文摘
高机动组框1 (HMGB1),它已成为一个最有趣的分子在炎症性疾病和癌症和ligand-activated过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs)是高度相关的,被认为是一个治疗的目标。特别感兴趣的是,某些PPAR配体已经证明了他们的强大的抗炎活动和潜在的抗癌效果。综述篇文章中,我们总结一下最近的实验证据,PPAR配体作为抑制HMGB1目标生物的行为,包括胞内表达,受体信号级联,和胞外分泌物HMGB1的细胞系和/或动物模型。PPAR我们还提出可能的机制参与炎性疾病和讨论未来的治疗价值PPAR针对HMGB1配体分子癌症预防和治疗。
1。介绍
1.1。PPARs及其Ligand-Induced激活
过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs)是核受体家族的成员,有三个同形像PPAR -αPPAR -β/δ和PPAR -γ,可以激活特定的PPAR在细胞质中配体。Ligand-activated PPARs转移到细胞核DNA和绑定到监管元素位于PPAR目标基因的启动子,过氧物酶体扩散国的反应元素(ppr),从而刺激他们的转录1]。这种机制称为transactivation(2),许多PPAR目标基因被发现参与新陈代谢和细胞内稳态3,4]。此外,ligand-induced激活PPARs也压制了通过一个机制称为炎症反应基因的表达ligand-dependent transrepression(5]。transactivation相比,transrepression不涉及核受体同源DNA元素的绑定但经营得罪相互依赖激活其他类PPAR目标基因的转录因子(TFs),包括核转录因子(NF -κBκB)和激活蛋白1 (AP-1),从而减少炎症反应(1,6]。
近年来,一些天然或合成PPAR配体、受体激动剂,已确定在PPAR激活(2]。PPAR配体含有大量的类,如二十烷类、噻唑烷二酮类)、一类(7]。大量的PPAR配体被认为有一定的药理作用。例如,二十碳五烯酸(EPA),属于类花生酸类,众所周知作为一种强有力的抗氧化剂和抗炎作用[8]。几个PPAR TZD类的配体/被用作抗糖尿病的药物,像troglitazone,罗格列酮和吡格列酮(1]。非诺贝特fibrate类的药物,主要用于降低胆固醇水平的患者心血管疾病的风险(9]。此外,替米沙坦,结构独特的血管紧张素ⅱ受体拮抗剂用于治疗高血压,有能力运作的活化剂PPAR -γ和PPAR -β/δ(10- - - - - -12]。
尽管早期研究集中在PPAR配体在调节细胞新陈代谢,有越来越欣赏PPARs的作用在调节各种各样的生物过程,尤其是炎症和癌症(2]。PPARs函数作为细胞传感器,TFs,炎症调节器。这些发现已经导致许多应用程序,PPARs的配体作为协作的保护健康组织,抗炎治疗,和增强抗癌疗法(13]。
1.2。HMGB1及其信号通路
核HMGB1。高机动组框1 (HMGB1)是一种高机动组的成员,总科,它广泛存在于哺乳动物细胞的细胞核和细胞溶质。在正常状态,HMGB1发现伴侣蛋白主要在细胞核DNA,稳定核小体和导致DNA转录,复制和重组(14- - - - - -16]。HMGB1包含两个DNA结合域hmg盒子,这使HMGB1绑定不同的DNA结构没有sequence-specificity [14]。此外,HMGB1已发现许多癌症相关的亲和力增加TFs dna结合蛋白的网站,比如NF -κB, p53、p73视网膜母细胞瘤蛋白和雌激素受体(ER) (14,17),因此,HMGB1可能调节基因转录由这些TFs。然而,HMGB1是否起着类似的复杂作用在调节基因表达这些TFs还有待进一步探讨。此外,HMGB1也能够弯曲DNA和二分体轴与核小体结合,促进核小体的滑动和染色体稳定性(18]。
HMGB1分泌。有趣的是,在一定的生理或病理条件下,HMGB1可能把从细胞核细胞溶质,然后被释放到细胞外环境。关于其分泌,HMGB1定位取决于赖氨酸残基的乙酰化作用的两个核本地化信号(NLS1/2)。大多数nonacetylated HMGB1存储在细胞核中。不过,当核HMGB1 hyperacetylated动员到胞质其次是活跃分泌到细胞外空间(19,20.]。此外乙酰化,磷酸化21- - - - - -23和甲基化24HMGB1]也导致其分泌的过程。HMGBl目前被认为是积极等炎症细胞分泌白细胞和一些肿瘤细胞也释放被动地在细胞损伤和死亡。
HMGB1-Mediated信号。分泌后,HMGB1的角色发生了巨大的变化。细胞因子,细胞外HMGB1刺激多种细胞表面受体,主要涉及晚期糖化终产物的受体(愤怒)的toll样受体家族(通常),和趋化因子receptor-4 (CXCR4)表达了对邻近细胞,并诱发相应的信号转导途径,导致激活NF -κB和增殖蛋白激酶(MAPK)途径14,25,26]。此外,下游MAPK通路的激活导致AP-1的感应,也有作用,促炎细胞因子的表达(26]。众所周知,NF -κB和AP-1诱导TFs,扮演着一个关键角色,多种基因的表达参与炎症、细胞存活、细胞凋亡、细胞分化、肿瘤起源和发展27- - - - - -29日]。因此,HMGB1的免疫和致癌活动已经分配给其在炎症和致癌作用的受体信号通路。
当前知识,HMGB1的生物作用是调节免疫和炎症反应,促进细胞增殖、血管生成、细胞粘附、迁移(14]。越来越多的证据显示,HMGB1有助于炎症疾病和癌症发展,重要的是,HMGB1作为一种新的治疗目标(14,16,30.]。
2。HMGB1的PPAR配体抑制炎症
最近,PPARs及其配体的作用在调节细胞反应炎症和癌症一直是特别感兴趣的。许多研究提供了新的见解的多向性的角色PPAR配体在抑制HMGB1的生物学行为,包括基因表达、信号通路和细胞外释放。代表PPAR配体及其对HMGB1概述在表的影响1。我们在这一节中描述的主要发现此类研究关于PPAR配体,这可能会给一个更好的理解的治疗价值PPAR配体治疗炎症相关的疾病。
2.1。二十碳五烯酸
二十碳五烯酸(EPA)是一种omega - 3脂肪酸,充当PPAR -γ受体激动剂,防止二次而不是主中风(31日,32]。众所周知,PPAR -γ高度表达的巨噬细胞,内皮细胞,树突状细胞、T细胞和B细胞(33- - - - - -35]。某些PPAR -γ受体激动剂也可以调节中枢神经和免疫系统通过抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的激活36),通过调节神经胶质细胞释放的促炎介质(37,38]。从日本最近的一项研究发现,美国环保署减毒缺血后炎症和切除卵巢的老鼠的大脑损伤。此外,HMGB1表达的增加脑缺血后通过愤怒和通常激活炎症通路,导致脑损伤(39]。作者报道,EPA可能施加PPAR -γ端依赖和PPAR -γ独立影响缺血后HMGB1 / TLR9识别途径;即环保局监管HMGB1 / TLR9识别途径一个大脑皮层缺血后,HMGB1的差别,对这些PPAR -γ愤怒和TLR9识别差别独立,而对这些PPAR -γ端依赖。因此,HMGB1的抑制信号,环保署可能有助于抑制缺血性脑损伤在绝经后妇女,在皮质梗死体积ovariectomization加剧了与upregulation HMGB1 / TLR9识别途径(39]。
2.2。替米沙坦
替米沙坦是众所周知的血管紧张素ⅱ受体阻断剂,用于高血压的管理(40]。此外,替米沙坦包含PPAR -的重要结构组成γ和产生多效性的影响部分激动剂(10]。来自日本的一个研究小组调查了替米沙坦的抗炎效应在老鼠大脑中动脉闭塞。根据他们的发现,替米沙坦显著降低巨噬细胞/小神经胶质细胞的数量表达HMGB1和等离子体使之抑制HMGB1的水平。等离子体HMGB1和cerebroprotective差别有趣的是,对这些效应引起的替米沙坦被PPAR -部分抑制γ拮抗剂GW9662。因此,替米沙坦显示其cerebroprotective效果,抑制脑缺血后炎症反应,PPAR -γ端依赖的方式,针对HMGB1表达和分泌。这些发现表明,替米沙坦可能是一个潜在的治疗缺血后损伤(38]。
2.3。Troglitazone
Troglitazone属于thiazolidinedione类的药物,包括罗格列酮和吡格列酮在以下部分中描述。一群来自中国的报道,PPAR -的激活γ由troglitazone抑制HMGB1表达在转录水平在血管内皮细胞中,其中troglitazone干扰NF -κB或AP-1信号(41]。更具体地说,troglitazone不仅可以抑制HMGB1启动子的转录激活,而且激活启动子驱动的NF -κB或AP-1响应元素。此外,troglitazone调制HMGB1定位在细胞核和细胞质。在激活免疫细胞,核HMGB1修改hyperacetylation或磷酸化来响应某些刺激如前所述1.2(19,21),这是关键的第一步的HMGB1动员从细胞核到细胞质中。然后集中到分泌溶酶体和细胞质HMGB1随后分泌炎症反应。
另外,另一组在中国最近报道,PPAR -的激活γ通过upregulation troglitazone抑制HMGB1蛋白表达的微rna - (microRNA) 142 - 3 - p THP-1细胞,人类单核细胞的细胞系来自急性单核细胞的白血病患者,并在模型小鼠外周血单核细胞与小鼠血(42]。本研究表明,ligand-activated PPAR -γ直接绑定到PPRE microrna - 142 - 3 - p启动子区域,而PPAR -γ全身的microrna - 142 - 3 - p也可能目标3′utr HMGB1从而抑制其表达在活的有机体内(42]。
这些结果表明,troglitazone可能在转录和转录后的调控HMGB1表达水平PPAR -γ介导的方式。因此,这些研究结果支持这样的设想,即troglitazone可能是一个治疗剂抑制过度HMGB1在炎性疾病。
2.4。罗格列酮
罗格列酮是thiazolidinedione类的另一个成员。罗格列酮和吡格列酮都批准了1999年由美国食品和药物管理局。尽管他们强有力的抗糖尿病的活动,他们的临床使用带来相当大的负面影响49]。一份来自韩国的报告表明,PPAR -γ罗格列酮激活参与了抑制的脂多糖(LPS)诱导释放HMGB1 RAW264.7细胞(巨噬细胞从Abelson小鼠白血病病毒诱导肿瘤)。罗格列酮的影响在HMGB1分泌治疗siRNA-PPAR——被废除γ或PPAR -γ拮抗剂GW9662。此外,罗格列酮还抑制LPS-induced TRL-4信号分子的表达,表明罗格列酮调节释放HMGB1通过PPAR -γ端依赖机制HMGB1 / TRL4通路(43]。此外,他们证明了抑制HMGB1释放PPAR -β/δ和PPAR -γ与脱乙酰酶酶有关,沉默信息监管机构1 (SIRT1)。PPAR-mediated upregulation SIRT1的HMGB1蛋白乙酰化的调节状态,负责封锁释放HMGB1的巨噬细胞(50]。
罗格列酮的抑制作用HMGB1也是从中国[在一份报告中描述44]。肺系统,预处理与罗格列酮显著抑制小鼠LPS-induced急性肺损伤(ALI)和逆转HMGB1表达升高和愤怒。HMGB1的交互与愤怒NF -激活κB和MAPK通路,导致HMGB1 upregulation,愤怒,和其他促炎介质,从而促进阿里的发展或急性呼吸窘迫综合征(ARDS) [44,45]。这项研究表明,激活PPAR -γ抑制LPS-induced炎症模型的发展,HMGB1表达及其释放的负面调制。
2.5。吡格列酮
吡格列酮,PPAR -γ受体激动剂,也是从thiazolidinedione类。最近一项研究发现,吡格列酮抑制晚期糖化终产物——(年龄)诱导海拔HMGB1蛋白表达在骨关节炎(OA)软骨细胞46]。年龄可能诱导软骨细胞损伤,这是很重要的发展在老年性OA软骨破坏和损害。此外,据报道,HMGB1参与软骨破坏OA的发病机理。值得注意的是,细胞质HMGB1-positive软骨细胞显著增加高品位的深层软骨(51]。另一方面,以往的研究表明,PPAR -γ的开发和发展中发挥了重要作用OA,和减少PPAR -的表情γ在OA软骨可能导致炎症反应的增加(52- - - - - -54]。有趣的是,他们发现年龄诱导炎症反应的差别,对这些PPAR -γ通过地表达和愤怒在人类OA软骨细胞(46]。节中描述1.2,通常和愤怒都HMGB1受体在细胞表面。因此,这些结果表明,PPAR -γ受体激动剂吡格列酮可以抑制胞质HMGB1及其细胞信号。因此,HMGB1可能是一个潜在的药物干预治疗OA的目标。
同样,另一个最近的研究表明,吡格列酮会抑制增长和入侵人类肝细胞癌(HCC)通过封锁的愤怒信号47]。吡格列酮也可能下调HMGB1表达和抑制HMGB1 /愤怒smmc - 7721和HepG2细胞通路(47]。愤怒是HMGB1的主要下游受体之一。在在体外和在活的有机体内肝癌模型,HMGB1可能诱导细胞增殖,分化,细胞死亡,血管生成、转移、炎症55]。这些发现给一个合理的解释吡格列酮的抗肿瘤活性,至少在部分。此外,这项研究提供了一个新颖的见解的治疗策略针对HMGB1 PPAR配体对人类癌症,只有多为炎症性疾病。
2.6。非诺贝特
非诺贝特,PPAR -α受体激动剂,表明保护作用对心脏肥大和抑制效应对炎症(56]。此外,越来越多的证据表明,HMGB1在心血管疾病中扮演着重要的角色57,58]。此外,据报道,核HMGB1的减少与人类的心脏衰竭,并保留大量的核HMGB1可能防止心脏肥大59]。来自中国的一项研究提供了实验证据,非诺贝特调制基底和LPS-stimulated HMGB1表达和定位除了其在心肌细胞的分泌。此外,非诺贝特保护存储核HMGB1蛋白在小鼠和抑制心脏肥大的发展引起的胸主动脉收缩横(48]。这些发现表明,非诺贝特在心肌细胞有抑制HMGB1表达和分泌的影响,这可能会抑制心脏肥大的发展。
3所示。针对HMGB1机制PPAR配体行动
虽然上面的内容部分2演示了几个PPAR配体的抑制效应HMGB1的生物行为,它需要一个综合结论潜在的分子机制。当前的知识,PPAR通常存在的异质二聚体与维生素a X受体(RXR);复杂的通常绑定到辅阻遏物。配体刺激后,辅阻遏物分子流离失所,PPAR,配体,RXR,辅活化因子形成一个活跃的复杂和转移到细胞核60,61年]。在细胞核,ligand-activated PPAR作为监管机构在转录水平,在一个称为PPAR-dependent方式。另一方面,PPAR-independent, PPAR配体工作除此之外的PPAR通路,主要在细胞质或细胞外环境。
事实上,真核基因表达,蛋白质功能、调控在多个水平,包括表观遗传,转录,转录后的,转化和转译后的。这里,我们概述HMGB1表达的PPAR配体的定位机制和生物行为三个层次。尽管一份报告表明,EPA HMGB1的差别的途径对这些部分是PPAR -γ独立(39),大多数的证据支持这样的观点,PPAR HMGB1配体的功能,主要PPAR-dependent的行为。总之,有四种可能的路线如图1。
3.1。转录水平
(一)抑制HMGB1信号通路。PPAR配体能够调节HMGB1生物行为PPAR-dependent方式在转录水平。报道,PPARs抑制炎症反应的某些基因的激活绑定TFs [5];也就是说,他们间接干扰其他TF通路来抑制转录或transrepression(5]。特别是在配体刺激,PPAR -α和PPAR -γ可以绑定NF -κ抑制NF - B和AP-1κB和/或AP-1目标基因(62年]。细胞表达PPAR -α和PPAR -γ调节炎症反应基因通过抑制NF -κB和AP-1通路(3,63年),参与HMGB1信号通路。这种机制减少相关分子的水平参与一个HMGB1-induced炎症反应。的差别,因为对这些NF -κB和AP-1 PPARs被发现在不同的细胞类型包括单核细胞/巨噬细胞、T淋巴细胞,内皮细胞,平滑肌细胞和角化细胞3,64年),可能有一个通用的机制抑制炎性细胞因子在各种类型的细胞。
几个PPAR -γ配体,如troglitazone [41),罗格列酮(44,45,吡格列酮(46],ciglitazone [65年),和布洛芬66年),发现在TF抑制NF -发挥了重要的作用κB或AP-1活动。此外,PPAR配体表达下调炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子(TNF)α(67年],[- 268年),干扰素(IFN)γ(68年),il - 1β(67年),il - 6 (67年],MCP-1 [43],MIP-1β(43]。有趣的是,HMGB1转录是由细胞因子调节干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α在成熟THP-1巨噬细胞或人类外周血单核细胞(69年]。分泌HMGB1作为促炎介质,但其释放发生大大晚于古典的分泌早期促炎介质,例如,TNF -α和il - 170年]。通过这种机制,PPAR配体可能阻止炎症信号级联,导致抗炎作用。结合实例描述的部分2,很多证据支持这条路线的PPAR配体目标HMGB1-receptor信号通过PPARs-mediated机制。
(b) TF-Mediated Transrepression。另外,很可能HMGB1 promoter-interfered直接抑制TF-mediated transrepression也是一个可能的途径。HMGB1基因包含6个外显子和位于人类染色体13 [1271年]。人类HMGB1基因转录是由一个超级强TATA-less启动子,这可能是最高的哺乳动物表达启动子转录活性和展品18倍大于SV40的启动子在乳腺癌细胞72年]。这一发现表明,人类HMGB1基因能够表达在一个非常高的水平。HMGB1观察到在大多数细胞的基础表达水平可能是镇压这个强大的转录活动的结果确定消声器的近端启动子(72年]。据报道,PPAR -γ配体troglitazone可能抑制HMGB1启动子的转录活动和NF -κ在内皮细胞(B或AP-141]。此外,未能识别PPAR HMGB1启动子结合位点表明,抑制效果所得罪的转录活动NF -κB和AP-1, promoter-binding-mediated监管由PPAR本身(而不是通过直接的41,73年- - - - - -75年]。
显然,这两个航线,(a)和(b),彼此相关分组在转录水平,NF -κB和AP-1可能管理HMGB1相声。
3.2。转录后的水平
(c) miRNA-Mediated监管。troglitazone的最近的一项研究提供了一个意想不到的潜在途径PPAR配体抑制HMGB1表达在转录后的级别。本研究报道,ligand-activated PPAR -γ抑制HMGB1表达通过upregulation mir - 142 - 3 - p和抑制炎症反应在人类急性单核细胞的白血病THP-1细胞系(42]。有趣的是,这PPAR -γ端依赖抑制HMGB1表达影响参与upregulation mir - 142 - 3 - p的目标3′utr HMGB1的记录,通过PPAR -γ直接绑定到PPRE mir - 142 - 3 - p启动子区域。这被认为是一个小说PPAR -抗炎机制γHMGB1的行为目标。此外,它曾表明,mir - 142 - 3 - p是一个潜在的肿瘤抑制直接针对HMGB1在非小细胞肺癌细胞76年]。ppr由DNA-specific序列,位于其靶基因的启动子区域。转录激活因子,PPARs可以直接绑定到ppr,从而调节目标基因在转录水平(transactivation) [3]。在transactivation PPARs直接调节目标基因的转录参与脂质和脂蛋白代谢,葡萄糖体内平衡,细胞分化[3,4]。然而,有证据表明,ppr也存在于microrna的启动子区域,以便ligand-activated PPARs可能在转录后的调控目标水平。例如,mir - 145还发现直接PPAR -γ转录目标在活的有机体内。罗格列酮治疗诱导PPAR -γ招聘到PPRE站点,上游的mir - 145转录起始站点,在结肠癌细胞系(77年),尽管没有直接联系mir - 145和HMGB1成绩单在科学文献指出。完全,miRNA-mediated监管可能是一个可能的模机制ligand-activated PPAR HMGB1的目标转录后的水平。
3.3。转译后的水平
(d)抑制HMGB1分泌。Ligand-activated PPARs也可能参与抑制HMGB1分泌而不是针对HMGB1在细胞外空间。在正常状态下,通过NLS1 NLS2,合成HMGB1转移细胞的胞质到细胞核DNA结合。作为核非组蛋白的蛋白质,HMGB1松散和瞬变与核小体,由紧密地绑定染色质和DNA (69年]。在免疫挑战,巨噬细胞被激活,导致被迫hyperacetylation NLS网站HMGB1内巨噬细胞休息。这导致其relocalization细胞溶质,其次是包装HMGB1分泌溶酶体,并释放到细胞外环境(19,78年]。值得注意的是,HMGB1的乙酰化作用发生在细胞核;这乙酰化作用阻止HMGB1与nuclear-importer蛋白质交互复杂,所以再入细胞核被阻塞(70年]。除了这乙酰化,磷酸化21- - - - - -23和甲基化24HMGB1的)也显示出与它的易位在炎症或癌症细胞分泌过程。因此,HMGB1的转译后的修改为其分泌似乎是一个关键的步骤。最近的研究表明,PPAR -β/δ和PPAR -γ能够抑制HMGB1乙酰化,从而减少HMGB1的分泌43,50]。此外,PPAR -γ配体替米沙坦和罗格列酮可以抑制HMGB1从巨噬细胞释放细胞(38,43]。值得注意的是,据报道,乙酰化HMGB1的有效基质SIRT1,河畔+端依赖第三类蛋白脱乙酰酶。由这个脱乙酰酶酶,ligand-activated PPAR -β/δ和PPAR -γ能够表达上调SIRT1在巨噬细胞,导致HMGB1蛋白脱乙酰作用。因此,PPAR配体也可能抑制HMGB1分泌通过调制HMGB1的转译后的修改状态PPAR-dependent机制。
4所示。未来角度PPAR配体和HMGB1的癌症
特别感兴趣的是配体激活的可能性PPARs可能潜在的抗癌效果,因为HMGB1和PPARs都与肿瘤发生和发展相关的癌症。在诊所,最新进展表明,PPARs潜在的抗癌药物(13];例如,在乳腺癌,PPAR -γ发现主要是分化良好的和较雌激素受体阳性乳腺癌癌、调节雌激素的行动,和有一个逆与人类肿瘤大小(79年]。这类似于一些炎性疾病,信使rna和蛋白质水平的PPAR -γ显示与水平的负相关性HMGB1在脓毒症患者外周血单核细胞(42]。
此外,一些PPAR配体通过PPAR-dependent已经证明了他们的强大的抗肿瘤活性和/或PPAR-independent机制(80年]。值得注意的是,最近的研究表明,PPAR -γ受体激动剂具有抗肿瘤活性,能够诱导凋亡细胞死亡在各种恶性肿瘤细胞谱系,包括恶性胸膜间皮瘤,甲状腺癌,脂肪肉瘤,乳房腺癌,前列腺癌,结肠癌癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌(80年- - - - - -82年]。
它在1973年被发现后(83年],多方面的HMGB1最近被确认为一种重要的中介的癌症,它启动了一个新的领域的转化医学目标HMGB1 [14]。HMGB1参与肿瘤发展、扩散入侵和转移,其高度与不良临床预后相关(84年- - - - - -87年]。HMGB1的参与癌症很复杂,和核/细胞内和细胞外的形式的HMGB1与肿瘤形成,进展、转移和对化疗的反应。HMGB1表达升高发生在几个实体肿瘤,包括黑色素瘤、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、恶性间皮瘤(85年- - - - - -88年]。
涉及PPAR HMGB1-receptor信号配体的潜在机制仍有待探讨。几可渗透的研究在一些细胞系和/或在动物模型(表已经透露他们的密切关系1)。这些研究表明,PPAR配体不仅抑制HMGB1信号通路,但也抑制HMGB1基因表达和分泌。因此,关于信号转导途径的额外信息和潜在的诊断工具是必要的。鉴于HMGB1的PPAR配体的相互作用,考虑到潜在目标分子药物治疗是至关重要的调查中标识的抗癌机制尚未全面通路在转录,转录后的,平移,转译后的水平。这可能为HMGB1铺平道路利用率作为炎症性疾病的治疗目标和相关的癌症。相反,进步的抗癌机理的理解PPARs将大大提高利用PPAR配体癌症或癌症相关疾病的治疗。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
确认
本研究支持由中国国家自然科学基金(81502794和81502794号),浙江省自然科学基金(没有。LY16H240001)、浙江省卫生和计划生育委员会(没有。2015 kya058),浙江省科技计划重点项目(没有。2014 c03030),浙江科学技术委员会(没有。2015 f10013)。