文摘
本研究的目的是了解的神经保护作用和机制thiazolidinedione吡格列酮在两种在体外和在活的有机体内MPP+注射/ MPTP药物诱导帕金森病模型。在活的有机体内实验结果表明,吡格列酮的口服治疗导致行为的显著改善症状注射了MPTP药物和TH阳性神经元的存活率增加吡格列酮干预组。此外,吡格列酮的口服治疗增加了过氧物酶体的表达proliferator-activated受体-γ共激活剂(1)(PGC-1)和线粒体的数量增加,以及一个观察线粒体超微结构的改善。从在体外研究2 4-thiazolidinedione导致增加水平的分子调控线粒体的功能,包括PGC-1,核呼吸因子1 (NRF1), NRF2,和线粒体融合2(进行Mfn2),抑制线粒体分裂1 (Fis1)。我们表明,蛋白质含量的bcl - 2和ERK在MPP减少+治疗组与对照组相比。这种效应被观察到的逆转在治疗2,4-thiazolidinedione, bcl - 2和ERK表达水平增加。我们还观察到凋亡蛋白水平巴克斯表现出相反的变化相比,bcl - 2和ERK的水平。这项研究的结果证实,吡格列酮/ 2,4-thiazolidinedione能够激活PGC-1和防止多巴胺能神经元的损伤和恢复线粒体超微结构通过调节线粒体的功能。
1。介绍
帕金森病(PD)是一种神经退行性疾病,其特征是进步的多巴胺能神经元的变性和死亡在黑质致密部(SNc)。多巴胺能神经元死亡结果在黑传播失衡,导致严重的运动症状,包括静止震颤,肌肉僵硬,动作迟缓,姿势不稳定(1,2]。目前的治疗方案帕金森病的的病人包括使用左旋多巴和于非多巴治疗(3,4]。这些药物缓解只与帕金森病相关的症状,不防止多巴胺能神经元的变性。因此,不阻止疾病的进展和治疗效果观察这些疗法减少了随着时间的推移,随着疾病的进展。大量的研究表明,线粒体功能障碍和氧化应激都扮演着至关重要的角色在PD的发病和进展5,6]。线粒体发挥关键作用在维持适当的细胞生理学,因为这些细胞器的维护是必不可少的细胞生物能疗法和细胞死亡的门槛的调制。因此,细胞机制负责线粒体质量控制的规定获得利益。我们假设线粒体可以作为潜在的药物预防和治疗PD的目标。
最近,核转录辅激活过氧物酶体proliferator-activated受体-γ共激活剂(1)α(PGC-1α)增加了兴趣在许多领域的研究。这种蛋白质的调控中发挥着重要作用线粒体生物起源。越来越多的证据表明,PGC-1的表情α减少在PD患者的黑质(7]。其他研究已经表明,过氧物酶体proliferator-activated receptor-gamma受体激动剂证明PD模型中的保护作用[8- - - - - -10]。保护机制被证明是归因于抗炎(9和抗氧化11)的影响,但具体机制还不清楚。我们假设thiazolidinedione激活PGC-1的表情α,增加的PGC-1水平α,并提供了通过调节线粒体功能的神经保护作用。过氧物酶体proliferator-activated受体-α、过氧物酶体proliferator-activated受体-β、过氧物酶体proliferator-activated受体-γ是核受体家族的成员由配体激活。噻唑烷二酮类)是药物合成高亲和力配体的过氧化物酶proliferation-activated受体-γ(PPAR -γ),包括troglitazone、罗格列酮和吡格列酮(12]。目前,troglitazone和罗格列酮已被证明存在局限性出于安全考虑,从市场撤回13,14]。因此,我们使用吡格列酮在这项研究中,这是一种药物用于临床治疗2型糖尿病。这种药物是PPAR -α和PPAR -γ受体激动剂(15),主要是PPAR激动剂——γ。理解是否PPAR -γ受体激动剂、thiazolidinedione调节PGC-1的表达水平α,导致改善线粒体功能,我们使用两种在体外和在活的有机体内MPP+注射/ MPTP药物PD模型。这些模型,我们测试了分子的表达水平被认为与线粒体的规定,包括PGC-1α,核呼吸因子1 (NRF1)、核呼吸因子2 (NRF2),线粒体分裂1 (Fis1),线粒体融合2(进行Mfn2)。
2。实验的程序
2.1。动物
实验使用雄性老鼠(C57BL / 6)重23至25克(从河北医科大学实验动物中心购买)。所有动物实验进行了符合国家健康研究所的指导的护理和使用实验动物(NIH出版物编号80 - 23)。河北师范大学伦理委员会批准了这项实验。所有的努力都是尽量减少动物痛苦和减少在这项研究中使用的动物数量。
2.2。化学物质
MPTP, MPP+4-TZD 2 4-thiazolidinedione(2),和兔子anti-TH(酪氨酸羟化酶(TH);产品编号:T8700)多克隆抗体都从Sigma-Aldrich购买。盐酸吡格列酮片是从武田制药有限公司购买的。鼠标anti-PGC-1α单克隆抗体(产品编号:ST1202)购买的微孔。兔子anti-NRF1多克隆抗体(产品目录号:12482 - 1 - ap),兔子anti-NRF2多克隆抗体(产品目录号:21542 - 1 - ap),兔子anti-Fis1多克隆抗体(产品目录号:10956 - 1 - ap),和兔子anti-Mfn2多克隆抗体(产品目录号:12186 - 1 - ap)从Proteintech购买。兔子anti-Bcl-2多克隆抗体(目录号:YT5756)和兔anti-Bax多克隆抗体(目录号:YT0459)从ImmunoWay购买生物技术公司。鼠标anti-ERK单克隆抗体(目录号:AM2189b)从Abgent无锡有限公司购买了荧光标记,二次抗体结合异硫氰酸荧光素(FITC)或四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)使用(1:300;GSGB-Bio)。兔子反β肌动蛋白抗体主要是购买的bios的公司。辣根过氧化物酶(合)共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白(稀释1:5000年,目录号:ZB2301)或anti-mouse免疫球蛋白g (1: 5000;产品目录号:106912)二级抗体购自北京ZSGB-Bio有限公司
2.3。动物分组
动物被随机分为六组:对照组,吡格列酮(Pio)集团MPTP组注射(MPTP药物),10毫克/公斤干预组注射(MPTP药物+ 10毫克/公斤Pio), 20毫克/公斤干预组注射(MPTP药物+ 20毫克/公斤Pio)和40毫克/公斤干预组注射(MPTP药物+ 40毫克/公斤Pio)。对照组收到腹腔内注射生理盐水的小鼠每天每天从次10到14天,胃内的注入水为17天。在Pio组,其他条件不变,除了水40毫克/公斤Pio所取代。MPTP-treated老鼠注射收到腹腔内注射MPTP药物溶解在盐水(30毫克/公斤体重)每天一次5天(从第十天到第14天),和水管理intragastrically 17天。给予三个干预组小鼠intragastrically适当剂量的Pio 17 d根据分组,从第十天到14天,小鼠给予腹腔注射相同剂量的MPTP药物注射的MPTP药物组为5天。吡格列酮溶解在饮用水的吡格列酮干预组和吡格列酮组。
行为测试(独立的后方,rotarod和游泳)之前执行第一个和第二个小时后注射后最终MPTP药物注入。动物牺牲注射最后MPTP药物注射后三天。免疫荧光研究检测蛋白进行定位和半定量的TH和PGC-1的变化分析α的水平。每组六个动物使用。蛋白表达与线粒体超微结构研究,每组四个动物使用。
2.4。细胞培养的治疗
SH-SY5Y杜尔贝科修改鹰的培养基培养细胞含10%胎牛血清的边后卫。文化包含1%青霉素、链霉素和维持在湿润的气氛中含有5%的股份有限公司2在37°C。细胞被镀在1×105细胞/毫升10厘米培养皿中过夜。然后他们被随机分配到对照组,边际产量+组,2,4-thiazolidinedione (2, 4-TZD)干预组(0.01,0.1,1和10μ米)。对照组,DMEM基础培养基是补充道。1更易与L MPP的浓度+(集成电路50)是在MPP中使用+治疗和2,4-TZD干预组。MPP+和不同剂量的2,4-TZD被添加到细胞在同一时间。细胞培养24小时的治疗方法。治疗期后,提取蛋白质免疫印迹实验。
2.5。行为评估
2.5.1。运动活动
观察小鼠的行为变化的熟悉和关闭,安静,和黑暗的环境中,老鼠被放置在自主活动的核心部分测试人员和独立的号码记录在5分钟之内。
2.5.2。游泳测试
在游泳测试中,老鼠被放置在水浴缸根据唐南描述的方法等。16)和Haobam et al。17],水深是40厘米和温度之间保持35°C和36°C。两分钟后测试,老鼠碎银,回到笼子里。老鼠的保留时间与他们的头在水面上漂浮,没有滑动的四肢被记录在2分钟。
2.5.3。Rotarod测试
为了研究运动平衡能力和肢体肌肉力量的老鼠,我们进行rotarod测试。老鼠走了一个旋转杆与杆的速度30 rpm。杆上的保留时间5分钟内被记录。
2.6。免疫荧光
注射第三天最后的腹腔内MPTP药物注入,动物深感麻醉注射戊巴比妥钠(40毫克/公斤,i.p。)和灌注transcardially使用10毫升的盐水,紧随其后的是一个卷的40毫升的磷酸盐缓冲剂(PB;pH值7.4)包含4%的多聚甲醛。大脑被立即删除并放置在0.1 PB含20%蔗糖在一夜之间在4°C。第二天,中脑样本含SN连续切成30的日冕部分μ米厚度使用冷冻切片机。两套部分与兔子孵化anti-TH免疫球蛋白g(1: 5000稀释)和鼠标anti-PGC-1α免疫球蛋白g(1: 1000稀释)24小时在室温下0.01 PBS中含2%正常驴血清和特里同x - 100年的0.1%。0.01 PBS的部分被冲洗,然后用TRITC-conjugated孵化山羊anti-mouse免疫球蛋白或山羊anti-rabbit免疫球蛋白g(1: 300稀释)的抗体稀释剂在室温下4小时。与PBS清洗步骤后,部分是安装在gelatin-coated玻璃幻灯片。幻灯片满是0.01 PBS含有50%甘油和荧光显微镜下检查(奥林巴斯BX51)。
2.7。透射电子显微镜分析
注射第三天最后的腹腔内MPTP药物注入,动物深感麻醉注射戊巴比妥钠(40毫克/公斤,i.p。)和灌注transcardially卷10毫升的盐水,紧随其后的是一个卷的40毫升的磷酸盐缓冲剂(PB;包含4%的多聚甲醛和2.5%的戊二醛pH值7.4)。大脑包括中脑SN立即被移除,放置在包含灌注4%戊二醛和多聚甲醛为24小时。组织样本然后用0.1洗了三次磷酸盐缓冲剂和后缀四氧化锇1% 1.5小时,其次是使用梯度酒精脱水系列。样本然后嵌入在环氧树脂,可以巩固26小时60°C。选择感兴趣的区域使用立体显微镜和透射光图像的大脑部分。感兴趣的领域是用刀片切成梯形截面为进一步削减和切片。组织样本被切成50纳米超薄部分。部分被double-stained 0.5%醋酸双氧铀和3%柠檬酸铅然后使用透射电子显微镜成像在80 kV (h - 7650)。
2.8。西方墨点法
免疫印迹进行确认PGC-1的蛋白质含量α,NRF2 NRF1 Fis1,进行Mfn2。此外,免疫印迹也用于监测细胞的变化信号使用bcl - 2这样的标记,伯灵顿,兵。总之,SH-SY5Y细胞被收集并放在一个埃普多夫管,然后细胞离心15分钟在4°C,和上层的移除。冷Radio-Immunoprecipitation试验(里帕)裂解缓冲(1毫升里帕包含10μL phenylmethanesulfonyl氟化物)被添加到溶解细胞。细胞匀浆在12000转离心20分钟在4°C去除细胞碎片。蛋白质浓度测定使用超微紫外-可见分光光度计。凝胶样品含有50μg细胞总蛋白被煮10分钟,然后10% SDS-polyacrylamide凝胶凝胶电泳分离。样品在凝胶被转移到PVDF(聚偏二氟乙烯)膜(微孔)。膜被孵化与阻断缓冲区包含5%脱脂牛奶2小时阻止非特异性结合位点。膜被孵化与兔子anti-TH(1: 5000稀释),鼠标anti-PGC-1α(1:1000稀释),兔子anti-NRF1(1: 500稀释),兔子anti-NRF2(1: 1000稀释),兔子anti-Fis1(1: 500稀释),兔子anti-Mfn2(1: 1000稀释),兔子anti-Bcl-2(1: 1000稀释),兔子anti-Bax(1: 1000稀释),或鼠标anti-ERK免疫球蛋白g(1: 1000稀释)一夜之间在4°C。膜清洗三次Tris-Buffered盐水和渐变20 (TBST) 30分钟。然后用相应的二级抗体膜被孵化合共轭anti-mouse或anti-rabbit免疫球蛋白)在室温下2小时。膜与TBST 30分钟洗了三次了。通过增强化学发光蛋白乐队是可视化方法使用ECL工具包。乐队使用扫描仪进行扫描和量化使用数量一个软件。
2.9。数据收集和统计分析
半定量的分析,TH-positive神经元在SNc和PGC-1α阳性细胞在黑质(SN)计算每个幻灯片。每个鼠标有5张幻灯片,每组有六个老鼠。Image-Pro + 6.0 TH - PGC-1被用来计数α阳性细胞。阳性细胞的数量被表示为平均数±标准差。统计分析与方差分析其次是LSD测试参数分析。统计分析了使用SPSS 13.0版,意义的α水平设置为0.05。
3所示。结果
3.1。行为评估
为了研究吡格列酮的影响在MPTP-treated小鼠运动和平衡能力,行为进行了研究。我们使用了独立后,在一个旋转杆运动,游泳后连续注射管理MPTP药物(每天一次)行为测试。我们表明,MPTP-treated老鼠表现出显著减少饲养频率控制老鼠相比(图1(一))。旋转杆的运动保留时间还发现在MPTP-treated显著降低小鼠(图1 (b))。然而,没有滑动的漂浮在水面的时间观察肢体增加控制老鼠相比(图1 (c))。饲养频率,游泳时间和运行时间的rotarod都发现增加干预组。吡格列酮组动物表现出性能符合控制动物。
(一)
(b)
(c)
3.2。吡格列酮增加注射TH-Positive神经元的生存在SNc受到MPTP药物
黑系统的完整性评估通过分析多巴胺神经元的数量在SNc TH免疫荧光。TH-positive神经元的数量被发现显著下降相比,老鼠注射接受连续的MPTP药物控制和吡格列酮组(图2 (g))。口服吡格列酮的注射前MPTP药物治疗,结果发现TH-positive神经元的数目的增加小鼠注射相比MPTP药物(数字2 (d)- - - - - -2 (f))。然而,无统计差异三个干预组(图之间的检测2 (g))。此外,数量没有显著改变TH-positive神经元控制老鼠和老鼠之间的观察吡格列酮组。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
3.3。吡格列酮增加了PGC-1α表达式
PGC-1α是主要的转录因子参与调节线粒体生物起源。我们用免疫荧光来洞察SN神经元线粒体功能。具体地说,我们分析了PGC-1水平的变化α了解细胞pioglitazone-mediated神经保护的目标在我们的PD模型。我们没有检测PGC-1有所不同α表达水平在对照组和吡格列酮组。然而,PGC-1的数量α注射后观察阳性细胞减少MPTP药物治疗,效果与吡格列酮治疗可以逆转。然而,我们没有注射观察统计区别MPTP药物组和10毫克/公斤吡格列酮干预组,和没有区别20毫克/公斤吡格列酮干预组和40毫克/公斤吡格列酮干预组(图3)()。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
3.4。吡格列酮在线粒体超微结构的影响
透射电子显微镜(TEM)是用来观察线粒体超微结构的变化在SNc每个治疗组。图4显示的存在许多细胞核周围的线粒体在对照组的样本,观察到没有肿胀的现象。此外,线粒体膜被发现被集成,线粒体嵴观察。然而,注射在MPTP药物组,几乎没有观察周围的细胞核,线粒体和细胞核被认为与严重萎缩脱髓鞘现象。线粒体数量增加(图4 (f)改善后)和线粒体超微结构观察吡格列酮治疗(数字4 (c)- - - - - -4 (e))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
3.5。2的影响,4-Thiazolidinedione PGC-1 (2, 4-TZD)α、NRF1 NRF2蛋白质水平
由于吡格列酮固体剂型,培养基中很难溶解,所以我们用粉末状的药物中间体2,4-thiazolidinedione (2, 4-TZD)检查在SN多巴胺神经元吡格列酮的保护机制。通过免疫印迹,我们发现PGC-1αMPP蛋白质含量减少+组相对于对照组()。此外,我们发现,干预2 4-TZD治疗导致PGC-1增加α蛋白质含量在0.1和1μmol / L 2, 4-TZD治疗组(数字5(一个)和5 (b))。然而,这些增加的水平仍低于对照组。
(一)
(b)
(c)
(d)
我们接下来关注理解如果2,4-TZD PGC-1通过下游信号起保护作用α,如NRF1和NRF2。我们表明,NRF1 MPP和NRF2蛋白质水平降低+组相对于对照组()。然而,这些水平增加了0.01,0.1,1μmol / L 2, 4-TZD MPP相比治疗组+集团()。没有观察到显著差异之间的三个2,4-TZD干预组。此外,10μmol / L 2, 4-TZD没有观察到有明显的蛋白质含量(数字效果5(一个),5 (c),5 (d))。
3.6。2的影响,4-TZD线粒体核裂变和核聚变
评估的影响2、4-TZD线粒体功能,我们分析了线粒体功能相关蛋白裂变(Fis1)和融合通过免疫印迹(进行Mfn2)表达水平。在MPP Fis1水平+组显著高于对照组()。此外,2,观察4-TZD干预减少Fis1蛋白质水平,有显著差异观察在0.01和0.1之间μmol / L 2, 4-TZD-treated MPP的团体相比,+集团()。没有观察到的统计差异之间的1μmol / L 2, 4-TZD-treated组和MPP+集团(数据6(一)和6 (b))。
(一)
(b)
(c)
进行Mfn2 MPP后观察蛋白质含量下降+治疗相比,对照组(数字6(一)和6 (c))。在治疗0.01、0.1或1μmol / L 2 4-TZD进行Mfn2蛋白水平被发现MPP相比大大增加+集团(),没有观察到的差异的三个2,4-TZD干预组。
3.7。2的影响,4-TZD伯灵顿的表达、bcl - 2、兵
为了监控信号通路的变化,伯灵顿、bcl - 2,和ERK蛋白水平检测到免疫印迹。伯灵顿水平被发现MPP的增加+组与对照组相比。然而,伯灵顿观察蛋白质含量减少低浓度2后,4-TZD治疗。伯灵顿水平相比变化观察,bcl - 2蛋白的水平,显示了相反的变化(图7)。这里给出的结果表明,0.01和0.1μmol / L 2, 4-TZD治疗表现出增强的保护作用。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
4所示。讨论
吡格列酮是一种thiazolidinedione药物,已得到了越来越多的兴趣由于其抗炎(9,18和抗氧化性能19在神经退行性疾病,如帕金森病(20.- - - - - -22]。炎症和氧化应激密切相关的线粒体功能,和PGC-1α是参与调节线粒体生物起源的关键因素。所以我们想知道如果注射吡格列酮可以调节线粒体功能受损MPTP药物和边际产量+在多巴胺能神经元。
在我们的研究中,我们观察到MPTP-treated老鼠表现出异常的机动能力,比如减少饲养频率(指示降低中枢神经系统的功能),降低运动保留时间的旋转杆(电机平衡和肌肉协调能力指示赤字),和长期漂浮在水面的时间没有滑动的肢体运动功能障碍(象征)。这些观察是类似于以前的研究报道23,24]。然而,在政府吡格列酮的17天,我们观察到小鼠的运动能力上面提到的MPTP-treated相比提高了老鼠。我们观察到类似的结果与其他研究进行与吡格列酮的抗炎作用与观察吡格列酮预处理减少胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平(数据未显示)20.),在SNc增加TH-positive神经元的数量,和救援赤字电动机的性能。在我们目前的研究中,我们发现,与吡格列酮预处理导致线粒体超微结构的改变多巴胺能细胞注射后的SNc MPTP药物伤害。炎症和活性氧都影响线粒体功能,这是细胞生存和凋亡的关键节点。因此,吡格列酮的保护作用的目标通过PGC-1可能参与调节线粒体功能α。
线粒体是负责向细胞提供能量。PGC-1α线粒体生物起源的主要调节因子,它能够调节线粒体复制和转录因子,如NRF1和NRF2 [1]。这些因素可以结合线粒体基因启动子,等βatp合酶、细胞色素C氧化第四单元和线粒体转录因子(mtTFA)。mtDNA是重要的合成的酶参与线粒体呼吸链。有一个研究,描述PGC-1的重要性在两个线粒体能量代谢的保养和维修7]。这项研究还表明,PGC-1α黑质多巴胺能神经元的表达水平降低PD患者。然而,PGC-1激活α表达导致的表达水平增加线粒体呼吸链编码单元,拯救DA神经元的损失由α-突触核蛋白和鱼藤酮诱导。此外,另一项研究表明,PGC-1的混战α基因扩增与α-突触核蛋白聚集相关的毒性损伤(25]。在这里,我们表明,PGC-1α注射后表达降低MPTP药物/ MPP+治疗,效果视为拯救吡格列酮干预治疗或2,4-thiazolidinedione。另外,我们观察到的变化在NRF1 PGC-1和NRF2水平与变化的水平。一些研究人员表明,锌指蛋白、巴黎(ZNF746),发现积累在人类大脑PD (1,26]。这是发现导致PGC-1表达水平的降低,随后抑制NRF1,在线粒体蛋白质的重要功能和氧化剂的新陈代谢。现有的数据表明,PGC-1α过度会导致增加线粒体生物起源在心肌细胞模型(26,27]。此外,PGC-1α基因敲除小鼠已被证明有降低线粒体的数量,以及减少线粒体呼吸慢肌纤维的能力(26]。
线粒体组成一个网络,不断发生核裂变和核聚变保持平衡。我们研究线粒体分裂和线粒体融合评估线粒体的功能。从我们的研究中,我们表明一定浓度范围的2,4-thiazolidinedione预防细胞死亡(数据显示在网上补充材料https://doi.org/10.1155/2017/4089214)。我们观察到在中进行Mfn2 Fis1 / MPP的比例显著降低+组,这表明核裂变和核聚变之间的平衡被打破了。然而一定浓度范围的2,4-thiazolidinedione之间导致改善线粒体在细胞受到MPP核裂变和核聚变+。线粒体核裂变和核聚变中扮演关键的角色维护线粒体的质量。线粒体融合减少压力通过混合的内容部分受损的线粒体是一种互补。裂变是一个关键的过程需要创建新的线粒体,同时也导致质量控制机制通过促进移除受损的线粒体。之前有研究表明,过度的Fis1导致增加线粒体分裂,最终导致细胞凋亡或引发自噬28,29日]。有一项研究表明,是由PGC-1中进行Mfn2表达α/犯错α,这两个进行Mfn2激活转录活动(30.]。研究人员发现,进行Mfn2激活促进线粒体融合和功能保护线粒体免受自由基损伤(31日]。这些研究也有类似的结果在我们的研究中观察到。
先前的研究已经表明,罗格列酮展品SH-SY5Y细胞保护作用,保护细胞免受细胞凋亡诱导抗氧化酶的表达和调节bcl - 2、Bax表达(11,32]。从我们的研究结果表明,伯灵顿的表达,一种蛋白质参与线粒体凋亡信号,在边际产量增加+组。我们还观察到凋亡蛋白的表达水平,bcl - 2,是减少。然而,治疗2,观察4-thiazolidinedione扭转这些影响,减少了伯灵顿和bcl - 2蛋白水平显著增加。类似的趋势观察与ERK bcl - 2,说明细胞的生存状态。神经保护作用的结果表明,2,4-TZD行为通过调节线粒体的功能。PGC-1α是激活2,4-TZD通过其抗氧化性能,可能扮演的角色。先前的研究发现,PGC-1α是一个至关重要的因素的几个重要的抗氧化酶的表达,包括GPx1、铜/ ZnSOD和MnSOD负责清除活性氧(ROS) (33]。此外,是否PGC-1α可以调节mitophagy还不清楚,需要进一步的研究。
5。结论
总之,我们的研究表明,吡格列酮发挥了在多巴胺能神经元的神经保护作用在体外和在活的有机体内PD模型。观察到的神经保护作用与PGC-1有关α激活和调节蛋白的表达参与线粒体功能,如NRF1 NRF2进行Mfn2 Fis1,。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
Yanqin王团长和赵的贡献同样这项工作。
确认
这项工作是支持由中国国家自然科学基金(没有。31300897),研究中国高等教育的博士项目基金(没有。20121303120005),河北省自然科学基金,中国(没有。H2013205165),河北的基础教育委员会、中国(没有。ZD2015012)。作者还要感谢回族姚明(硕士学位)援助。
补充材料
的影响2,4 -thiazolidinedione存活率上引起SH-SY5Y MTS试验。存活率被发现在MPP显著下降+干预组2 4-TZD存活率显著增加0.01,0.1,1和10μmol / L 2, 4-TZD治疗组。干预效果更好的0.01,0.1,1μmol / L 2, 4-TZD比10μmol / L 2治疗组,4-TZD治疗组。“aa”表示P< 0.01,与对照组相比,“b”表示P< 0.05,与MPP相比+集团;“bb”表示P< 0.01,与MPP相比+组。
比较每组的细胞凋亡比例与Hoechst33342染色检测。组细胞凋亡率显著增加,与对照组相比,干预MPP相比凋亡率降低+组。没有显著差异在0.01,0.1,1μmol / L 2, 4-TZD治疗组。10μmol / L 2的细胞凋亡率,4-TZD治疗组明显提高。“aa”表示P< 0.01,与对照组相比,“bb”表示P< 0.01,与MPP相比+集团;“cc”表示P< 0.01,和0.01μmol / L 2相比,4-TZD治疗组;“弟弟”表示P< 0.01,和0.1μmol / L 2相比,4-TZD治疗组;“ee”表示P< 0.01,而1μmol / L 2, 4-TZD治疗组。
2、4-TZD MPP +诱导细胞凋亡SH-SY5Y Fluoro-Jade C (FJC)染色。FJC绿色荧光离子是一种衍生品标记神经元的退化。在倒置荧光显微镜下,拍照所有细胞的凋亡细胞的明视场然后拍照用FITC通道,最后计算出细胞凋亡率。组细胞凋亡率显著增加,与对照组相比,干预MPP相比凋亡率降低+组。“aa”表示P< 0.01,与对照组相比,“bb”表示P< 0.01,与MPP相比+集团;“c”表示P< 0.05,和0.01μmol / L 2相比,4-TZD治疗组,表明“cc”P< 0.01,和0.01μmol / L 2相比,4-TZD治疗组;“弟弟”表示P< 0.01,和0.1μmol / L 2相比,4-TZD治疗组;“ee”表示P< 0.01,而1μmol / L 2, 4-TZD治疗组。