人类Hepatocyte-Bearing鼠标:动物模型来预测人类药物代谢和有效性

文摘

临床前研究传统的预测药物的疗效和安全性进行几乎只在小鼠和大鼠的啮齿动物,尽管药物代谢差异人类和啮齿动物。此外,人类()肝炎病毒等病毒感染啮齿类动物肝脏。一只老鼠轴承的肝脏肝细胞已经很大程度上利用肝细胞会克服这些缺点。我们已经建立了一个实用、高效和大规模生产系统这样的老鼠。积累的证据表明,这些hepatocyte-humanized老鼠是一个有用的和可靠的动物模型,展示类型反应的一系列体内药物处理(吸附、分布、代谢、排泄)实验和在肝病毒的感染和传播。在本文中,我们目前的现状研究嵌合小鼠和描述他们的实用性研究过氧物酶体proliferator-activated受体。

1。介绍

人类(h)身体由大约30器官,每一个都实现一个特定的功能,与其他器官还自主合作,维持生活。肝脏是必要的(h)——生命,因为它参与的控制能量平衡和扮演着中心角色在摄取食物的代谢和排泄和化学物质。知识的功能的机制h肝脏是重要的对于理解生物学的肝脏以及临床治疗liver-damaged患者,在人类研究药物药理学。理想的方法来阐明机制负责肝脏功能会执行实验使用h肝原位,当然,这种方法是不现实的。因此,科学家们采取了两种其他的方法:体外检查样品的孤立h身体(体外/人类),并使用动物体内考试(体内/动物)。虽然这两种方法,分别和在一起,揭示了很多关于管理的功能和形态的机制h肝脏,他们本质上是有限的生物现象的复杂性和动物和人类之间的同源物种差异的机制。

生物现象的复杂性要求相互交互的多个不同的组件。代表一个器官的特定细胞的功能是集体称为薄壁组织的细胞。例如,肝脏实质细胞的肝细胞,因为它们执行肝脏特异性功能如血清蛋白质的合成和分泌和代谢相关的酶的合成,包括肝脏特异性细胞色素P450 (CYP450)的蛋白质。然而,肝细胞本身无法实现肝脏功能和要求的合作nonparenchymal肝细胞如肝血管、胆管胆汁细胞、枯否细胞和星状细胞在Disse位于肝板和正弦曲线(1]。门静脉途径进口的主要营养物质到肝脏,肝血窦,小和大多数大肠,脾脏和胰腺。营养和氧气的正弦曲线和分泌蛋白在肝细胞交换通过Disse的空间。星状细胞,主要的细胞类型产生在肝脏细胞外基质成分,位于相邻的肝细胞和正弦内皮细胞(2]。肝细胞、内皮细胞和星状细胞代表65,21岁,和6%,分别h肝脏和肝细胞是主要负责功能(1]。

不同的细胞类型之间互动合作的主要方式是多细胞实体能够作为一个生命系统功能。这也是一个限制在体外的主要来源/人类的研究。到目前为止,没有研究已经成功地重建一个体外/h肝脏系统完全模拟的事件的发生h肝脏体内。这种限制促使体内的搜索/动物实验系统适合提供数据,可以外推到人类。然而,动物模型必须解决的挑战的物种差异基因和蛋白质与生物相关的现象。

肝脏过程营养物质从肠道和肠蛋白质,脂类和碳水化合物。它还提供一个内分泌功能,分泌白蛋白(铝青铜),大多数凝固因素,几个等离子体载体蛋白,脂质进入血液。此外,肝脏合成胆汁分泌到消化道。肝脏的组织学结构的优化这些函数(3]。肝细胞在一个聚合的协会组织良好(肝上皮细胞)分化肝细胞,建立小型顶端域线之间的通道细胞(小管)。这些通道连接到胆管,流入小肠。肝细胞是并列的基底面有窗的血窦内皮,动脉的血液流动和肠道门户发行量再流入静脉循环(4]。

h肝细胞在体外是不可或缺的/人类的肝脏研究。然而,准备h肝细胞足够多数量的实验目的是困难的,因为源是非常有限的,因为h肝细胞体外增殖和生长不丰富的工具。这使我们创建一个鼠标(米)轴承肝脏几乎完全由h肝细胞。这种方法可能在体外同时废除的局限性/人类和体内动物实验。用这个m -模型中,少量的可用h肝细胞会大量繁殖米肝脏在体外使用/人类的研究。此外,这些老鼠将提供一个优越的新型模型动物体内/动物研究,因为更少的物种差异会存在对肝脏功能。

我们称这种类型的鼠标liver-humanized鼠标,或只是一个嵌合体小鼠,尽管正确的名字应该是“hepatocyte-humanized鼠标。”的想法h肝嵌合体小鼠最初被Brinster集团1995年(5),并在2001年实现了两组学习hB型肝炎病毒(h-HBVs) [6),h丙肝病毒感染(7),之后,在2004年,由美国研究的体内生长能力h肝细胞的基因和蛋白质表达cyp [8]。一年后,一个详细的形态学研究嵌合米肝脏被Meuleman报道等。9]。Kneteman Mercer简要回顾了当前嵌合小鼠研究[10]。在本文中,我们综述嵌合体小鼠的研究进展,包括简短的历史背景,实用性测试h型临床可用的药物代谢,和潜在的用于检查h尤其是类型过氧物酶体proliferator-activated受体(PPARs)在新陈代谢中扮演关键角色的外源性物质在动物生物的方式。我们证明h嵌合肝细胞传播米可以作为正常肝脏,然后孤立h肝细胞在体外/人体模型(11]。

2。一只老鼠轴承同种的移植和异种的肝细胞

研究新生儿出血疾病,转基因小鼠()携带一系列串联的四白蛋白启动子/ enhancer-driven urokinase-type纤溶酶原激活物(uPA)基因创造了12]。肝脏肝细胞超量产生小鼠尿激酶,变得严重hypofibrinogenemic,加速肝细胞死亡。Sandgren等。(13开发了一个模型的肝脏再生老鼠,一种慢性刺激肝脏增长是由于肝脏功能生成的赤字。当肝细胞随机删除有害转基因小鼠的肝细胞半合的转基因开始复制,选择性地扩大到恢复原始大小的肝脏。转基因表达肝细胞被废除,因为复制的DNA重排转基因串联阵列的影响。这允许个人生存除了出生,和等离子uPA浓度逐渐恢复正常2个月时。transgene-deficient细胞形成克隆殖民地称为肝结节。这些结节扩大并取代了transgene-active细胞周围,无法复制,因为细胞损伤。最终,整个肝脏transgene-deficient细胞取代。这项研究展示了有用的鼠标不仅用于检查的复制能力米肝细胞,成功地通过移植肝细胞分离从成年老鼠到转基因小鼠(14),但哺乳动物的肝细胞,获得免疫耐受,如下所示。

Rhim等。(5]介绍了Alb-uPA转基因成immunotolerantν/ν小鼠交配小鼠与瑞士无胸腺的裸小鼠,产生immunotolerant老鼠(/裸小鼠)。大鼠(r)肝细胞移植的肝脏转基因小鼠纯合子。主机没有移植的肝脏r肝细胞被完全苍白(白色)。相比之下,那些r肝细胞有白色区域,代表该地区仅由transgene-expressing主机组成米肽和红色区域,代表transgene-deleted主机组成的区域米肽,添r -细胞,或两者兼而有之。与抗体免疫组织化学分析r肝细胞证实,主要由红色区域r肝细胞。完全再生转基因米肝脏像正常米肝脏的颜色、形状和大小。印迹分析表明,多达56%的老鼠的DNA来源,而同意与肝实质细胞入住率。这些发现强烈支持这个想法,宿主肝嵌合体,r薄壁组织和米-nonparenchymal细胞,包括血管、胆管和相关的结缔组织。肝脏重量对身体重量的比例为6.8%,这是类似于非转基因控制老鼠(5.8%),表明rat-mouse (r / m)嵌合肝能够正常终止增长。成功的一代的嵌合肝表明健康的老鼠r实质和米-nonparenchymal细胞能够相互通信恢复肝脏功能,尽管物种差异。

肝细胞启动和终止扩散的影响下nonparenchymal细胞(1]。因此,正常的进展和终止r / m嵌合肝再生暗示r肝细胞产生交互的表面蛋白和可溶性正确米因素,米细胞外基质,米表面蛋白米-nonparenchymal细胞。成功的更换m -肝脏与r肝细胞提高了激动人心的可能性米肝脏也可以重组h肝细胞(5]。

3所示。重新的肝细胞中肝

在两个先前的研究来生成一个鼠标和一个h-hepatocyte-mouse (h / m)嵌合肝、Rug-2-knockout老鼠(6)和重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠7)被用作免疫缺陷对uPA转基因小鼠交配伙伴。我们SCID鼠交配(),小鼠产生liver-injured SCID小鼠()[8]。正常的h肝细胞,~ 10⁶可行的细胞每只老鼠,这些老鼠的肝脏移植到出生后20 - 30天。的h肝脏肝细胞道利率高达96%并逐步添满。后重新h肝细胞移植很容易监控的增加h铝青铜在宿主体内的血液浓度,和扩张h肝细胞殖民地被immunohistological染色肝部分与可视化h特殊技能anti-cytokeratin (CK) 8/18抗体。道的数量的比率h肝细胞,肝细胞(米- - -h肝细胞)在宿主肝、更换指数(RI),由计算面积的比值决定了hCK8/18-positive肝细胞的整个地区免疫组织化学检查部分七叶。这是证明持续移植h肝细胞发生在纯合子Alb-uPA转基因(^{+ / +}转基因()老鼠,而不是半合^{+ /−}老鼠)。的h肝细胞开始扩散移植后7天左右。他们的殖民地逐渐变得更大,几乎是支流在70天左右,当国际扶轮高达96%。Immunohistological染色肝部分为IV型胶原蛋白、层粘连蛋白,stabilin(肝脏内皮细胞标记),BM8(枯氏细胞标记)和肌间线蛋白(肝星状细胞标记)展示了嵌合肝(图的性质1)。肝细胞之间的交互和星状细胞是肝的生理和病理条件的关键(15]。关闭,看似正常的协会h肝细胞与米星状细胞被染色与特定的抗体immunohistologically可视化h-CK8/18 (h肝细胞)和米肌间线蛋白(米星状细胞(图)2)。这些结果清楚地表明,嵌合米肝脏具有高RI(主要是由实质细胞h肽的比例较低米肽),米-nonparenchymal细胞,米与之前的一项研究[-ECMs,协议9]。国际扶轮之间有良好的相关性和管家基因的信使rna表达水平等h铝青铜,h转铁蛋白,支持的概念移植h肝细胞功能(16]。在我们的经验中,老鼠> 6毫克/毫升h铝青铜在血液里有一个国际扶轮70%。我们的组织学研究表明h肝细胞是组织良好和包围米-nonparenchymal细胞,重建正常组织特定的正常肝脏功能(部分中描述1),尽管大型物种区别人类和老鼠。

我们选择强劲增长的年轻老鼠作为主机。这些老鼠能够不仅存活下来,而且成长,尽管相对缓慢,和他们的体重增加原来的重量的50%,在更换主机米肝细胞与h同行。这些简单的动物实验使我们意识到米肽和h肝细胞能够相互沟通来维持生活:米肽支持的扩散h肝细胞,h肝细胞支持年轻的老鼠的增长。主机的肝脏先天受损由于uPA生产过剩,低血铝青铜的水平,并显著高水平的丙氨酸转氨酶(ALT)。重新的h肝细胞在肝脏增加血铝青铜的浓度和降低ALT水平,表明h肝细胞导致的改善米肝脏功能(8]。基于这些考虑,发现,我们期望的米肝做成的h肝细胞将函数作为一个看上去正常的肝脏代谢和解毒内源性和外源性生物分子。

4所示。表达谱的-Cytchrome p450在第一阶段代谢酶

生化处理的外来物质(外源性物质)吸收了身体是肝脏的主要任务之一。在肝细胞中,外源性物质处理组酶更稳定、亲水衍生物,统称为xenobiotic-metabolizing酶(xm),通过两个阶段:第一阶段,由氧化酵素,完成第二阶段,由接合酶(17]。摄取药物、毒物和化学致癌物代谢在第一阶段由CYP和flavin-containing单氧酶总科。值得注意的是,CYP的关键酶是临床药物的消除。

人类和啮齿动物对外源性物质的反应不同,这在一定程度上解释CYP亚科物种差异。这些物种差异引起严重问题研究临床可用的药物,因为异型生物质代谢研究的结果在小鼠和大鼠,这是最常用的实验模型的药理学和毒理学研究,不能外推到人类。因此,信息的表达CYP科和亚科应该从两个有价值的观点。首先,表达h / m嵌合体小鼠的CYP亚型中发现h肝细胞,但不是在老鼠中,将会是一个好迹象h肝细胞功能的生化反应米iver。第二,h -CYP-expressing嵌合小鼠为研究是一个有用的实验模型h外源性物质代谢反应类型,包括临床有价值的药物。值得注意的是,CYP3A4表示CYP是最丰富的工具h肝脏和代谢60%的治疗药物;总的来说,CYP2D6和CYP3A4代谢市场上70%的药物(17]。

物种差异CYP2C亚科是众所周知的,特点是集中18,19]。的h肝脏包含四个CYP2C亚型,CYP2C8、CYP2C9 CYP2C18,和CYP2C19缺席小鼠和大鼠。免疫印迹分析使用h特殊抗体CYP2C9显示积极的信号与hepatocytic微粒体分数h / m国际扶轮嵌合体小鼠34%从捐献者,但不是hepatocytic微粒体分数与RI嵌合体小鼠28%或从没有被移植的小鼠h肝细胞。CYP2C9催化的双氯芬酸、羟基化和微粒体嵌合小鼠的分数显示双氯芬酸羟基化活动,依靠国际扶轮的鼠标,强烈暗示h肝细胞的嵌合肝保留h类型对药物药理作用。最明显的,因此不同的例子之一CYP2D6 CYP老鼠和人类之间是(20.,21),参与大量的临床使用药物的代谢(22,23]。CYP2D6在人类中,是唯一的活跃成员CYP2D亚科,而老鼠和老鼠不表达蛋白的酶活性hcyp2d6,尽管他们有至少五个其他CYP2D基因(20.,24]。的酶活性hcyp2d6的嵌合小鼠在口头管理debrisoquin得到ah随后cyp2d6衬底,老鼠和检测-hydroxydebrisoquin,主要debrisoquin产生的代谢物hcyp2d6在小鼠的血。预处理与奎尼丁的老鼠,一个典型的hcyp2d6抑制剂,减少代谢产物的水平。因此,嵌合体小鼠的CYP酶活性被CYP2D6-metabolized专门诱导药物特别是压抑CYP2D6抑制剂(25]。

在已知的CYP家族,四个家庭(CYP1-4) xm中扮演主要的角色。我们比较六的信使rna和蛋白质表达谱h-CYPs CYP1A1 1 a2、2 c9 2 c19 2 d6,和3 a4,嵌合米肝脏与供肝(8]。总RNA制备嵌合体小鼠的肝脏具有不同RIs和捐助者,和mRNA 6h-CYPs放大在定量逆转录酶聚合酶链反应(存在)。所有六个mrna已经扩大到可检测水平,更高的RI值较高的老鼠。因此,h肝细胞的嵌合小鼠出现表达6hcyp基因的方式类似于他们的表达h的身体。

然后我们问是否这些通常表示h-CYPs在h / m嵌合肝还的方式诱导。的h-CYP3A4和h-CYP1A亚科专门应对利福平和3-methylcholanthrene (3-MC),分别为(26]。嵌合小鼠h肝细胞腹腔内注射利福平或3-MC,每天一次4天。六的mRNA水平h-CYPs在肝脏组织测量24小时后注射。利福平治疗增强的表现h-CYP3A4的5.8倍,但并不影响其他五位的水平h-CYPs。管理3-MC增强CYP1A1和CYP1A2 mRNA水平10.0倍和6.4倍,分别,但对其他四个cyp没有影响。无论是利福平还是3-MC诱导表达的6h-CYPs在没有被移植h肝细胞。利福,利福平的模拟,也专门诱导h-CYP3A,但不是主机小鼠Cyp3a嵌合米肝脏(27]。CYP3A4的程度诱导嵌合体小鼠的实际应用在药物测试,因为许多药物CYP3A4基质和CYP3A4的感应减少这些药物的药理药效(17]。

利福平是孕烷X受体的配体(PXR),形成一个异质二聚体类维生素a X受体(RXRa)。利福平/ PXR RXRa随后结合异型生物质响应元件(XRE)组成的α和β的直接重复half-sites相隔四核苷酸CYP3A4基因,从而上调表达的第一阶段(28]。利福平是一个强大的人类和兔子PXR活化剂,但几乎没有老鼠和老鼠的活动(29日]。因此,肝脏的数据h / m嵌合小鼠忠实地反映的人类。绑定的3-MC芳基碳氢化合物/ 3-MC气道高反应性受体(AHR)形式复杂,移植的CYP1A1、CYP1A2,和CYP1B1表达式绑定,气道高反应性的核转运蛋白(ARNT),这些基因的xr (30.]。我们的研究表明,这些已知的由利福平和3-MC ligand-activated受体信号通路激活功能的h / m嵌合米肝脏。因此,我们建议hepatocyte-humanized鼠标将是一个有用的动物模型的研究h类型外源性物质引起的信号通路调节基因的表达。

5。人性化的第二阶段结合药物的途径嵌合小鼠

据估计,第二阶段结合占约30%的药物间隙(31日),尤其是与极性基团的化合物。第二阶段主要的肝酶在人类UDP-glucuronosyltransferase (UGT),负责glucuronidation;sulfotransferase(饥饿),硫酸盐化作用;N乙酰转移酶(NAT),乙酰化作用;与谷胱甘肽年代对谷胱甘肽转移酶(GST)接合。我们检查了信使rna和蛋白质表达的酶活性h这些酶的形式嵌合小鼠肝脏有RI值从0到90%32]。表达的嵌合肝hugt,h饥饿,hnat,h销售税mRNA和UGT2B7 SULT1E1, SULT2A1, GSTA1蛋白质水平与他们的RI值。活动相关的酶如吗啡6-glucuronosyltransferase和雌激素酮3-sulfotransferase RI-dependent方式也被检测到。的蛋白质含量和酶活性相II-associated嵌合酶米肝脏的RI大约90%类似的供肝。在一个单独的研究中,我们系统地比较了mRNA表达谱26第二阶段h酶,包括销售税、南、NAT和UGT成员,嵌合小鼠肝脏之间的71 - 89%,供体肝脏的RIs (16]。所有的测试酶基因被发现。65%的基因测试,嵌合肝脏中的表达水平是供体肝脏的30 - 55%的水平;虽然较低,但这些值与RI值。这些结果表明,肝二期药物的生物转化是明显的人性化h / m嵌合体小鼠。

有组织的药物在临床使用结合PXRs或本构雄烷受体(汽车)。的ligand-activated PXRs和汽车参与一些二期的规定XME基因如SULT1A UGT1A和销售税(33- - - - - -35]。因此,很可能这些h类型ligand-activated转录监管机构功能h / m嵌合米肝脏,这表明这些嵌合小鼠将有助于研究监管这些转录因子的基因和蛋白质表达与异型生物质新陈代谢。

6。药物通过嵌合的运输肝细胞的膜

药物在肝脏交通在很大程度上是由两个系统:extrahepatic-to-hepatic运输使用转运蛋白(如有机阳离子转运体1 (OCT1)、有机阴离子运输多肽(OATP) 1 b1, OATP1B3;并使用腺苷hepatic-to-bile管道运输-triphosphate-binding磁带(ABC)的蛋白质,包括22,胆汁盐出口泵(BSEP / ABCB11),乳腺癌耐药蛋白(BCRP / ABCG2),和耐多药resistance-associated蛋白2 (MRP2) [36]。前膜转运蛋白位于正弦和负责毒品进入肝细胞的吸收;后者在微管的膜和负责胆汁代谢物的排泄。的h这些运输系统的基因被优先表示相比米对应的基因与RIs嵌合体小鼠60% (36]。一种头孢菌素抗生素,头孢美唑(CMZ)排泄没有任何化学改性,通过尿和胆汁通路。尿通路是占主导地位的人类37),而大鼠(38和老鼠36)使用胆道通路。之前收到h小鼠肝细胞,主机CMZ主要通过胆汁分泌通路,但尿通路是主导和RIs嵌合体小鼠60% (36]。

的h-ABCB4运输车已与fibrate-metabolism特征(39]。此外,我们研究了21的表达水平hABC转运蛋白基因,包括成员,溶质载体(SLC)和OATP的家人,嵌合小鼠肝脏的RIs从71年的89%,对供体肝脏的水平(16]。62%的基因测试,嵌合肝脏中的表达率分别为0.35,0.75。从这些有限的数据,大部分的h型运输机在嵌合基因表达米肝脏。

7所示。传染性的嵌合体小鼠肝炎病毒

h乙肝病毒和丙肝病毒造成的肝脏疾病,特别是丙肝病毒,是有效的抗病毒药物的发现目标,在全球范围内(40]。然而,有效的疗法的发展一直受到缺乏有用的体外和体内病毒复制的模型。例如,培养h肝细胞作为受体细胞病毒传播是不合适的,和啮齿动物不是有用的动物模型的严格的物种特异性病毒感染(41]。病毒性传染性和传播的潜力h / m嵌合小鼠会有说服力的证据得出结论,它实际上是“人性化。“Kneteman领导的研究小组首次挑战嵌合小鼠接种的hcv感染h血清,生产鼠标(病毒感染模型7]。由于他们的实质性优势的大小和持续时间h肝细胞移植,纯合子动物在这方面优于半合子的同行。初始总病毒载量的增加1950倍,与复制检测证实的节段移植肝脏的病毒RNA。丙肝病毒蛋白质被本地化h肝细胞结节,感染连续通过三代小鼠,确认感染性病毒颗粒的合成和释放。使用h-hepatocyte-chimeric Rug-2-knockout小鼠作为实验动物,Dandri等人是第一个成功生产体内乙型肝炎病毒感染(6]。

我们研究乙型肝炎病毒的传染性嵌合小鼠(42]。给小鼠注射之后h血清含有乙肝病毒,高水平的病毒血症小鼠发生在22周。通过实验表明,这些小鼠的血清含有感染乙肝病毒。正如先前所显示的丙肝病毒,乙肝病毒病毒血症往往是高在老鼠不断RI。此外,拉米夫定,anti-HBV药物,有效减少病毒血症水平受感染的老鼠。因此,嵌合小鼠可能是一个理想的模型,我们可以开发和评估反h肝炎病毒药物。

8。的嵌合小鼠作为研究的动物模型类型过氧物酶体Proliferator-Activated受体

8.1。药物代谢的控制下Ligand-Activated受体

生化系统在肝脏管理不仅内生(homobiotic),而且异型生物质分子。这些分子首先被特定的蛋白质受体在肝细胞表面。一般来说,绑定其受体的配体生成一个信号,最终改变基因表达,产生细胞反应。肝细胞具有四种类型的受体(16),所有这些都ligand-activated转录监管机构:汽车;PXR(也称为类固醇X受体(SXR)];过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR);和芳基碳氢化合物受体(AHR)。前三个属于核受体(NR)总科,由七个亚科,1 6 0 [43]。AHR是Per-AhR成员/ Arnt-Sim同源序列(PAS) /基本helix-loop-helix(通过)总科,也代表了昼夜节律的周期监管机构(每),啊受体核转运蛋白(ARNT),和一心一意的中线细胞分化的监管机构。

从历史上看,使用肝PPARs一直研究的角色。他们属于NR亚科1,以及甲状腺激素受体,视黄酸受体(RAR)和维生素D受体(VDR)。作为转录因子,这些受体分享类似的过程。他们是由配体激活绑定;形式形成,通常用类维生素a X受体(RXR);把细胞核;绑定到一个独联体代理XRE组成的两个hexanucleotides直接重复,由一个或两个核苷酸,在目标基因的启动子区域;和提高目标基因表达(17]。一般来说,在缺乏配体,亚科1 NR形成一定会绑定到时若蛋白质和抑制转录独联体表演元素(44]。配体结合时,受体共激活剂的若和同事分离蛋白质,使评分,促进基因表达。

三个PPAR亚型目前已知的(45]:(或NR1C1), (NR1C2),和 (NR1C3)。当连续暴露于某些外源性物质如降血脂药药物,增塑剂,和除草剂,它没有明显的结构关系,老鼠和老鼠可能显示肝过氧物酶体增殖体积和数量(增加)导致肝肿瘤;这表明刺激脂肪酸基因之间的相关性- - -氧化的酶和肝肿瘤过程(46,47]。Reddy和饶48)提出具体的可溶性为这些药物结合位点,集体称为过氧物酶体扩散(PPs),存在于肝脏和肾脏细胞提取物(49,50]。PPAR基因是第一只克隆的类固醇激素受体超家族的成员米肝cDNA文库(51]。这个基因对应,根据当前的命名法。两年后,三PPAR家族成员(x密切相关,,)被孤立非洲爪蟾蜍卵巢cDNA图书馆和被证明激活启动子的酰基辅酶A氧化酶(ACO)基因,编码关键酶脂肪酸氧化的酶(52]。x同源Issemann的吗(51),和x目前放置在吗亚科,连同其他同源成员中发现的哺乳动物。哺乳动物是在一个新的PPAR组由于不同氨基酸序列与x;然而,它目前被认为是和被指定为(45]。的三个PPARs,在目前的审查是最关键的,因为它是表示在肝脏的高水平,激活脂肪酸分解代谢,刺激糖质新生和酮体合成,参与脂蛋白组装的控制(45]。

8.2。PPAR的物种差异α相关的信号

的同形像与动物模型主要重要性的研究来预测肝PPs在人类身上的影响,因为受体激动剂诱导看似完全不同的行为在啮齿动物和人类53]。最初,顾名思义,PPARs绑定PPs进行了研究,因为他们的能力,从而诱发PP-metabolizing酶。在老鼠和老鼠,而不是人类,PPs降血脂药等药物,工业增塑剂,除草剂不会致癌物质,导致肝肿瘤(54]。在人类中,这些药物功能维持脂质稳态和不产生过氧物酶体增殖。因此,PPs的毒性和致癌性是高度特定物种(55]。物种的不同可能是由于PPAR信使rna表达水平较低h肝细胞与啮齿动物细胞(56,57]。另外,或另外,物种差异可能是由于不同的敏感性与过氧物酶体增殖反应相关基因的低水平的PPs,由于结构上的差异(54]。既有相似点和不同点在对外源性物质的反应不仅不同种类(种间),还同一物种的个体(种内的)。种间啮齿动物和人类之间的多样性是众所周知的,对药物代谢研究。NR亚科1成员至少有两个函数在哺乳动物。一是调节过氧物酶体增殖通过绑定PPAR响应元素(ppr)等基因的启动子的算法(58,59),双官能脱氢酶/水合酶(BFE)描绘洪涝频发60),微粒体CYP4A1 [61年]。另一种是调节血清胆固醇水平等目标基因脂蛋白脂肪酶基因(62年)和载脂蛋白AI调节基因,暗生,人民共和国(63年]。前者机制似乎在啮齿动物,而不是人类,并负责过氧物酶体增殖和hepatocarcinogenesis的感应,而后者机制控制啮齿目动物和人类(基本脂质代谢56]。这个物种差异异型生物质/配体受体信号可能归因于受体的表达水平的差异,或不同的受体配体结合亲和力,并导致难以确定反应人类基于啮齿动物的数据(56]。

8.3。PPARαGene-Humanized老鼠

克服物种差异的一种方法是生成“人性化”转基因小鼠(gene-humanized老鼠)的h感兴趣的基因引入米基因组(17]。一个gene-humanized米流程,表达了基因(64年)的控制下四环素响应监管体系在小鼠的肝脏gene-null老鼠(65年创建了)。这些老鼠功能对预期的配体作为野生型老鼠,但并未表现出肝细胞增殖,包括过氧化物酶体的增加,野生型老鼠。因此,这种方法可以帮助克服物种的差异,并提供了适合研究的动物模型h响应由感兴趣的基因。

8.4。PPAR信号在嵌合体小鼠

考虑到著名的角色和物种分化的PPARs外源性物质,学习是很重要的h-PPAR-related反应的h / m嵌合体小鼠。我们研究了一类的影响(antihyperlipidemic药物和PPAR激动剂)63年,66年]在嵌合体小鼠。鉴于PPAR-regulated核心作用的肝脏脂质代谢和fibrate化合物的使用在各种临床药物的反应h / m嵌合小鼠一类和PPARs可能有重要的实际意义。

肝细胞分泌胆汁磷脂,主要由磷脂酰胆碱(PC),通过多药耐药性2 22 (MDR3或ABCB4)嵌入到微管的膜。MDR3把电脑在研究中被证实使用mdr2基因(小鼠相同器官h-MDR3)基因敲除小鼠。这些老鼠完全缺乏磷脂在他们的胆汁67年),但胆汁PC与超表达的完全恢复h-MDR3 [68年]。的表达水平h-MDR3基因影响肝胆的疾病的发展(69年]。

一类微移植mdr2基因表达(70年),这是与增加胆汁分泌磷脂(71年]。Benzafibrate (BF),第二代fibrate模拟,临床上可以减少血清胆酶水平升高在慢性淤胆型肝病患者72年]。这是显示绑定到和,前更高的亲和力,因此据说善意PPAR配体(73年]。其他研究人员创建了一个coactivator-dependent receptor-ligand体外相互作用分析表明,高炉的配体,,(74年]。相同的研究还显示药物引起的激活,,(74年]。

男朋友诱发增加ABCB4 (MDR3)和细胞膜的再分配。这种感应与一个增强的能力有关h肝细胞直接电脑进入胆汁微管(75年]。此外,ABCB4再分配时衰减表达式被小干扰RNA或抑制吗啉代反义寡核苷酸在培养HepG2细胞(肝胚细胞瘤细胞)75年),强烈建议的必要性PC BF-induced激活的分泌h肝细胞。

我们测试的能力h / m嵌合米肝脏展示h类型PPAR-dependent通过管理BF嵌合体小鼠的反应。小鼠60 - 80%被喂以一个标准实验室的RIs chow含有0.3% (wt / wt)男朋友7天,并分析了他们的肝脏MDR3 mRNA和蛋白表达39]。BF-treated老鼠的mRNA水平大约是2倍的摘要控制老鼠。蛋白质水平大约是3.5倍,在控制。fibrate诱导一个健壮的再分配(胞外分泌和插入)MDR3的蛋白质进入胆汁淤积。

尽管PPARs的表达和功能研究h / m嵌合米肝脏是有限的,我们得出结论,基于上述研究,嵌合米肝脏展品的表型PPAR-regulated生理和病理过程,包括对外源性物质的反应,通常出现在h肝脏体内。

9。总结和未来的

政府后,异型生物质一般,在很大程度上被肝脏吸收,细胞分布,代谢和分泌的胆汁或尿导管。这些步骤,集体称为吸收,分布,代谢,排泄(ADME),是相互依存的,和药物药物动力学是由这些互动过程所带来的参数决定的。有明显的物种差异相关的许多基因和蛋白质ADME异型生物质。人类和啮齿动物之间的差异决定在啮齿动物药代动力学数据的确定必须非常谨慎,故意,正确推断人类为了确保药物在患者是安全有效的。直到最近,h-hepatocyte-chimeric老鼠研究主要与CYP-associated新陈代谢,代表M ADME,丙肝病毒和乙肝病毒感染。这些研究表明,嵌合小鼠明显明显人性化,提供一个可靠的和有前途的动物模型预测人类药物代谢和有效性。虽然数据也被累积,D和E ADME步骤,更多的工作需要达到一个适当的结论之前关于人性化的嵌合小鼠对这些过程。然而,目前可用的数据似乎表明,这些过程也非常人性化。

根据到目前为止,我们的研究和经验h-hepatocyte-chimeric老鼠表现出h类型的肝脏在基因和蛋白质水平的反应。这些老鼠可以模拟稳态表达式h肝脏在缺乏外源刺激和展览的预期h类型对刺激的反应。然而,我们必须考虑嵌合体小鼠的局限性。当前嵌合小鼠肝细胞只有人类的起源,但所有其他细胞米起源。执行肝脏功能,实质细胞需要nonparenchymal细胞的老鼠,而不是人类的起源在嵌合体小鼠。一些之间的相互作用h肝细胞和米-nonparenchymal细胞可以进行正常的齐次交互,和一些可能不会。

此外,内分泌系统调节肝细胞的关键实现正常代谢体内平衡和恢复正常条件后内源性或外源性因素造成的代谢参数超出正常范围内。嵌合肝受到的影响米内分泌系统系统,和一些米激素如生长激素(GH)不能采取行动h肽,因为受体之间复杂的不形式米gh和h肝细胞受体(76年]。在支持这一概念,h肝细胞与管理h肝生长- gh显示增强的表现h基因,包括igf - 1、STAT-3疾控中心25一个,cyclinD1、添宿主肝约6倍,速度控制。尽管有这些可能的局限性,我们认为嵌合鼠标是迄今为止最好的动物模型h肝脏功能的研究,因为嵌合小鼠高RI值不仅表达h肝脏蛋白质也模仿h肝脏的功能。五年前,我们开始大规模生产的同质人口hepatocyte-humanized老鼠高RIs促进在学术和工业研究活动社区,包括考试的h类型新陈代谢的新药h)的研究h丙肝病毒感染和传播机制,开发新的anti-HCV-drugs。然而,我们仍在初级阶段的描述嵌合体小鼠的各个方面。进一步的研究将系统地揭示这种新开发的优势和限制hepatocyte-humanized鼠标。

确认

作者感谢Hardwich博士盛情邀请审查嵌合体小鼠的研究现状,重点是PPAR信号,这将是一个重要的问题在嵌合体小鼠的使用药物的发展。我们感谢Drs。崛江横井t, t, t .井上请提供相关信息给PPAR-associated药物代谢;协助准备手稿女士t .清水;和a . Miyajima博士请允许我们展示图1在我们的审查。我们感谢最近的评论(1嵌合体小鼠的)历史和组织学方面,一些地方的引用,和一个优秀的审查17),提出了信息在异型生物质代谢的研究进展,特别是那些使用gene-engineered人源化小鼠评估h类型异型生物质新陈代谢。我们的研究嵌合小鼠肝脏组成的h肝细胞是由三个项目,Yoshizato项目合作链接独特的科技经济振兴(集群),日本的教育,文化,体育,科学和技术,k . Yoshizato广岛县,广岛大学21世纪先进的辐射事故医学COE计划k . Kamiya和先进的医疗技术,健康,和劳动科学研究资助来自卫生部、劳动和福利日本横井。

引用

1. k . Yoshizato c Tateno, r . Utoh“人类hepatocytes-bearing鼠:一种新的动物模型研究肝脏大小控制机制在哺乳动物中,“国际期刊的设计与自然,4卷,不。2,页1 - 2009。视图:谷歌学术搜索
2. k . Nakatani h .实在y Shimahara et al .,“Cytoglobin /堵塞,其独特的纤维母细胞定位在内脏和器官功能纤维发生,”实验室调查,卷84,不。1,第101 - 91页,2004。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. f . Lemaigre k . s . Zaret,“胚胎肝脏发展更新:新的模型,细胞谱系的控制,和形态发生,”当前在遗传学和发展意见,14卷,不。5,582 - 590年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. g·k . Michalopoulos“肝再生”,细胞生理学杂志,卷213,不。2、286 - 300年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j . a . Rhim e . p . Sandgren r·d·帕米特和r . l . Brinster”完全与异基因的小鼠肝脏肝细胞的结合,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷92,不。11日,第4946 - 4942页,1995年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m . Dandri m·r·伯·e·托罗et al .,“重新与人类肝细胞和体内小鼠肝脏感染乙肝病毒,”肝脏病学,33卷,不。4、981 - 988年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d·f·默瑟·d·e·席勒j·f·艾略特et al .,“丙型肝炎病毒复制小鼠嵌合人类肝脏,”自然医学,7卷,不。8,927 - 933年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. c . Tateno y Yoshizane:齐藤et al .,“完全人源化小鼠的肝脏附近显示生活代谢反应的药物,”美国病理学杂志》,卷165,不。3、901 - 912年,2004页。视图:谷歌学术搜索
9. p . Meuleman l·利·r·德·沃斯·et al .,“人类的肝脏的形态和生化特征uPA-SCID鼠标妄想,”肝脏病学第41卷。。4、847 - 856年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. n . m . Kneteman d·f·默瑟,“老鼠嵌合人类肝脏:谁说模特必须高?”肝脏病学第41卷。。4、703 - 706年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m .西村t .提价c Tateno et al .,“感应人类CYP1A2和CYP3A4的肝细胞的主要文化与人性化的嵌合小鼠肝脏,”药物代谢与药物动力学,20卷,不。2、121 - 126年,2005页。视图:谷歌学术搜索
12. j·l .黑格尔e . p . Sandgren j·l·德根r·d·帕米特和r . l . Brinster“新生儿出血在转基因小鼠表达urokinase-type纤溶酶原激活物,”细胞,卷62,不。3、447 - 456年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. e . p . Sandgren r·d·帕米特j . l .黑格尔c . c .女儿的r . l . Brinster和j·l·德根”完成肝再生albumin-plasminogen活化剂转基因体细胞删除后,“细胞,卷66,不。2、245 - 256年,1991页。视图:谷歌学术搜索
14. j . a . Rhim e . p . Sandgren j·l·德根r·d·帕米特和r . l . Brinster”替代病变小鼠肝脏的肝细胞移植,”科学,卷263,不。5150年,第1152 - 1149页,1994年。视图:谷歌学术搜索
15. n . Kawada d . b . Kristensen k Asahina et al .,”表征的星状细胞activation-associated蛋白(堵塞)和过氧化物酶活性在鼠肝星状细胞,发现“《生物化学》杂志上,卷276,不。27日,25318 - 25323年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 横井m .西村h . Yoshitsugu t . et al .,“评价mRNA表达人类摘要的酶和转运蛋白与人性化的嵌合小鼠肝脏,”Xenobiotica,35卷,不。9日,第890 - 877页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. f·j·冈萨雷斯和a m。Yu”,细胞色素P450和异型生物质受体人性化的老鼠,”药理学和毒理学的年度审查,46卷,41 - 64,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. e . l . Lecluyse n·j·休伊特,s . s .弗格森“诱导肝细胞色素P450酶:方法、机制,建议,和vitro-in体内相关性,”Xenobiotica,37卷,不。年级,1196 - 1224年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m·j·格雷厄姆和b . g .湖”诱导药物代谢:物种差异和毒理学意义,”毒理学,卷254,不。3、184 - 191年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. j·j·p·博·m·伯特兰·杰克逊et al .,“确定最好的动物模型对人类细胞色素P450活动:一个比较的老鼠,老鼠,兔子,狗,micropig,猴子和人,”Xenobiotica,30卷,不。12日,第1152 - 1131页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j·考德威尔”,试图预测物种现状的药物代谢的差异,“药物代谢的评论,12卷,不。2、221 - 237年,1981页。视图:谷歌学术搜索
22. 美国m .藏、美国Raimundo和m . Eichelbaum”细胞色素P450 2 d6:概述和更新药理学、遗传学、生物化学、”Naunyn-Schmiedeberg药理学的档案,卷369,不。1,23-37,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. a m。Yu j . r .空闲和f·j·冈萨雷斯,“多态细胞色素P450 2 d6:人源化小鼠模型和内源性底物,”药物代谢的评论,36卷,不。2、243 - 277年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. y Masubuchi, t·埃瓦萨s细川护熙et al .,“选择性缺乏debrisoquine 4-hydroxylase活动鼠肝微粒体,“药理学和实验治疗学杂志》上,卷282,不。3、1435 - 1441年,1997页。视图:谷歌学术搜索
25. m . Katoh t·泽田师傅y Soeno et al .,“人类的细胞色素P450酶体内药物代谢模型使用嵌合小鼠和人性化的肝脏,”制药科学杂志》,卷96,不。2、428 - 437年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. w·p·鲍恩j·e·凯里a Miah et al .,“测量细胞色素P450基因在人类肝细胞诱导,使用定量实时反向transcriptase-polymerase连锁反应,”药物代谢和处理,28卷,不。7,781 - 788年,2000页。视图:谷歌学术搜索
27. m . Katoh t .松井,m . et al .,只是“体内诱导人类细胞色素P450酶的表达与人性化的嵌合小鼠肝脏,”药物代谢和处理,33卷,不。6,754 - 763年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 高田t . Toriyabe k .经营t . et al .,”推出一个新的重要的顺式元件的transactivation CYP3A4基因通过外源性物质,”分子药理学,卷75,不。3、677 - 684年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. s . a .琼斯,l·b·摩尔,j·l·申克et al .,“孕烷X受体:滥交异型生物质受体分化在进化过程中,“分子内分泌学,14卷,不。1,27-39,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. i . j .赵和s . g . Kim Oltipraz抑制3-methylcholanthrene感应的CYP1A1 CCAAT / enhancer-binding蛋白质激活,“《生物化学》杂志上,卷278,不。45岁,44103 - 44112年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. t·d·Bjornsson j·t·卡拉汉h . j . Einolf et al .,“体外和体内药物之间交互的行为研究:美国药品研究与制造商制造商的角度来看,“药物代谢和处理没有,卷。31日。7,815 - 832年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. m . Katoh t .松井,h .时候et al .,“人类第二阶段酶的表达与人性化的嵌合小鼠肝脏,”药物代谢和处理,33卷,不。9日,第1340 - 1333页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. w·谢M.-F。Yeuh Radominska-Pandya et al。,“控制类固醇、血红素和致癌物代谢核孕烷X受体和本构雄烷受体”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷100,不。7,4150 - 4155年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 小玉,小池百合子,m .根岸英一和y山本,“核受体的车,PXR相声FOXO1规范编码的摘要和gluconeogenic酶的基因,”分子和细胞生物学,24卷,不。18日,第7940 - 7931页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. j .张黄w . s . s . Chua p,和d·d·摩尔”调制的acetaminophen-induced异型生物质受体肝毒性的车,”科学,卷298,不。5592年,第424 - 422页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. h .时候,m . Katoh t·泽田师傅et al .,“人性化的排泄途径与人性化的嵌合小鼠肝脏,”毒物学的科学,卷97,不。2、533 - 538年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. h . Ko, e·诺瓦克·g·r·彼得斯et al .,“药物动力学的单剂头孢美唑后肌内政府头孢美唑钠健康男性志愿者,“抗菌药物和化疗,33卷,不。4、508 - 512年,1989页。视图:谷歌学术搜索
38. t . Murakawa h .坂本s .广岛市东北方et al .,“药物动力学的ceftizoxime动物肠外给药后,“抗菌药物和化疗,17卷,不。2、157 - 164年,1980页。视图:谷歌学术搜索
39. j . Shoda k Okada, y Inada et al .,“苯扎贝特诱导多药耐药性22 3表达在人类肝细胞培养和人性化的嵌合小鼠肝脏,”肝脏病学研究,37卷,不。7,548 - 556年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. s . a . Sarbah和z . m . Younossi丙型肝炎:更新沉默的流行病”临床胃肠病学杂志,30卷,不。2、125 - 143年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. p . Meuleman g . Leroux-Roels,“人类liver-uPA-SCID鼠标:模型评估针对乙肝病毒和丙肝病毒的抗病毒化合物”抗病毒研究,卷80,不。3、231 - 238年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. m . Tsuge n . Hiraga h . Takaishi et al .,“感染人类肝细胞嵌合体小鼠的基因工程乙型肝炎病毒,”肝脏病学,42卷,不。5,1046 - 1054年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 核受体命名法委员会”,一个统一的命名系统的核受体超家族,”细胞,卷97,不。2、161 - 163年,1999页。视图:谷歌学术搜索
44. s . Yu和j·k·Reddy转录辅活化因子的过氧物酶体proliferator-activated受体,”Biochimica et Biophysica学报,卷1771,不。8,936 - 951年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. l . Michalik j . Auwerx j·p·伯杰et al .,“国际药理学联盟。LXI。过氧物酶体proliferator-activated受体。”药理评价,卷。58岁的没有。4、726 - 741年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. e·a·锁,a·m·米切尔和c·r·Elcombe“生化机制诱导肝过氧物酶体增殖,”药理学和毒理学的年度审查,29卷,第163 - 145页,1989年。视图:谷歌学术搜索
47. m . r . Nemali m . k . Reddy: Usuda et al .,“微分的酶诱导和调节酶:过氧物酶体扩散的预测价值识别某些摘要致癌物质,”毒理学和药理学应用,卷97,不。1,第87 - 72页,1989。视图:谷歌学术搜索
48. j·k·Reddy和m . s .饶过氧物酶体proliterators和癌症:机制和影响,“药理科学趋势7卷,第443 - 438页,1986年。视图:谷歌学术搜索
49. n . d . Lalwani w·e·Fahl, j . k . Reddy”nafenopin结合蛋白的检测大鼠肝胞液与过氧物酶体增殖的感应降血脂药化合物,”生物化学和生物物理研究通信,卷116,不。2、388 - 393年,1983页。视图:谷歌学术搜索
50. Goldfischer和j·k·Reddy”,过氧化物酶体(微体)在细胞病理学,”国际实验病理学检查,卷。26日,45 - 84年,1984页。视图:谷歌学术搜索
51. 即Issemann和美国绿色”,激活类固醇激素受体超家族的成员由过氧物酶体扩散,”自然,卷347,不。6294年,第650 - 645页,1990年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. c·德雷尔·g·克雷,h·凯勒,f . Givel g . Helftenbein和w . Wahli过氧化物酶病的控制$\beta$氧化途径小说核激素受体家族,”细胞,卷68,不。5,879 - 887年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. 山崎裕立花,k . d、k . Ishimoto和t . Doi PPARs癌症的作用,“PPAR研究102737卷,2008篇文章ID, 15页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. k . Morimura c .张j·m·沃德j . k . Reddy和f·j·冈萨雷斯微分易感性的老鼠人性化的过氧物酶体proliferator-activated受体$\alpha$王寅- 14643诱导肝肿瘤发生。”致癌作用,27卷,不。5,1074 - 1080年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. p .宾利,考尔德,c . Elcombe p•格拉索·d·斯特林格和周宏儒。Wiegand:“肝过氧物酶体增殖在啮齿动物对人类及其意义,”食品和化学毒物学没有,卷。31日。11日,第907 - 857页,1993年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. p·r·霍尔登和j . d . Tugwood”过氧物酶体proliferator-activated受体α:作用在啮齿动物肝癌和物种差异,”分子内分泌学杂志》,22卷,不。1,1 - 8,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. c·n·a·帕尔默M.-H。许,k·j·格里芬,j . l . Raucy e . f·约翰逊,“过氧物酶体扩散者激活受体-$\alpha$表达在人类肝脏,”分子药理学,53卷,不。1,14-22,1998页。视图:谷歌学术搜索
58. j . d . Tugwood Issemann, r·g·安德森,k . r . Bundell w . l . McPheat和美国绿色,“鼠标过氧物酶体扩散者激活受体识别响应元素$5^{\prime }$旁侧序列鼠酰基辅酶a氧化酶基因,”在EMBO杂志,11卷,不。2、433 - 439年,1992页。视图:谷歌学术搜索
59. 张,s . l . Marcus f . g . Saijadi et al .,“过氧物酶体的识别proliferator-responsive元素上游的基因编码的酶鼠enoyl-CoA水合酶/ 3-hydroxyacyl-CoA脱氢酶”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷89,不。16,7541 - 7545年,1992页。视图:谷歌学术搜索
60. o .芭铎,t·c·奥尔德里奇,n . Latruffe和美国绿色,“PPAR-RXR异质二聚体激活过氧物酶体扩散国的反应元素双功能酶基因的上游,“生物化学和生物物理研究通信,卷192,不。1,37-45,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. t·c·奥尔德里奇,j . d . Tugwood和美国绿色,“识别和描述DNA元素涉及CYP4A1转录的规定,“生物化学杂志第2部分,卷。306年,第479 - 473页,1995年。视图:谷歌学术搜索
62. k市检察院,j . Peinado-Onsurbe a m。PPAR Lefebvre et al。。$\alpha$和PPAR$\gamma$催化剂直接明显的组织转录响应通过PPRE脂蛋白脂肪酶的基因,”在EMBO杂志,15卷,不。19日,5336 - 5348年,1996页。视图:谷歌学术搜索
63. j·m·彼得斯n . Hennuyer b Staels et al .,“改变脂蛋白代谢过氧物酶体proliferator-activated受体$\alpha$缺乏的老鼠。”《生物化学》杂志上,卷272,不。43岁,27307 - 27312年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. c .张t.e.秋山,j·m·沃德et al .,“减少肝细胞增殖核受体在小鼠人性化的过氧物酶体proliferator-activated受体$\alpha$”,癌症研究,卷64,不。11日,第3854 - 3849页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. t . s . s . Lee Pineau, j·德拉戈et al .,“有针对性的中断$\alpha$过氧物酶体的同种型proliferator-activated受体基因在小鼠结果在废除过氧物酶体扩散者的多效性的影响,“分子和细胞生物学,15卷,不。6,3012 - 3022年,1995页。视图:谷歌学术搜索
66. 学术界。李、p . Olson和r·m·埃文斯“脂质代谢,代谢疾病和过氧物酶体proliferator-activated受体,”内分泌学,卷144,不。6,2201 - 2207年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. j·j·m·Smit a . h . Schinkel r . p . j . Oude Elferink et al .,“纯合子小鼠的中断mdr222基因导致完全没有胆汁和磷脂的肝脏疾病,”细胞,卷75,不。3、451 - 462年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. a·j·史密斯,j . m . l . de Vree r . Ottenhoff r . p . j . Oude Elferink, a . h . Schinkel和p . Borst Hepatocyte-specific表达的人类MDR322基因恢复胆道磷脂酰胆碱排泄缺席Mdr2(- / -)小鼠。”肝脏病学,28卷,不。2、530 - 536年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. o . Rosmorduc b·赫梅林有着挪威P.-Y。Boelle r .帕洛阿尔托研究中心,j . Taboury, r . Poupon。”ABCB4基因mutation-associated成人胆石病。”胃肠病学,卷125,不。2、452 - 459年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. t . Kok v . w .入手,h . Wolters et al .,“过氧物酶体proliferator-activated受体$\alpha$(PPAR$\alpha$)介导多药耐药性的监管2 (Mdr2)表达和功能在老鼠身上,“生物化学杂志第3部分,卷。369年,第547 - 539页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. j . Chianale诉Vollrath也指出,a . m . Wielandt et al .,”一类诱导mdr2基因表达和胆汁分泌磷脂鼠标,“生物化学杂志第3部分,卷。314年,第786 - 781页,1996年。视图:谷歌学术搜索
72. Maeda t .栗原市a酒井敦a m . Shigemoto和k .山下式”苯扎贝特治疗原发性胆汁性肝硬化:比较与熊去氧胆酸,”美国胃肠病学杂志》,卷95,不。10日,2990 - 2992年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. g .克雷o . Braissant f L 'Horset et al .,“脂肪酸、二十烷类和降血脂药代理人认定为配体的过氧物酶体proliferator-activated由coactivator-dependent受体配体受体分析,“分子内分泌学,11卷,不。6,779 - 791年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. 井上,f .伊藤,s Aoyagi et al .,“Fibrate和他汀类药物协同增加PPAR的转录活动$\alpha$/ RXR$\alpha$和减少transactivation NF$\kappa$B。”生物化学和生物物理研究通信,卷290,不。1,第139 - 131页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. j . Shoda y Inada, a教授et al .,“苯扎贝特刺激微管的PPAR NBD-labeled PC HepG2细胞定位$\alpha$ABCB4介导的再分配”,脂质研究期刊》的研究,45卷,不。10日,1813 - 1825年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. n .杨继金c . Tateno立花et al ., a“GH增强扩散的人类肝细胞移植到免疫缺陷小鼠肝脏受损,“内分泌学杂志》,卷194,不。3、529 - 537年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2009 Katsutoshi Yoshizato和Chise Tateno。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。