文摘
PPAR<我>α和HNF4<我>α核受体控制基因转录直接绑定到特定的核苷酸序列。使用转基因小鼠缺乏PPAR<我>α或HNF4<我>α,我们表明,酶的表达<我>3-keto-acyl-CoA硫解酶B(<我>有彩虹)是在这两个转录因子的依赖。Transactivation和凝胶转变实验发现了一种新颖的PPAR在内含子3的响应元件<我>有彩虹PPAR的基因<我>α但不是HNF4<我>αtransactivates。有趣的是,我们发现HNF4<我>α增强PPAR<我>α/RXR<我>α从结核病PPRE3 transactivation dna结合蛋白独立的方式。HNF4 Coimmunoprecipitation分析支持了假设<我>α是身体与RXR互动<我>α。rt - pcr进行肝脏特异性HNF4 RNA<我>α零老鼠证实HNF4的参与<我>α在PPAR<我>α监管的感应<我>有彩虹Wy14,643。总的来说,我们认为HNF4<我>α增强了PPAR<我>α介导的激活<我>有彩虹基因表达在一定程度上通过与专PPAR的交互<我>α伙伴,RXR<我>α。
1。介绍
过氧化物酶体细胞器等各种代谢途径至关重要<我>β长链脂肪酸的氧化(VLCFAs)、前列腺素,白细胞三烯以及外源性物质和活性氧的解毒。除了异化的事件,生物合成的胆固醇、胆汁酸、多萜醇,醚脂质(缩醛磷脂)也发生在过氧化物酶病矩阵。而线粒体和过氧化物酶体都是细胞脂肪酸氧化降解的主要场所,<我>β这两种细胞器明显不同的氧化反应底物特异性。而线粒体主要氧化短期、中期,大多数长链脂肪酸,过氧化物酶体优先氧化很长的直链脂肪酸(VLCFAs) ()和支链脂肪酸(BCFAs) (<一个href="#B1">1]。
过氧化物酶病<我>β氧化的VLCFAs可分为四个主要步骤:脱氢,水化,氧化,thiolytic乳沟。而不同的酶是参与不同的生化反应,thiolytic乳沟是通过三个酶在啮齿动物,即3-ketoacyl-CoA硫解酶(那),3-ketoacyl-CoA硫解酶B(有彩虹,EC: 2.3.1.16)和甾醇载体蛋白X /甾醇载体蛋白二硫解酶(SCPx / SCP2)。
在啮齿动物中,<我>那和<我>有彩虹相差9基因编码两种截然不同的蛋白质氨基酸和显示类似的底物特异性<我>在体外(<一个href="#B2">2]。然而,<我>那和<我>有彩虹基因没有表现出明显重叠的表达模式(<一个href="#B3">3]。而<我>那广泛表达,<我>有彩虹主要存在于肝脏和肾脏(<一个href="#B4">4]。组织分布的差异表明,有可能有不同的生物活性。虽然有被认为是重要的VLCFA新陈代谢,这种蛋白质的确切功能<我>在活的有机体内还有待建立。虽然<我>有彩虹−−/动物表型与野生型的同胞在正常情况下,喂的过氧物酶体扩散者激活受体α(PPAR<我>αNR1C1)受体激动剂Wy14,643(王寅)导致的浓缩<我>n7和<我>n9中链不饱和脂肪酸(MUFAs)在肝脏<一个href="#B5">5]。
PPARs ligand-activated核激素受体参与许多流程的规定,包括葡萄糖、氨基酸和脂质代谢、炎症和伤口愈合<一个href="#B6">6- - - - - -<一个href="#B62">8]。三个PPAR同形像(<我>α,<我>β/<我>δ,<我>γ)每个管理一组不同的绑定到目标基因的DNA序列组成的两个重复的共识序列AGGTCA隔开一个核苷酸(直接重复1,根据DR1)。根据DR1网站特别受PPARs及其二聚的伴侣类维生素a x受体(RXR)也被称为过氧物酶体扩散国响应元素(ppr)和存在在基因的启动子区域和/或intronic序列(<一个href="#B42">9,<一个href="#B63">10]。核受体PPAR的角色<我>α在肝脂肪酸氧化(已有详细记载<一个href="#B9">11]。PPAR<我>α作为核受体对脂肪酸和激活fibrate类的药物,用于治疗血脂异常(低血浆高密度脂蛋白/高甘油三酯)。转录控制<我>那和<我>有彩虹PPARs在肝脏之前的研究已经证实,和涉及功能PPRE(结核病PPRE2)内含子3的<我>有彩虹基因(<一个href="#B11">12]。
除了PPAR<我>α,liver-enriched转录因子核4肝细胞<我>α(HNF4<我>αNR2A1)也扮演关键的角色,葡萄糖、氨基酸、脂类代谢。因为HNF4<我>α也认识到DR1-binding网站,PPAR吗<我>α和HNF4<我>α分享共同的目标基因,正如前面所示<我>糖原synthase-2,<我>酰coa thioesterase我,<我>鸟氨酸氨甲酰基转移酶(<一个href="#B7">7,<一个href="#B8">13,<一个href="#B13">14]。另一个假定的双重PPAR候选人<我>α和HNF4<我>α监管是<我>有彩虹。根据DR1序列(结核病PPRE1)启动子的发现<我>有彩虹被证明是受PPAR<我>α和HNF4<我>α在体外(<一个href="#B12">15]。确认<我>在活的有机体内这一发现的重要性,本研究评估的规定<我>有彩虹PPAR核受体<我>α和HNF4<我>体内α,使用<我>PPARα−−/和肝HNF4<我>α分别为零的老鼠(<一个href="#B15">16- - - - - -<一个href="#B10">18]。这些<我>在活的有机体内模型结合细胞培养工具HNF4的参与提供依据<我>α王寅感应的<我>有彩虹通过与PPAR交互<我>α类维生素a x受体α(RXR二聚伙伴<我>α在非传统PPRE位于内含子3的<我>有彩虹基因。
2。材料和方法
2.1。动物实验
Nine-week-old C57BL / 6 j PPAR<我>α零雄性老鼠和年龄WT老鼠使用。在笼子里的老鼠22°C,以同样的黑暗和光明的时期,有免费的水和食物含有4.3% (w / v)脂质(U.A.R.A-03 Epinay苏尔食人魔、法国)。药理干预,野生型(WT)和PPAR<我>α零老鼠,填喂法与王寅(30毫克公斤8天−1·天−1从σ)。控制动物仅接受车辆阿拉伯树胶(3%)。六个liver-specifically HNF4<我>α中断(HNF4<我>α∆L)和控制(HNF4<我>αF / F)老鼠谷物饮食有或没有(0.1% w / w)王寅5天。牺牲了动物颈椎错位和组织之前迅速snap-frozen液氮储存在−80°C。道德方面的考虑:<我>在活的有机体内根据欧盟指导方针进行了研究实验动物的使用和护理,一个独立的伦理委员会批准。
2.2。细胞培养
COS-7细胞生长(如前所述)(<一个href="#B11">12,<一个href="#B12">15]。短暂,COS-7细胞,小鼠肝癌Hepa 1.6和人类海拉细胞通常生长在杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)中补充10% FCS和胎牛血清(FCS)是来自潘生物技术GmbH是一家。鼠肝癌H4IIEC3细胞在DMEM /火腿F-12(1/1)中补充FCS为5%。所有的细胞都生长在没有抗生素的培养基。定期检测支原体污染进行了pcr测试。
2.3。隔离的总RNA和Northern实验
总RNA提取50毫克使用试剂盒试剂从肝脏根据指定的供应商(表达载体)的方法。总RNA (15<我>μg)是解决在1%琼脂糖凝胶含有6% (v / v)甲醛和转移到Hybond-N膜(Amersham生物科学)。一夜之间,过滤器被杂化32P-labeled cDNA探针。那有和36 b4探针以前描述(<一个href="#B3">3]。Acox-I DNA探针从小鼠肝脏总RNA,通过rt - pcr测序验证。
2.4。隔离的总RNA,反转录和常规PCR
Hnf4loxP / loxPAlfp.cre突变小鼠胚胎(<一个href="#B18">19),<我>Hnf4loxP / loxPAlfp.cre成年小鼠(<一个href="#B17">17以前报道的其他地方。从一般的18.5总RNA。c和成人肝脏提取使用试剂盒RNeasy迷你工具后,制造商的协议。污染基因组DNA被使用10 u RNase-free-DNAse我/<我>μg RNA。互补脱氧核糖核酸合成使用MMLV-RT(表达载体)和核苷酸(0.5毫米)和随机六聚物引物(5<我>μ米)。这些DNA提供了模板使用特定引物的退火温度57°C的核苷酸(0.1毫米),引物(0.5<我>μ米),Taq DNA聚合酶(罗氏)。
2.5。逆转录和实时定量PCR (RT-qPCR)
从Hepa 1.6细胞总RNA提取和纯化使用试剂盒RNeasy列(试剂盒)。一个<我>μg的总RNA用于逆转录iScript逆转录酶(BioRad)。PCR反应进行使用qPCR MasterMix + SYBR绿色我和荧光素(Eurogentec)。所有与MultiGuard PCR反应进行障碍技巧(索伦森生物科学,Inc .)和一个iCycler PCR机器(Bio-Rad实验室)。引物是指定生成的PCR扩增产物100 - 200 bp和选择提供的迹象显示引物3软件(<一个href="http://frodo.wi.mit.edu/primer3/" target="_blank">http://frodo.wi.mit.edu/primer3/)。序列可以从美国Mandard请求。特异性扩增的熔化曲线验证了PCR扩增效率的分析和评价。δCt的量化方法和表达相关控制基因36 b4,这并没有改变在任何的实验条件进行了研究。
2.6。Transactivation化验
COS-7和海拉细胞转染Exgen 500 (Euromedex)制造商的协议。5×104细胞/被播种在24-wells板。细胞转染的1<我>μ克的质粒DNA包含向量pCMV 30 ng的记者<我>β一起牛乳糖(Clontech)相同摩尔量的荧光素酶(Luc)向量(约250 ng)。不同数量的表达向量编码pSG5-mPPAR等不同的核受体<我>α,pSG5-mRXR<我>α,pCDNA3-hHNF4<我>α被使用。相应的空向量用于控制实验。4 h转染后,培养基是取代1毫升的完全培养基有或没有10−5M王寅(Alexis生化)。卢克和<我>β牛乳糖活动测量48 h后转染使用Promega Luc工具包(Promega)和一个标准的试验。氯酚红<我>β-D-galactopyranoside作为衬底<我>β牛乳糖。对于每一个条件,转染化验是重复四次。记者pGluc构造是由吕克·表达载体包含<我>β球蛋白启动子上游的Luc编码序列。结核病PPRE3-pGluc是由插入合成双链寡核苷酸pGluc HindIII和BamHI网站之间的向量(上链TGACCTGACCTCTGCTCGATAACCTTTTCCCTACTT+ 970,降低链CTCTAAGTAGGGAAAAGGTTATCGGCAGAGGTCAGGTCA+ 970;ACOX-I PPRE,和MFP1-PPRE前面描述的<一个href="#B19">20.,<一个href="#B20">21]。Hepa 1.6细胞(8×10512-well板)与Lipofectamine转染TM2000(表达载体),H4IIEC3细胞(1×1066-well板)与FuGene高清(罗氏)根据制造商的指示。
2.7。表达和记者向量
表达向量pSG5-mPPAR<我>α和pSG5-mRXR<我>α是一种礼物,王志浩(Stephen Green)博士(英国)。表达向量编码HNF4的变异形式<我>α博士(DN HNF4)是由托德列夫(韦恩州立大学医学院的底特律,密歇根州,美国)。DN HNF4选择性主要负突变形成缺陷与WT HNF4形成<我>α由HNF4防止DNA结合和转录激活<我>α。DN HNF4无法结合DNA的(<一个href="#B21">22]。哺乳动物表达载体编码D126Y HNF4<我>α2是一种礼物的伯纳德•莱恩博士(INSERM U459,里尔,法国)(<一个href="#B36">23]。
2.8。1.6 Hepa的瞬时转染细胞与AMAXA技术
Hepa 1.6细胞通常生长在与10%胎牛血清的DMEM培养基补充。Hepa 1.6细胞(×107100年)resuspended<我>μl的转染转染工具包提供的解决方案(Nucleofector工具包V) /转染,5<我>μg的DNA被添加到细胞悬液。被转移到Amaxa转染的细胞dna组合电池使用Amaxa minipipette。试管是接下来放入Nucleofector和程序“t - 028高效”被选中。500年<我>μl温暖的媒体被添加到试管和转染细胞转移到菜(25厘米2与prewarmed媒体)。24小时后转染,培养基被改变了。总RNA提取48 h后转染。
2.9。凝胶转变和Supershift化验
核从转染COS-7细胞提取准备(2×106细胞每100毫米盘,8<我>μ适当的表达质粒的g)。原子核和核提取准备正如前面指出[<一个href="#B23">24]。蛋白质浓度测定的布拉德福德化验(BioRad)。寡核苷酸与dCTP使用结束标签的大片段DNA聚合酶i核提取物(0.5<我>μg hHNF4<我>α纯度的浓缩铀的提取物)孵化20 1 h在冰上<我>μl缓冲区(10毫米消息灵通的pH值7.9;120毫米生理盐水1毫米EDTA 1毫米德勤,7% (v / v)甘油,0.5毫米PMSF 2<我>μg亮抑酶肽,抑肽酶、抑肽素),1<我>μ克的双链聚dIdC)和35 fmol放射性标记大鼠PPRE3寡核苷酸。另外,1到100倍摩尔超过竞争者寡核苷酸是补充道。的HNF4<我>α抗体用于supershift来自圣克鲁斯生物技术公司(HNF4 Inc .<我>αsc - 8987 x)和添加了核提取30分钟前添加调查。核蛋白质复合物解决在6% (w / v)聚丙烯酰胺凝胶1 x此种。
2.10。Coimmunoprecipitation CoIP化验
CoIP化验,核提取物被调整到25毫米玫瑰(pH值7.9),200毫米氯化钾,1毫米EDTA, NP-40 0.5%, 10%甘油和孵化2<我>μ克在4°C 12 h抗体。50<我>μl的蛋白质G-Sepharose珠子之前洗两次相同的缓冲区被孵化2 h上旋转的混合物。离心后一步,颗粒状的珠子与上述缓冲洗了四次。后的蛋白质被冲走了,珠珠终于resuspended减少加载缓冲区(<一个href="#B24">25]和样本在95 - 100°C煮3 - 5分钟之前进行sds - page。的HNF4<我>α(sc - 6556), PPAR<我>α(sc - 9000 x), RXR<我>α(sc - 774)、二级(驴抗体,sc - 2020)抗体都从圣克鲁斯生物技术公司购买使用。
2.11。DNA亲和沉淀试验(DAPA)
DNA亲和沉淀试验(DAPA)如前所述执行(<一个href="#B25">26]。蛋白质被筛选了15<我>μl的sds - page加载缓冲通过加热5分钟在95°C。的链霉亲和素magnesphere顺磁珠来自Promega (Z5481)。类似的抗体与用于coimmunoprecipitation化验使用除了二级抗体(山羊antirabbit, sc - 2004,圣克鲁斯生物技术有限公司)。
2.12。免疫印迹
免疫印迹酶的两个3-ketoacyl-CoA硫解酶(PTL)如前所述执行<一个href="#B26">27]。兔多克隆抗体针对A和B两种硫解酶蛋白质(PTL)的礼物t .桥本博士和n Usuda(日本信州大学替代品),之前描述(<一个href="#B26">27]。信号检测与ECL-plus (Amersham生物科学)根据制造商的指示。
2.13。统计分析
除非表示,单向方差分析测试是用来识别统计上显著的差异。统计学意义的切断是设置在一个价值的以下。
3所示。结果
3.1。那有mRNA水平PPAR引发的强劲<我>α受体激动剂王寅在肝脏
利用cDNA探针识别<我>那和<我>有彩虹基因,这是之前显示<我>硫解酶(一个+B) mRNA水平被PPAR诱导<我>α受体激动剂在PPAR<我>α端依赖的方式(<一个href="#B10">18]。评估是否<我>有彩虹仅是PPAR敏感<我>α受体激动剂,北部污点分析使用一个特定的核苷酸探针和肝RNA从WT和PPAR<我>α零小鼠治疗与否与Wy14,643(王寅),一个强有力的和特定的PPAR激动剂<我>α(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1(一))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
在基础条件下,<我>有彩虹信使rna水平在野生型(WT)和PPAR相似<我>α有缺陷的老鼠。PPAR的表达<我>α目标基因<我>一个cox-I和<我>有彩虹在PPAR诱导<我>α端依赖的方式(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1(一))。值得注意的是,增加的<我>有彩虹米RNA水平在王寅治疗被翻译成更高的过氧化物酶病3-ketoacyl-CoA硫解酶蛋白质含量(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1(一))。
进一步调查是否<我>在体外的表达<我>有彩虹也是由PPAR控制吗<我>α在其他物种,鼠肝癌H4IIEC3细胞王寅对待。使用RT-qPCR,显示<我>有彩虹PPAR强劲mRNA水平引起的激活<我>α(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (b))。考虑到戏剧性的激活<我>有彩虹表达了王寅H4IIEC3细胞,超过一个PPRE老鼠<我>有彩虹基因序列可以控制自己的表情。比较与其他PPAR建立<我>α目标基因如<我>一个cox-I和<我>Mfp-1显示的基因表达谱<我>有彩虹的确是接近的吗<我>Mfp-1(PPAR最敏感基因之一<我>α由于非典型的存在和复合PPRE基因序列)<我>一个cox-I(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (b))[<一个href="#B16">28,<一个href="#B29">29日]。
3.2。识别结核病PPRE3作为PPAR小说响应元件<我>α
找出更多的功能根据DR1 ppr、比较<我>在网上分析了老鼠和老鼠<我>有彩虹基因序列从5600个基点位置−上游的转录开始网站位置+ 13000 bp下游Nubiscan V2.0执行软件(<一个href="#B28">30.]。它揭示了一些保守的DNA序列,怀有一些以前ppr特征以及小说PPRE我们叫结核病PPRE3 [<一个href="#B11">12,<一个href="#B12">15)(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (c))。凝胶迁移转变分析被用来测试结核病PPRE3是否绑定<我>在体外通过翻译PPAR<我>α/RXR<我>α蛋白质。在协议与其他之前报道的数据,我们发现了一个弱智PPAR<我>α/RXR<我>α在MFP-1 PPRE还结核病PPRE3进一步暗示的直接监管<我>有彩虹由PPAR<我>α通过结核病PPRE3 [<一个href="#B16">28)(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (d))。
来验证是否PPAR<我>α可以transactivate<我>有彩虹基因在结核病PPRE3 transactivation化验在COS-7细胞进行记者的结核病PPRE3向量包含一个副本。Luc活动的记者向量包含结核病PPRE3 PPAR反应明显<我>α超表达在缺乏外源激动剂(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (e))。自从明显大PPAR的响应能力<我>α在缺乏外源配体可能反映了高本构活动由ligand-independent AF1域,我们检查了氨基端删除(ΔAF1) PPAR的行为<我>α构造缺乏AF1 transactivation化验。发现ΔAF1 PPAR<我>αWT PPAR表现相似<我>α,表明自然PPAR的存在<我>α受体激动剂在培养基(数据没有显示)。正如所料,吕克·活动王寅治疗后明显增强。重要的是要注意,MFP-1 PPRE由两个根据DR1元素隔开两个碱基对,从而形成一个内部DR2元素(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (c))[<一个href="#B16">28,<一个href="#B29">29日]。除了一对碱基分离两个假定的根据DR1,结核病的总体结构PPRE3非常类似于MFP-1 PPRE。然而,值得注意的是,核苷酸序列组合的四种不同half-sites结核病PPRE3明显不同于MFP-1 PPRE。和相比ACOX-I PPRE,感应结核病PPRE3折起来MFP-1 PPRE非常相似的一个可能的后果不寻常和复合结构(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (c)和<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (e))。总体而言,结核病PPRE3 PPAR元素是一个强有力的反应<我>α并可能PPAR的关键<我>α端依赖激活<我>有彩虹基因转录。
3.3。核孤儿受体HNF4<我>α控制有基因表达在肝和肝癌Hepa 1.6细胞
肝脏肝细胞的核4<我>α(HNF4<我>αNR2A1)中扮演一个重要的角色在基因的转录调控在不同的代谢途径,包括脂肪酸、氨基酸、葡萄糖、胆固醇代谢。虽然有限,但有一些重叠在一些HNF4的身份<我>α和PPAR<我>α调节基因(<一个href="#B6">6,<一个href="#B61">31日,<一个href="#B64">32]。针对这一点,HNF4<我>α可能是假设直接控制<我>有彩虹在肝脏基因表达。因为完全删除<我>Hnf4α老鼠是致命的,我们试图检查是否删除<我>Hnf4α对肝脏有影响<我>那和<我>有彩虹基底表达式使用样本<我>Hnf4α−−/老胚胎(图18.5天<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig2/" target="_blank">2(一个))[<一个href="#B15">16,<一个href="#B18">19]。
(一)
(b)
在mRNA水平的<我>那没有影响,<我>有彩虹的mRNA水平显著降低了肝脏<我>Hnf4loxP / loxPAlfp.cre胚胎支持HNF4的至关重要的作用<我>α在调节基底的表达<我>有彩虹在开发过程中肝细胞(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig2/" target="_blank">2(一个))。它也可以猜测的减少<我>有彩虹米RNA水平观察到肝脏的<我>Hnf4loxP / loxPAlfp.cre胚胎可能的结果由于缺乏HNF4代谢扰动<我>α。为了排除这种可能性,因为我们没有办法药物激活HNF4<我>体内α,我们的表达进行了研究<我>有彩虹在鼠标Hepa 1.6肝细胞,转染效率(使用Amaxa Nucleofector技术)与WT形式或HNF4强有力的显性负的形式<我>α(DN HNF4)以前描述的<一个href="#B21">22]。DN HNF4选择性主要负突变,其中包含一个有缺陷的dna结合域。因此,DN HNF4形式缺陷与WT HNF4形成<我>α从而防止HNF4 DNA结合和随后的转录激活<我>α。COS-7和海拉细胞相比,老鼠Hepa 1.6和老鼠H4IIEC3肝癌细胞表达大量的内生WT HNF4<我>α(数据没有显示)。WT HNF4的异位表达<我>αHepa 1.6肝细胞有轻微影响<我>有彩虹和<我>那信使rna水平,通过RT-qPCR(图所示<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig2/" target="_blank">2 (b))。类似的照片也被观察到<我>一个poAII,先前HNF4特征<我>α目标基因(<一个href="#B32">33]。然而,被迫表达DN HNF4下降<我>有彩虹以及<我>一个poAII在mRNA水平50%<我>那信使rna保持不变,确认HNF4<我>α控制基础<我>有彩虹基因的表达。在一起,我们的数据表明HNF4<我>α是一种新型的监管机构的<我>有彩虹表达肝细胞系的来源。
3.4。HNF4<我>α结合结核PPRE3
鉴于HNF4<我>α基底的表达是至关重要的<我>有彩虹这HNF4<我>α承认根据DR1序列,我们检查是否HNF4<我>α可以绑定到结核病PPRE3 [<一个href="#B46">34]。使用结核病PPRE3 HNF4一起调查<我>α从HNF4纯度的浓缩铀的核提取物<我>α转染COS-7细胞,我们进行了电泳迁移率改变分析。一个复杂丰富HNF4时被发现<我>α核提取物(图使用<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig3/" target="_blank">3(一个),弄2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
主要包含HNF4这个复杂<我>α因为它没有在untransfected COS-7细胞(巷1)和它消失在添加过量的未标记的ACOX-I PPRE共识寡核苷酸(巷3巷5),以前是有效地受HNF4<我>α。多余的冷非特异性寡核苷酸不减少HNF4 Sp1绑定网站<我>α绑定PPRE3(6巷巷8)。HNF4<我>α特定的抗体与核HNF4<我>α浓缩提取supershifted复杂(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig3/" target="_blank">3 (b),巷2)。在一起,我们的数据证明<我>在体外结合HNF4<我>α结核病PPRE3。
评估是否能够调解HNF4 PPRE3结核病<我>α与HNF4端依赖transactivation,进行瞬时转染<我>α和记者向量包含一个副本的结核病PPRE3序列。虽然意义重大,HNF4<我>α只有适度调节转录<我>通过结核病PPRE3 COS-7细胞(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig3/" target="_blank">3 (c))表明结核病PPRE3 HNF4表现不佳<我>α响应元件在经典transactivation化验和HNF4表明绑定<我>α结核病PPRE3不一定是翻译成一个巨大的转录激活。额外transactivation化验执行5.65 kb的老鼠<我>有彩虹基因启动子序列也未能证明HNF4<我>α端依赖子激活(数据未显示)。我们得出结论,关键反应元素为HNF4 (s)<我>α,如果有的话,可能位于其他位置。
鉴于这种考虑,Bolotin等人最近报道了一个人体HNF4鉴定的综合方法<我>α使用蛋白质绑定目标基因微阵列(<一个href="#B35">35]。这个策略允许的发现DNA序列受HNF4<我>α在人类版本的过氧化物酶病3-ketoacylCoA硫解酶(也称为3-acetyl-CoA acetyltransferase-1, ACAA1)。因为我们发现了相似的序列在内含子5 (DR1int5)的鼠标<我>有彩虹COS-7细胞基因,transactivation化验进行使用的副本DR1int5克隆的荧光素酶报告基因(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig3/" target="_blank">3 (d))。转染与HNF4<我>α增强的记者活动约三倍,这表明DR1int5部分参与的规定<我>有彩虹由HNF4<我>α。
3.5。HNF4<我>α增强了PPAR<我>α结核病PPRE3介导的转录激活
人们普遍HNF4记录<我>α和PPAR<我>α分享一些类似绑定主题导致这两个受体之间的竞争。检查是否同样适用于结核病PPRE3受体都cotransfected无论是nonhepatic (COS-7,海拉)或肝细胞(Hepa 1.6, H4IIEC3)。无论使用的细胞系,PPAR<我>α/RXR<我>α异质二聚体记者活动增加HNF4由cotransfection进一步增强<我>α(数据<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig4/" target="_blank">4(一)和<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig4/" target="_blank">4 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
之前报道的其他cotransfection HNF4<我>α强烈抑制PPAR<我>α/RXR<我>α记者活动增加时,卢克活动是由ACOX-I PPRE图案(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig4/" target="_blank">4 (c))。因此,我们的结论是,HNF4<我>α促进transactivation由PPAR<我>α/RXR<我>α从结核病PPRE3通过分子机制仍有待确定。
3.6。结合HNF4<我>α结核病与PPAR PPRE3是可有可无的合作<我>α
因为HNF4<我>α积极影响PPAR的能力<我>αtransactivate结核病PPRE3,它可能表明这两种受体之间可能的合作。测试是否通过HNF4协同效应<我>α取决于其能力与结核病PPRE3 transactivation化验COS-7细胞中进行了使用两种不同的突变形式的HNF4<我>αDNA结合的要么是有限公司(−75%,因此它的DNA结合域内点突变,D126Y HNF4<我>α2)或废除(DN HNF4),而其稳定性仍然不受影响(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig5/" target="_blank">5(一个))[<一个href="#B21">22,<一个href="#B36">23]。
(一)
(b)
(c)
虽然transactivation潜力D126Y HNF4<我>α2是减少,二聚作用的受体并不是报道的影响。类似于WT HNF4<我>α,表达D126Y HNF4<我>α2或DN HNF4未能transactivate本机结核病PPRE3(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig5/" target="_blank">5 (b))。值得注意的,D126Y HNF4<我>α2和DN HNF4 WT HNF4强了<我>α的transactivation PPAR<我>α从结核病PPRE3。在一起,我们得出这样的结论:HNF4之间的合作<我>α和PPAR<我>α不依赖于物理HNF4绑定<我>α结核病PPRE3。
最终检查是否PPAR之间的合作效果<我>α和HNF4<我>α依赖于DNA核苷酸序列本身,我们执行transactivation化验使用DR-1 PPRE酰基辅酶氧化酶我(ACOX-I PPRE)(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig5/" target="_blank">5 (c))。与结核病PPRE3相比,超表达WT HNF4<我>α有效力地激活PPAR Luc活动减少<我>α/RXR<我>α异质二聚体。使转染表达向量编码HNF4的两种突变形式<我>α导致了一个相对温和的Luc活动减少。因此,我们假设PPAR之间的竞争<我>α和HNF4<我>α是减少了。这两个突变体无法开车水平高于PPAR Luc活动<我>α/RXR<我>α异质二聚体,证实与HNF4缺乏合作<我>α。总的来说,我们的数据表明,HNF4之间的合作<我>α和PPAR<我>α受体可能取决于结构和DNA的核苷酸序列响应元素。
3.7。HNF4<我>α不支持PPAR的绑定吗<我>α/RXR<我>α结核病PPRE3
HNF4的刺激效应的分子机制<我>α在PPAR<我>α/RXR<我>α介导的转录激活<我>通过结核病PPRE3 HNF4不需要绑定<我>αDNA,但目前,这种机制仍不清楚。因此,我们质疑HNF4<我>α可以促进PPAR的绑定<我>α/RXR<我>α结核病PPRE3异质二聚体,<我>通过一个可能的蛋白质相互作用。我们使用DNA亲和沉淀试验(DAPA)评估复杂的形成与PPAR结核病PPRE3<我>αRXR<我>α和HNF4<我>α蛋白质来自核转染COS-7细胞(图的提取<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(一))。
PPAR的异位表达<我>α在COS-7细胞导致PPAR的生产<我>α蛋白质(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(b),巷1)和过表达HNF4<我>α没有检测到的PPAR吗<我>α抗体(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(b),弄4)。与我们之前的结果(图一致<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig1/" target="_blank">1 (d)),我们确认PPAR<我>α是注定要结核病PPRE3(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(b),当PPAR巷2)。<我>αRXR<我>α,HNF4<我>α蛋白质是完全孵化与结核病PPRE3,表明HNF4信号相似<我>α不赞成PPAR的绑定吗<我>α/RXR<我>α结核病PPRE3。
因此,我们得出结论,PPAR的增强<我>α/RXR<我>α由HNF4 mediated-activation结核病PPRE3转录的<我>α可能不是因为PPAR的DNA结合稳定吗<我>α/RXR<我>α异质二聚体。
更进一步,immunorevelation HNF4复合物也执行<我>α承认异位WT HNF4抗体<我>α(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(c),巷1)但不是PPAR<我>α或RXR<我>α(数据没有显示)。正如前面所示的这项研究中,HNF4<我>α要么是身体上的束缚和(或)是一个复杂的绑定到结核病PPRE3(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(c),莱茵3)。有趣的是,当PPAR<我>αRXR<我>α和HNF4<我>α蛋白质是完全孵化(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(c)、巷2)HNF4的信号<我>α强烈支持PPAR的概念<我>α/RXR<我>α可能支持绑定和/或HNF4的招聘吗<我>α结核病PPRE3。与结核PPRE3和支持别人的transactivation化验,PPAR之间的竞争<我>α/RXR<我>α和HNF4<我>α对于绑定ACOX-I PPRE被发现、验证实验系统(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(c),比较胡同间4和5)(<一个href="#B33">36]。
3.8。物理RXR之间的相互作用<我>α和HNF4<我>α
增加HNF4的检测<我>α蛋白质在结核病PPRE3 PPAR的存在<我>α和RXR<我>α从物理之间的相互作用可能导致PPAR吗<我>α/RXR<我>α和HNF4<我>α。这个假设优点特别是因为我们发现DN HNF4进一步调查<我>α(DNA结合不足)能够进一步增强PPAR<我>α/RXR<我>α从结核病PPRE3 transactivation,可能<我>通过蛋白质-蛋白质之间的关系(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig5/" target="_blank">5 (b))。因此,PPAR之间的交互<我>αRXR<我>α或PPAR<我>α/RXR<我>α与HNF4<我>α评估在溶液中没有使用coimmunoprecipitation DNA (CoIP)化验。核蛋白质提取物转染COS-7细胞(见细节,人物<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d)与多克隆PPAR)第一次免疫沉淀反应<我>α映射的n端部分蛋白抗体,之前被西方墨点法分析多克隆HNF4<我>α抗体(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),通道2、3、5、7)。与缺乏内生HNF4协议<我>α在COS-7细胞中,没有观察到缺乏异位HNF4信号<我>α(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),莱茵7)。HNF4瞬时转染<我>α导致的外观非常微弱的乐队(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),通道2和3)可能表明PPAR之间的弱相互作用<我>α和HNF4<我>α。当PPAR<我>αRXR<我>α和HNF4<我>α蛋白质出现(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),巷5),信号仍然是观察表明PPAR<我>α直接或<我>通过另一种蛋白质RXR等合作伙伴<我>α可能与HNF4交互<我>α。另外,我们不能排除这种可能性,HNF4之间的互动<我>α和PPAR<我>α/RXR<我>α可能部分面具PPAR识别的抗原决定基<我>α抗体。
在我们的研究中,更进一步CoIP化验也使用多克隆RXR执行<我>α(预留PPAR<我>α合作伙伴)的免疫沉淀反应步骤。值得注意的是,这是发现RXR<我>α大量与HNF4<我>α在解决方案(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),莱茵6)。值得注意的是,当与HNF4免疫沉淀反应步骤进行<我>α与RXR抗体和免疫印迹<我>α抗体分别,我们和其他人未能观察到任何信号(<一个href="#B37">37(数据未显示)。这可能是一个抗原决定基的结果映射HNF4糖基的<我>α,一个地区的关键蛋白质的相互作用。因此,使用的抗体抗原决定基可能无法访问。
因为内生PPAR<我>α表达式是几乎在COS-7发现细胞(数据未显示),由于信号观察异位PPAR的缺席<我>α相似(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),比较巷4和6),它可以断定HNF4<我>α与RXR<我>α无论PPAR的存在<我>α。观察到的信号通道4和6是一致的表观分子量与异位转染WT HNF4获得<我>α(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d),莱茵1)。
总的来说,我们的研究结果指向HNF4之间的物理相互作用在溶液中<我>α和RXR<我>α。
3.9。HNF4<我>α参与是PPAR吗<我>α监管有彩虹在肝脏的感应
为了检查是否我们<我>在体外发现翻译<我>在活的有机体内因为可能存在一个二分法HNF4的功能<我>α在成人和胎儿肝脏,我们下一个的影响进行了探讨<我>Hnf4α删除的基底和Wy-induced表达式<我>有彩虹,<我>那在成年小鼠和SCPx / SCP2硫解酶条件肝HNF4中断<我>α(∆L HNF4<我>α)[<一个href="#B17">17]。我们的实验条件复制的经典模式<我>一个poAIV表达式与选择性相关联<我>Hnf4α缺乏在肝脏(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig7/" target="_blank">7)。WT老鼠相比,的表达<我>有彩虹和<我>Scpx显著低于∆HNF4<我>α老鼠(和为<我>有彩虹和<我>Scpx、职责)。<我>那表达不受肝Hnf4<我>α删除()。这一块的数据支持我们先前的发现<我>那不是一个HNF4<我>α调节基因。此外,的mRNA水平<我>有彩虹,<我>那,和<我>Scpx都显著诱导王寅(,和为<我>有彩虹,<我>那,<我>Scpx、职责)。值得注意的是,HNF4的效果<我>αWy-sensitive(王寅*基因型互动,我:)只<我>有彩虹。时的表达<我>那和<我>Scpx往往是低∆L HNF4<我>α老鼠王寅(和。228年<我>那和<我>Scpx、职责),它不是重要的。在一起,我们的数据支持HNF4的参与<我>α在PPAR<我>α监管的感应<我>体内有彩虹。
(一)
(b)
4所示。讨论
本研究有助于理解的监管<我>有彩虹PPAR核受体基因<我>α和HNF4<我>α。在基础条件下,肝<我>有彩虹PPAR米RNA水平没有影响<我>α删除,类似于其他直接PPAR<我>α目标基因如G0 / G1开关基因2或基因编码可溶性Interleukin-1受体拮抗剂(<一个href="#B38">38,<一个href="#B39">39]。这并不奇怪,因为生理刺激,如禁食或慢性刺激如高脂肪饮食需要PPAR的激活<我>α端依赖信号系统在肝脏<一个href="#B40">40,<一个href="#B65">41]。PPAR中断<我>α完全废除Wy-mediated感应的<我>有彩虹信使rna水平。因为感应<我>有彩虹基因表达的PPAR<我>α受体激动剂是健壮的,我们假设的存在超过一个单一的功能在启动子和/或PPRE<我>有彩虹基因序列。符合这一点,我们之前报道的PPAR结核病PPRE2的表征<我>α可以transactivate [<一个href="#B11">12]。现在跟踪研究的证据表明,这种分子的监管<我>有彩虹由PPAR<我>α在肝脏比预期更复杂,因为它还取决于我们叫结核病PPRE3小说cis-acting元素,非典型PPRE组成的两个顺序根据DR1序列隔开一个核苷酸从而形成一个内部根据DR1元素。
的存在超过一个PPRE附近(所谓PPRE集群)提出了老鼠和人类版本的<我>Fiaf / Angptl4和<我>Ucp3过氧化氢酶基因以及鼠标和老鼠Cyp4a1基因(<一个href="#B42">9,<一个href="#B44">42,<一个href="#B45">43]。内含子3的四个相邻ppr存在高度PPAR敏感目标<我>Fiaf / Angptl4但只有一个PPRE功能(<一个href="#B43">44]。可以说,相比之下<我>有彩虹没有重叠的报道,这四个ppr劈开只有投机两种情况之间的潜在的比较。虽然存在超过一个PPRE基因组序列并不是唯一的,重叠的ppr似乎很少见。温家宝等人最近报道,鼠标<我>Octn2基因内含子1中包含三个重叠的ppr,然而只有一个PPRE是主要的<一个href="#B46">34]。类似于<我>有彩虹的存在三个ppr的基因组序列<我>Octn2可能是负责其庞大的转录激活反应PPAR吗<我>α。
关于其他过氧化物酶病基因,<我>SCPx / SCP2硫解酶基因以前PPAR的标识为目标<我>α有两个分离根据DR1 PPRE图案局部在启动子区域(<一个href="#B47">45]。它也是值得注意的<我>Mfp1显示一个PPRE由四个共识hexameric TGACCT half-sites安排的两个根据DR1元素隔开两个碱基对,从而也形成一个内部DR2元素(<一个href="#B16">28,<一个href="#B29">29日]。类似于<我>Mfp1,<我>有彩虹似乎是第二个酶氧化基因显示这个特殊的特性。
尽管存在多个ppr可能负责大型的响应能力<我>有彩虹PPAR米RNA水平激活<我>α也认为,替代解释。在这方面,以前的数据表明<我>有彩虹信使rna正受肝X受体α(<一个href="#B48">46]。鉴于肝X受体α基因的转录提出了PPAR依赖<我>α,可以得出结论,PPAR<我>α信号通路调节肝脏<我>有彩虹表达式通过不同但互补机制[<一个href="#B49">47]。
此外,在结核病的内部根据DR1元素PPRE3是两个侧面half-sites已经被证明能够加强和稳定二聚的复合物的形成由II型核受体如RXR和甲状腺激素受体(<一个href="#B50">48]。因此,一个可以吸引人的假设这种机制也发生的PPAR / RXR异质二聚体。它可以在一定程度上支持的大型响应PPAR记者向量<我>α受体激动剂在transactivation化验。此外,使用电泳迁移率改变分析,其他人以前分类绑定PPAR的效率<我>α到MFP-1 PPRE高和transactivation化验进一步支持这种分类的功能相关性(<一个href="#B51">49]。鉴于结核病PPRE3结构接近的MFP-1 PPRE,结核病的存在PPRE3的基因组DNA序列<我>有彩虹可能足以解释的大反应吗<我>有彩虹信使rna水平PPAR<我>α受体激动剂。
除了PPAR<我>α,核受体HNF4<我>α和PPAR十分表现在肝脏和股票吗<我>α一些相似的dna结合蛋白性质(<一个href="#B52">50]。因为几个根据DR1图案(HNF4潜在的候选人<我>α绑定)已确定的顺序<我>有彩虹、法规的<我>有彩虹由HNF4<我>α研究了用RNA从HNF4吗<我>α零胚胎和HNF4∆L成年老鼠。这是发现肝<我>有彩虹信使rna水平依赖HNF4<我>α因为它是完全缺失(胚胎)或强烈减弱HNF4(成人)在肝脏<我>α消融。然而,HNF4<我>αtransactivations结核病PPRE3或DR1int5却非常令人失望。在这一点上的调查,我们的数据对HNF4 transactivation化验<我>α和结核病PPRE3或DR1int5与明确的照片<我>有彩虹基因表达在肝脏HNF4<我>α有缺陷的胚胎/老鼠。一个合理的解释是另一个关键HNF4<我>α响应元素可能位于其他地方的基因组DNA。从理论上讲,也有可能单独来看,测试根据dr1 HNF4差<我>α响应的基因组上下文元素而在一起<我>有彩虹基因序列,这些远端元素同时触发大规模转录响应行动。另外,我们也不能排除HNF4关键响应元件<我>α位于很远从启动开始的吗<我>有彩虹在另一个染色体的一部分,弯曲专门与基因组序列的交互<我>有彩虹。这种监管最近描述的规定<我>Ucp2和<我>Ucp3核受体PPAR<我>γ(<一个href="#B53">51]。
此外,它是很难估计的PPAR在多大程度上<我>α可能参与的缺乏<我>有彩虹观察到的<我>在活的有机体内在HNF4∆L老鼠。不同的研究提供了证据表明,PPAR的稳态水平<我>α信使rna减少肝脏的HNF4∆L成年老鼠(<一个href="#B17">17,<一个href="#B54">52]。由DNA芯片正在进行的调查还显示,PPAR<我>α子被HNF4身体绑定<我>α分类PPAR<我>α小说和HNF4的直接目标<我>α(<一个href="#B54">52]。有趣的是,PPAR的绑定<我>α到HNF4<我>α启动子/增强子也被报道(<一个href="#B54">52]。因此,作者得出表达式的组合规则的存在<我>Pparα和<我>HNF4α协调的方式,对其下游目标基因。因为基底<我>有彩虹信使rna水平PPAR的肝脏<我>α零和WT老鼠是类似的正则条件下,PPAR的至关重要的作用<我>α在<我>有彩虹监管不太可能在HNF4∆L老鼠。
除了它的分类作为一个强大的本构转录激活因子,这是以前证明HNF4<我>α可以形成一个稳定的亲和力等复杂与其他转录因子轴马力,SREBP-1c, SREBP-2, HNF1<我>α导致的调制一些各自的目标基因的表达(<一个href="#B55">53,<一个href="#B57">54]。这些数据提出一个重要的概念问题HNF4之间的比较<我>α作为一个传统的核受体/转录因子和共激活剂。我们的数据是一致的HNF4的解释<我>α与RXR<我>α在解决方案(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(d))和DNA的存在(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(c))在不影响配体的结合PPAR<我>α/RXR<我>α异质二聚体(图<一个href="//www.newsama.com/journals/ppar/2010/352957/fig6/" target="_blank">6(b))。
而进一步的研究是必要的,以确定这种交互的化学计量学,值得强调的是,HNF4<我>α由配体强的transactivation结核病PPRE3 PPAR<我>α/RXR<我>α在四个不同的细胞系的假设排除人工制品由于使用一个特定的细胞系。获得的数据让人想起那些Winrow等人曾报道了PPAR功能性合作<我>α和HNF4<我>α感应的Luc活动从MFP-1 PPRE [<一个href="#B33">36]。之前报道的别人,HNF4<我>α减少转录激活ACOX-I PPRE PPAR<我>α/RXR<我>α(<一个href="#B33">36,<一个href="#B34">55]。重要的是,我们目前发现HNF4<我>α参与是PPAR吗<我>α全身的表达<我>有彩虹在小鼠肝脏的transactivation化验表明,我们的数据中观察到COS-7细胞翻译<我>在活的有机体内。
为什么HNF4挥之不去的问题<我>α将从结核病PPRE3和增强transactivation MFP-1 PPRE而减少,从ACOX-I PPRE吗?HNF4的分子机制<我>α影响被PPAR transactivation<我>α/RXR<我>α从结核病PPRE3可能涉及HNF4之间的相互作用<我>α和RXR<我>α。此外,特定的协会和PPAR辅活化因子/辅阻遏物<我>α/RXR<我>α染色质的配置可能会加强或削弱PPAR的稳定性<我>α/RXR<我>α不同的ppr呈现他们或多或少与HNF4容易交互<我>α。因此,加强PPAR的预期<我>α/RXR<我>α由HNF4介导transactivation<我>αPPAR的只关注一个非常有限的子集<我>α目标基因显示复合ppr,类似发现<我>有彩虹和<我>Mfp-1。
最后,染色质结构内的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)基因簇是由核受体HNF4策划<我>α和HNF1<我>α(<一个href="#B58">56]。此外,染色质重塑基因的表达<我>Smarcd3和<我>cdt 1老鼠被发现在改变HNF4∆L表明这些因素是潜在的候选人,可能导致HNF4的间接影响<我>α(<一个href="#B59">57]。支持这个想法,它可以假设一个类似的监管同时发生<我>有彩虹基因位点。支持这一假设,我们发现PPAR的transactivation<我>α/RXR<我>α通过结核病PPRE3被HNF4同样诱导<我>α著名的抑制剂或trichostatin组蛋白脱乙酰作用(数据没有显示)。
从生理的角度来看,最近的研究揭示HNF4的至关重要的作用<我>α在控制驱动脂肪酸的酶的表达<我>β能源生产的氧化<我>果蝇(<一个href="#B60">58]。鉴于PPAR<我>α行为的水平<我>β氧化途径在哺乳动物中,或许也没什么PPAR的大惊喜<我>α和HNF4<我>α信号线路相交(<一个href="#B61">31日]。在多大程度上PPAR之间的交互<我>α/RXR<我>α异质二聚体和HNF4<我>α更多的生理条件下酶影响脂质分解代谢值得进一步调查。
总之,这项研究表明<我>有彩虹是一个双重目标的两个肝浓缩核受体HNF4吗<我>α和PPAR<我>α。我们的工作也表明PPAR<我>α/RXR<我>α可能接触HNF4<我>α通过RXR<我>α进而调节的转录<我>有彩虹。因此,通过与其他先前绑定核受体染色质DNA, HNF4<我>α可能促进辅活化因子的招聘,可能增强基因转录。HNF4的收敛<我>α,PPAR<我>α,RXR<我>α信号通路强调了复杂的相互作用涉及正确的转录酶的反应<我>β氧化。
缩写
| 根据DR1: | 直接重复1 |
| HNF4<我>α: | 肝细胞的核4α |
| PPAR<我>α: | 过氧物酶体proliferator-activated受体α |
| 那有: | 3-ketoacyl-CoA硫解酶B |
| 卢克: | 荧光素酶。 |
确认
作者感谢博士Arnaud Jacquel(中心de矫揉造作的INSERM U866,第戎)AMAXA技术协助,雅克·卡明斯基对他有价值的帮助CoIP过程和松原扮演者博士身高5英尺4英寸的有用的建议。他们还要感谢博士t·列夫(韦恩州立大学医学院病理学系,底特律,MI,美国)分享DN HNF4表达载体,b·莱恩博士(将进医学院学习亨利Warembourg、里尔、法国)分享pcDNA3.1 hHNF4<我>α2和pcDNA3.1 D126Y HNF4<我>α2。f . Hansmannel和g . Chevillard接受奖学金的研究,国家教育和科技。这项工作是勃艮第地区委员会的支持下,在GDR-CNRS no2583过氧物酶体,法国外交部的研究,国家教育和科技和欧盟过氧物酶体项目(项目号lshg - ct2004 - 512018)。邓肯和m .战斗支持由美国国立糖尿病、消化和肾脏疾病研究所的美国国立卫生研究院。j . Chamouton和f . Hansmannel同样导致了这项工作。美国Mandard和诉Nicolas-Frances加入最后一个作者。