan肝脏hyperlipidemic和高血压的条件。但这种假设应该严格证明通过额外的研究包括更多的实验fimasartan在脂肪酸氧化的影响研究。

的利益冲突

作者曾参与本研究宣称,他们没有任何披露关于资金或利益冲突的关于这个手稿。

确认

这项工作是支持的高丽大学授予由Boryung制药有限公司有限公司(批准号Q1409421),韩国University-Korea研究所科技融合学校(批准号R1435292),韩国科学和技术研究所的机构计划(项目没有。2 e25360),韩国大学授予。

补充材料