脂肪酸CLA-Enriched蛋黄可以诱导转录激活过氧物酶体Proliferator-Activated MCF-7乳腺癌细胞的受体

文摘

在我们之前的研究中,我们表明,脂肪酸从CLA-enriched蛋黄(EFA-CLA)减少乳腺癌细胞的增殖;然而,其作用的分子机制仍然不明。在目前的研究中,我们使用MCF-7乳腺癌细胞系来确定EFA-CLA的影响,作为一个潜在的配体在过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs),在确定硅片PPAR-responsive基因:BCAR3,TCF20,WT1,ZNF621,THRB(成绩单TRβ2)。我们的研究结果表明,EFA-CLA充当PPAR配体与竞赛的活动为所有PPAR亚型,对PPAR特异性最高的γ。总之,我们建议EFA-CLA-mediated PPAR-responsive调节基因最有可能推波助澜cis9, trans11CLA同分异构体纳入蛋黄。值得注意的是,EFA-CLA激活PPAR更有效地比nonenriched FA以及合成CLA同分异构体。我们也建议这个规定,至少在某种程度上,可以减少负责观察MCF-7细胞的增殖EFA-CLA对待。

1。介绍

过氧物酶体proliferator-activated受体配体依赖性转录因子(PPARs)。各种脂肪酸及其代谢衍生物作为PPARs天然配体(1]。一些人,包括亚麻油酸、亚麻酸和花生四烯酸,发现激活PPARs即使在微摩尔的,生理上相关的浓度(2]。Hydroxyoctadecadienoic酸(赫德),产品的亚油酸氧化以及花生四烯酸代谢物15 d-pgj2 (15-deoxyprostaglandin J2),也与PPAR激活(3,4]。

有人建议,ligand-dependent激活PPARs导致癌症细胞株增殖的抑制某些模型(5- - - - - -7]。特别是,PPARγ同种型可以减少癌症细胞增殖以及调节细胞分化、激活细胞凋亡,抑制血管生成(8- - - - - -10]。具体来说,特定的PPAR的管理γ受体激动剂导致了G1期细胞逮捕和抑制细胞增殖5,11]。然而,可用的文学也提出了矛盾的结果。在一些研究中,PPARγ具体的拮抗剂,T0070907,显著降低乳腺癌细胞的增殖和迁移(12,13]。

共轭亚油酸(CLA)术语包括几个亚油酸异构体,主要有两个同分异构体:cis9, trans11(80 - CLA)总额的90%trans10, cis12。可用文献显示,CLA作为一种强有力的PPARs配体,通过PPAR-mediated参与调节脂质代谢途径(14]。然而,数据显示isomer-specific CLA的活动;具体地说,cis9, trans11特点是PPAR激动剂(15,16),而trans10, cis12被证明抑制活性的合成PPAR受体激动剂(15]。此外,研究显示潜在的抗肿瘤的性质cis9, trans11(17- - - - - -20.而相反的效果观察trans10, cis12同分异构体(18]。

PPARs作为转录因子调节相关基因的表达,ppr绑定。大量的基因受PPARs被描述;然而,列表不是详尽的和不断更新新的结果被发表的实验数据和生物信息学分析启动子区域和PPRE共识序列。在目前的研究中,我们应用这些工具来识别在硅片PPRE选择基因参与细胞周期进程和扩散。接下来,我们分析了合成的影响cis9, trans11CLA和trans10, cis12CLA同分异构体以及脂肪酸的混合物从CLA-enriched和nonenriched蛋黄中提取这些基因的表达。我们所知,我们的研究是第一个地址CLA的影响纳入脂肪酸的蛋黄;我们希望活动的同学在这样一个“有机”的形式可能偏离的合成形式。其他脂肪酸的存在在一个蛋黄,这对PPARs本身可以作为潜在的配体,可以调节CLA的作用;因此,我们的数据可能是特别重要的评价CLA-enriched食品。

2。材料和方法

2.1。生产CLA-Enriched蛋黄

执行生产CLA-enriched蛋黄在动物生产的国家研究所克拉科夫(波兰),按照当地的动物伦理委员会的建议(批准文号:851/2011)如前所述21]。鸡蛋被收集并存储在4°C,和蛋黄蛋白分开,均质,冻结在−20°C。样本然后冻干再储存在−20°C,直到进一步的分析。

2.2。脂肪酸成分的提取和分析

从控制和CLA-enriched蛋黄脂质提取利用修改Folch方法(22如前所述(23]。10毫克的脂质提取受到皂化0.5 KOH /甲醇甲基化次之,占14% (v / v) BF3 /甲醇和己烷萃取。脂肪酸甲酯(名声)被GC / MS分析如前所述[23]。

2.3。CLA PPAR的同分异构体和受体激动剂/拮抗剂

cis9, trans11CLA和trans10, cis12CLA同分异构体(美国Nu-Chek预科)溶解在乙醇和储存在氮气−20°C和介绍了细胞培养在最终浓度相应浓度的CLA-enriched蛋黄:cis9, trans1130岁时μM和trans10, cis12在12μM。

PPAR的合成受体激动剂和拮抗剂α(WY14643和gw - 6471), PPARδ(gw - 0742和GSK0660)和PPARγ(吡格列酮(PIO)、troglitazone T0070907)准备按适当的制造商的协议。各自的浓度选择基于他们的EC / IC50特点和确认MCF-7细胞系使用细胞毒性LDH测试(罗氏、波兰)。

2.4。细胞培养

人类乳腺癌细胞腺癌行MCF-7(写明ATCC®HTB22TM)购买来自美国文化集合类型。细胞培养在适当的介质(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)写明ATCC协议的按照10%的边后卫(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)。

细胞生存能力是由结晶紫测定(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国)。

2.5。脂肪酸治疗

实验中包含MEM补充10%的边后卫和适当的治疗:(a)脂肪酸从CLA-enriched蛋黄中提取0.5毫克/毫升(EFA-CLA), (b)脂肪酸从nonenriched蛋黄中提取0.5毫克/毫升(脂肪酸),(c)cis9, trans11合成异构体(最终集中在35岁μ米),(d)trans10, cis12合成异构体(最终浓度为13μ米),(e)未经处理的细胞控制(空控制,EC)和(f) -控制(数控;乙醇的最终浓度为0.1%)。合成PPARs受体激动剂和拮抗剂用作PPAR积极控制α(10μM WY14643和10μM gw - 6471), PPARδ(2μM gw - 0742和1μ米GSK0660), PPARγ(40μM PIO, 10μM troglitazone, 10μ米T0070907)。每个治疗包括3生物和技术复制。

2.6。质粒

PPAR表达向量是准备使用网关®克隆系统(美国热费希尔)。简而言之,PPARA (CR456547_1) PPARD (NM_006238.4)和PPARG NM_015869.4 ORF序列合成,优化在人类细胞中表达,并克隆到pDONR221输入向量(美国热费希尔GeneArt)。随后,并将被插入pcDNA6.2 / N-EmGFP-DEST目的地向量(美国热费希尔)CMV启动子控制下通过Clonase II复合反应。

2.7。与PPAR编码细胞转染质粒

与PPARA细胞系,PPARD, PPARG超表达是通过瞬时转染获得pcDNA6.2 / N-EmGFP-DEST向量包含各自的人类PPAR羊痘疮。MCF-7细胞被播种12-well板块细胞每口井。播种后24小时,细胞是暂时性的转染为1.5μ使用Lipofectamine g (PPAR编码质粒(热费希尔科学、马、美国)在OPTI-MEM介质(美国马热费希尔科学)。转染24小时后,生长介质被选择性取代MEM培养基的边后卫和5.0 10%μg / mL杀稻瘟菌素(BioShop、加拿大)。直到confluency转染细胞培养。

实时聚合酶链反应和免疫印迹方法进行确认的PPAR质粒转染后(网上图S1和S2表,补充材料https://doi.org/10.1155/2017/2865283)。

2.8。与PPRE转染质粒

分别细胞系overexpressing PPARA、PPARD和PPARG 12-well盘子被播种,细胞每口井。24小时后,细胞转染与0.7μg X3 PPRE-TK-luc质粒(猫。美国Addgene # 1015)和0.7μg光杆载荷控制(猫。美国# E2261、Promega WI)使用Lipofectamine(美国马热费希尔科学)OPTI-MEM介质(美国马热费希尔科学)。

2.9。Dual-Luciferase化验

24小时与PPRE质粒转染后,媒体再次取代MEM培养基含有10%的边后卫和适当的实验处理如上所述。治疗后24小时,细胞收获蛋白质荧光素酶的隔离。

荧光素酶蛋白(Photinus pyralis和Renilla reniformis)执行检测使用Dual-Luciferase®记者分析系统(美国WI Promega) GloMax®20/20单管光度计(美国WI Promega),根据制造商的指示。

2.10。在网上选择和实验确认PPAR-Dependent基因(PPAR-Responsive mrna)

PPAR-responsive基因选择在网上寻找过氧物酶体扩散者激素反应元素(ppr AGGTCANAGGTCA)在启动子和/或5′-独联体监管区域的启动子的基因参与细胞周期进展和增殖。这与NCBI基因和爆炸工具执行搜索。

实验,与各自的PPAR质粒,转染后24小时中取代了MEM培养基含有10%的边后卫和适当的实验处理如上所述。治疗后48小时,细胞信使rna隔离和RT-qPCR收获。

2.11。RNA隔离,互补脱氧核糖核酸的合成,RT-qPCR分析

总RNA分离细胞对细胞培养使用RNA隔离设备(授权生物技术、波兰)。反转录进行1μ总RNA的g使用最大值合成第一链cDNA包RT-qPCR(美国马热科学)。定量验证的基因进行了使用CFX96触摸™实时PCR检测系统仪器(美国CA Bio-Rad)和SYBR绿色精密融化Supermix工具包(Bio-Rad、钙、美国)。个人PCR反应条件进行了优化,给出对寡核苷酸引物(表S1、辅料)。基本条件如下:95°C 10分钟,45 PCR循环在95°C, 15秒;59°C, 15秒;72°C, 15秒,然后融化曲线分析(65 - 97°C 0.11°C匝道利率每1°C和5收购)。结果规范化使用至少两个参考基因(GAPDH,HPRT1,ACTB,或HSP90AB1)和计算使用方法(24]。

2.12。蛋白质分离和免疫印迹分析

细胞溶菌作用进行了使用细胞裂解缓冲(细胞信号技术、马、美国)按制造商的协议。总蛋白进行量化使用皮尔斯BCA™蛋白质化验设备(热费希尔科学、马、美国)。

每个免疫印迹遵循了类似的过程。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中提取分离和转移到一个硝基过滤器(由湿electroblotting Bio-Rad、钙、美国)。随后,固定化蛋白质与适当的孵化主要抗体,PPAR具体α(SAB2101852), PPARγ(SAB2101853)和PPARδ(AV32880)以及在网上选择WT1 (SAB2102716) THRB (AV36994)和TCF20 (SAB2106444) Sigma-Aldrich,密苏里州,美国,或者β肌动蛋白(# 8457)β微管蛋白从细胞信号技术(# 2128),美国马。最后,适当的二次抗体结合辣根过氧化物酶(# 7074,细胞信号技术,妈,美国)应用。由化学发光检测被处决,使用清晰™西方ECL衬底(Bio-Rad、钙、美国)。删除的抗体膜,我们用免疫印迹剥离缓冲区(美国马热科学)。

2.13。统计分析

所有实验进行至少三个独立的时间和以一式三份。Shapiro-Wilk的测试用于评估常态分布。一个独立的样品以及用于比较两组之间未配对方式。被认为是具有统计学意义。所有分析都使用Statistica版本执行。12(美国StatSoft,塔尔萨)。

3所示。结果

3.1。细胞生存能力

治疗与提取、电弧炉和EFA-CLA MCF-7可行性降低乳腺癌细胞系相比,控制;然而,相比,电弧炉EFA-CLA效果更明显。72 h后治疗,细胞生存能力EFA-CLA-treated组下降了50%而生存能力下降达到32%(图1)。综合治疗trans10, cis12CLA减少细胞生存能力与培养时间以线性的方式,达到43%,72 h。的还原效果cis9, trans11CLA异构体不明显和统计学意义只有在72 h(总体生存能力下降了15%)。

3.2。PPARs EFA-CLA转录活动的影响

分析活动和各种高作为潜在的PPAR配体的特异性,我们应用PPAR-dependent荧光素酶表达模型(图2)。我们使用特定的受体激动剂和拮抗剂为每个同种型PPARs积极控制。我们的结果证实了预期选择受体激动剂和拮抗剂(数据的影响3(一个)- - - - - -3 (c))。实验FA提取不同的影响。消极的控制相比,EFA-CLA显著增加PPAR的活动α(数控的202%;;图3(一个)),PPARδ(数控的187.10%;;图3 (b)),PPARγ(数控的353%;;图3 (c))。脂肪酸提取相比,EFA-CLA还显示显著激活的PPAR亚型(数字3(一个)- - - - - -3 (c))。合成cis9, trans11同分异构体也显著激活所有PPARs, PPARα(数控的211%;;图3(一个)),PPARδ(数控的221.88%;;图3 (b)),PPARγ(数控的237%;;图3 (c))。trans10, cis12CLA同分异构体有很少或没有影响PPAR的激活α和PPARδ(数据3(一个)和3 (b));然而,它减少了PPAR的活动γ(数控的85%;;图3 (c))。

3.3。选择性PPARs FA转录活动的效果

的选择性影响研究FA作为潜在PPAR配体数据所示4(一)- - - - - -4 (d)。EFA-CLA决心是PPAR的最具体的γ(活动增长了3.5倍,;图4(一))。对两PPAR脂肪酸提取作为拮抗剂α和PPARδ,而它只表现出微不足道的PPAR激动剂活动δ(活动增长了1.44倍,,图4 (b))。cis9, trans11异构体显示对所有PPAR激动剂属性亚型,对PPAR最强的影响γ(活动增长了2.37倍,;图4 (c))。trans10, cis12同分异构体对两PPAR transactivation显示无显著影响α和PPARδ(,图4 (d)),而它显示拮抗剂对PPAR活动γ(,图4 (d))。

3.4。预测潜在PPRE-Dependent基因的硅片

潜在PPRE-responsive基因的预测是在计算机中执行。NCBI数据库搜索特定的存在PPRE(过氧物酶体扩散国响应元素)共识序列(AGGTCAAAGGTCA, AGGTCAGAGGTCA AGGTCACAGGTCA,或AGGTCATAGGTCA) 5′地区的基因与肿瘤发生和细胞周期(图5)。七个基因被确定:BCAR3,地方时,SLC5A1,TCF20,WT1,ZNF621,THRB(成绩单TRβ2),可能受PPARs(表1)。THRB基因被发现的存在PPRE共识序列替代促进剂TR的地区β2同种型(第4和第5外显子之间的基因内区)。在确定潜在PPRE-dependent基因,一些被选作进一步的实验分析,包括TCF20,WT1 ZNF621,THRB。

3.5。EFA-CLA对PPAR-Regulated基因的表达的影响

选择PPAR-responsive基因的表达(包含PPRE)已经在应对各种实验检测脂肪酸作为PPARA潜在的配体,PPARD或PPARG。我们的研究结果表明受体激动剂和拮抗剂的影响实验。

PPAR EFA-CLA补充道γ-overexpressing细胞的表达升高TCF-20在3.2倍和ZNF621超过3.1倍,而减少的表达WT1基因的1.2倍。然而,最新的可能解释,至少部分,从这一事实WT1基因与干扰cotranscribed长,非编码反义RNA (WT1-AS)相同的双向启动子。为细胞overexpressing PPARδEFA-CLA治疗导致的高表达TCF-20超过三倍,而PPARα-overexpressing细胞ZNF621基因调节的1.8倍。

最强的增强TCF-20表达式(13)是PPAR观察γ和PPARδ-overexpressing细胞治疗后trans10, cis12CLA。有趣的是,的表达THRB(TRβ2)基因变体也强烈增加了治疗trans10, cis12CLA17.2 - 18.15 -,和PPAR的7.9倍δ,PPARγ和PPARα-overexpressing细胞,分别,但不是观察EFA-CLA-treated细胞。这些结果表明,EFA-CLA其他脂肪酸混合物的存在有助于FA治疗的总体效果。

很明显,所选择的基因的表达(TCF-20,WT1,ZNF621,THRB),首次确认了这项工作的假定的PPAR-responsive基因,在使用代理的存在改变了(表2),在他们中间TCF-20被EFA-CLA影响最。

4所示。讨论

鸡蛋富含共轭亚油酸(CLA)通过饲料修改符合标准的功能性食品。基于Roberfroid [25)分类、CLA-enriched蛋可以看作一种传统食品,旨在使用作为一个正常的饮食的一部分但含有生物活性物质被修改,也就是说,CLA同分异构体。它已被证明对人体生理功能的有益的作用,在某种程度上超越了它的营养价值,特别是通过降低患动脉粥样硬化的风险(26]。我们先前的研究显示额外的有益属性CLA-enriched鸡蛋在减少乳腺癌和黑色素瘤细胞的增殖(23,27]。当前手稿支持这些发现我们的新结果表明,脂肪酸提取CLA-enriched蛋黄(EFA-CLA)减少MCF-7乳腺癌细胞系(图的可行性1)。然而,分子机制并不完全理解。比较之间的对肿瘤细胞增殖的影响提取物CLA-enriched和nonenriched蛋黄可能导致的结论是,它只是CLA的存在同分异构体的结果纳入蛋黄脂质。可用的文学会支持这种假说作为抑制作用大量研究显示,特别是cis9, trans11CLA异构体,在肿瘤细胞(28- - - - - -32]。实际上,我们的分析CLA-enriched蛋黄表明FA的状况cis9, trans11CLA成立更有效(3:1的比例)trans10, cis12同分异构体(21),因此可以在EFA-CLA占主导地位。比较有趣的是,合成的影响CLA同分异构体与蛋黄CLA-EFA显示后者的优势减少癌细胞生存能力(图1)。脂肪酸的分析配置文件之间的丰富和nonenriched蛋黄透露不仅CLA合并,也出乎意料,SFA / MUFA比率显著变化,特别是增加总SFA浓度MUFA为代价的。因此,问题是否它是一个个人或国家林业局CLA的综合效应和修改/ MUFA比率在丰富蛋黄MCF-7细胞系(23]。我们观察到的结果CLA-EFA最有可能实现的效果:合并CLA同分异构体和其他脂肪酸通过母鸡的蛋改性有机饮食(23];然而,这个问题需要进一步的研究。

它已经表明,PPAR受体激动剂有不同的属性对个人PPAR亚型,具有不同吸收和独特的基因表达谱。据我们所知,这是第一个研究侧重于从CLA-enriched蛋黄FA的影响转录激活PPARs (PPARα,PPARγ,PPARδ)。所有实验作为控制合成CLA同分异构体以及不同PPARs的标准受体激动剂和拮抗剂。我们的研究结果表明,EFA-CLA提取展品受体激动剂的性质对所有PPAR亚型(数字3(一个)- - - - - -3 (c));然而,这些属性似乎大多数对PPAR选择性γ(图4)。有趣的是,PPARγ与最伟大的有关对肿瘤细胞增殖的影响,生存,和分化,其配体与抗癌相关属性(33,34]。此外,作为EFA-CLA观察,transactivation PPAR受体更有效比脂肪酸提取从nonenriched蛋黄(脂肪酸)(数据3(一个)- - - - - -3 (c))。自cis9, trans11CLA同分异构体显示PPAR激动剂活动(数据3(一个)- - - - - -3 (c)),因为这个异构体是三倍更有效地纳入蛋黄比trans10, cis12CLA(23],它可以是猜测cis9, trans11CLA在PPARs EFA-CLA-mediated激活中起着重要作用。

合成CLA同分异构体的影响对他们的特异性为我们提供了重要的信息。而cis9, trans11异构体充当了PPAR激动剂(数字3(一个)- - - - - -3 (c)),观察对手的效果trans10, cis12异构体,特别是PPARγ(图3 (c))。可用的文学与我们的研究结果是一致的。cis9, trans11抑制细胞生长(异构体被报道15,16)表现出抗肿瘤特性(17- - - - - -20.]。它被发现的存在trans10, cis12同分异构体可能废除的抗增殖活动cis9, trans11(18),甚至抑制合成的活性PPAR受体激动剂(15]。因此,更有趣的是,我们的研究结果显示更有效降低癌细胞增殖EFA-CLA治疗比使用纯合成cis9, trans11CLA异构体,可能会建议其他因素包括修改SFA / MUFA比率在丰富蛋黄23),支持抗增殖作用cis9, trans11CLA同分异构体。

PPARs作为转录因子调节相关基因的表达,ppr绑定。可用文献给出了一个数量的基因受PPARs;ligand-dependent转录因子(35),这些基因的表达可以抑制或激活取决于配体,表明选择性[36]。班发现了同分异构体作为PPAR配体和显示参与抑制转录的基因,包括肿瘤坏死因子(37),NFKB1(38),而NR1I3(39以及transactivation:TGFB1(40),乳腺癌易感基因1(41),PTEN(42),p21 / WAF1 / CDKN1A(43),CEBPA(44),ABCB4(45),而AOX(46]。尽管大量的基因受PPARs描述,列表不是详尽的和不断更新的新成果被发表的实验数据和生物信息学分析启动子区域包含PPRE共识序列(AGGTCANAGGTCA)(图5)。

在当前的研究中,我们应用生物信息学工具与PPRE发现基因分析CLA的影响这些基因的表达。据我们所知,我们提出几个新的基因可能会PPAR-regulated:BCAR3,地方时,SLC5A,TCF20,WT1,ZNF621,THRB(成绩单TRβ2)(表2)。从初步数据显示,其中一些被PPARs强烈的监管,我们的表达进行了研究TCF20,WT1,THRB (TRβ2),ZNF621基因在不同的上下文中PPAR配体,包括EFA-CLA。

第一个TCF20可以作为phosphoserine-specific阻遏estrogen-dependent肿瘤的雌激素受体(ER) (47]。MCF-7人类乳腺癌细胞系是雌激素受体(ER)积极;因此,的表达TCF20应该抑制ER,从而影响肿瘤细胞的生存能力。我们的结果证实了这些假设,表现出升高TCF20细胞接受EFA-CLA mRNA水平。这种效应强于电弧炉(表2)。有趣的是,最明显的效应被发现trans10, cis12CLA同分异构体(表2),这或许可以解释它的优势cis9, trans11CLA在减少的可行性MCF-7(积极与它的影响减少细胞生存能力)(图1)。相比之下Pariza et al。18),这个结果也表明,trans10, cis12CLA同分异构体可能支持的抗增殖作用cis9, trans11CLA在通过transcription-enhancing EFA-CLA影响TCF20。

可用文献地址由PPAR受体编码之间的关系THRB基因(48- - - - - -50]。THRB人类甲状腺激素受体的编码三个亚型:TRβ1、组织TRβ2和TRβ4,被认为是参与细胞周期控制和新陈代谢51]。最近,THRB研究了作为一个肿瘤抑制(52]。尽管TRβ1)同种型已经发现扮演一个角色的竞争性抑制PPAR transactivation [53),有有限的信息TR之间的关系β2和PPAR受体。TRβ和PPAR受体有关同样的义务coreceptor,视黄素X受体(RXR),结合heterodimeric伴侣之前绑定的DNA。虽然RXR中起着重要的作用在调节一系列核激素受体的活动包括TRβ和PPARs充当heterodimeric伙伴,这种受体在细胞中表达的是既定的53];因此,关注PPARs,我们不显示RXR本文的表达。然而,据报道,TRβ和PPAR受体竞争结合rxr在细胞核54]。因为我们发现PPRE在TR的序列β2-specific启动子,位于第四基因内区THRB基因,TR的双向调节β2和PPARs被认为是更复杂的。结果提出了在目前的手稿显示增强的transactivation TRβ2所有PPARs亚型的治疗实验FA(表2),可能是TR的机能活动的证据β2-specific PPRE;然而,这需要进一步的研究。最显著的影响是测量合成CLA的同分异构体,特别是trans10, cis12(表2)。综上所述,我们的研究结果表明,转录水平的TRβ2是由PPARs升高及其受体激动剂。同时,TRβ1同种型已被证明与PPAR争夺进入RXR coreceptor或PPRE结合位点在调节基因的启动子区域50),可以建议TRβ在表达TR 1-mediated抑制作用β2同种型和其他可能PPAR-responsive基因。

WT1基因,转录因子,直接或间接地与许多基因参与细胞周期与肿瘤,包括HIF1A,沙土荒漠,对不起,NROB1,SOX9,IGF2,MDM4,乳腺癌易感基因1,TP53,SP1(NCBI基因)。可用文献表明一个致癌的本质WT1并显示其超表达在各种肿瘤和肿瘤细胞系,特别是乳腺癌细胞和黑色素瘤(55,56]。此外,水平的下降WT1基因表达与细胞增殖减少黑色素瘤和乳腺癌细胞(57,58]。WT1也一直与恶性转化在乳腺癌,及其超表达与药物治疗的敏感性降低。事实上,它已被证明为estrogen-dependent线WT1积极调节的表达表皮生长因子受体和HER2(55),导致抗激素治疗(59,60]。在黑素瘤,体外WT1沉默导致减少细胞增殖,诱导细胞凋亡与caspase-3激活(61年),而体内黑色素瘤转移性肺(减少了56]。另一方面,一些研究表明,药物PPAR的激活δ通过其受体激动剂(GW0742和GW501516)抑制小鼠黑色素瘤细胞的增殖,以上的差别伴随着对这些WT1(62年]。这是建议PPARδ可以通过PPRE的行为吗WT1启动子和直接抑制其活动;然而,我们的研究结果并不支持这一假说。尽管一个已知的PPAR的使用δ受体激动剂、GW0742导致PPARδ激活(图3 (b)),没有表达的减少WT1测定(表1)。这种矛盾可能由于使用不同的生物材料表明细胞/组织监管和/或协会/分离不同的辅阻遏物或辅活化因子转录机器。有趣的是,我们表明,EFA-CLA和治疗cis9, trans11减少的表达WT1通过PPAR的激活δ(表2)。类似的效果观察其他实验FA(表2)表明各种PPAR配体在不同的细胞可能产生不同的影响;然而,这个假设应该研究。

5。结论

总之,潜在的肿瘤抑制的性质PPAR受体配体对他们的吸引力的候选人的发展新chemopreventive抗癌剂。这里,我们首次展示功能食品,CLA-enriched蛋(EFA-CLA),更有效地降低MCF-7癌细胞的扩散比合成CLA同分异构体。这种EFA-CLA效应可以从高含量的结果cis9, trans11异构体,改变国家林业局/ MUFA比率在丰富蛋黄,和/或支持的角色trans10, cis11同分异构体在特定基因的调控。我们的研究结果表明,EFA-CLA PPARs可以作为配体,显示一个受体激动剂的活动,特别是向PPARγ同种型。控制,合成cis9, trans11异构体的CLA施加一个对所有PPAR激动剂影响受体,trans10, cis12显示没有影响,甚至充当PPAR的拮抗剂γ。然而,这个异构体能够调节特定基因包含ppr等TCF20参与细胞周期阻滞。与此同时,cis9, trans11同分异构体调节THRB抑制器和表达下调WT1致癌基因显示一小部分的PPAR行动的EFA-CLA导致观察到的减少乳腺癌细胞的增殖。因此看来,CLA-enriched鸡蛋可以被视为食品抗癌潜力。

的利益冲突

作者报告没有金融或其他的利益冲突相关的主题篇文章。

确认

这项工作是支持的波兰国家科学中心(批准号2011/03 / B / NZ9/01423)“共轭亚油酸(CLA)诱导转录激活PPAR:调查假定的抗癌作用的分子机制的脂肪酸CLA-Enriched蛋黄”和科学教育的(批准号N N312 236038)”的影响CLA-Enriched母鸡的蛋黄脂质在选定的肿瘤细胞系的增殖。”

补充材料

引用

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