文摘

轮状病毒感染被报道诱导宿主细胞的炎症反应伴随着一些细胞的增加表达或激活分子包括ROS、NF -κB, cox - 2。PPARγ刺激(NAC)发现了治疗和防治干扰病毒感染包括轮状病毒感染。小肠绒毛隔绝在活的有机体内与轮状病毒感染小鼠ECwt ECwt-infected细胞的百分比分析,轮状病毒抗原的存在,和传染性病毒粒子产生与吡格列酮治疗后。孤立的绒毛也被感染了在体外和对待PPARγ受体激动剂(PGZ TZD、RGZ DHA和阿拉巴马州),all-trans维甲酸(ATRA),和南汽。治疗后,包括PPAR细胞蛋白的表达γNF -κB PDI Hsc70, cox - 2使用免疫化学分析,ELISA、免疫荧光和免疫印迹。结果表明,轮状病毒感染导致增加细胞蛋白质研究和活性氧的积累。病毒侵染诱导细胞蛋白研究和活性氧的积累减少吡格列酮治疗后,也造成相应的传染性病毒粒子。我们假设轮状病毒感染是受益于宿主细胞的诱导促炎反应和炎症通路的干扰会导致减少感染。

1。介绍

轮状病毒是严重急性脱水的主要原因在全球婴幼儿腹泻。根据可用的数据,这个病毒代理大约每年有527000 5岁以下儿童死亡原因(1]。轮状病毒是家庭成员一种及其nonenveloped tripled-layered粒子(TLP)包含一个基因组的11 dsRNA片段编码6结构蛋白(VP1-VP4, VP6和VP7)和六个非结构蛋白(NSP1-6) [2]。轮状病毒诱导炎症和氧化应激在感染细胞信号通路,而抗炎和抗氧化治疗显示抑制轮状病毒感染(3- - - - - -5]。最近,提供了证据,thiazolidinediones噻唑烷二酮类),如吡格列酮(PGZ)和罗格列酮(RGZ),抑制轮状病毒感染在MA104培养细胞(6)和ICR小鼠(3]。这种抑制作用通过thiazolidinedione-mediated激活发生过氧物酶体proliferator-activated receptor-gamma (PPARγ配体依赖性转录因子),属于核受体基因家族,显示抗炎作用[7,8]。激活PPARγ通过服用tzd干扰NF -κB信号级联,导致减少的转录NF -κB-dependent促炎基因(9]。PPARγ配体抑制炎症基因的表达,如白介素- 1 (IL)β和肿瘤坏死因子(TNF)α(7]。PPARγ,就像PPARα和PPARβ,广泛表达于广泛的细胞在调节不同的基因的转录heterodimerization类维生素a的X受体(rxr) [10,11]。

PPARγ激活与抑制某些病毒感染有关。PPAR的刺激α和PPARγ据报道,阻止人类免疫缺陷病毒(HIV) 1复制和肿瘤坏死因子(TNF)α生产严重感染的细胞(12]。Downregulation呼吸道合胞体病毒(RSV)诱导ICAM-1表达和核转录因子NF -κ治疗后B活动观察PPAR的人类肺上皮细胞γ受体激动剂(13]。RGZ抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制在HepG2细胞转染质粒含有乙肝病毒基因组(14]。NF -κB构成家庭发挥重要作用的转录因子在炎症、免疫、细胞增殖、分化、和生存(15]。NF -κB已经报告给调解cyclooxygenase-2 (cox - 2)表达(16]而抑制cox - 2活性有关轮状病毒感染的减少(4]。NF -κB激活已经观察到在肠道上皮细胞(iec)后感染轮状病毒(17,18),虽然有些轮状病毒菌株可以抑制NF -的激活κB (19]。

两个轮状病毒疫苗(其一默克公司和葛兰素史克的Rotarix)介绍了在2007年5月以来超过100个国家。到目前为止,有53个国家提供他们通过他们的国家免疫计划20.]。这些疫苗的评估表明,他们是显著有效的减轻负担和后病毒性疾病(21]。尽管疫苗疗法仍然是最好的希望保护儿童轮状病毒感染的影响因素引入这些发展中国家的疫苗纳入国家免疫计划17]。金融和物流问题是具有挑战性的轮状病毒疫苗的潜力减少死于腹泻的风险。现有疫苗的减毒活性质引起了一些担忧与病毒传染,传播的风险(22),覆盖所有的潜在缺乏血清型(23,稍微肠套叠(风险升高21,24]。替代策略对提高应对现有疫苗已经提出解决剩余rotavirus-associated负担的死亡率和发病率17]。

在搜索替代抗病毒策略可以改善由轮状病毒引起的腹泻疾病的治疗和促进机制的了解轮状病毒感染周期,我们化验的潜力PGZ轮状病毒感染的控制。彻底的理解机制支持轮状病毒感染是至关重要的理解基于PPAR更好的抑制效果γ受体激动剂和抗氧化剂5,6,25]。借鉴PGZ和RGZ能够抑制小鼠感染轮状病毒(3),我们想扩大我们之前的结果通过测试额外的PPARγ受体激动剂如亚麻酸),13 - (S) -hydroxyoctadecadienoic酸(蚯蚓)13日(蚯蚓)和二十二碳六烯酸(DHA)除了all-trans视黄酸(ATRA)和PPAR之前测试γ受体激动剂PGZ RGZ。另外,我们想知道是否以前一些细胞蛋白的表达与轮状病毒感染是与一些PPAR响应病毒感染和治疗γ受体激动剂使用同步系统组成的小肠绒毛隔绝老鼠。在这里,我们表明,PPAR细胞蛋白质γNF -κB, PDI, Hsc70和活性氧(ROS)都增加了在活的有机体内和在体外轮状病毒感染小肠绒毛,而增加水平接近基底的返回,同时减少病毒感染,治疗后PGZ和其他PPARγ受体激动剂。提出,轮状病毒感染是敏感基因的表达受转录因子PPAR绑定γ响应元素(ppr)和ATRA响应元素(罕见)。

2。材料和方法

2.1。动物、病毒和试剂

野生型小鼠轮状病毒EDIM-Cambridge (ECwt) G3P [18)是一种礼物从m·佛朗哥博士(Instituto de遗传Pontificia大学Javeriana,波哥大,哥伦比亚)。Fifty-two-day-old ICR小鼠体重25 - 30 g从西班牙获得de Salud,波哥大,哥伦比亚。动物实验协议正式获得伦理委员会批准的医学院根据国家和国际法规。

超免疫血清对铯chloride-purified ECwt在兔子长大,山羊,小鼠和豚鼠。兔子超免疫抗血清NSP4, NSP5, PDI, Hsc70获得使用各自的纯化抗原。preimmune血清都是在免疫印迹检测轮状病毒抗体的缺失。山羊anti-PDI (sc - 17222), anti-Hsc70 (sc - 1059), anti-PPARγ(sc - 6285)。和anti-COX-2 (sc - 18619)多克隆抗体(Abs) (200µg / mL)购买的圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国)。兔子anti-PPARγ(sc - 7273), anti-p-NF -κ337 B p50 (Ser) (sc - 271908), anti-COX-2 (sc - 19999),和anti-PDI (sc - 376369)单克隆抗体(mab) (200µg / mL)也从圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国)。兔子anti-NF -κB p50得到从英杰公司(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)。辣根过氧化物酶(合)共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白(sc - 2313),山羊anti-mouse IgG-HRP (sc - 2005),和HRP-conjugated兔抗体免疫球蛋白(sc - 2020),异硫氰酸荧光素(FITC)——共轭驴anti-mouse免疫球蛋白(sc - 2024),和FITC-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(sc - 2359) (400µg / mL)购买的圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国)。Cy5-labeled山羊anti-rabbit免疫球蛋白Abs (sc - 45101, 200µg / mL,圣克鲁斯生物技术有限公司,圣克鲁斯,美国CA)和Alexa 594 -标记兔抗体免疫球蛋白Abs (400µg / mL,表达载体,卡尔斯巴德、钙、美国)。活性氧检测使用Cellomics氧化应激1高碳钢试剂盒(猫# 8401001,热科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。

药物是根据美国药典级,由活性成分缺乏辅料。抗氧化剂,南汽和all-trans维甲酸(ATRA)和亚麻酸(ALA),购买来自议员生物医学(梭伦,哦,美国)。PPARγ受体激动剂thiazolidinedione (TZD)、吡格列酮(PGZ)和罗格列酮(RGZ)提供的阿尔法蛇丘(马沃德,美国),σ(圣路易斯,密苏里州,美国),和圣克鲁斯生物技术公司(美国圣克鲁斯,CA),分别。二十二碳六烯酸(DHA)是来自圣克鲁斯生物技术公司(圣克鲁斯、钙、美国),和13 - (S) -hydroxyoctadecadienoic酸(蚯蚓)13日(蚯蚓)从Amresco购买(梭伦,哦,美国)。药物的可溶性溶剂由制造商表示,然后在无菌磷酸盐缓冲盐水稀释(PBS)和消毒过滤通过0.22μm膜(微孔,贝德福德,妈,美国)。

2.2。肠道绒毛隔离

绒毛从小肠被孤立如前所述25]。villus-enriched准备在最低基本培养基(MEM)含抗生素/抗真菌的解决方案是保持在4°C到化验轮状病毒感染,不超过1小时。

2.3。病毒感染试验

Fifty-two-day-old雄性ICR小鼠口服感染与否与纯化ECwt如前所述[25]。在感染后2 h (h.p.i)小鼠口服给PGZ(9毫克/公斤/天)每天三次了两天。控制感染小鼠接受安慰剂(无菌PBS)或PGZ同一剂量条件下(3]。后12、24、36和48 h.p.i。,mice were euthanized and their small intestines isolated. Duodenum samples were taken separately to be submitted for histopathological examination and the remaining intestines were used for villus isolation. The experiments here described were referred to as在活的有机体内实验。

成人未感染ICR小鼠小肠被屠杀和他们分离的绒毛隔离。绒毛是接种轮状病毒ECwt 0.5 (MOI) 15分钟之后,PGZ (153µTZD(153米)µRGZ(153米)µDHA(45米)μ阿拉巴马州的米)(45μ蚯蚓(45美元)μ米),或者ATRA (45μ米)分别添加和孵化37°C。收获每2 h.p.i PGZ-treated绒毛。而绒毛治疗与其他试剂在12 h.p.i收获。未感染绒毛对待PGZ (153µ米),每2 h.p.i收获。被用作控制。这里的实验描述被称为在体外实验。

绒毛隔绝在活的有机体内感染小鼠治疗在体外PGZ (153µ米)和培养12 h在37°C。绒毛的在活的有机体内感染和PGZ-treated老鼠也在相同的条件下培养。绒毛与未感染和PGZ-treated老鼠也培养了12 h在37°C。绒毛与未感染的小鼠感染ECwt 0.5 (MOI),治疗PGZ (153µ米),留给12 h 37°C。绒毛与未感染的老鼠接受PGZ (153µM)为30分钟37°C,然后感染ECwt 0.5 (MOI)和左12 h在37°C。绒毛在12 h.p.i后收获。在37°C。在所有情况下,病毒抗原和细胞蛋白质被捕获ELISA分析。这里的实验描述被称为在vivo-in体外实验。

2.4。病毒滴度的绒毛溶解产物

绒毛与未感染的老鼠被播种在96 -文化板块,然后感染或不与ECwt (MOI的0.5)。15分钟后皮。PGZ (153µTZD(153米)µRGZ(153米)µDHA(45米)μ阿拉巴马州的米)(45μ蚯蚓(45美元)μ米),或者ATRA (45μ米)被添加到绒毛和留给孵化37°C最多12 h。控制绒毛孵化没有试剂。孵化后,收获每2 h.p.i PGZ-treated绒毛。而其余试剂对待每12 h.p.i收获。绒毛受到两个周期冻结和解冻,用在30%幅度为3分30秒声波降解法。绒毛的溶解产物添加10µg / mL胰蛋白酶和连续稀释接种之前绒毛与未感染的老鼠。绒毛在孵化前12 h在37°C为轮状病毒抗原阳性细胞免疫化学分析如下表示。结果画洁净/毫升与postinoculation时间。

2.5。免疫细胞化学

肠道绒毛从感染和未感染的老鼠不治疗或与PGZ固定了20分钟在冰冷的甲醇:乙酸(3:1 v: v)。透化作用后0.5% Triton x - 100和0.1% SDS 15分钟,50 mM NH绒毛被孵化₄Cl 30分钟。与PBS洗涤后,坚持盖玻片的绒毛在37°C的环境与主兔子Abs对轮状病毒结构蛋白或主兔子Abs对轮状病毒非结构蛋白(NSP4或NSP5)。洗后用PBS,绒毛孵化与HRP-conjugated山羊anti-rabbit Abs 1 h在37°C。反应是可视化使用aminoethylcarbazole (AEC)衬底。绒毛在显微镜下观察到放大×100(先锋)。

细胞被积极的病毒抗原的比例估计绒毛隔离受感染和未感染的老鼠。药物对病毒感染的影响建立了比较感染病毒的绒毛细胞病毒感染小鼠的平均百分比PGZ治疗与感染病毒的小鼠没有PGZ治疗。药物作用是表示为意味着轮状病毒抗原阳性细胞的比例相对于被感染的老鼠没有PGZ治疗。同样的程序被用于分析绒毛感染在体外已经治疗与否与PGZ TZD、RGZ, DHA,阿拉巴马州,蚯蚓,ATRA。

PPAR的影响γ激活,PGZ TZD、RGZ DHA,阿拉巴马州和蚯蚓,或者ATRA治疗ECwt感染和细胞蛋白的表达NF -κB(磷酸化和nonphosphorylated), PPARγPDI, Hsc70或cox - 2被免疫荧光分析使用above-prepared盖玻片,用于轮状病毒抗原的免疫细胞化学分析。这些盖玻片用PBS和治疗原发性山羊Abs PDI和Hsc70、兔对p-NF - Absκ337 B p50 (Ser)和NF -κB,或鼠标马伯PPARγ和孵化1 h在37°C。二次抗体FITC-conjugated驴、anti-rabbit或anti-mouse Abs申请20分钟在室温下(RT)。绒毛在荧光显微镜观察细胞(先锋)和拍照。

组织学小鼠十二指肠的横截面也分析上述细胞蛋白的表达(NF -κB, PPARγ,Hsc70 PDI和cox - 2)和轮状病毒感染。十二指肠横截面从感染和未感染的小鼠有治疗与否PGZ和10%多聚甲醛固定,石蜡嵌入式,分为3 - 5µ米厚片。石蜡包埋的部分被放置到盖玻片,在二甲苯deparaffinized, permeabilized Triton x - 100 1%和1% SDS 30分钟。与PBS洗涤后,盖玻片处理NH 50毫米₄Cl 30分钟,然后孵化与兔子Abs轮状病毒结构蛋白1 h在37°C。二次HRP-conjugated山羊anti-rabbit添加了Abs和孵化1 h在37°C。反应与AEC色原体可视化。盖玻片是反应与山羊anti-PDI anti-Hsc70, anti-COX-2或anti-PPARγAbs或兔子anti-NF -κB Abs 1 h在37°C。FITC-conjugated驴anti-mouse Abs或FITC-conjugated驴anti-rabbit添加了Abs和孵化20分钟在RT在黑暗中。代表从每个盖玻片被使用荧光显微镜照片(先锋)。照片的分析进行了免疫细胞化学和免疫荧光分析ImageJ使用程序。修正总细胞荧光(CTCF)值转换为百分比值和用柱状图表示。感染控制规范化值为100%。

共焦显微镜用于细胞蛋白表达分析。盖玻片deparaffinized部分同时孵化与山羊对p-NF - AbsκNF - 337 B p50 (Ser)κB和PDI,鼠标对PPAR马伯γ老鼠,兔子,山羊或Abs轮状病毒结构蛋白。孵化1 h后37°C,盖玻片是孵化20分钟在RT二级FITC-conjugated山羊anti-rabbit Abs或FITC-conjugated驴anti-mouse Abs、Cy5-labeled山羊anti-rabbit免疫球蛋白Abs、或Alexa 594 -标记兔抗体免疫球蛋白Abs。共焦进行了分析检验包含绒毛盖玻片,治疗感染和未感染的老鼠与PGZ与否。盖玻片是观察,拍照使用共焦显微镜(尼康颈- 1),并分析了使用ImageJ colocalization仪插件。

2.6。ELISA

绒毛隔绝在不同实验条件下小鼠细胞溶解在缓冲区里帕(50 mM Tris-HCl, pH值8.0,150毫米氯化钠,NP-40 1%, 0.1% SDS, 0.5%的医生,和0.5毫米PMSF)和用在30%幅度为3分30秒声波降解法。ELISA板被涂上一层豚鼠Abs轮状病毒结构蛋白,山羊PPAR AbsγNF -κB, cox - 2兔子Abs PDI或Hsc70阻塞和5%的脱脂牛奶。从小鼠用于绒毛溶解产物在活的有机体内实验应用于总蛋白浓度约80µg / mL而从在体外实验应用于大约20毫克/毫升的浓度。绒毛的溶解产物未感染的小鼠或PBS代替绒毛溶解产物被用作控制。兔子Abs对轮状病毒结构蛋白添加到孔板已经被涂上几内亚Abs轮状病毒结构蛋白。检测细胞蛋白质,山羊Abs PDI和Hsc70和鼠标马伯PPARγ、NF-kB或cox - 2被添加到孔板涂上相应的捕获抗体细胞蛋白测试。HRP-conjugated驴抗体Abs或HRP-conjugated山羊anti-mouse二氯化Abs和o-phenylenediamine(门诊部当)(美国马热科学34005年,沃尔瑟姆)被用来可视化和量化的反应。

2.7。活性氧的检测

ROS生成测量使用Cellomics氧化应激1高碳钢试剂盒。绒毛从感染和未感染的小鼠治疗与否与收集PGZ表示postinfection时间和放置在杜尔贝科修改鹰媒体(DMEM),加上dihydroethidium(她)(16μg / mL最终浓度)和赫斯特33342年最终浓度(0.016 ng / mL)和孵化为30分钟37°C。在400 g离心收集的绒毛是2分钟,然后用4%多聚甲醛在PBS为30分钟37°C。的绒毛被放置到幻灯片嵌入式与树脂和盖玻片覆盖着。ECwt-infected和PGZ-treated绒毛在体外受到相同的程序。每张幻灯片十代表图像领域的显微镜下记录。

2.8。流式细胞术

NF -流式细胞术分析κB, NF -κbp, PDI Hsc70, PPARγ或cox - 2表达绒毛细胞隔离受感染或感染小鼠治疗与否与PGZ由修复PBS / EDTA -(5毫米)孤立的绒毛细胞甲醇:乙酸(3:1 v / v)为1 h在4°C。的绒毛和50 mM NH孵化₄Cl 30分钟,然后处理混合包含主要Abs轮状病毒结构蛋白和细胞蛋白质NF -κB, NF -κPDI, B-p50 Hsc70, PPARγ,cox - 2。主要Abs服用次要FITC-labeled驴anti-mouse Abs和CY5-labeled山羊anti-rabbit Abs。细胞没有抗体治疗,细胞主要Ab治疗和二级Ab无关,与二级Ab和细胞治疗没有初级Ab是用作控制。分析了细胞流式细胞分析仪(BD FACSCanto II)。

2.9。西方墨点法

PPARγ和NF -κB-p50表达绒毛细胞对应在体外实验评估了准备绒毛溶解产物作为ELISA表示。ECwt感染存在与否的绒毛是PGZ (153µTZD(153米)µRGZ(153米)µDHA(45米)μ阿拉巴马州的米)(45μ蚯蚓(45美元)μ米),或者ATRA (45μ米)。量化溶解产物Laemmli处理的样品缓冲和sds - page分析了10%。分离蛋白被转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜被封锁与5%脱脂奶和探测主要山羊anti-PPARγ或兔子anti-NF -κB-p50 Abs。二级HRP-conjugated山羊anti-rabbit抗体或驴Abs被用来检测ImmunoCruz的反应™免疫印迹鲁米诺试剂盒(sc - 2048圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯,CA,美国)。

2.10。细胞生存能力

villus-associated细胞的生存能力评估使用锥虫蓝(σ93595年,圣路易斯,密苏里州,美国)排除测试。绒毛悬浮液从感染或感染小鼠治疗与否与PGZ TZD、RGZ, DHA,阿拉巴马州,蚯蚓,或ATRA测试。细胞不含染色数代表的10个领域里的,他们的平均百分比指的是全细胞记录。

2.11。统计分析

统计分析的数据进行了使用GraphPad Prism 5.0版本和应用Kolmogorov-Smirnov测试来确定样本数据是正态分布的。此外,参数单向方差分析(方差分析)和多重比较Dunnett测试被用来发现统计上显著的差异。

3所示。结果

3.1。PPARγ激活减少ECwt感染

证据提供了培养细胞的感染轮状病毒可以被南汽,吡格列酮,或罗格列酮治疗3,5]。我们评估的能力PGZ干扰ECwt感染小肠从口头villus-associated细胞感染的老鼠。免疫细胞化学的结果显示,感染细胞的百分比的绒毛从受感染小鼠后减少PGZ治疗与感染细胞的百分比的绒毛与未经处理的小鼠(图的控制1(一))。免疫细胞化学分析后,PGZ抑制病毒感染的平均百分比通过12-48 h.p.i。检测结构的存在,NSP4和NSP5病毒性抗原为65.09%,80.52%,和62.47%,分别比平均的感染比例ECwt-infected绒毛没有PGZ治疗(图1(一))。未感染的细胞治疗与否与PGZ没有反应抗体用于治疗轮状病毒结构和非结构蛋白。这些结果表明,PGZ ECwt-infected老鼠明显减少病毒感染的治疗。

绒毛细胞的平均百分比保持积极PGZ后病毒抗原,TZD、RGZ, DHA,阿拉巴马州,或者研究ATRA治疗也在同步系统组成的小肠绒毛与未感染的老鼠。的平均百分比PGZ抑制病毒感染通过12-48 h.p.i。时间确定的ECwt结构性的存在和非结构化(NSP4和NSP5)抗原。对这些抗原阳性细胞的平均比例分别为48.81%,73.96%,和64.41%,分别ECwt-infected控制相比,绒毛没有PGZ治疗(图1 (b))。绒毛出现在未感染的细胞完全不利于病毒结构和非结构化抗原,而不管绒毛与PGZ治疗与否。这些结果表明,治疗在体外ECwt-infected绒毛PGZ也导致绒毛细胞的数量显著减少积累病毒编码蛋白测试。类似的行为来观察PGZ-treated ECwt-infected绒毛被发现与其他PPAR ECwt-infected绒毛治疗后γ受体激动剂测试并与ATRA病毒结构蛋白积累的总含量降低。绒毛的ELISA OD值发现溶菌产物从ECwt-infected绒毛RGZ对待,TZD,阿拉巴马州,DHA,或ATRA 0.191±0.064, 0.145±0.048, 0.322±0.107, 0.342±0.114, 0.186±0.062, 0.399±0.079相比,分别为治疗ECwt-infected控制绒毛(图1 (c))。没有反应抗体病毒结构蛋白提取物中检测出未感染的绒毛与代理指定的抗炎治疗与否。

3.2。PGZ治疗感染性粒子的效价的影响

虽然减少ECwt抗原PGZ治疗后的观察在活的有机体内和在体外系统,我们想研究这种抗原是否减少伴随着一种有效减少感染性粒子的比例。的免疫细胞化学结果在体外受感染的绒毛表明PPARγ激活PGZ治疗传染性的浓度降低了57.37% (2 h), 53.49%(4小时),49.70%(6小时),36.36%(8小时),44.34% (10 h), 54.33%(12小时)通过检查期间(从2到12 h.p.i。)与受感染的绒毛没有吡格列酮治疗(图1 (d))。传染性效价完全缺席提取物未感染和未感染加上PGZ控制绒毛。平均减少传染性PGZ治疗引起的效价是49.28%通过这个postinfection时间。测试的第二个周期的影响PGZ治疗传染性效价,绒毛被感染,用吡格列酮治疗再次收集每2 h (2 - h.p.i。),细胞溶解,接种在缺乏吡格列酮治疗的情况下,未受感染的绒毛和孵化12 h。PGZ-treated绒毛的免疫化学的结果表明,接种物显示显著减少传染性效价的最后12 h潜伏期与接种物相比PGZ-untreated绒毛。减少传染性效价大约是16.67% (2 h), 86.36%(4小时),85.63%(6小时),25.31%(8小时),75.17% (10 h), 78.28%(12小时)(图1 (e)),而平均减少61.23%通过postinfection期间检查。提取物未感染的绒毛被(或不)PGZ缺乏感染滴度。这些结果表明,减少病毒抗原在PGZ-treated绒毛不是减少传染性病毒粒子的数量。病毒效价在原油溶解产物ECwt-infected绒毛平均降低了46.15%,47.69%,40.77%,42.31%,82.31%,31.54%,59.23%,治疗RGZ, TZD,阿拉巴马州,DHA, ATRA蚯蚓,和防治(NAC),分别通过postinfection期(2 - h.p.i)(图进行测试1 (f))。溶菌产物从感染绒毛缺乏传染性效价是用作控制。NAC治疗ECwt-infected绒毛被用作积极控制感染轮状病毒的抑制作用。使用的试剂浓度通过12 h.p.i并不影响细胞的生存能力。期检查(图1 (g))。总的来说,结果表明,PPARγ激活导致数量下降的时期形成病毒的传染性病毒粒子循环。

3.3。PPARγ激活修改细胞蛋白的表达,减少ECwt感染

描述的影响ECwt感染细胞蛋白质PPAR的表达γNF -κB, cox - 2、PDI和Hsc70,免疫荧光试验进行使用的在活的有机体内和在体外系统与PGZ治疗的存在与否。同样,一个免疫荧光试验进行使用在体外系统治疗的存在与否与RGZ TZD,阿拉巴马州,DHA,蚯蚓或ATRA。代表照片在指定的时间点在感染后使用程序ImageJ(图进行了分析2(一个))。这些照片表明,病毒感染细胞蛋白质的积累表示增加,而PGZ治疗引起的减少信号对应于这些蛋白质和病毒抗原。

荧光染色强度使用程序ImageJ量化。修正后的总细胞荧光(CTCF)值表示在活的有机体内治疗感染小鼠PGZ导致PPAR平均增加20.34±5.09%γ表达式通过12-48 h.p.i。时期,相比,其表达在绒毛未感染控制老鼠(图2 (b))。ECwt感染的老鼠PPAR增加γ表达式由110.35±10.5%,46.02±6.78%,23.00±4.80%,在绒毛细胞在12和29.07±5.39%,24岁,36岁,48 h.p.i。分别控制相对于未受感染的老鼠。PGZ治疗受感染的老鼠PPAR使病毒诱导表达明显下降γ只在12和48 h.p.i。(35.56±5.96%和16.23±4.03%,职责),而这个表达式是保持几乎不变PGZ治疗后中间postinfection时候检查(24和36 h.p.i。)(图2 (b))。略微减少细胞cox - 2蛋白的表达水平,PDI,和观察Hsc70绒毛细胞未受感染的老鼠PGZ处理,除了NF -κ略有增加(图B的表达2 (b))。病毒感染引起的平均增加152.23±87 90%,129.82±81.01%,83.79±27.15%,和NF - 40.86±29.02%κB, cox - 2、PDI和Hsc70表达式,分别相对于绒毛从感染控制老鼠在12-48 h.p.i。期检查。NF -表达水平的比较κB, cox - 2, PDI, Hsc70感染小鼠的感染时间进程表明,PGZ治疗导致了他们的表达显著减少postinfection时报分析(12-48 h.p.i)。PGZ-induced平均减少45.78±16.78%,23.93±17.63%,23.47±10.90%,和NF - 21.74±12.11%κB, cox - 2, PDI Hsc70,分别通过12-48 h.p.i。期检查(图2 (b))。

平均值的百分比immunofluorescent绒毛细胞阳性细胞蛋白质PPARγNF -κB, cox - 2、PDI和Hsc70在活的有机体内系统是45.7±3.38%,48.4±3.47%,40.3±3.17%,49.6±3.52%,和40.3±3.17%,分别对绒毛未受感染的老鼠,虽然绒毛细胞的平均百分比ECwt-infected老鼠显示这些蛋白质的一个积极的信号是64.57±4.02%,74.15±4.30%,75.82±4.35%,63.65±3.98%,和65.85±4.06%,分别通过时间点检查(图3(一个))。这些结果符合增长约为41.29%,53.20%,88.14%,28.33%,和63.4%,分别为这些rotavirus-induced细胞蛋白相比,控制绒毛未受感染的老鼠。相比之下,PGZ治疗ECwt-infected老鼠生产绒毛细胞的平均百分比减少这些细胞蛋白表达。PPAR的平均百分比γNF -κB, cox - 2、PDI和Hsc70-expressing细胞降低了23.93%,25.83%,24.16%,9.00%,和30.57%,分别通过12-48 PGZ治疗受感染的老鼠h.p.i。时期相比,绒毛细胞的平均百分比积极相应的细胞蛋白检测的绒毛ECwt-infected老鼠没有PGZ治疗(图3(一个))。根据这些结果,PGZ治疗ECwt-infected老鼠似乎减少细胞的比例被积极的细胞蛋白检查只是比例中所观察到的类似绒毛细胞未受感染的老鼠。

的伴随效应ECwt感染和PGZ治疗PPAR细胞蛋白的表达水平γPDI, Hsc70检查。ELISA结果显示,ECwt感染显著增加PPAR的表达水平γPDI, Hsc70从感染的细胞在活的有机体内,导致以下OD值:0.966±0.241,0.832±0.208,0.909±0.227,分别通过postinfection时间检查与未感染控制细胞表达水平观察相比,分别为0.535±0.133,0.561±0.140,0.435±0.108(图3 (b))。另一方面,PGZ治疗ECwt-infected老鼠在活的有机体内减少病毒结构抗原通过12-48 h.p.i。期研究。均值为PPAR ELISA OD值γPDI, Hsc70从pioglitazone-treated ECwt-infected老鼠0.711±0.177,0.571±0.142,0.505±0.126,分别(图3 (b))。没有检测到病毒结构蛋白在绒毛未感染和未感染PGZ-treated控制老鼠。似乎这些ELISA值之间的中间发现ECwt-infected和未感染的老鼠。然而,PPAR PGZ的降低效果γ感染细胞的表达水平在过去postinfection无意义的次检查,可能由于PGZ诱导PPAR的事实γ表达水平在绒毛细胞未受感染的老鼠。

villus-associated PGZ-treated绒毛细胞的免疫荧光分析在体外表明细胞表达细胞蛋白质PPAR的百分比γNF -κB, cox - 2, PDI, Hsc70 21.8±1.76%, 31.7±2.12%, 27.5±1.98%, 36.5 + 2.28%和39.8±2.38%(图3 (c))。ECwt感染后绒毛在体外细胞记录的百分比,这些细胞蛋白阳性是增加在所有的情况下与未感染的细胞控制绒毛(图3 (c))。PPAR阳性细胞的平均百分比γNF -κB, cox - 2, PDI, Hsc70 ECwt-infected绒毛为57.98±2.88%,59.07±2.90%,57.03±2.85%,64.68±3.03%,和58.24±2.88%,整个时间点分别检查。这些意味着比例降低了11.85%,17.72%,14.26%,17.05%,和12.5%,分别ECwt-infected绒毛PGZ处理时在经历h.p.i。期(图3 (c))。然而,PGZ治疗感染绒毛导致增加PPAR的水平γ表达式由ECwt相似诱导感染(图3 (c))。

ELISA结果的在体外实验表明,PGZ治疗ECwt-infected绒毛减少病毒抗原,当平均通过12-48 h.p.i。时期。PGZ治疗ECwt-infected绒毛相对减少了46.66%的病毒抗原感染绒毛没有治疗(图3 (d))。同样,PGZ治疗ECwt-infected绒毛PPAR的表达水平下降γPDI, Hsc70 26.40%, 31.37%,和44.44%,分别与感染相比绒毛,没有接受PGZ(图3 (d))。细胞蛋白的表达水平PGZ-treated ECwt-infected绒毛密切观察到类似的控制细胞无毒性(图3 (d))。相比之下,PGZ治疗感染绒毛PPAR增加γ表达水平61.87%,而PDI和Hsc70表达水平保持不变,相对于未感染和治疗控制绒毛(图3 (d))。未感染和未感染PGZ-treated控制绒毛为阴性病毒结构抗原。

治疗与RGZ ECwt-infected绒毛,TZD,阿拉巴马州,DHA,蚯蚓,ATRA对细胞的表达水平及其影响PPAR的蛋白质γNF -κB、cox - 2和Hsc70也检查了的在体外系统使用绒毛在postinfection乘以上述免疫化学测定。villus-associated细胞的免疫荧光分析的研究在体外系统显示ECwt感染导致显著增加的百分比绒毛细胞显示细胞蛋白质PPAR积极的信号γNF -κB、cox - 2和12点将h.p.i Hsc70。,in comparison to that found in cells from uninfected control villi. Treatment of ECwt-infected villi with RGZ, DHA, and HODE did not cause any statistically significant effect on the proportion of PPARγ阳性细胞。除了ATRA和NAC治疗有显著刺激影响PPAR的比例γ阳性细胞的治疗保持这个比例基本不变。绒毛细胞的百分比被积极的NF -κB只有显著减少了治疗阿拉巴马州和ATRA,而剩下的PPAR治疗γ受体激动剂保持这个比例几乎不变。COX-2-positive绒毛细胞的比例降低,但不明显,由RZG TZD,阿拉巴马州,和ATRA治疗,而这个比例在治疗后统计上保持不变的任何剩余的PPARγ受体激动剂测试。除了TZD, DHA,蚯蚓,NAC治疗,其余治疗导致显著降低百分比Hsc70绒毛细胞的积极信号。这些检测结果表明,细胞蛋白质不同响应指定的治疗。这些发现呼吁进一步的研究旨在了解这些微分反应的分子机制。

ELISA结果显示ECwt感染显著导致PPAR的表达增加γNF -κB、cox - 2和12点将h.p.i Hsc70。与各自的表达水平在感染控制细胞(图3 (e))。然而,一个微分效应与PPAR的治疗γ受体激动剂和ATRA ECwt-infected绒毛观察细胞蛋白表达在体外。PPARγ只有ALA处理表达显著降低,而对PPAR其他治疗没有显著影响γ抗原ECwt-infected绒毛(图中积累3 (e))。在NF -κB表达,任何减少治疗所造成的化验是统计学意义(图3 (e))。cox - 2表达只是显著减少了RZG治疗,而其余治疗保持其表达水平在统计学上类似于ECwt-infected绒毛没有治疗(图3 (e))。与此同时,降低了所有PPAR Hsc70表达式γ受体激动剂治疗和ATRA治疗,除了DHA明显Hsc70表达水平降低甚至低于基底的感染控制绒毛(图中观察到3 (e))。一些观察到的差异影响PPAR所致γ受体激动剂和ATRA治疗可以解释的事实,检测细胞被免疫荧光阳性细胞蛋白质的比例比检测不敏感细胞抗原的ELISA积累在整个细胞群。

关于PPAR PGZ效果γ调解,进行免疫印迹分析主机cell-encoded蛋白质ECwt后感染的绒毛在体外系统。受感染的绒毛和PGZ立即不及时治疗或治疗,RGZ, TZD,阿拉巴马州,DHA,蚯蚓,或者ATRA然后在指定的时间点细胞溶解使用anti-PPAR免疫印迹分析γ或anti-NF -κB抗体。结果表明,PGZ治疗诱导PPAR的高表达γ在未感染绒毛在治疗后8 - 12 h(图3 (f)车道7和8)与PGZ-untreated相比未感染控制绒毛在同一次(图3 (f),车道3和4)。基底PPAR的表达水平γ在0、4、8、12 h后文化车道1所示,2、3和4分别(图3 (f))。PGZ-untreated绒毛的ECwt感染导致进一步增加PPAR的表达式γ在8 h.p.i。(图3 (f)巷11),而这种细胞蛋白质的表达进行了12点将h.p.i略有减少。(图3 (f)前巷12)相比,立即检查时间点。PGZ ECwt-infected绒毛的治疗显示增加PPAR的表达式γ4(巷14)和8个h.p.i。(巷15)轻微下降12 h.p.i紧随其后。(莱恩16)(图3 (f))。这些发现表明,吡格列酮治疗ECwt-infected绒毛引发额外的PPAR的表情γ至少在中间postinfection时间检查。是否PGZ治疗和ECwt感染都是添加剂的影响至少在postinfection时间检查仍有待研究。PPAR的ECwt-induced表达式γ是不同与PGZ影响绒毛的治疗,RGZ, TZD, DHA,阿拉巴马州,蚯蚓,或者ATRA当12 h.p.i的分析。而PGZ治疗,用作参考,似乎保持PPARγ表达几乎不变,TDZ治疗刺激进一步的表达这种细胞蛋白质(图3 (g))。相比之下,阿拉巴马州和PPAR的蚯蚓产生明显降低γ表达水平,而RGZ, DHA, ATRA诱导PPAR的轻微下降γ表达水平相比ECwt-infected绒毛中的表达水平没有治疗(图3 (g))。在NF -κB,其表达水平也增加了ECwt感染,而感染的所有治疗与PGZ绒毛,RGZ, TZD, DHA,阿拉巴马州,蚯蚓,或者ATRA似乎减少了NF -κB表达水平与感染控制绒毛细胞(图中找到3 (g))。

研究病毒感染与细胞蛋白表达之间的关系,PPAR的流式细胞术分析γp-NF -κB, NF -κB, cox - 2、PDI和Hsc70。显著减少的细胞被病毒抗原阳性的比例在绒毛细胞被发现感染小鼠,接受PGZ与吡格列酮治疗控制。例如,病毒抗原阳性绒毛细胞的百分比在36 h.p.i下降了68.2%。,而这个比例在48 h.p.i几乎被废除。对于PGZ-treated老鼠。尊重细胞蛋白质,绒毛细胞的百分比从受感染的老鼠表现出积极信号蛋白显著增加评估相比,观察控制绒毛细胞未受感染的老鼠。然而,除了在36 h.p.i。,PGZ treatment led to a decreased percentage of cells showing positive signals for these proteins. For all cellular proteins tested, this percentage declined approaching the basal levels observed in control villus cells from uninfected mice (Table1)。

研究的敏感性在活的有机体内ECwt PGZ治疗的感染在体外,小肠绒毛在48 h.p.i隔离受感染的老鼠。然后治疗在体外与PGZ 12 h。PGZ治疗效果对轮状病毒SP和PPAR细胞蛋白质γPDI, Hsc70也决定用ELISA。的在体外PGZ治疗在活的有机体内感染病毒SP的绒毛导致水平下降,PPARγ,Hsc70 37.19%、48.40%和55.21%,分别而PDI水平保持不变,与相应的抗原最初出现在控制绒毛隔绝在活的有机体内受感染的老鼠(图4)。的在体外积累的病毒SP, PPARγ在绒毛,PDI Hsc70隔离受感染的老鼠已经用吡格列酮治疗在活的有机体内增加了35.97%、31.38%、23.71%和37.85%,分别与相应的抗原最初出现在控制绒毛隔绝在活的有机体内受感染的老鼠。这些结果证实,小肠绒毛隔绝在活的有机体内ECwt-infected老鼠继续能够支持在隔离和病毒感染在体外文化。此外,结果表明,在体外PGZ绒毛以前感染的治疗在活的有机体内在干扰轮状病毒感染是有效的(图4)。

调查病毒抗原和细胞蛋白质的亚细胞定位研究工作,colocalization分析了共焦荧光显微镜和这项工作。组织学分析横截面的十二指肠口头ECwt-infected老鼠显示PGZ治疗导致减少病毒抗原和细胞免疫荧光信号PPAR的蛋白质γNF -κB, cox - 2, PDI, Hsc70对那些受感染老鼠没有吡格列酮治疗。的代表图像PGZ治疗影响细胞蛋白的表达是PPAR的显示γ和NF -κB(数据5(一个)和5 (b))。量化colocalization病毒和细胞的蛋白质在ImageJ使用colocalization仪插件了兼容的皮尔森相关系数的随机colocalization这些蛋白质。从十二指肠绒毛细胞表现出PPAR的百分比γ或NF -κB在细胞质或细胞核染色是在36 h.p.i量化。用共焦显微镜的组织学分析横截面的十二指肠绒毛ECwt-infected和未受感染的老鼠与否与PGZ(数据处理5 (c)和5 (d))。PPARγ免疫荧光检测的细胞质1.5±0.55%,53.0±3.26%,和18.4±1.92%的绒毛细胞感染,感染,感染和PGZ-treated小鼠,分别。相应的核PPAR百分比γ荧光是20.2±2.01%,29.5±2.43%和18.1±1.90%(图5 (e))。这些结果表明,ECwt感染显著增加细胞质PPAR的积累γ在较小程度上,核PPAR的积累γ。NF -的百分比κB荧光绒毛细胞的细胞质中发现未感染,感染,感染和pioglitazone-treated老鼠1.7±0.59%,49.7±3.15%,和7.7±1.24%,分别,而相应的百分比核NF -κB荧光是29.5±2.43%,28.2±2.37%和27.0±2.33%(图5 (f))。这些百分比表明核NF -κB水平几乎不敏感ECwt感染而细胞质NF -κB水平令人印象深刻的增加。考虑的在活的有机体内感染系统分析是一个异步,PPAR的亚细胞定位百分比获得γ和NF -κB是反映平均状态的感染过程,而不是一个同步病毒循环。然而,结果表明,ECwt感染增加的百分比绒毛细胞细胞质和核PPAR积极γ相比于未受感染的细胞,而PGZ治疗似乎抵消这种增强效应。NF -也观察到同样的趋势κ核积累NF - B,除了κB似乎不变ECwt感染和PGZ治疗。

3.4。轮状病毒感染和氧化应激

改变氧化/抗氧化剖面已经报道了整个从rotavirus-infected新生儿小鼠小肠的匀浆26]。在这种背景下,我们试图研究轮状病毒感染是否能诱导氧化应激在ECwt-infected绒毛细胞与小鼠小肠。绒毛隔离受感染的老鼠不及时治疗或治疗与PGZ绒毛与未感染的老鼠相比的活性氧积累起来的。数据显示,平均38.47±3.50%绒毛细胞的感染控制老鼠ROS-positive通过48 h postinfection时间检查,而这意味着增加到74.29±6.75%的ECwt-infected绒毛。PGZ治疗感染小鼠的平均百分比减少ROS-positive绒毛细胞(图44.89±4.08%6(一)和6 (d))。在实验中涉及在体外ECwt感染绒毛与未感染的老鼠,它是发现,在平均87.66±2.62%的绒毛细胞积极为ECwt-infected ROS绒毛相比36.57±1.35%感染控制绒毛通过课程(图12 h postinfection时间6 (b))。的平均百分比ROS-positive细胞ECwt-infected绒毛减少到44.92±1.63%当这些绒毛在PGZ(数据维护6 (b)和6 (e))。修正后的总细胞荧光(CTCF)值在绒毛细胞的活性氧积累显示,通过这些物种都基本没有postinfection时报在未感染的情况下学习和PGZ-treated未受感染的老鼠(图6 (c))。病毒感染活性氧积累增加了28.94±5.38%,16.28±4.03%,78.43±8.86%,12和91.16±9.55%,24岁,36岁,48 h.p.i。未受感染的老鼠相比,绒毛。相比之下,PGZ治疗诱导的活性氧积累减少绒毛细胞感染病毒的老鼠。这PGZ-induced降低的百分比为19.35±4.39%,8.46±2.91%,15.67±3.95%,12和34.09±5.83%,24岁,36岁,48 h.p.i。分别(图6 (c))。总的来说,两在活的有机体内和在体外实验结果支持假设PGZ抑制ECwt-induced在小肠绒毛细胞氧化应激。

4所示。讨论

在当前,我们研究在活的有机体内和在体外PGZ和其他PPAR的效果γ小肠绒毛细胞的受体激动剂对轮状病毒感染。基于先前的报道提供证据对轮状病毒感染抑制PGZ和RGZ6,25),我们试图描述一些细胞和分子事件与ECwt感染小肠绒毛的使用在体外同步系统组成的小肠绒毛从老鼠,而不是孤立的在活的有机体内异步系统由老鼠。口头的结果感染小鼠ECwt表明PGZ治疗显著降低的比例绒毛细胞积极轮状病毒抗原。这表明PGZ能够影响病毒感染肠道绒毛细胞通过直接接触或返回的体循环回到小肠。PGZ是否影响在活的有机体内轮状病毒感染,减少病毒传播或复制率或者两者都还有待建立。然而,获得的结果使用鼠标异步系统反映平均测量从许多病毒生命周期的不同阶段。有趣的是,PGZ抑制作用在一个同步确认在体外系统未感染小鼠感染小肠绒毛隔绝ECwt然后PGZ治疗有效浓度控制。这种治疗导致绒毛细胞的数量显著减少积累病毒编码蛋白测试并减少病毒抗原存在于溶菌产物的总量从孤立的绒毛。一个类似的行为被发现与其他PPAR ECwt-infected绒毛治疗后γ受体激动剂如RGZ、TZD、阿拉巴马州和DHA和ATRA生理活性维生素代谢功能的配体视黄酸受体(RAR)和类维生素a X受体(RXR)。正常和恶性细胞的生长和分化是由绑定RAR-RXR异质二聚体对维甲酸(RA)响应元素(罕见)27]。这些发现表明,PPAR的激活γ和ATRA-activated转录因子参与轮状病毒感染周期的机制。

虽然减少感染ECwt绒毛细胞的比例和累计总抗原PGZ治疗后的观察在活的有机体内和在体外系统,我们想研究这种抑制效应是否伴随着一种有效减少感染性粒子的比例。PGZ-treated绒毛的免疫化学的结果表明,接种物显示显著减少传染性效价的最后12 h潜伏期,相比,吡格列酮治疗控制。这些结果表明,减少病毒抗原在PGZ-treated绒毛不是传染性病毒粒子的数量减少。这些结果不排除PGZ也影响轮状病毒传播感染细胞的数量减少也PGZ治疗后观察。类似的影响传染性效价与其他PPAR在治疗后被发现γ受体激动剂如RGZ TZD,阿拉巴马州,蚯蚓,DHA和也ATRA和抗氧化南汽。

在描述的影响ECwt感染细胞蛋白质PPAR的表达γNF -κB, cox - 2, PDI Hsc70,我们发现这些细胞蛋白质当然ECwt感染后表达增加。ECwt-induced这些细胞蛋白的表达发生在两个细胞的数量的增加积极的这些蛋白质和蛋白质抗原的总量积累在绒毛。这些结果表明,轮状病毒感染的发展似乎需要这些细胞蛋白质的参与,不排除其他细胞的影响因素,不同的检查。然而,除了PPARγ仅略有降低,细胞蛋白的表达水平研究密切水平恢复到基底PGZ ECwt-infected绒毛的治疗后,这表明减少病毒感染引起的PGZ治疗涉及至少PPAR的存在γNF -κB, cox - 2, PDI和Hsc70。然而,研究表明,单独PGZ治疗和PPAR ECwt感染也有相似的效果γ表达式在培养的绒毛。此外,PGZ治疗和ECwt感染的影响似乎只在中间添加剂postinfection乘以8 h.p.i。(4)化验在体外系统。在获得的结果的情况下从小肠绒毛孤立在活的有机体内ECwt-infected老鼠,这些绒毛能够继续支持病毒感染时进一步培养在体外条件。有趣的是,PGZ治疗绒毛诱导PPAR的感染γ表达式。此外,PGZ治疗这些以前ECwt-infected绒毛能干扰病毒感染,表明两种在活的有机体内和在体外系统产生了类似的结果。与此同时,免疫荧光分析表明,ECwt感染增加的百分比绒毛细胞细胞质和核PPAR积极γ,而PGZ治疗似乎抵消这种增强效应。NF -也观察到同样的趋势κ核积累NF - B,除了κB似乎对ECwt感染和吡格列酮治疗。尽管PPAR的微分效应γ受体激动剂测试和ATRA PPAR细胞蛋白的表达γNF -κB、cox - 2和Hsc70 ECwt-infected绒毛的观察,只有PPARγ表达显著降低了阿拉巴马州而cox - 2抗原减少只有RGZ治疗和降低了所有PPAR Hsc70表达式γ受体激动剂治疗和ATRA治疗。PPARγ配体如EPA和DHA已报告增加PPARγ表达和抑制NF -κB在树突细胞(28]。

激活PPARγ由thiazolidinediones噻唑烷二酮类)已被证明会干扰NF -κB信号级联(9),据报道,调解cox - 2表达(15]虽然抑制cox - 2活性降低轮状病毒感染4]。NF -κB激活已经观察到在肠道上皮细胞(iec)后感染轮状病毒(17,18),虽然有些轮状病毒菌株可以抑制NF -的激活κB (19]。PPARγ激活已被证明阻断TNF -α生产(12),而NAC抑制TNF-induced NF -κB激活(28,29日和抑制轮状病毒感染3,6]。另一方面,轮状病毒感染刺激I型干扰素的表达和众多细胞因子感染细胞的先天反应的一部分18]。此外,许多细胞因子的表达依赖于激活的转录因子NF -κB发生一次病毒在宿主细胞中检测到的组件。NF -κ对干扰素的诱导- B是重要的λ和干扰素-β。一些限制NF -轮状病毒已经进化策略κB激活(30.),避免干扰素的影响,至少在感染的早期阶段(31日]。ATRA治疗可以减少表达NF -κB在人类乳腺癌细胞(MCF-7) [32),虽然发现了ATRA诱导NF -κB在正常的人类角质细胞(33]。根据这个原理的框架和我们的结果,我们假设,轮状病毒感染早期是受益于宿主细胞的诱导促炎反应就是明证的增加表达等分子细胞ROS和cox - 2的表达和激活增加NF -κb和PPAR促炎的过程的干扰γ受体激动剂,灭活胞质NF -κ核NF - B或ATRA出现减少κB水平会导致降低轮状病毒感染的感染细胞的比例下降,病毒抗原,积累和传染性效价。然而,脂肪酸能够干扰炎症细胞的免疫应答通过通路以外由NF -κB (28]。

病毒诱导氧化应激是证据确凿的事实,尤其是在RNA病毒的情况下(34]。ROS生产与细胞死亡,也可能发挥重要作用信号病毒复制的规定(34]。轮状病毒感染已被证明诱导活性氧(35],而NAC治疗轮状病毒感染的报道在体外和在活的有机体内(3,5,6]。在目前的研究中,我们发现了一个相对的绒毛细胞比例增加积极ROS化验后ECwt感染在活的有机体内和在体外。然而,PGZ治疗受感染的绒毛导致减少意味着ROS-positive绒毛细胞的比例非常接近未感染绒毛细胞观察。目前的发现支持了假设PGZ抑制小肠ECwt-induced氧化应激的绒毛细胞,干扰病毒感染。

总的来说,我们的结果表明,轮状病毒感染是可以增加细胞蛋白质PPAR的积累γNF -κB, PDI, Hsc70和活性氧在活的有机体内和在体外条件,而PGZ和ATRA治疗返回这些蛋白质的基础水平,与此同时降低轮状病毒感染。我们建议,轮状病毒感染敏感基因的表达受转录因子结合ppr和罕见的。

5。结论

总之,研究结果提供的证据表明,PPARγ受体激动剂和ATRA对小鼠肠道绒毛感染产生抑制作用在活的有机体内ECwt,引起显著减少传染性病毒粒子和减少一些细胞蛋白参与轮状病毒感染。PPAR的影响γ受体激动剂和ATRA对轮状病毒感染在同步系统组成的小鼠的小肠绒毛孤立显示,基因控制的ppr,很少参与病毒循环抑制。通过PPAR PGZ的抑制作用γ活动给了我们一个更好的了解轮状病毒感染的宿主细胞响应和机制参与其发病机理。然而如何PPAR的确切机制γ受体激动剂——ATRA-induced基因调节轮状病毒感染周期并不完全理解和值得进一步研究。PGZ以来撤销为治疗的代理在一些国家,其他TZD可能是轮状病毒感染治疗的潜在候选人。然而,开发轮状病毒感染的治疗药物依赖于更好地了解轮状病毒感染的细胞和分子机制。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。