XIST抑制变弱草酸钙Nephrocalcinosis-Induced肾脏炎症和氧化损伤通过mir - 223 / NLRP3通路

文摘

lncRNA X不活跃的角色具体记录(XIST)在许多疾病,包括癌症和炎症性疾病,曾被阐明。然而,肾结石仍然知之甚少。在这项研究中,我们揭示了潜在XIST对肾结石所施加的影响通过炎症反应和氧化应激机制。我们建立了一个glyoxylate-induced草酸钙(草酸钙)石小鼠模型和暴露HK-2细胞一水草酸钙(COM)。XIST之间的交互,mir - 223 - 3 - p,和nod样受体蛋白3 (NLRP3)和各自的效果是由rna和蛋白表达,荧光素酶活性,免疫组织化学(包含IHC)化验。细胞坏死,活性氧(ROS)生成、压制XIST和炎症反应被发现后,激活和抑制mir - 223 - 3 - p,推倒XIST和激活mir - 223 - 3 - p在体外和体内。NLRP3, XIST caspase-1, il - 1β水平明显增加小鼠肾脏glyoxylate-induced草酸钙石样本模型。XIST击倒显著抑制炎症损伤和ROS生产和进一步的减毒草酸晶体沉积。microrna - 223 - 3 - p模仿也产生同样的效果。此外,我们验证了XIST之间的交互,microrna - 223 - 3 - p和NLRP3,和随后的效果。我们的研究结果表明,lncRNA XIST参与肾结石的形成和发展与mir - 223 - 3 - p和交互NLRP3 / Caspase-1 / il - 1β通路调节炎症反应和活性氧的生产。

1。介绍

肾结石病的发病率在中国成年人中约10.63%在最近几十年,这患病率继续增加;后的第一个5年的复发率第一肾结石也不断增加1,2]。草酸钙(草酸钙)石头,占所有肾结石病例的80%,导致肾脏炎症反应,导致肾小管细胞坏死和额外的草酸钙晶体沉积(3,4]。NLRP3蛋白是首次发现在自身免疫性疾病和招募衔接分子通过PYD-PYD ASC交互,然后招募procaspase-1形成inflammasome复杂(5,6]。激活caspase-1参与细胞因子prointerleukin-1的处理β进入成熟和活跃分泌形式(7]。越来越多的证据表明,NLRP3 autoinflammatory的发病机理中起着重要作用,自身免疫性和慢性炎症和代谢疾病(8- - - - - -10]。

竞争内源性rna(龙头)可能在RNA-RNA扮演关键角色交互,可以解释的关系长非编码rna (lncRNAs), microrna, mrna (11]。3 - - - - - -未翻译区(utr) lncRNAs和mrna的公共基础网站的microrna能绑定,从而影响下游蛋白的表达(12,13]。的lncRNA XIST是必不可少的在哺乳动物x染色体的失活,导致调节相关的rna结合蛋白(RBPs),染色质修饰和基因沉默14,15]。新出现的证据表明,XIST参与调节炎症、组织损伤和癌症(16- - - - - -18]。此外,沈等人报道,沉默XIST减毒sepsis-induced急性肝损伤和预防炎症反应,ROS生产,并通过抑制细胞凋亡BRD4表达式(19]。然而,XIST调节的机制CaOx-induced肾脏炎症和损伤在很大程度上是未知的。

在这个研究中,我们研究了竞争相互作用XIST / microrna - 223 / NLRP3草酸钙monohydrate-treated HK-2细胞和glyoxylate-induced草酸钙小鼠模型。我们发现XIST海绵mir - 223 - 3 - p提高肾小管上皮细胞炎症反应和损伤通过激活NLRP3 / Caspase-1 / il - 1β途径。

2。材料和方法

2.1。细胞培养和转染

HK-2细胞从美国购买类型文化集合(美国写明ATCC)和维护在罗斯威尔公园纪念研究所1640年媒介(HyClone UT)补充10%胎牛血清(美国σ)37°C在潮湿的5%股份有限公司₂的气氛。与细胞计数细胞生存能力评估工具(Beyotime,中国)。沉默XIST的表达,验证小干扰RNA (siRNA)专门针对XIST (si-XIST GCACAAACTCAATTCTCTA)合成了RiboBio(广州)。过表达或推翻microrna - 223合成microrna的寡核苷酸(mir - 223 - 3 - p模仿:5 - - - - - -3 :UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA, mir - 223 - 3 - p抑制剂:5 - - - - - -3 :UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA)和相应的消极控制从RiboBio购买(广州)。我们转染化学合成的核或通过使用Lipofectamine microrna的寡核苷酸3000(美国表达载体)。

2.2。动物实验

我们的实验按照标准建立的国立卫生研究院的指导实验室动物保健和使用的。然后,八周大C57BL / 6 j雄性老鼠是在特定的无菌条件下的实验动物中心同济医院。每个老鼠每天收到通过腹腔内注射生理盐水或乙醛酸为一个星期。八周大的老鼠在静脉注射治疗组 病毒基因组rAAV-sh-XIST或rAAV向量作为负控制(由Vigene,中国)在100年一个卷μl通过尾静脉。rAAV注入两周后,免疫荧光分析确认鼠标肾脏感染了rAAV(补充图S1)。mirna - 223年干预组,长效microrna - 223拮抗剂通过尾静脉注射在第1和4天。老鼠是牺牲和切割一个星期后,和双边肾脏标本被固定在4%多聚甲醛进行进一步的实验。动物研究是同济医院的伦理委员会批准。

2.3。草酸钙晶体的测量

肾是脱蜡和石蜡部分沾hematoxylin-eosin根据标准实验程序。彩色样本然后偏光显微镜下观察(德国蔡司)。此外,染色肾Pizzolato石蜡切片进行分析的方法来验证的草酸钙晶体沉积量(20.]。最后,草酸钙晶体的数量确定与ImageJ软件(美国国立卫生研究院)。

2.4。管状损伤和坏死检测

肾石蜡切片脱蜡,然后受到周期性acid-Schiff (PAS)染色。肾脏损害得分是根据以下四个方面:管状坏死,上皮细胞凋亡,管腔内的形成,和刷状缘脱落。我们随机选择不重叠的微观领域的视图和管状损伤的比例计算。等级0到5 0%,≤10%,11 - 25%,26 - 45%,46 - 75%,分别和≥76%伤害。细胞坏死的肾部分样品评估通过TdT-mediated dUTP缺口末端标记(TUNEL)。阳性细胞数在10个随机选择的不重叠的微观领域的观点。

2.5。实时定量聚合酶链反应

总RNA收集利用试剂盒试剂(美国英杰公司)根据标准实验程序,和互补DNA合成了通过使用一个一体化的RT SuperMix完美的RT - pcr设备(Vazyme,中国)。实时定量PCR进行SYBR绿色主人混合(Yeasen, 11201 - 11203)来评估RNA表达水平在Bio-Rad CFX96系统,和目标RNA水平GAPDH或U6规范化。列出了所有的引物序列补充表1。

2.6。流式细胞术

在six-well HK-2细胞培养板一起100μg / ml COM(美国Sigma-Aldrich)和处理各种转染试剂2 h。接下来,细胞治疗2,7-dichlorofluorescein二乙酸(美国BD生物科学DCFH-DA) 30分钟37°C。最后,在细胞内ROS生产通过流式细胞仪检测波长485 nm和538 nm。在six-well HK-2细胞培养板一起100μg / ml COM 24 h,然后沾膜联蛋白V-FITC和π凋亡检测设备(美国BD)。整个整个人口的染色细胞的坏死被流式细胞术检测(美国BD)。

2.7。测定超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H₂O₂)水平

LDH和MDA的含量,用于评估细胞膜的破坏和脂质过氧化反应,分别在HK-2培养细胞的上清液测定使用商业LDH和MDA测定试剂盒(Beyotime生物技术,中国)根据制造商的指示。进一步测量HK-2细胞抗氧化酵素活动,SOD和H₂O₂水平评估使用商用试验包(Beyotime生物技术,中国)根据各自的制造商的指示。

2.8。测量ROS生成

对待HK-2细胞培养与DCFH-DA (S0033 Beyotime生物技术,中国)30分钟。在管状上皮细胞细胞内ROS生成(tec)被流式细胞术检测(美国BD生物科学)激发和发射波长的488和525海里,分别。细胞内ROS生成也监控使用荧光显微镜(日本尼康)。ROS生成与ImageJ量化软件的水平。

2.9。线粒体膜电位检测

四甲基罗丹明乙酯(TMRE)(美国Abcam ab113852)是用来确定线粒体膜电位。总之,对待tec孵化了150 nM TMRE在温暖的培养基稀释了15分钟。细胞被洗两次与温暖的PBS,和荧光强度检测使用一个盘子读者在激发/发射波长的520/590 nm。

2.10。免疫印迹分析

蛋白质从HK-2收获细胞里帕缓冲区包含一个完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Servicebio,中国),和蛋白质浓度测定用BCA试剂盒(Beyotime,中国)。样本的蛋白质分离,然后用抗体孵化NLRP3(博士德、中国、BM4490) caspase-1 (Absin、中国、abs119750), il - 1β(中国)Absin和GAPDH (Absin、中国、abs132004)一夜之间在4°C。接下来,这些细胞被孵化与适当的相应的辣根peroxidase-conjugated二级抗体(细胞信号技术,美国)在室温下2 h和可视化与发射极耦合逻辑解决方案(美国微孔)ChemiDoc XRS仪器(美国Bio-Rad)。分析了蛋白质的相对表达水平与ImageJ软件(美国国立卫生研究院)。

2.11。Dual-Luciferase报告基因分析

构建荧光素酶记者向量,3 - - - - - -utr XIST NLRP3,包括野生型假定的mir - 223 - 3 - p结合位点和人为假定的结合位点突变,插入到pGL4.13质粒。然后,HK-2细胞cotransfected质粒和人工mir - 223 - 3 - p模仿和抑制剂。转染后2天,Dual-Luciferase记者分析系统(WI Promega,麦迪逊,美国)是用于检测荧光素酶活性。给出了萤火虫荧光素酶活性的相对表达水平和规范化的Renilla荧光素酶的活动。

2.12。免疫组织化学

肾是脱蜡和石蜡部分根据标准实验程序,处理和样本孵化anti-NLRP3 (Servicebio 1: 400年,中国、GB11300), anti-caspase-1 (Servicebio 1: 1000年,中国、GB11383), anti-IL-1β(Servicebio 1: 600年,中国、GB11113), anti-SOD2(博士德1:200年,中国、BM4813),和anti-NOX2(博士德1:600年,中国、BA2811)抗体在一夜之间在4°C。相对与ImageJ软件相应蛋白的表达进行了分析(美国国立卫生研究院)。

2.13。RNA荧光原位杂交(FISH)

COM注入小鼠不同剂量后,肾脏在石蜡样本收集和固定。部分脱蜡,然后用蛋白酶K在37°C治疗20分钟。变性进行变性解决方案包含不同比例的乙醇在-20°C。部分是孵化与探针在37°C 12 h,然后洗了三次。荧光标记和核染色被用来观察组在RNA表达的差异。

3所示。统计分析

8.4 GraphPad棱镜,占据SE15.1被用来分析数据。实验数据显示为 。我们进行了 - - - - - -测试和单向方差分析(方差分析)来比较不同群体之间的差异。值< 0.05被认为是具有统计学意义。

4所示。结果

4.1。XIST和NLRP3表达显著增加在草酸钙肾钙质沉着症小鼠模型

我们建立了一个glyoxylate-induced草酸钙肾钙质沉着症小鼠模型通过注射小鼠不同剂量的乙醛酸(0毫克/公斤,50毫克/公斤,和100毫克/公斤)为七天。然后,我们执行他染色和皮佐拉朵干这一行下染色,然后观察偏振光学显微镜,草酸钙的数量增加而增加剂量的乙醛酸(图1(a))。此外,PAS染色表明,草酸钙造成的伤害越来越广泛的乙醛酸注射后(图1(b))。TUNEL染色显示显著的细胞死亡乙醛酸注射后(图1(b))。此外,免疫组织化学分析显示NLRP3表达水平高,caspase-1, il - 1β在肾钙质沉着症(图样本1(c))。我们还发现XIST的RNA表达水平,NLRP3 caspase-1, il - 1β非常高的样品glyoxylate-induced草酸钙肾结石(数据吗1(d)和1(e))。

4.2。抑制XIST减毒CaOx-Induced肾体外炎症和氧化损伤

HK-2细胞培养用不同剂量的COM晶体不同的时间来确定最优浓度和预处理时间。我们最终选择了100μg / ml为治疗浓度和8 h为前提时间(数字2(一个)和2 (b))。探索XIST的影响,我们与XIST siRNA转染HK-2细胞,发现,RNA和蛋白质水平的XIST NLRP3, caspase-1, il - 1β明显减少(数据2 (c)- - - - - -2 (f)和补充图S2(a))。然后,XIST撞倒,明显降低了COM-induced LDH水平,H₂O₂浓度和细胞间MDA代体外;相比之下,XIST击倒(图后SOD含量增加2 (g))。PI染色流式细胞术分析表明,坏死的数量减少与si-XIST转染后(图2 (h))。TMRE被用来进一步探索线粒体损伤和显示si-XIST缓解COM-induced线粒体膜电位的损失(图2(我))。此外,活性氧产量大幅减少si-XIST组相比,COM + si-NC集团(数字2 (j)和2 (k))。总之,我们发现抑制XIST会禁止COM-induced炎症反应和氧化应激。

4.3。mir - 223 - 3 - p直接绑定到3 - - - - - -UTR XIST抑制其表达

lncRNAs和microrna是一个核心的交互机制,发挥监管作用。进一步探索XIST影响草酸钙肾钙质沉着症的机制,我们专注于mir - 223 - 3 - p,被确认为一个潜在的绑定目标的XIST通过母星3.0,TargetScan和miRWalk(图3(一个))。我们第一次发现mir - 223 - 3 - p水平小干扰rna转染后,发现其表达增强的相比,si-NC组(图3 (b))。同时,鱼的表达水平进行检测XIST和microrna - 223的肾组织中草酸钙肾钙质沉着症小鼠接受rAAV-sh-XIST(图3 (c)),证明XIST的水平负相关,microrna - 223(图的水平3 (d))。我们建造野生型(WT)和突变(傻瓜)XIST 3 - - - - - -UTR荧光素酶记者向量确定mir - 223 - 3 - p模仿与XIST交互。荧光素酶活性明显抑制WT组,而狗的活动组没有显著改变(图3 (e))。转染的mir - 223 - 3 - p抑制剂增加了WT组的荧光素酶活性,但没有明显变化,在狗群(图3 (f))。此外,XIST的表达降低与HK-2细胞转染mir - 223 - 3 - p模仿和增加在这些转染mir - 223 - 3 - p抑制剂(图3 (g))。这些结果表明,3 - - - - - -UTR XIST直接绑定到mir - 223 - 3 - p和参与生物监管。

4.4。mir - 223 - 3 - p的表达抑制NLRP3通过直接绑定到3 - - - - - -UTR

我们进行了生物信息学分析确定3 - - - - - -UTR NLRP3包含一个结合位点的mir - 223 - 3 - p(图4(一))。我们第一次发现NLRP3的水平是负相关的水平mir - 223 - 3 - p(图4 (b))。为了进一步验证互动,我们构建了荧光素酶记者向量编码3 - - - - - -UTR NLRP3 WT的和狗mir - 223 - 3 - p绑定序列。后cotransfection mir - 223 - 3 - p模仿,WT组显著的荧光素酶活性抑制,而狗组没有显著改变(图4 (c))。mir - 223 - 3 - p抑制剂随后转染两个荧光素酶记者向量,和荧光素酶活动WT组明显升高,而狗组没有显著改变(图4 (d))。这些实验表明,mir - 223 - 3 - p直接绑定到3 - - - - - -UTR NLRP3。探索的功能mir - 223 - 3 - p CaOx-induced肾钙质沉着症和肾损伤,我们转染mir - 223 - 3 - p模仿和抑制剂COM-treated HK-2细胞。存在和免疫印迹显示,mir - 223 - 3 - p激活导致NLRP3的表达减少,caspase-1, il - 1β,mir - 223 - 3 - p抑制造成相反的现象(图4 (e)和4 (f)和补充图S2(b))。这些数据表明,mir - 223 - 3 - p抑制NLRP3表达式通过直接绑定到3 - - - - - -UTR。

4.5。mir - 223 - 3 - p逆转的影响XIST COM-Induced肾小管上皮细胞炎症和氧化损伤

验证XIST的内部函数和microrna - 223体外免疫印迹和存在,揭示NLRP3水平下降,caspase-1, il - 1β在COM-treated HK-2 cotransfected si-XIST和microrna - 223细胞抑制剂与转染的microrna - 223单独抑制剂(数字5(一个)和5 (b)和补充图S2(c))。然后,我们发现了SOD水平与si-XIST转染后,mir - 233抑制剂,或两者兼而有之。SOD的表达明显减少了mir - 223 - 3 - p抑制剂,而si-XIST部分逆转这种效果(图5 (c))。此外,LDH水平,H₂O₂浓度和细胞间MDA生产SOD水平相比显示出相反的结果(数据5 (e)- - - - - -5 (f))。此外,PI染色进行检测COM-induced HK-2坏死(图5 (g)),证明si-XIST显著降低COM-induced HK-2坏死,而mir - 223 - 3 - p抑制剂废除这种治疗效果。此外,si-XIST缓解COM-induced线粒体膜电位的损失,而mir - 223 - 3 - p的组合抑制剂和si-XIST增强COM-induced线粒体膜电位的损失(图5 (h))。此外,增强了ROS破裂mir - 223 - 3 - p抑制剂和减毒mir - 223 - 3 - p抑制剂和结合si-XIST(数字5(我)和5 (j))。总之,这些结果表明,mir - 223 - 3 p的抑制增强了炎症反应和活性氧的生产,而si-XIST减弱这些影响,减少肾小管细胞损伤。

4.6。XIST抑制草酸钙晶体沉积和草酸钙Nephrocalcinosis-Induced减轻炎症和氧化肾损伤通过XIST - mir - 223 - 3 - p - nlrp3龙头、途径

验证的能力之间的交互XIST和mir - 223 - 3 - p减少草酸钙沉积通过抑制肾脏炎症和氧化损伤体内,我们管理rAAV-sh-XIST的影响,antagomir - 223 - 3 - p,草酸钙肾钙质沉着症老鼠。接下来,他和Pizzolato进行染色,细胞极化光学显微镜下观察。结果表明,沉默XIST明显减少草酸钙沉积,而抑制mir - 223 - 3 - p显著增加草酸钙沉积(图6(a))。此外,不是和TUNEL染色表明,肾损伤rAAV-sh-XIST组的更广泛和更广泛的antagomir - 223 - 3 - p组(图6(b))。另一方面,IHC结果表明,促炎的表达水平标记NLRP3 Caspase-1, il - 1β和prooxidant NOX2 rAAV-sh-XIST注射后明显减少,显著增加后antagomir - 223 - 3 - p政府,而SOD2表达式显示相反的变化(数据6(c)和6(d))。此外,没有观察到显著变化在草酸钙肾钙质沉着症小鼠注射rAAV-sh-XIST和antagomir - 223 - 3 - p。这些结果表明,mir - 223 - 3 - p逆转的影响在COM crystal-induced XIST肾小管上皮细胞炎症和氧化应激损伤数据6(一)-6(d))。的差别,因此对这些XIST可以减弱活性氧破灭,保护肾小管细胞免受损伤,进一步减少在主题与草酸钙晶体沉积肾钙质沉着症。

总的来说,这些结果表明,XIST抑制草酸钙crystal-induced减少炎症和氧化肾损伤的相互作用mir - 223 - 3 - p和NLRP3 / Caspase-1 / il - 1β通路(图7)。

5。讨论

肾结石的形成归因于多种因素,包括感染、代谢,和其他疾病(1,3]。肾结石形成的进展包括草酸钙晶体粘附,增长,促进肾小管和骨盆。先前的研究显示,肾小管上皮细胞暴露于生成草酸钙过量的活性氧和炎症反应,从而进一步导致肾损伤和增加草酸钙沉积(21- - - - - -23]。因此,发展的诊断标记和有针对性的治疗,延迟或减弱草酸钙肾钙质沉着症的发展是非常必要的。

越来越多的研究表明,lncRNAs多个转录和转录后的生物过程中扮演不可替代的角色,包括染色质修饰、DNA修复、保护mRNA稳定,microrna寄食于(24- - - - - -26]。XIST是第一个lncRNAs被发现在1990年代和参与许多癌症相关的监管流程和炎症反应(14,27]。XIST,也作为一个分子海绵mir - 133 - a - 3 - p,展示了作为龙头、扭转RohA压迫,促进炎症的恶化结直肠癌(28]。此外,XIST增强脂多糖(LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征通过上调干扰素调节因子的水平2绑定mir - 204 (29日]。因此,我们假设lncRNA XIST是一个关键因素,参与炎性疾病的病理生理过程。在这项研究中,我们第一次公布了龙头、机制XIST调节CaOx-induced炎症和ROS紊乱。

的激活NLRP3 inflammasome导致许多疾病的初始阶段和进展,包括肾结石(30.,31日]。NLRP3击倒充分改善足突细胞自噬和保护从糖尿病nephropathy-induced足细胞损伤(32]。此外,应等人证明NLRP3 mir - 495,互动的增加表达抑制激活NLRP3 inflammasome下调炎性细胞浸润和响应对象和急性肺损伤(33]。此外,NLRP3激活了健壮的ROS生产和炎症反应通过TXNIP科目hyperoxaluria和大鼠肾草酸钙(34]。依照这些发现,我们的实验表明,NLRP3 CaOx-induced激活的肾小管上皮细胞损伤体外和体内模型。

NLRP3被证明单钠尿酸盐晶体沉积被激活的关节,诱导炎症反应,另一项研究发现,NLRP3-deficient老鼠免受crystal-related伤害(35,36]。此外,NLRP3封锁了减轻炎症损伤引起胆固醇晶体在动脉粥样硬化(37,38]。安德斯等人发现NLRP3-deficient白鼠oxalate-rich饮食未能形成草酸钙肾钙质沉着症和他们的肾脏保护从nephrocalcinosis-related纤维化39]。他等人表明,此外,intrarenal草酸钙晶体沉积引起的管状损伤,炎症和肾功能衰竭通过树突状细胞(DC)的分泌炎性细胞因子il - 1β封锁下降管损伤(31日]。总的来说,NLRP3密切相关疾病引起不同类型的晶体,包括草酸钙晶体。

探索之间的内部关系的变化XIST NLRP3,我们集中在电抗器的假设。我们发现mir - 223 - 3 - p可能是一个特定的XIST和NLRP3之间的桥梁,但mir - 223 - 3 - p的角色在草酸钙肾钙质沉着症还没有描述。针对mrna microrna改变基因表达的转录后的调控时期(40]。mir - 223 - 3 - p被认为是炎症和免疫调控的重要过程,从骨髓分化到中性粒细胞功能,激活巨噬细胞极化,(41- - - - - -43]。Neudecker等人表示,mir - 223 - 3 - p的表达增加与炎症性肠病(IBD)科目,它限制了炎症反应,抑制NLRP3 inflammasome在肠道非特异性免疫反应44]。与之前的研究一致,我们发现mir - 223 - 3 - p绑定到3 - - - - - -utr XIST和NLRP3和相互合作。此外,mir - 223 - 3 - p的表达升高显著抑制NLRP3的mRNA翻译产品。

综上所述,这些结果表明,XIST增强NLRP3翻译的竞争性结合mir - 223 - 3 - p从而释放NLRP3信使rna;这些现象加剧了炎症反应和ROS生产,导致肾小管上皮细胞损伤。这个新机械的见解lncRNAs由我们提供的分子调控功能的研究将进一步勘探的关键小说对肾结石的诊断和治疗策略。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

伦理批准

动物实验都通过同济医院(TJ201800631),按照欧盟指令执行保护动物用于科学目的,和报告按照到达的指导方针。

信息披露

投资者没有参与研究设计、数据收集、数据分析、解释,或写报告的。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

作者的贡献

本研究进行了与所有合作作者。华徐、刘Haoran Chaozhao梁构思大纲和设计研究。彭Lv起草。彭Lv,你们道,杨小琪,陈段,向阳姚明,李Bo,库恩唐执行实验。彭lv和刘Haoran导致了数据和表。华许,陈(音译,汪涛Yaoliang邓,剑Liu Jinchun兴,Zhangqun你们修改最后的手稿连同所有作者。彭Lv和刘Haoran同样这项工作和分享第一作者。

确认

我们给我们的诚挚的感谢所有其他研究人员与这项研究帮助我们。这项研究得到了国家自然科学基金(8167031233)和安徽省科技(KJ2020A0167)。

补充材料

补充表1:引物序列用于实时qPCR列表分析。补充图S1: GFP和XIST表达的免疫荧光分析小鼠肾脏。(一)小鼠注射rAAV向量或rAAV-sh-XIST (rAAV-2/9-eGFP)通过尾静脉。在八周接受,他们的肾脏被临时冻结和整体安装成像(放大,×40)。(B)的XIST qPCR分析小鼠肾脏。GAPDH是用作内部控制。数据的显示 。一个代表性的情节 样本所示。 ; ,由学生的 - - - - - -测试。补充图S2: NLRP3相对量化的蛋白表达,Caspase-1, il - 1β通过免疫印迹。GAPDH是用作内部控制。数据的显示 。 ; ,由单向方差分析(模拟)。(补充材料)

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