文摘

Amifostine放射保护剂功效高但是可怜的安全,半衰期短,没有口服配方,和依从性差,限制了其应用。与辐射的风险加大,开发新的辐射防护剂是至关重要的。我们以前合成一个新的amifostine导数,小分子化合物hl - 003。在这项研究中,我们关注评价hl - 003的放射防护性能。使用在体外2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl化验,我们最初确认hl - 003作为一种强有力的抗氧化剂和证明其自由基清除活性强于amifostine。我们进行了急性毒性试验,28天毒性测试,一个30天的存活率测试,和药代动力学研究中,所有的总提供的证据表明,hl - 003是一种小分子放射保护剂功效高、良好的安全性,很长的半衰期,口服。hl - 003的肠道辐射防护机制探讨了男性C57小鼠腹部照射后通过分析肠道组织样本hematoxylin-eosin染色、免疫组织化学、TUNEL染色法和免疫荧光检测。结果表明,hl - 003保护肠道辐射损伤的DNA和抑制磷酸化组蛋白的表达H2AX,磷酸化p53,和apoptosis-related蛋白质caspase-8 caspase-9,导致维持小肠的正常形态和见解提供辐射防护机制。因此,hl - 003是一种小分子放射保护剂在放射医学与潜在应用。

1。介绍

平民在辐射暴露的风险增加,由于增加核武器爆炸的可能性,破坏核设施,暴露在放射性材料,恐怖袭击,和核事故,所有这些都可以产生灾难性影响公共卫生1]。急性辐射综合症(ARS)发生在全身或局部照射的强度大于1 Gy。主要临床表现是造血作用(2 - 6 Gy),以及胃肠道(6 - 8 Gy)和脑血管综合症(> 8 Gy) (2- - - - - -4]。在过去的60年里,尽管重大科技进步发展的安全、无毒,ARS策略和有效的辐射,美国食品和药物管理局没有批准任何药物(5]。目前,辐射对策可分为三类:辐射防护剂暴露前接种预防损伤,辐射缓冲因素应用辐射暴露后不久,但在辐射的外观症状,加快恢复或修复,和辐射治疗或者治疗后出现症状来刺激修复或再生(6]。我们的研究旨在辐射防护剂。

先前的报道表明,辐射损伤的机制与生产密切相关的活性氧(ROS),导致氧化损伤蛋白,脂质,和DNA,并激活激活信号转导途径(7- - - - - -9]。因此,使用抗氧化剂进行辐射防护是一个关键医疗对策。Amifostine最活跃的小分子放射保护剂,是由沃尔特里德陆军研究所1959年保护士兵免受核辐射造成的损害(5,10,11]。然而,它的应用程序是极其有限的由于其半衰期短,其政府注射,口服配方的缺乏,依从性差,严重的副作用,包括恶心、呕吐、低血压(12,13]。

用更少的副作用比获得放射保护剂amifostine,设计并合成一系列氨基硫醇类似物,包括β氨乙基isothiourea(让),N-acetyl-L-cysteine (NAC) N-2-mercaptopropionylglycine (MPG),二乙基二硫代氨基甲酸(DDC), 2, 2-dimethylthiazolidine, prc - 210 (14- - - - - -16]。然而,这些化合物的放射防护效果仍需要改进,除了prc - 210 (17]。此外,尽管众所周知的天然抗氧化剂,如姜黄素、白藜芦醇、维生素C、红参、低毒性和高耐受性,其辐射防护效果低于amifostine(的18- - - - - -21]。因此,迫切需要开发口服的小分子放射保护剂效率高和低毒性。

我们之前开发的一个新的小分子,hl - 003, 100%的知识产权(22]。在当前的研究中,我们首先用无细胞系统研究hl - 003的抗氧化活性和其对DNA氧化损伤的保护作用。然后系统地评估安全、功效和药代动力学(PK) hl - 003的特点,包括其穿过血脑屏障(BBB)的能力。最后,我们研究了辐射防护机制辐射诱导hl - 003的小肠损伤。我们的分析表明,小分子抗氧化剂hl - 003有一个潜在的临床价值作为radioprotectant反对农业研究所。

2。材料和方法

2.1。动物

雄性C57BL / 6小鼠(21 - g),雄性ICR小鼠(21 - g),和雄性SD大鼠(200 - 300 g)买来SPF HFK生物科学有限公司有限公司(中国,北京),JOINN实验室(中国,北京),和查尔斯河实验室(中国,北京),分别。实验动物都是保持在一个认证动物设施的指导中国和美国国立卫生研究院的国家动物福利法律指导的护理和使用实验动物。所有动物程序批准的机构动物保健和使用委员会放射医学研究所、中国医学科学院(许可证号码:2017053)。

2.2。2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl DPPH自由基清除测试

DPPH (CAS No。1898 - 664年)正是重(6.4毫克),完全溶解在32毫升无水乙醇准备股票在4°C存储解决方案。在实验之前,股票的解决方案是稀释至50μ克/毫升。hl - 003(10毫克)与1毫升ddH溶解₂O和双重的连续稀释10获得工作的解决方案,5,2.5,1.25,0.625,0.3125,0.15625,0.078125和0.0390625毫克/毫升。180年整除μL DPPH乙醇溶液分发96孔板(14319035号;美国纽约康宁公司,康宁)和混合着20μ在不同浓度L整除hl - 003。控制样品含有180μ20 L乙醇溶液混合μ在不同浓度L hl - 003的解决方案。每个样本制备和加工一式三份。测试是由孵化样品在室温下在黑暗中30分钟。样品进行了分析通过测量吸光度在使用标515海里(SM600、上海Utrao医疗器械有限公司)。

2.3。急性毒性试验

共有88名男性C57BL / 6小鼠被随机分配到急性毒性测试组。六十小鼠被分为六个hl - 003组(每组10老鼠)。每组收到了不同的hl - 003剂量(1200、1600、1800、2000、2400和3200毫克/公斤),口服填喂法。十八个老鼠对待amifostine (112901-68-5;江苏Aikon生物制药研发有限公司)。小鼠被分为三组每组小鼠(6),其中每个收到amifostine不同剂量(600、700和800毫克/公斤),口服填喂法。对照组小鼠(10),口服填喂法进行管理hl - 003汽车包含85%的羟丙基- 20%β环糊精溶液(HP -βcd, 20190414号;志远生物技术)和15% Solutol HS-15 (HF08982;深圳hiboled世纪生物技术有限公司)。毒性的治疗和老鼠的死亡为14天postadministration监控和记录。所有幸存的小鼠安乐死结束时实验。

2.4。长期毒性试验

共有50个雄性C57BL / 6小鼠被随机分配到长期毒性测试组。四十小鼠被分为四个hl - 003组(每组10老鼠)。28天,每个治疗组收到了不同的hl - 003剂量(800、1000、1200和1600毫克/公斤),口服填喂法。对照组小鼠(10)收到了hl - 003汽车解决方案为28天口服填喂法。毒性的治疗和老鼠的死亡为28天的观察和记录。所有幸存的小鼠安乐死结束时实验。

2.5。辐射防护功效的口头hl - 003和Amifostine管理

52雄性C57BL / 6小鼠随机分为7组:对照组( ),红外8 Gy集团( ),hl - 003 800毫克/公斤( ),hl - 003 1200毫克/公斤( ),hl - 003 1600毫克/公斤( ),amifostine 200毫克/公斤( ),和amifostine 500毫克/公斤( )。hl - 003口头管理1 h前8 Gy全身照射(WBI)在所有hl - 003组。amifostine组,一个剂量的200或500毫克/公斤amifostine口头管理0.5或1 h 8 Gy WBI之前,分别。红外8 Gy集团hl - 003汽车解决方案是通过1 h 8 Gy WBI之前。在对照组,hl - 003汽车解决方案是口头管理没有辐射。一个^137年Cs封闭在一个接触源仪器Gammacell-40(加拿大原子能有限,粉笔河,加拿大)作为辐射源。辐照后30天的老鼠连续监测。记录小鼠的死亡,存活曲线生成使用GraphPad Prism 6.0软件。

2.6。筛查的最佳时间来执行口头hl - 003管理

六十雄性C57BL / 6小鼠随机分为六组(每组10老鼠):对照组,红外8 Gy集团hl - 003 0.5 h组,hl - 003 1 h组,hl - 003 2 h集团和hl - 003 4 h组。hl - 003(1600毫克/公斤)是口头管理0.5,1、2或4 h 8 Gy WBI之前。红外8 Gy集团hl - 003汽车解决方案是通过1 h 8 Gy WBI之前。在对照组,hl - 003汽车解决方案是口头管理没有辐射。辐照后30天的老鼠连续监测。记录小鼠的死亡,存活曲线生成使用GraphPad Prism 6.0软件。

2.7。辐射防护功效的hl - 003 10 Gy

五十雄性C57BL / 6小鼠随机分为5组(每组10老鼠):对照组,红外10 Gy集团hl - 003 3 h组,hl - 003 4 h组,hl - 003 6 h组。hl - 003(1600毫克/公斤)是口头管理3、4和6 h 10 Gy WBI之前。红外10 Gy集团hl - 003汽车解决方案是口头管理4 h 10 Gy WBI之前。在对照组,hl - 003汽车解决方案是口头管理没有辐射。辐照后30天的老鼠连续监测。记录小鼠的死亡,存活曲线生成使用GraphPad Prism 6.0软件。

2.8。PK的研究hl - 003

6雄性SD大鼠随机分为两组(每组3大鼠),接受的剂量100毫克/公斤hl - 003通过静脉注射(注射)或400毫克/公斤hl - 003 / os(订单)。收集血液样本为0.08,0.25,0.5,1,2,4,8,24小时后hl - 003管理(静脉输液或订单)。能整除的50μL等离子来自每一个血液样本。等离子体整除被装载在一个与250年96孔板和混合μL乙腈(WXBC4001V;Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。板和离心机在400 rpm 20分钟。每一个上层清液(150μL)是150年混合μL 0.1%的甲酸(C1728048;阿拉丁为10分钟),传得沸沸扬扬。能整除的为10.0μL /样本被液体chromatography-tandem注入和分析质谱(LC / MS / MS, TQU335,热科学、威尔明顿,美国)。

2.9。BBB通透性评价hl - 003

在0.25、0.5、1、2、3、4、6和8 h后雄性ICR小鼠接受口服剂量400毫克/公斤hl - 003,全血整除的大约200人μL在血液采集收集包含EDTA的船只,和大脑组织样本在验尸中被发现。收集的血液被放在冰和离心20分钟的4000 rpm。等离子体分为1.5毫升EP管。小鼠安乐死后,大脑很快被删除。剩余在脑组织和血液净化冰水,和脑组织的残余水干了干医疗纱布。称重后,大脑和血浆样本存储在-80°C进行测试。样本分析LC / MS / MS (TQU335,热科学)。

2.10。保护机制的分析hl - 003对肠道辐照

九名雄性SD大鼠随机分为3组(每组3大鼠):对照组,IR组和hl - 003 + IR组。大鼠IR组15 Gy腹部照射(ABI)。hl - 003 + IR组剂量为1600毫克/公斤hl - 003口头管理4 h前15 Gy ABI。五天后IR,所有老鼠都牺牲了收集小肠组织进行机理分析。

2.11。苏木精和伊红染色(他)

组织样本的小肠在4%多聚甲醛固定,石蜡嵌入式,切成4μ米的部分。部分与二甲苯脱蜡,沾染了他,和分析用显微镜(奥林巴斯美国,梅尔维尔,纽约,美国)。

2.12。免疫组织化学分析

组织样本的小肠在4%多聚甲醛固定,嵌入在石蜡,切成4μ米部分,并与二甲苯脱蜡。部分被均匀地覆盖着山羊血清和密封在室温下30分钟。丢弃封闭液后,一夜之间,片被孵化在4°C主要抗体在适当的稀释,包括anti-Lgr5抗体(1:300年,bs - 20747 - r;bios), anti-lysozyme抗体(1:100年,ab108508;Abcam)和anti-Ki67抗体(1:300年,ab15580;Abcam),其次是孵化与二次抗体结合过氧化物酶在室温下50分钟。随后,部分沾3,3 - - - - - -diaminobenzidine (DAB)和苏木精为显微分析(奥林巴斯DP26)。苏木精染色细胞核蓝色,民建联的棕色污点产生积极的目标蛋白的表达。

2.13。TUNEL分析

组织样本的小肠在4%多聚甲醛固定,嵌入在石蜡,切成4μ米部分,并与二甲苯脱蜡。部分加工TUNEL试剂盒(均原位细胞死亡检测装备,11684817910;罗氏公司)和荧光显微镜的图像进行了分析(奥林巴斯BX51)。

2.14。免疫荧光分析

组织样本的小肠在4%多聚甲醛固定,嵌入在石蜡,切成4μ米部分,并与二甲苯脱蜡。部分被均匀地覆盖着山羊血清和密封在室温下30分钟。丢弃封闭液后,一夜之间,片被孵化在4°C主要抗体在适当的稀释,包括反γ-H2AX抗体(1:100年,bs - 3185 r;bios), anti-p53抗体(1:100年,ab26;Abcam)、anti-caspase-8抗体(1:50,ab25901;Abcam)或anti-caspase-9抗体(1:100年,ab52298;Abcam),其次是孵化与二次抗体在室温下50分钟。随后,细胞核被restained在显微镜下用DAPI和分析(奥林巴斯BX51)。苏木精染色细胞核蓝色,民建联的棕色污点产生积极的目标蛋白的表达。紫外线激发下DAPI-stained核是蓝色的,积极的表达目标蛋白质检测红色或绿色光信号,根据荧光素标签。

2.15。统计分析

所有数据都表示为 (标准差)。分析了存活率运用kaplan meier方法,和平均使用未配对进行了比较 - - - - - -测试。统计分析了使用GraphPad Prism 6.0,和1.42 ImageJ问软件被用于免疫荧光图像的定量分析。统计学意义是 。

3所示。结果

3.1。hl - 003是一个强大的自由基清除剂在体外

因为hl - 003设计作为氨基硫醇氧化,我们最初评估它的抗氧化能力在体外用DPPH实验。结果表明,hl - 003高效回收DPPH浓度的方式在30分钟(图1),这证明了hl - 003是一种强大的自由基清除剂,并有很强的抗氧化活性。

3.2。hl - 003比Amifostine有更好的安全性

自hl - 003年设计并开发成口服ARS-protective代理,我们评估其口头安全通过急性毒性试验、长期毒性试验(表28天1和2)。急性毒性试验表明,最大耐受剂量(mtd)的hl - 003和amifostine在老鼠1800和600毫克/公斤,表明hl - 003比amifostine更好的容忍。长期毒性试验,hl - 003的28天MTD 1000毫克/千克,这表明化合物有很强的安全性。死亡率的急性和长期毒性试验对照组为0%(数据没有显示)。

3.3。口服不同剂量的hl - 003在辐照小鼠存活率

评估潜在的hl - 003作为口服ARS-protective代理,我们评估了不同剂量的放射防护功效口服hl - 003在雄性C57BL / 6小鼠(图2和表S2)。收到8 Gy WBI三十天后,老鼠IR组存活率为0%。小鼠的存活率暴露在口腔amifostine amifostine 30天分别为28.6%和30%的200毫克/公斤和500毫克/公斤组,分别。生存amifostine组没有显著不同于IR组。有趣的是,口服不同的hl - 003剂量显著增加辐照小鼠的生存,存活率的57% ( ),57% ( ),和85.71% ( )在hl - 003 800、1200和1600毫克/公斤组,分别。

3.4。最优时间口服hl - 003政府辐照前4 h

我们使用的最佳剂量1600毫克/公斤来确定最优时间hl - 003政府在雄性C57BL / 6小鼠。IR组,老鼠开始9天后收到8 Gy WBI死去。最后老鼠这组13天辐照后去世,和30天的存活率是0%。政府hl - 003为0.5,1和2 h辐照前延迟第一个动物的死亡时间从9天辐照后12日14日和14天,分别和30天的存活率为10%,60%,和60%,分别。hl - 003治疗组的生存曲线显著不同的IR组( )。更重要的是,没有老鼠死于hl - 003管理4 h辐照之前,和辐照小鼠的存活率增加到100%。因此,最优hl - 003管理时间是4 h之前8 Gy WBI(图3、表S3)。

3.5。口服hl - 003增加了辐射小鼠耐受剂量

在这个实验中,我们测试了hl - 003是否能提高小鼠的存活率高剂量照射之下。结果表明,注射剂量1600毫克/公斤hl - 003在3、4、6 h辐照前的存活率显著提高小鼠暴露于10 Gy WBI ( ,图4)尽管辐照小鼠的存活率从8 Gy 10 Gy从100%下降到40%相同的管理条件下的hl - 003(1600毫克/公斤,4 h辐照之前),它在一定程度上改善了辐照剂量下10 Gy。支持信息表中所示的特定值S4。

3.6。评价hl - 003 PK参数

我们评估的口服疗效hl - 003和评估其PK参数和雄性SD大鼠口服生物利用度(表3)。血浆半衰期( )hl - 003输液注射后的值和范围管理 和 分别h。后卖方管理400毫克/公斤hl - 003,最高药物浓度( )在等离子体 ng / mL,到达峰值的时间( )是 h。此外,hl - 003的生物利用度 %。

此外,BBB被ICR小鼠评估。在实验中获得的参数计算使用Winnonlin 7.0 noncompartment模型(图5和表S5)。等离子体的AUC是 人力资源ng / mL, AUC的脑组织 人力资源ng / g。计算B / P比值 %,这表明hl - 003通过BBB可以进入脑组织。

3.7。hl - 003缓解辐射诱导形态损伤小肠

我们评估了保护作用hl - 003的放射性肠损伤雄性C57BL / 6小鼠探索辐射防护的机理。我们评估的作用hl - 003在小鼠肠道形态学ABI与15 Gy 3天后他染色的组织样本(图6)。与未照射肠道组织的正常形态,辐照小鼠的小肠绒毛打破,地下室是损坏。口服hl - 003显著提高辐照小鼠的小肠形态学变化,与未照射的小鼠。

3.8。hl - 003促进增殖、分化和再生的隐窝细胞辐照雄性C57BL / 6小鼠

肠道上皮细胞能不断自我更新来维持体内平衡和快速再生受伤后(23,24]。在这项研究中,免疫组织化学染色法进行评估的作用hl - 003上隐窝细胞增殖、分化及其对维持肠道细胞再生的影响。Lgr5就⁺肠道干细胞(isc),溶菌酶⁺Paneth细胞,Ki67⁺瞬态放大细胞(tac)进行评估后在3天15 Gy ABI(图7)。与对照组的地位相比,辐射严重Lgr5就数量的减少⁺isc, Ki67⁺tac,溶菌酶⁺Paneth IR组的细胞,而这些细胞类型显著增加辐照小鼠的小肠组织处理hl - 003,表明hl - 003增加了增殖,分化,在这些小鼠肠道隐窝细胞的再生能力。

3.9。hl - 003在小肠组织中细胞凋亡减少辐照雄性C57BL / 6小鼠

hl - 003的作用在辐照小鼠小肠组织的凋亡细胞被TUNEL分析(图评估8)。我们发现IR组比对照组小肠细胞凋亡,但政府hl - 003显著降低辐照小鼠小肠细胞的凋亡,差异具有统计学意义( )。

3.10。hl - 003保护对辐射损伤DNA双链

调查是否hl - 003保护DNA免受辐射损伤、DNA损伤标记的表达γ-H2AX分析辐照雄性C57BL / 6小鼠(25]。结果如图所示9。相比γ在对照组-H2AX表达地位,的表达γ-H2AX辐照小鼠小肠细胞刺激,而政府hl - 003抑制γ-H2AX辐照小鼠的小肠细胞中表达,差异显著( )。这些结果表明,hl - 003缓解irradiation-induced DNA损伤。

3.11。hl - 003抑制辐照小鼠的肠细胞凋亡抑制Apoptosis-Related通路蛋白

进一步研究机制的保护作用hl - 003放射性肠道损伤,apoptosis-related通路蛋白p53的表达水平和caspase-8/9评估免疫荧光(图10)。IR组有更高的小肠p53和caspase-8 caspase-9蛋白质的表达水平比对照组。然而,hl - 003治疗辐照小鼠显著抑制p53的表达水平( ),caspase-8 ( ),和caspase-9 ( ),与水平辐照雄性C57BL / 6小鼠没有进一步的治疗。这些结果表明,hl - 003对辐射诱导肠道损伤产生保护作用通过p53途径和线粒体凋亡通路。

4所示。讨论

迄今为止,潜在的辐射危害已成为一个严重的公共卫生挑战由于核工业的迅速发展和广泛应用(26]。尤其是放射保护剂应该是安全、有效、易于管理,因为他们应该给军事人员和急救人员之前进入一个已知的辐射区域(27]。冷战期间,沃尔特里德陆军研究所的研究在美国开发一个强大的、高度辐射防护抗氧化含巯基团体,名叫amifostine(或WR2721)。然而,它的应用程序是有限的,因为它严重的副作用,半衰期短,nonoral自然,和其他缺点(28,29日]。寻找一个辐射防护剂长半衰期,口服,没有明显的副作用对人体一直[放射医学领域的一个重要的问题30.,31日]。

我们以前使用的结构amifostine设计和合成小分子化合物含有巯基,hl - 003,我们有100%的自主知识产权。在最近的研究中,我们最初评价hl - 003的抗氧化能力无细胞系统体外。我们发现强大的自由基清除活性hl - 003浓度依赖性。安全性的急性毒性试验表明,hl - 003 ( 毫克/公斤)比amifostine ( 毫克/公斤),联合化疗在28天的长期毒性试验口服hl - 003 28天是1000毫克/公斤,表明这种化合物是一个高度安全的抗氧化剂。

通过评估的影响不同的hl - 003剂量辐照小鼠的30天的存活率,我们观察到口腔hl - 003政府改善辐照小鼠的存活率,而口腔amifostine没有提供一个有效的辐射防护。此外,我们发现正确的时间口服hl - 003年政府4 h前8 Gy的辐照剂量。hl - 003仍然显示了一定的辐射保护作用,虽然效果的辐照剂量下10 Gy低于8 Gy。因此,hl - 003是一种小分子放射保护剂和良好的安全性,有效性高,口服。

我们进一步分析了PK hl - 003的特征在活的有机体内。血浆半衰期为hl - 003进行静脉注射( 分钟)和口头( 比amifostine (h)长 分钟)。其口服生物利用度高达42.29%。有趣的是,hl - 003可以交叉BBB和潜在的辐射防护对大脑辐射损伤的影响。这些结果表明,hl - 003是一个辐射防护剂,具有良好安全性、功效高、口服、长半衰期。具体地说,在我们的临床前研究,hl - 003比amifostine更高的辐射防护功效。

进一步分析hl - 003的放射防护性能在我们的研究中,其防止放射性肠损伤的评估机制。小肠很容易受到辐射,和放疗患者往往受到严重的肠道反应,如恶心,呕吐,腹泻,严重降低了患者的生活质量(32]。不幸的是,没有特定的放射性肠损伤药物在临床使用33]。因此,有效的发展放射保护剂是一个至关重要的目标。染色的肠道组织样本和他透露,hl - 003显著提高辐照小鼠肠道形态学变化,表明这是有效对抗辐射诱导肠道损伤。

哺乳动物的肠道上皮是最快的自我更新的组织,取决于由肠上皮干细胞自我更新位于隐窝与环境保持动态平衡和再生后迅速破坏34,35]。isc表达Lgr5就更新自己,这是一种肠道干细胞标记。的Lg5⁺isc是一个已知的肠道辐射损伤后再生的关键因素(36,37]。此外,Paneth细胞,位于底部的隐窝细胞,维持体内平衡的肠道环境分泌溶酶体和其他抗菌蛋白(38]。有趣的是,有一个积极的相关性Paneth细胞的数量和Lgr5就的数量⁺干细胞(39]。小肠上皮细胞的增生的细胞可以确定由于扩散标记蛋白的表达Ki67 [40]。我们发现hl - 003显著预防irradiation-induced Lgr5就下降⁺isc, Ki67⁺tac,溶菌酶⁺Paneth细胞,它促进了再生,肠道上皮细胞的分化、增殖和维持体内平衡的肠道上皮细胞。

在这项研究中,TUNEL染色法分析表明,hl - 003的细胞凋亡显著降低辐照小鼠的小肠。免疫荧光分析探讨通路与细胞凋亡有关。众所周知,辐射可以通过活性氧产量直接引起DNA损伤,介导apoptosis-related通路的激活可导致组织和器官功能的损失(41]。磷酸化组蛋白H2AX是DNA双链断裂的一个重要标志42),可以促进p53的磷酸化,proapoptotic因素(43]。具体来说,激活p53可以调节DNA损伤修复和细胞周期检查点。此外,它可以促进线粒体细胞色素c的释放,激活半胱天冬酶级联,和诱导细胞凋亡44]。hl - 003治疗显著降低的水平磷酸化蛋白H2AX,磷酸化p53,和激活caspase-8 caspase-9在照射后小鼠的小肠,表明hl - 003显著降低辐射诱导的DNA损伤,抑制激活p53,封锁了半胱天冬酶级联反应,和小肠免受辐射伤害。

5。结论

在这项研究中,我们建立在早期研究小分子抗氧化剂代理hl - 003通过全面评价化合物的安全性、药物动力学和功效。我们证明了hl - 003是一个理想的辐射防护剂与一个有前途的安全性、功效高、口服、长半衰期。我们进一步研究了辐射防护机制hl - 003对辐射诱导肠道损伤。我们发现hl - 003提供辐射防护通过促进增殖、分化、和肠上皮的再生,保护DNA免受辐射损伤,抑制apoptosis-related通路的激活。因此,hl - 003是一个潜在的小分子放射保护剂。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者证实不存在利益冲突。

作者的贡献

红旗歌谣田的构思和设计实验。Ya-Hong刘和党委苗进行了实验。Ya-Hong刘分析和解释结果和准备手稿。育英郭也导致了手稿准备和数据分析。Yahong刘和党委苗族co-first作者的研究论文。

确认

这项工作得到了天津的重大科技项目创造新药(17 zxxysy00090)和天津重点研发项目的技术支持项目(19 yfzcsy00350)。

补充材料

有五个表中补充材料:DPPH的平均百分比的数据回收hl - 003在不同浓度所示表S1;辐射防护效率的数据hl - 003和amifostine口头管理8 Gy辐照后表S2所示;辐射防护作用hl - 003的数据在不同的政府8 Gy辐照后时间点所示表S3;辐射防护作用hl - 003的数据在不同的管理时间点10 Gy辐照后所示表S4;和hl - 003 ICR小鼠的PK参数表S5所示。(补充材料)