Rotundifuran Cyr61是一个潜在的目标,自然Labdane-Type二萜蔓荆l,to Trigger Apoptosis of Cervical Cancer Cells

文摘

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤,严重威胁着人类健康。本研究探讨了anticervical癌症效果和潜在机制Rotundifuran (RTF),自然产品隔绝蔓荆l在这项研究中,我们发现RTF可以抑制宫颈癌细胞株的增殖,包括海拉和SiHa细胞(IC₅₀不到10μ米),通过诱导细胞凋亡在体外和RTF的抗肿瘤效果,进一步证实了在海拉cell-inoculated异种移植模型。此外,我们的研究结果证明,RTF的抗肿瘤作用可能与活性氧(ROS)——通过MAPK mitochondrial-dependent诱导细胞凋亡和PI3K / Akt信号通路。利用蛋白质组学分析和药物亲和反应目标稳定——(飞镖)结合质谱(DARTS-MS) Cyr61被表示为RTF宫颈癌细胞的潜在目标。我们目前的研究将是有益的RTF作为候选人的发展在未来治疗宫颈癌。

1。介绍

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,是全球女性癌症死亡的首要原因,构成严重威胁女性健康。2018年流行病学调查估计,超过550000例宫颈癌每年肯定诊断。不幸的是,超过60%的患者诊断局部晚期和令人失望的存活率。此外,它还报道说,大多数宫颈癌死亡发生在低收入和中等收入国家(1,2]。除了手术和放射治疗,药物治疗仍是常见的治疗策略用于宫颈癌。根据机构在肿瘤临床实践指南(https://nycancer.com/nccn/),宫颈癌的一线药物包括顺铂、紫杉醇、topotecan。然而,这些提到的药物会带来很多严重的毒性或副作用3,4]。尽管一些新药如生化药剂近年来一直尝试,仍然很难治疗一些先进或复发性宫颈癌5,6]。因此,寻找更新奇和替代治疗宫颈癌是可靠的药物毒性较低的重要性和必要的。

天然生物活性分子来自植物或草药扮演主导的角色在发现铅化合物对各种疾病新药的开发。由于多学科药物发现策略,越来越多的生物活性分子被发现从天然植物7- - - - - -9]。的水果蔓荆l,also called Viticis Fructus in the Chinese pharmacopoeia, is a commonly used herbal medicine in Chinese folk medicine for treating headache, swelling and aching of gums, malignant tumors, etc. [10,11]。Rotundifuran (RTF)是一个活跃的小分子从水果中提取的诉trifolia,它具有对人类骨髓白血病细胞有前途的抗癌潜力,通过诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞(12,13]。基于系统性回顾以前的文献,我们发现单体/从植物中提取的理想资源筛选有用的代理治疗宫颈癌的14]。在我们先前的调查,报道一些自然代理与重要的抗肿瘤活动对宫颈癌(15- - - - - -17]。作为我们的持续研究的一部分,我们进一步发现Rotundifuran (RTF)对宫颈癌细胞潜在的抗癌作用初步筛选实验在体外。因此,在这项研究中,我们对此已进行了隔离和确定了RTF的水果诉trifolia并进一步系统研究RTF的抗肿瘤作用及其分子机制对宫颈癌,这有助于提供科学依据这种化合物作为一种新型药物的开发宫颈癌的临床治疗。

2。材料和方法

2.1。植物材料

的成果诉trifolia从成都购买吗Hehuachi中药市场(中国成都)2017年8月,被香港教授张(学院制药、上海中医药大学)。凭证标本(S20180826-MJZ #)的成果诉trifolia存入我们的实验室。

2.2。动物和伦理语句

雄性BALB / C裸小鼠购自上海实验动物中心(中国上海)和特定的无菌条件下长大。动物实验都是严格按照国际伦理准则和美国国立卫生研究院的指导的护理和使用实验动物,是动物实验伦理委员会批准上海中医药大学(SHUTCM)。

2.3。细胞培养

海拉和SiHa细胞,从美国获得类型文化集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国),培养在杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)补充10%胎牛血清的边后卫和抗生素(青霉素100 U /毫升和100年μg / mL链霉素)。本文中使用的所有的细胞系培养在湿润孵化器(美国热费希尔)含5%股份有限公司₂/ 95%空气在37°C。

2.4。化学药品和试剂

DMEM培养基和抗生素(青霉素和链霉素)从HyClone购买有限公司(中国上海);PBS和CCK-8包从Meilun获得生物技术(中国大连);4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI),特里同x - 100, BCA蛋白质化验试剂、PVDF膜,和JC-1工具包获得Beyotime(海门,中国);膜联蛋白V-FITC /π工具包是购自BD生物科学(美国圣地亚哥,CA);的边后卫从Tianhang购买生物科技(杭州);完整的蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂和链霉蛋白酶从罗氏有限公司购买(中国上海);荡妇,主要抗体Bcl-xL Apaf-1, PARP裂解,裂解caspase-3, caspase-8裂解,裂解caspase-9, Akt,磷酸化- p - Akt, PI3K, p-PI3K,物,p-JUK, ERK, p-ERK, p38, p-p38, CCAR1, Cyr61,β肌动蛋白、细胞色素c和goat-anti-rabbit /鼠辣根过氧化物酶-(合)共轭二次抗体从细胞信号传导科技有限公司购买(丹弗斯、马、美国);主要抗体GAPDH是购自Servicebio有限公司(武汉);从NanoTemper RED-NHS蛋白质标记工具购买技术(德国慕尼黑);C-Fc Cyr61蛋白(哺乳动物)的收购Novoprotein有限公司(中国,北京);和十二烷基硫酸钠(SDS)和加载缓冲区从Sangon获得生物技术(上海,中国)。

2.5。RTF的准备

干和粉的果实诉trifolia(35公斤)与95%含水乙醇回流提取三次(每次提取周期持续1.5 h)。提取被过滤,然后得到上清液集中在50°C下减压真空旋转蒸发器。然后,残渣是悬浮在水和提取层承受一个层分数(ACE)。ACE分数受到重复在硅胶柱层析法(100 - 200目)柱层析法和筛选了石油ether-EtOAc (10: 1 - 3: 1)。结合类似的分数TLC分析的基础上提供3小分支(A、B和C)。然后,小分支B受到nm - 200反向聚合物凝胶(纳米生物技术、苏州、中国)柱层析洗脱以85%甲醇和提供3分数(A₁B₁C₁基于薄层色谱分析)。此后,B₁分数由LC6000准备高效液相色谱分离(水公司,米尔福德,妈,美国)的流动相乙腈:水(85:15)和提供的单体RTF (0.41 g)。然后,分离化合物的纯度由薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法测定和化学结构通过HR-ESI-MS被发现¹h - nmr、¹³理化性质和较文献[9,10]。此外,水果的RTF被隔离诉trifolia纯度超过98%(图S1- - - - - -S5)。

2.6。测定细胞生存能力

CCK-8分析是用来确定海拉细胞的异常和SiHa。简单地说,细胞的密度 细胞/ 200μL镀,一夜之间在96 -孔板培养坚持。治疗后RTF和不同浓度(0、4、8、12和16μ24 h或48 h M),这些细胞被孵化与CCK-8工具包来确定细胞增殖抑制(%)( )。光密度值(OD) 450纳米波长的检测到一个标(Tecan火花、Mannedorf、瑞士)进行进一步的集成电路₅₀分析。抑制率是按照下列公式计算: 。

2.7。核与DAPI染色

DAPI染色试验进行确定proapoptotic RTF对宫颈癌细胞系的影响海拉和SiHa。简单地说,当细胞受到RTF 24 h和随后与DAPI染色,细胞的核形态的变化进行了分析和荧光显微镜拍摄的照片(奥林巴斯,th4 - 200,东京,日本)。

2.8。流式细胞分析仪分析

流式细胞分析仪分析进一步用于检测宫颈癌细胞凋亡。简单,细胞暴露在RTF 24 h和随后沾FITC共轭膜联蛋白V /π,和荧光信号进行了分析流式细胞分析仪(B75442,贝克曼,帕萨迪纳市、钙、美国)。早期凋亡细胞的比例计算膜联蛋白V-positivity PI-negativity,而晚期凋亡细胞的比例计算膜联蛋白V-positivity PI-positivity。

此外,流式细胞术也执行分析宫颈癌细胞的细胞周期阻滞引起的RTF治疗24小时,随后沾propidium碘(π)。

2.9。测定线粒体膜电位

线粒体膜电位(MMP的 )被JC-1染色法测量。简单,细胞暴露在RTF 24 h和随后沾JC-1商业JC-1工具包的指令后,和JC-1单体和聚合物的荧光信号分析和荧光显微镜拍摄的照片(奥林巴斯,th4 - 200,东京,日本)。

2.10。免疫荧光细胞色素c的Colocalization (Cyt c)释放

海拉细胞镀在20毫米玻璃盘子和RTF处理24小时孵化了MitoTracker红色CMXRos (50 nm) 20分钟。与PBS洗涤后,这些细胞被孵化Cyt c抗体(1:100)在一夜之间,紧随其后的是孵化使二次抗体(1:1000)。DAPI染色10分钟后,荧光图像被使用通用电气DeltaVision OMX SR(美国通用电气)。细胞没有RTF治疗被用作控制。

2.11。ROS的确定

DCFH-DA荧光探针用于确定宫颈癌细胞的细胞内ROS水平。简单,细胞暴露在RTF 24 h和随后沾DCFH-DA指令后的荧光探针的商业工具,然后,分析了荧光和荧光显微镜拍照(奥林巴斯,th4 - 200,东京,日本)。

2.12。在裸鼠异种移植模型

此外,我们还确定的抗肿瘤效应对宫颈癌RTF在活的有机体内。总之,动物有4组设计在我们的研究中,包括控制,积极的(独联体铂金,3毫克/公斤/天),和RTF团体(10毫克/公斤/天,40毫克/公斤/天)( )。裸小鼠皮下注射海拉细胞( 在右翼/鼠标)。当肿瘤增长近似2 - 3毫米直径,老鼠接受积极的代理和RTF(腹腔内注射,i.p)以及同等体积的溶剂控制(0.5% DMSO, i.p)。DMSO溶液或药物管理12天。肿瘤大小和体重监控每两天。肿瘤体积取决于使用游标卡尺按照下列公式计算: (15]。在研究结束时,老鼠被牺牲和肿瘤对TUNEL检测来确定apoptosis-positive细胞分离。

2.13。西方墨点法

细胞暴露在RTF 24 h,然后细胞溶解使用NP-40裂解缓冲包含磷酸酶和完整的蛋白酶抑制剂。蛋白质浓度测定由BCA蛋白质化验试剂,和总蛋白质样本退化煮10分钟。然后,等量的蛋白质(35μg)相隔SDS-polyacrylamide凝胶电泳(SDS /页);然后,目标蛋白质乐队涂抹在PVDF膜和探索各种主要抗体,其次是孵化与二次抗体。最后,化学发光法和ECL工具包用于可视化的目标蛋白质的乐队。加载规范化对蛋白质,抗体针对GAPDH或β肌动蛋白作为内部参考,和表达的蛋白表达水平相对价值内部参考。

2.14。药物亲和反应目标稳定(飞镖)分析

细胞暴露在RTF (100μ米)和0.5% DMSO对3 h,然后细胞溶解使用NP-40裂解缓冲包含磷酸酶和完整的蛋白酶抑制剂。蛋白质浓度测定由BCA蛋白检测试剂。然后,链霉蛋白酶添加的比例1:1:500年,300年和1:1000(链霉蛋白酶/总蛋白),然后,混合物在室温下孵化了30分钟。随后,使用免疫印迹分析反应产物进行了分析。

2.15。细胞热转移试验(CETSA)分析

细胞暴露在RTF (100μ米)和0.5% DMSO对3 h,然后细胞溶解使用NP-40裂解缓冲包含磷酸酶和完整的蛋白酶抑制剂。蛋白质浓度测定由BCA蛋白检测试剂。然后,细胞可溶性蛋白随后被分成7整除和转移到PCR盘子,紧随其后的是加热3分钟42°C, 47°C, 52°C, 57°C, 62°C, 67°C PCR仪器(瑞士巴塞尔LightCycler 96、罗氏公司)。随后,使用免疫印迹分析反应产物进行了分析。

2.16。微尺度热迁移分析

微尺度热迁移(MST)进行了分析使用NanoTemper庞然大物NT.115 (NanoTemper技术,德国慕尼黑)。Cyr61蛋白质(哺乳动物,C-Fc)溶解在蒸馏水浓度为20μm .随后,溶剂被改变到缓冲溶液(50毫米玫瑰(pH值7.5),CaCl 10毫米₂氯化钠,50毫米,5毫米德勤)和Cyr61的浓度被稀释为5μm .然后,Cyr61与等容荧光染料混合(25μ米),在室温下在黑暗孵化了30分钟。此后,混合解决方案分为12等于整除获得标记蛋白(100μL(每个整除)。蛋白质的解决方案是由一个MST加载到标准的毛细血管和扫描仪器,随后,选择最大荧光吸收的蛋白质样品和混合蛋白质样本的标签。然后,标记蛋白质样本与串行混合稀释RTF样本,和混合装入标准毛细血管和扫描的MST乐器。最后,价值决定使用NanoTemper分析2.3软件(NanoTemper技术,德国慕尼黑)。

2.17。分子对接

分子对接软件都使用了薛定谔(LLC),纽约,纽约,美国)。简而言之,RTF的分子结构是由“Ligprep 3.6”模块,并从RCSB蛋白质结构是下载PBD (http://www.rcsb.org/)。随后,进行了分子对接使用薛定谔的下滑6.9模块软件。

2.18。统计分析

不同群体之间的显著差异与学生的决定 - - - - - -测试。给出的结果 至少有三个独立的实验, 被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。RTF抑制宫颈癌细胞的增殖通过诱导细胞凋亡

准备充足的RTF单体后,我们进一步评估这种化合物的细胞毒性影响宫颈癌细胞系的海拉和SiHa细胞使用CCK-8化验。结果如图1(一)代表RTF表现出显著的抗增殖活动对海拉和SiHa细胞,以及集成电路₅₀值都小于10μ在24 -(8.67和7.29μ米)和48小时(6.15和5.49μ米)的治疗方法。

DAPI DNA-specific荧光染料,通常用于观察细胞的核形态。代表图1 (b),在正常癌症细胞系海拉和SiHa细胞核是圆的和完整的微弱的荧光,而RTF治疗可以诱导宫颈癌细胞凋亡特征特性,如核凝结,增加亮度,和细胞数量减少。流式细胞术分析进一步表明,RTF诱导细胞周期阻滞于G2 / M期(图1 (c))。有趣的是,以前的文献已经证实,G2 / M周期阻滞可以诱导细胞凋亡18]。进一步确认是否RTF可以诱导细胞凋亡,FITC-conjugated膜联蛋白V / PI染色也进行了流式细胞术分析,这是一个全面认可为细胞凋亡检测,结果还暗示RTF可以诱导细胞凋亡在海拉和SiHa细胞(图1 (d))。

3.2。RTF增加ROS水平和减少MMP在宫颈癌细胞

ROS是mitochondrial-dependent细胞凋亡的关键调节器17]。如数据所示2(一个)和2 (c)RTF治疗可以显著提高海拉和SiHa细胞的细胞内ROS水平来衡量一个DCFH-DA荧光探针荧光显微镜和流式细胞术。此外,从我们现在的结果在图表示2 (b),类似的积极控制H₂O₂(20μRTF可以大大降低MMP的M), ( )海拉和SiHa细胞。上面提到的所有这些结果表明RTF可以诱导细胞凋亡的宫颈癌细胞系通过调节线粒体功能。

3.3。RTF体内抑制肿瘤的生长

上述结果表明,RTF所对宫颈癌细胞抗肿瘤效应。确认RTF的抗肿瘤效应在活的有机体内在裸鼠异种移植模型是随后进行。如数据所示3(一个)和3 (c),类似于阳性对照组(独联体铂金,3毫克/公斤/天),RTF(40毫克/公斤)对希拉异种移植肿瘤有明显的抗肿瘤作用在活的有机体内与对照组相比。然而,没有毒性的RTF治疗小鼠(图3 (b)和表S1)。此外,进一步TUNEL结果(图3 (d))也建议RTF可以明显诱导细胞凋亡在肿瘤组织。

3.4。RTF诱导Mitochondrial-Dependent在宫颈癌细胞凋亡

mitochondrial-dependent凋亡是细胞死亡的最重要的途径之一,在半胱天冬酶和蛋白质和bcl - 2家族这个凋亡通路的主要监管机构(19,20.]。我们目前研究的结果(图4(一)(8和16)透露,RTF治疗μ米)可以统计移植裂解半胱天冬酶家族蛋白质(caspase-3裂解,裂解caspase-8,和裂解caspase-9)和proapoptotic bcl - 2家族蛋白质(伯灵顿和Bim),而统计的凋亡bcl - 2家族蛋白表达下调(bcl - 2和Bcl-xL)相比,控制细胞。此外,Apaf-1和PARP也两个重要蛋白质对细胞凋亡的诱导,结果表明,RTF治疗(8和16μ米)可能会增加这两个海拉细胞中的蛋白质,而控制细胞。增殖作用的蛋白激酶(MAPK)和PI3K / Akt信号是两个重要的上游信号通路对细胞凋亡。我们目前的结果如图4 (b)和4 (c)表明RTF治疗(8和16μM)统计表达下调PI3K的磷酸化,Akt,和ERK在海拉细胞,移植物的磷酸化。此外,激活caspase-3取决于细胞色素c的释放,所以接下来,激光共焦显微镜被用来进行复核过程中细胞色素c的释放mitochondrial-dependent细胞凋亡。MitoTracker是用于定位在这个过程中细胞色素c的存在。如图4 (d)RTF治疗可以引起caspase-3的激活以及细胞色素c的释放。

3.5。Cyr61是一个潜在的目标RTF引发宫颈癌细胞凋亡

RTF可能引发细胞凋亡诱导mitochondrial-dependent在宫颈癌细胞凋亡;然而,特定的潜在药物的目标RTF仍不清楚。因此,标记定量蛋白质组学分析和药物亲和反应目标stability-combined质谱(DARTS-MS)进行探索潜在的药物靶点。有趣的是,相关的结果(数据没有显示)表明CCAR1和Cyr61是两个潜在药物靶点的RTF的相对表达0.525和2.963,而控制。此外,我们进一步筛选这些癌症基因组的两种蛋白质(TCGA)数据库,发现TCGA分析结果(图5(一个))符合我们DARTS-MS和蛋白质组学的结果。此外,我们决定在海拉细胞这两个蛋白的表达;结果表明,RTF治疗可以统计上显著上调Cyr61的表情,虽然没有明显的差异CCAR1中控制和RTF治疗组在海拉细胞(图5 (b))。

进一步确认是否Cyr61是固体药物的目标RTF,飞镖和CETSA分析。如数据所示6(一)和6 (b),结果表明,治疗后RTF, Cyr61显示更加稳定财产链霉蛋白酶和热治疗,而控制。此外,我们决定RTF的亲和力和Cyr61利用MST分析,结果如图6 (c)表明,离解常数( )绑定关联 ,这表明Cyr61 RTF有很强的亲和力。此外,我们还分析了可能的结合位点在Cyr61 RTF,如图7(d);RTF显示交互2氨基酸残基的Cyr61(藏474和ASP 458)。

4所示。讨论

我们所知,这是第一个系统的报告关于RTF的抗肿瘤效应对人类宫颈癌细胞系在活的有机体内和在体外及其可能的分子机制和药物的目标。在这项研究中,我们发现,RTF显示显著的抗肿瘤作用对宫颈癌细胞系通过诱导mitochondrial-mediated内在细胞凋亡。使用生物物理蛋白质组学方法,我们发现,Cyr61 RTF引发细胞凋亡的潜在目标。

如今,人们普遍认识到,不受控制的细胞增殖和细胞凋亡不足,导致受损细胞的积累,是各种形式的癌症的主要原因之一(20.]。细胞凋亡是一种已知的生理细胞程序性细胞死亡方式自杀以及癌症治疗的理想策略(21,22]。目前,增加自然单体具有前景的抗肿瘤特性被发现从植物或草药基于现代药物发现技术,如bioactivity-guided提取、高通量筛选、高内容筛选和计算机辅助筛选[23- - - - - -25]。在我们目前的研究中,我们报告RTF的抗肿瘤效应,自然labdane-type二萜诉trifolia,而宫颈癌。我们已经评估了RTF两个已知的抗肿瘤活性宫颈癌细胞系海拉和SiHa发现RTF显示良好的抗增殖性能两个细胞系IC₅₀不到10μm .有趣的是,我们进一步的实验还发现,RTF诱导抗肿瘤效应对宫颈癌细胞诱导细胞凋亡。因此,我们进一步探讨了可能引起的凋亡通路RTF。重要的是,我们发现RTF治疗也可以诱导MMP的减少和增加活性氧积累,证明RTF可能触发mitochondrial-dependent细胞凋亡。接下来,我们确定一些关键蛋白表达有关mitochondrial-dependent细胞凋亡通路,包括半胱天冬酶家族和bcl - 2家族。正如我们所料,RTF治疗可以上调proapoptotic蛋白质包括caspase-3分开,caspase-8裂解,裂解caspase-9,伯灵顿,荡妇,Apaf-1,和裂解PARP,表达下调凋亡蛋白(bcl - 2和Bcl-xL)。此外,标记定量蛋白质组学分析进行了探讨RTF的深度及抗肿瘤作用的可能机制,和相关的基于微分KEGG分析蛋白质显示PI3K / Akt和MAPK信号通路可能与RTF(数据未显示)的抗肿瘤作用。以前的科学报告表明,PI3K / Akt和MAPK信号通路也密切参与ROS-induced mitochondrial-dependent凋亡[19,26,27]。因此,我们研究了两个信号通路相关的蛋白质,发现RTF治疗可能下调PI3K的磷酸化,Akt,和兵,而移植的磷酸化在海拉细胞物。总的来说,我们的研究结果表明,RTF的抗肿瘤作用可能与ROS-induced mitochondrial-dependent凋亡通过MAPK和PI3K / Akt信号通路的调控。

然而,RTF的直接目标分子仍不清楚。分子目标识别是一个重要的和努力工作为进一步优化分子结构和druggability铅化合物。因此,我们将打开的潜在分子目标通过一些新技术如DARTS-MS RTF,飞镖,CETSA, MST,分子对接。基于蛋白质组学分析,DARTS-MS,癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析,Cyr61是RTF的可能的分子目标的筛选。此外,飞镖和CETSA分析,两个最近出现有效的策略监控药物目标参与细胞或组织,进行确认是否Cyr61是RTF的固体药物的目标。有趣的是,我们的研究结果表明,Cyr61显示一个更稳定的财产链霉蛋白酶和热处理下RTF的组合。此外,结果表明MST Cyr61有很强的亲和力和RTF的价值 ,和分子对接表明RTF显示交互2氨基酸残基的Cyr61(藏474和ASP 458)。所有这些结果表明Cyr61是一个可能的目标RTF引发宫颈癌细胞的凋亡。

Cyr61(属于CCN的家庭,也称为CCN1), matricellular分泌蛋白与通用的功能,可以调节各种重要的细胞活动,有时反对功能(28,29日]。越来越多的证据表明,Cyr61不仅可以促进细胞的增殖和生存也引发细胞凋亡,细胞周期阻滞和死亡的细胞(30.- - - - - -32]。此外,Cyr61密切相关,各种癌症的发展,包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、宫颈癌(28,33- - - - - -35]。据报道,upregulation Cyr61可能加剧的开发和转移乳腺癌[33];然而,有趣的是,它也指出,Cyr61表达式在metrocarcinoma较低32],宫颈癌[35,36),和肺癌34,37]。因此,Cyr61可能是一个抗肿瘤监管机构对子宫内膜癌,宫颈癌、肺癌。重要的是,活性氧积累起着至关重要的作用在Cyr61 proapoptosis诱导,ROS能进一步规范MAPK和PI3K / Akt信号通路,其次是mitochondrial-dependent细胞凋亡和DNA损伤反应(28,38,39]。相关的潜在的抗肿瘤分子机制途径RTF总结了图的影响7。

5。结论

总之,我们的研究表明,Rotundifuran (RTF)具有显著的抑制对宫颈癌势,Cyr61是可能的分子目标自然单体诱导宫颈癌细胞凋亡。我们目前发展的研究将是有益的RTF作为候选药物治疗宫颈癌的未来,也为未来提供一个可用的参考其他天然活性化合物的分子目标识别。

数据可用性

使用的数据来支持本文结果可从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

香港,新菜肴,魏彭的构思和设计研究和写的手稿;帮贡、沈里乡和Hai-Yue局域网完成实验;金美帮助修改手稿;裴帮助完成实验;陈和张的李俊,莉莉收集和分析数据。所有作者的贡献和批准了手稿。

确认

这项工作是支持的资金从中国的国家自然科学基金(81773941和81773941号);国家药物创新的关键主题,中国(2019 zx09201005 - 007);国家重点研发项目中医现代化的关键研究项目(2019 yfc1711602);项目的教授特别任命(东方学者)在上海高等院校、中国;上海的“晨光计划”上海教育委员会,中国(18 cg46);和“Yangfan计划”(19号yf1449400)上海市科学技术委员会、中国。

补充材料

补充1。RTF的数据如图S1-S5识别。

补充2。表S1显示RTF小鼠的急性毒性。

引用

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