制备、生物安全、和细胞毒性研究的一个新Tumor-Microenvironment-Responsive可生物降解的介孔二氧化硅综合基于多通道和协同治疗

文摘

三阴乳腺癌(TNBC)患者经常会复发,和临床放疗和化疗提供的改进是适度的。尽管靶向治疗和免疫治疗近年来一直是一个重要的研究课题,科学发展尚未翻译为TNBC患者显著改善。针对目前临床治疗的这些缺点,我们设计了一个硅综合(SNS)与Nano-Ag MnO的核心和复杂₂和阿霉素(阿霉素)周围的介孔二氧化硅壳。这个系统被涂上anti-PD-L1目标PD-L1受体高表达在肿瘤细胞的表面。MnO₂本身已被证明作为chemodynamic疗法(CDT)和阿霉素的细胞毒性。因此,完整的SNS系统提出了一种多通道,潜在的协同治疗TNBC的策略。鉴于潜在的临床翻译兴趣SNS, SNS的生物安全性和抗肿瘤活性评估的一系列研究,包括物理化学特性,粒子稳定、血液相容性和细胞毒性。我们发现的粒子大小和电动电势SNS 94.6 nm和-22.1 mV,分别。紫外光谱分析表明,Nano-Ag、强力霉素和MnO₂被成功加载到SNS,强力霉素的药物负载比率约为10.2%。稳定性研究发现SNS的粒子大小没有变化在不同的解决方案。溶血试验表明,SNS,远超过预期的生理浓度的水平,并没有引起红细胞溶解。进一步在体外和在活的有机体内实验发现,SNS没有激活血小板或导致凝血障碍和没有显著影响血液细胞的总数或肝肾功能。细胞毒性实验表明,SNS显著抑制肿瘤细胞的生长,破坏细胞膜,增加细胞内ROS水平,抑制释放TGF -β1由巨噬细胞细胞因子,抑制细胞内蛋白质合成。一般来说,SNS似乎有利的生物安全和抗肿瘤效果和可能代表一个有吸引力的TNBC的新治疗方法治疗。

1。介绍

纳米颗粒出现(NP)系统作为一个受欢迎的策略研究人员寻求改善的方法诊断和治疗各种疾病和导致许多诊断/治疗如Ferumoxytol批准,albumin-bound紫杉醇,Onivyde [1- - - - - -6]。纳米系统主要是用作药物加载或交付航空公司(例如,为小分子、蛋白质/多肽,或基因疗法)或直接作为显像剂(7- - - - - -9]。纳米系统作为抗癌药物载体疗法已经成为一个特别流行的研究领域,鉴于靶向到肿瘤的潜在好处环境和相应的可能减少系统性毒性(10- - - - - -12]。纳米材料具有独特的物理、化学和生物学特性,使他们能够有效地加载与化疗或基因疗法(7- - - - - -9]。通过主动或被动运输导致优惠积累目标站点在活的有机体内有效剂量的化疗药物送到不属预定目标的组织可以显著减少,使高剂量肿瘤或毒性减少到身体的其他部位(10,11]。聚乙二醇脂质体阿霉素的制定(阿霉素)降低阿霉素的毒性和副作用通过增强渗透性和保留效应(EPR)治疗三阴乳腺癌(TNBC) [13,14]。同样,nanocarrier-encapsulated吲哚菁绿(协调小组)和阿霉素允许高热和化疗的综合治疗(15]。然而,大多数的这些新技术系统应用程序的设计,提高生物相容性(作为一个重要的问题16,17]。

为了提高患者的不良预后TNBC缺乏具体、通道受体,我们的团队设计了一个硅综合(SNS),核心由Nano-Ag和一个包含MnO介孔二氧化硅组成的外壳₂阻止阿霉素,anti-PD-L1作为目标群体。包含anti-PD-L1旨在利用在高度表达PD-L1受体表面的肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL) (18- - - - - -20.]。MnO₂本身有一个角色在chemodynamic疗法(CDT)和阿霉素是细胞毒性21,22]。结合,这个平台提供了潜在的多通道,TNBC的协同治疗。之前的初步研究表明,SNS TNBC能够成功目标。在这个工作中,进一步使潜在临床SNS的发展,我们研究了SNS的生物安全和抗肿瘤活性。

2。材料和方法

2.1。材料

分析工具对佛波醇12-myristate 13-acetate (PMA)、活性氧(ROS),特里同x - 100, BCA, il - 1β,TGF -β1从Beyotime获得生物技术(上海,中国)。测量工具的二磷酸腺苷(ADP)、乳酸脱氢酶(LDH)、anti-PD-L1 (spartalizumab)和阿霉素从TOMUMS购买生命科学有限公司有限公司(广州)。细胞计数Kit-8 (CCK8)获得Dojindo实验室(上海)有限公司,有限公司(上海,中国)。胎牛血清(的边后卫)、青霉素和链霉素,罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI) 1640中型和杜尔贝科修改鹰介质(DMEM)从热费希尔科学、购买公司(美国沃尔瑟姆)。其他试剂没有特别列出了从国药控股(中国,北京)。

2.2。细胞培养和动物实验

人类单核细胞白血病细胞系THP-1 TNBC细胞系mda - mb - 231和4 t1请提供中国科学院干细胞银行。所有细胞培养在37°C公司5%₂和文化媒体4 t1和mda - mb - 231细胞high-glucose DMEM penicillin-streptomycin 1%和10%的边后卫(2,21]。THP-1细胞的培养基penicillin-streptomycin RPMI 1640中1%和10%的边后卫(16]。所有动物的研究遇到了蚌埠学院的伦理委员会要求。

2.3。SNS的准备

(一)7.5毫升葡萄糖溶液(30毫克/毫升)添加到40毫升的CTAB溶液(1.25毫克/毫升),搅拌在80°C和500 rpm 30分钟。然后,我们慢慢添加1.5毫升的混合解决方案包含54毫克AgNO₃精氨酸和56个毫克。反过来,3分钟后,我们添加了50毫克CTAB和424年μL张志贤,继续搅拌3 h。接下来,我们添加15毫升的异丙醇,30毫升盐酸(5 N)和20毫升hexamethyldisilicyl醚(HMDO),然后加热到80°C,搅拌30分钟。有色溶液的上层是收集、离心,用乙醇洗很多次获得silver-containing介孔二氧化硅NPs (MSN)。(b)接下来,我们结合25毫克的silver-loaded MSN和1毫升盐酸阿霉素·(2.78毫克/毫升,pH值7.0),这是在黑暗中激起了24小时在室温下允许阿霉素吸附达到平衡。(c) silver-loaded MSN和阿霉素通过离心收集;然后,我们添加1毫升KMnO₄解决方案(0.79毫克/毫升)和1.25毫升的MES(100毫米和pH值6.0)和混合30分钟的超声波。然后,KMnO之间的氧化还原反应₄布朗和MES MnO₂,这将是加载到MSN-COOH壳阻止阿霉素。最后,MSN装满Nano-Ag、强力霉素和MnO₂获得并通过离心沉淀和三个洗(15000 rpm和15分钟)。(d) 20毫克MSN是分散在5毫升MES(100毫米和pH值6),1毫克anti-PD-L1添加,0.2毫克EDC加入交联4 h。然后,离心机,冲另一个3倍(15000 rpm和15分钟),然后冷冻干燥获得最终的SNS。

2.4。物理化学特性

NPs的直径和粒度分布是由动态光散射(DLS) ZetaSizer Nano z(英国莫尔文仪器有限公司)。电动电势(ζ特点是使用一个氦氖激光 海里)(23- - - - - -26]。所有测量都是在25°C,样本在PBS溶液的浓度是40μ克/毫升。10毫升的NPs (40μg / mL)都中了铜网格和在室温下干燥,然后用黄金和sputter-coated观察使用一个h - 800透射电子显微镜(TEM)(日立、东京、日本)(加速电压:200 kV) [24- - - - - -27]。NP不同配方的紫外可见吸光度检测到GS54T紫外可见分光光度计(天津Tuopu仪器有限公司,天津,中国)。所有的样品一式三份分析批次( )。

2.5。SNS的稳定性评价

SNS的大小在PBS (pH值7.4),2% BSA, 5%的边后卫的解决方案(NPs的最终浓度:40μg / mL)检测使用ZetaSizer纳米z系统后6 h, 12 h, 24 h, 2 d, 3天的孵化37°C。我们还测量了SNS的大小在不同pH值的PBS(5.0, 7.4,和9.1)由DLS [25,28]。

2.6。血液相容性

2.6.1。溶血率

收集血液样本从健康男性志愿者为抗凝管(BD EDTA血常规管)根据抗凝管指令和生理盐水稀释(8毫升抗凝血+ 10毫升生理盐水)。准备的NPs被添加到稀释血液,和最终的浓度NPs是20,50岁,100年和200年μ克/毫升。孵化1 h后37°C,血样在2500转离心5分钟。收集上清液,使用紫外可见分光光度计测量吸光度是540海里。然后,我们计算了溶血率如下公式(1):

在ODt NP组的吸光度值;ODnc的吸光度值负控制(生理盐水);ODpc是阳性对照的吸光度值(蒸馏水)和溶血率为100%。一个 %表示,物质满足我们的安全需求;一个 %表示,物质可以诱导红细胞(红血球)破裂,因此没有临床使用要求(17,23]。

2.6.2。血小板活化分析

确定血小板激活,新鲜健康男性志愿者的血样收集到柠檬酸钠抗凝管(BD Biosciences-China,中国)。然后,血液孵化了NPs在37°C(最终浓度:200μg / mL)。30分钟后,我们评估血小板活化程度的流式细胞术(FCM)(美国BD生物科学)。为此,我们测量荧光标记的存在血小板活化标志物anti-CD62P和血小板pan-marker anti-CD42a使用FCM [11,17]。0.9%氯化钠和0.2μM ADP被用作-控制(NC)和积极的控制(PC),分别。

2.6.3。NPs在凝血的效果

新鲜血液样本收集的健康男性志愿者与109更易与L柠檬酸钠抗凝管( )。NPs被添加到这个血液样本的最终浓度200μ克/毫升。孵化后30分钟在37°C,血液在2500转离心10分钟。根据标准协议,激活局部血栓形成质时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)测定在Sysmex CS5100全自动凝血分析仪(Xisen Meikang医疗电子(上海)有限公司,有限公司,上海,中国)(29日]。PBS和hemocoagulase atrox(0.1单位/毫升)被用作数控和PC,分别。

2.6.4。NPs效果在活的有机体内对血液细胞和生化参数

NPs(1.5毫克/公斤)的尾静脉注入雌性SD鼠(7 - 8周)每隔7 d。我们用PBS和阿霉素(4.5毫克/公斤)作为NC和电脑。14 d后,老鼠都牺牲了,新鲜的血液被收集到一个与109更易与L柠檬酸钠抗凝管( )。一个完整的血细胞计数和临床血液化学测量(评估肝脏和肾脏功能)使用Sysmex poch - 100我自动血液分析仪(Sysmex医疗电子(上海)有限公司,有限公司,中国)和一个AU480贝克曼全自动生化分析仪(贝克曼库尔特公司,迈阿密,美国),按照制造商的指示(16]。

2.7。细胞相容性

2.7.1。LDH释放实验

细胞膜的完整性决定了LDH释放实验。适量的4 t1和mda - mb - 231细胞培养在96 -孔板,每箱指令。坚持后,培养基是吸气和200年μL(包含NPs DMEM (5μg / mL)添加到每个96 -孔板。DMEM培养基含有1% Triton x - 100作为个人电脑,和DMEM培养基仅是用作数控2,16]。24小时后,上层清液中LDH浓度决定根据LDH工具包指令。

2.7.2。细胞内ROS水平分析

使用2细胞内ROS水平测定,7-dichlorodihydrofluorescein二乙酸(DCFH-DA)作为指标。总之,适量的4 t1和mda - mb - 231细胞孵化6-well盘子。坚持后,DMEM培养基包含NPs (5μg / mL)添加和细胞培养。DMEM培养基含有H₂O₂(50μ米)是用作个人电脑。PBS是用作数控16,30.]。6小时后,细胞被洗3次用PBS。然后,NPs的影响细胞内ROS水平是决定/设备的指令。

2.8。Immunocompatibility

PMA是添加到RPMI 1640中包含THP-1对数生长期的细胞增长50 ng / mL的最终浓度。然后,细胞悬液中加入96 - 200孔板μL /好,培养48 h诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。然后,RPMI 1640小心地吸气,取而代之的是200μL RPMI 1640中包含NPs(浓度:5μg / mL)。在这个实验中,200年μL RPMI 1640中被用作数控和200年μL RPMI 1640中含2.5毫克/毫升的菊粉作为个人电脑。细胞培养24小时,和上层清液的吸光度测量根据il - 1 450海里β和TGF -β1定量酶联检测设备指令(16]。我们使用一个标准曲线来确定il - 1的内容β和TGF -β1在中。

2.9。蛋白质合成实验

4 t1细胞和mda - mb - 231细胞培养在6-well盘子。坚持后,培养基的6-well盘子是吸气,和1000年μL DMEM包含NPs(浓度:5μg / mL)被添加到每个。PBS和自由阿霉素(10μg / mL)被用作数控和PC,分别。孵化24 h后,蛋白质浓度测定根据BCA试剂盒的指示来评估不同的NPs在蛋白质合成和细胞毒性的影响(31日,32]。

2.10。统计分析

数据了 (SD)。单向方差分析和一个未配对的学生 - - - - - -测试被用来确定跨领域使用的统计学意义的比较。的阈值 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。物理化学特性

SNS的准备期间,中间NPs的粒子大小约为50 - 80纳米(图1(一))。后加载MnO₂,NPs的大小明显增加,表明MnO₂扮演了一个角色的密封表面介孔介孔二氧化硅。NPs与anti-PD-L1共轭后,水动力直径也略有增加(约94.6海里)。阿霉素加载到NPs添加MnO后完全封装₂,电动电势之间的中间NPs是-20和-30 mV。完整的SNS的电动电势是-22.1 mV(图1 (b))。SNS的TEM图像显示,黑人核心Nano-Ag的大小分布均匀,SNS的形态与90 - 100 nm直径均匀球面,在良好的协议与DLS研究94.6 nm(图1 (c))。紫外可见吸收光谱,SNS没有anti-PD-L1和SNS表现高信号的峰值代表Nano-Ag(408海里),阿霉素(272海里),和MnO₂(380海里)(图1 (d))。阿霉素的信号峰值/ Ag@SNS Nano-Ag (408 nm)和阿霉素(272海里)。正如预期的那样,Ag@SNS只有山峰Nano-Ag(408海里)。这些发现表明,Nano-Ag、强力霉素和MnO₂成功coloaded SNS anti-PD-L1嫁接前。SNS的准备后,阿霉素的含量在上层清液通过紫外可见分光光度计检测,和阿霉素的载药率是确定为10.2%左右。见图1 (e),没有Nano-Ag进步党是深蓝色,进步党没有强力霉素是黄绿色。没有MnO SNS, SNS₂,SNS没有anti-PD-L1 MnO的颜色₂:浅棕色。

3.2。SNS的稳定性

当NPs注入到体循环,它们吸附血浆蛋白改变NPs的大小和巨噬细胞的吞噬作用,从而影响在活的有机体内分布和保留时间(33,34]。BSA与PBS SNS孵化之前,2%,5%的边后卫,DLS的粒径为94.6海里。与5%的边后卫,仅在PBS, PBS和PBS 2% BSA, SNS在12 h的粒子大小是98.52 nm, 114.11,和103.04 nm,分别;在72 h,平均直径是109.39 nm, 126.92 nm,分别为121.41 nm(图2(一个))。因此,蛋白质含量缓冲似乎稍稍增加意味着颗粒大小,可能由于蛋白质吸附。然而,这些差异没有统计学意义。延长培养时间,SNS的颗粒大小不同的PBS溶液pH值逐渐增加(图2 (b))。在12 h,在PBS溶液pH值为5.0,7.4,和9.1,SNS的大小为95.16 nm, 98.52 nm,和101.09 nm,分别;在72 h,大小101.73 nm, 109.39 nm,分别和113.74海里。pH值越低,增加SNS粒度越小;pH值越大,越大的SNS粒径增加。然而,相比之下,SNS直径的预培养,没有统计上的显著差异,可能由于MnO加速退化₂在酸性溶液31日]。这些结果表明,SNS在一系列生理缓冲条件下是稳定的。

3.3。血液相容性

3.3.1。溶血率

在体外溶血试验被认为是一个重要的药物(本文以可靠的方法来评估35]。在这些溶血实验中,我们评估了SNS浓度和溶血率之间的线性关系。SNS的拟合线性方程,而阿霉素 ( );对于SNS没有MnO₂组 ( );SNS没有Nano-Ag组 ( );SNS没有anti-PD-L1组 ( );最后,SNS组 ( )。NPs溶血率达到5%以上时,浓度分别为438.80,308.92,262.38,445.84和410.68μg / mL,分别明显高于200年的最大实验浓度μ这个实验中使用的g / mL。此外,当NPs是200年的最大实验浓度μg / mL, NPs的溶血率小于4%(图3(一个))。这些实验表明,红细胞破裂引起的SNS的程度超过相关的浓度范围(5 - 10μg / mL)可能会远远低于5%。根据美国材料试验学会标准(ASTM F756-00, 2000), SNS和其他NPs不典型的溶血性25]。

3.3.2。血小板激活测试

血小板激活是一个复杂的过程,涉及许多生理和病理过程,包括血栓事件,炎症,肿瘤的生长和转移11,17]。当外国NPs介绍了血液,血小板活化程度是本文的一个关键指标。我们执行一个血小板激活测试研究本文以SNS, FCM(图3 (b))。血小板活化的结果表明,NPs没有显著不同于数控,曾非常低血小板激活( )。个人电脑,然而,诱导血小板活化,和个人电脑和数控之间有显著性差异( )。这些结果表明,SNS可能血小板相容性很好。

3.3.3。SNS对凝固的影响

PT是外在的凝固状态筛选试验的凝血系统和评估每个凝血因子的功能。工党是一个重要的指数监测患者对抗凝治疗。当测试值大于3 s大于控制价值,它被认为是不正常16]。同样,APTT测试反映的凝固状态内在凝血系统,通常是用作筛选试验(25]。TT是一个简单的测试来检测凝血的功能,抗凝和纤维蛋白溶解系统(25]。此外,血小板被激活时,它会释放凝固酶活化剂,催化凝血酶原变成凝血酶的方式依赖于钙离子。凝血酶将水溶性FIB的等离子体转化为水不溶性纤维蛋白。FIB积累在血液细胞,结合在一起形成一个质量导致血栓(16]。心房纤颤的正常浓度(cFIB) 2 - 4 g / L。在诊所、PT、APTT、TT和cFIB通常用作凝固方便指标筛选。在我们的研究中,当比较不同NP组、NC和PT的结果没有显著差异,APTT, TT和cFIB(表1)。比较个人电脑和数控,工党和TT没有显著不同,但APTT和cFIB在PC明显低于数控( )。在一起,这些结果表明,SNS没有明显影响凝血系统。这些结果也符合的作用机制hemocoagulase atrox,其中包含两个酶凝血:类似和thrombokinase-like。前者促进血小板聚集在出血形成白血栓(血小板血栓)和产生止血。后者是由血小板激活因子III(磷脂)、凝血酶原转变为凝血酶和进一步激活纤维蛋白原变成纤维蛋白(36]。因此,这实在是再合适不过hemocoagulase atrox将主要影响APTT和cFIB。

3.3.4。NPs对血液成分的影响结果

治疗的影响血液细胞和生化参数表中列出2。NC和NP组之间,没有显著差异在白细胞(WBC)、血红蛋白(HB)、血小板(PLT)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血清肌酐(Scr)和血液尿素氮(BUN)的治疗。在个人电脑,与之相比,数控,生化参数(ALT, AST,包子和可控硅)显著增加( ),和血细胞计数(WBC、HB、PLT)明显下降( )。这些结果表明,SNS没有明显影响血细胞或生化参数,表明SNS不可能有毒体内。

3.4。细胞相容性

3.4.1。LDH释放实验

LDH是一种内酶,不能通过完整的细胞膜。因此,LDH释放实验可以用来确定治疗SNS导致细胞膜损伤。LDH浓度介质在24 h如图4(一)和图4 (b)。数控的LDH浓度在4 t1细胞(87.56 U /毫升)明显低于PC (442.52 U /毫升)( )。SNS的LDH浓度没有强力霉素,SNS没有MnO₂,没有Nano-Ag SNS, SNS没有anti-PD-L1, SNS在4 t1细胞159.66,213.04,178.23,256.81,和274.09 U /毫升。这些NP组的LDH浓度明显高于数控( )和明显低于PC ( )。此外,SNS程度最高的LDH释放有关。我们观察到类似的行为mda - mb - 231细胞,除了SNS的LDH浓度组相比没有明显不同的电脑。高LDH释放治疗后与NPs表明NP-induced破坏细胞膜。这些结果表明,SNS单独导致最严重破坏细胞膜。

3.4.2。细胞内活性氧测定

过度的细胞内ROS能破坏蛋白质、DNA、磷脂等生物大分子。ROS的生成是一个主要的抗癌机制的放射治疗和治疗几个代理(1,37- - - - - -39]。因此,它是重要的临床和理论意义来衡量NPs在细胞内ROS生产的影响。DCFH-DA没有荧光,可以自由通过细胞膜。进入细胞后,细胞中DCFH-DA可以通过酯酶水解生成DCFH。重要的是,DCFH无法穿透细胞膜,所以DCFH-DA探针保持细胞内。细胞内活性氧氧化的nonfluorescent DCFH产生荧光DCF (1,31日]。因此,细胞内ROS水平可以衡量光纤检测细胞内的荧光。细胞内ROS水平图所示4 (c)和图4 (d)。4 t1细胞的细胞内ROS数控处理(91.39%)明显低于PC (628.65%) ( )。产生的细胞内ROS水平与SNS没有强力霉素治疗后,没有MnO SNS₂,没有Nano-Ag SNS, SNS没有anti-PD-L1, SNS在4 t1细胞为225.89%,413.54%,194.33%,289.37%,和357.09%,分别。细胞内ROS水平与这些NP组治疗后明显高于数控( )但低于PC ( )。SNS没有MnO₂导致所有SNS变异细胞内ROS水平最高,或许是由于MnO的能力₂直接与活性氧反应。我们发现了类似的趋势在mda - mb - 231细胞。这些结果表明,SNS生成活性氧可能有抗肿瘤活性。

3.5。Immunocompatibility

多肽的il - 1β主要是由单核细胞和巨噬细胞,导致炎症,会导致发烧。然而,在肿瘤微环境中,它可能导致肿瘤的生长和转移2,39]。TGF -β1所表达的主要是内皮细胞、血液细胞、结缔组织细胞和上皮细胞。TGF -β1块不成熟的T细胞成Th1细胞的分化,促进他们转换为Treg子集,和抑制树突状细胞的抗原递呈功能,从而干扰正常的免疫调节和增效肿瘤细胞的免疫逃逸24,40]。因此,评估具有重要意义SNS在释放il - 1的影响β和TGF -β1由单核细胞和巨噬细胞。

THP-1单核细胞被诱导分化治疗PMA 48 h,我们观察梭状,椭圆形或不规则的贴壁细胞(图5(一个))。这项观察表明THP-1细胞成功地分化成巨噬细胞。在以下immunocompatibility测试中il - 1β治疗后浓度与数控( pg / mL)明显低于PC ( pg / mL) ( )(图5 (b))。的il - 1β水平与SNS没有强力霉素治疗后,没有MnO SNS₂,没有Nano-Ag SNS, SNS没有anti-PD-L1, SNS , , , ,和 分别pg / mL。的il - 1β这些NP组的浓度也有类似的浓度作为数控( ),但明显低于PC ( )。这些结果表明,治疗与SNS并导致巨噬细胞il - 1的合成和释放β。TGF -β1浓度与数控孵化后( pg / mL)明显低于治疗后与电脑( pg / mL) ( )(图5 (c))。TGF -β1浓度与SNS没有强力霉素治疗后,没有MnO SNS₂,没有Nano-Ag SNS, SNS没有anti-PD-L1, SNS , , , ,和 分别pg / mL。TGF -β1浓度的这些NP组(SNS没有anti-PD-L1除外)均明显低于数控( )和电脑( )。TGF -β1浓度产生的治疗没有anti-PD-L1 SNS,然而,略高于治疗后与数控( )。这些表明,针对anti-PD-L1导致减少释放TGF -β1,有可能进一步提高SNS的免疫疗法的好处。然而,在SNS anti-PD-L1并不影响il - 1的释放β。

3.6。细胞内蛋白质合成

细胞内蛋白质浓度图所示6。4 t1细胞有显著不同的细胞内蛋白质与数控治疗后,治疗后相对于PC或NPs ( )。细胞内蛋白水平与SNS没有强力霉素治疗后,没有MnO SNS₂或SNS Nano-Ag明显高于个人电脑( )。没有显著区别PC与SNS社交网站没有anti-PD-L1 ( )。这些发现表明,SNS没有anti-PD-L1和SNS PC组有一个类似的抗肿瘤活性。此外,细胞毒性的SNS(对细胞内蛋白质浓度的影响)是最高的SNS变体。mda - mb - 231细胞,细胞内蛋白质浓度与SNS没有强力霉素治疗后,没有MnO SNS₂,没有Nano-Ag SNS, SNS没有anti-PD-L1明显高于治疗后与电脑( )。细胞治疗与SNS有相似的细胞内蛋白质浓度细胞处理电脑( )。所有NP-treated细胞的胞内蛋白质含量低于数控( )。这些结果表明,所有NPs有一定的细胞毒性,但最终制定SNS(靶向配体)最强的抗肿瘤活性。这可能是由于anti-PD-L1的瞄准和免疫治疗活动。这一结果进一步证实了LDH版本中获得的数据。

4所示。讨论

近年来,免疫疗法,治疗恶性肿瘤的靶向治疗的科学和临床快速发展(6,18]。然而,这些方法还没有被翻译对TNBC患者(有意义的改善结果41,42]。因此,在这项工作中,我们试图测试一个新的nanodelivery系统可能利用anti-PD-L1活动实现有针对性的免疫疗法。之前的迹象显示支持这种方法的潜在的有效性,所以我们需要更好的理解SNS的生物相容性。

在这项研究中,我们使用了DLS分析SNS的稳定,粒径的变化。NPs注入后,血浆蛋白吸附,形成一个水动力电晕NPs的表面,从而影响粒子的大小和zeta NPs的潜力,最终改变NPs通过改变交互的保留时间与网状内皮系统(RES)和肾过滤43,44]。一般来说,更小的微粒RES不太可能被删除,导致一个更有利的药代动力学和biodistribution概要文件。此外,较小的颗粒也更亲水表面,可能减少蛋白质吸附(34]。然而,如果粒子太小,如低于10海里,他们更有可能从肝脏和肾脏溢出。据报道,NPs粒径约100海里最有效地避免清除RES和受益于EPR效应分发到肿瘤组织(44,45]。我们发现培养时间延长时,约100海里SNS的大小没有改变无论在PBS孵化,5%的边后卫,2% BSA表明稳定性好。SNS孵化的平均粒径在2% BSA略小于孵化在5%的边后卫,可能因为BSA是一个提取白蛋白(583个氨基酸残基,分子量66.43 kDa)从牛血清,及其分子量小于完整的蛋白质中发现的边后卫。我们发现孵化在缓冲区pH值较低导致较小的SNS,可能因为MnO₂分解更快更能提高细胞缺氧的状态。这种现象可能有助于改善SNS的抗肿瘤作用在酸性肿瘤细胞的细胞器。

因为它可能管理通过注入到体循环,理解本文的SNS对了解其安全性是至关重要的在活的有机体内。根据国际标准(ISO 10933 - 4),合成材料的血液相容性主要考虑以下两个方面:(1)治疗是否不损害血液组件(例如通过改变溶血率、肝肾功能,或血细胞计数);(2)是否治疗不会引起血栓形成(即。通过诱导血小板激活和凝固)[16,46]。

本文总血红蛋白(《)和plasma-free血红蛋白(PFH)释放到等离子体定量测定比色法(47]。对于这些毒性研究,我们测试了NPs在巨大的浓度超过我们可能期望使用治疗期间。一般来说,实验的浓度NPs应该至少30倍的预期的治疗浓度。SNS的预期治疗浓度大约是5μg / mL,所以我们测试了200的浓度μ克/毫升。

在我们的研究中,溶血率达到5%时的浓度NPs是262.38μ根据线性回归g / mL。因此,在治疗浓度SNS (5μg / mL)可能对溶血没有显著的影响。这是一个预期的结果,因为红细胞损伤通常会造成静电吸附和疏水相互作用。然而,在这项研究中,疏水介孔二氧化硅表面含有亲水性羧基组,可以溶解在水中。虽然SNS带有一个负电荷,SNS和红细胞表面之间的疏水相互作用之间的静电斥力大于SNS和红血球。因此,在高浓度时,SNS可以诱导红细胞细胞膜的破裂。

在恶性肿瘤化疗中,myelosuppression是一种常见的严重的副作用。这是因为化疗导致骨髓造血能力下降,降低外周血细胞的数量。其次,由于不同的各种血细胞的半衰期,myelosuppression最初的表现通常是白血球减少症,特别是嗜中性白血球减少症,其次是PLT和减少血红蛋白(48]。因此,监控红细胞表面的变化具有重要意义,白细胞,血小板细胞毒性药物的管理。

ALT主要存在于肝细胞线粒体)(但不是。另一方面,AST是主要分布在心脏和肝脏细胞的线粒体。血浆浓度在健康的条件下这两种酶是非常低的。然而,当肝细胞受损,细胞膜的通透性增加,导致这两个酶的释放的肝细胞。肾脏主要负责血液过滤和废物清除,所以它在运输中发挥着关键作用和删除NPs。当NPs进入身体和吞噬的RES, NPs主要集中在肝、脾、肾,可能会影响肝脏和肾脏功能和导致异常增加ALT, AST,可控硅,包16]。我们发现电脑治疗14天后在老鼠中,血细胞计数显著降低和生化参数显著增加。然而,SNS治疗或数控没有导致血液细胞显著差异或生化参数,尽管加载与强力霉素和Ag)。这可能是因为药物保护作用的介孔二氧化硅载体封装,避免直接接触强力霉素,Ag)和正常组织。

血小板激活可以从三个主要机制的结果。(1)ADP途径:ADP、凝血酶、肾上腺素,等内生ADP诱导血小板释放,引起血小板聚集;(2)TXA2途径:PGG2 TXA2诱导血小板聚集;(3)空军通路。SNS,作为一个外生物质进入血液,可能诱发血小板激活和聚集通过以上途径导致血栓形成。此外,NPs与负电荷可以诱导血小板聚集更强比阳离子或中性NPs (2,11]。SNS的电动电势是负的,所以它是重要的评估SNS的血小板聚集作用。在我们的研究中,SNS和0.9%氯化钠溶液没有诱导血小板聚集,但电脑,这表明SNS对血小板凝血通路没有显著影响。

接下来,我们进一步研究了SNS对凝固的影响。血管损伤或引入外源物质可引起凝血级联的激活,导致凝血酶的产生,和纤维蛋白原转化为纤维蛋白,促进凝血(49]。这可以分为三个基本步骤:凝血酶原复合物的形成,凝血酶原的激活与纤维蛋白的形成。凝血功能主要分为内源性凝血系统,外源性凝血系统和纤维蛋白溶解系统。在诊所、APTT、PT、TT和cFIB是常见的测试用于评估凝血功能(25,49]。在我们的研究中,APTT和cFIB hemocoagulase atrox (PC)明显高于NPs数控,这表明凝血化验是正常的。然而,凝血功能不NP组和NC组之间的明显不同,表明SNS对凝血功能无显著影响。这可能是由于SNS的亲水性壳,这可能会降低NPs的吞噬作用。此外,SNS相同电荷血浆蛋白,可能减少调理素作用。

LDH NAD-dependent激酶。它可以分为NAD-dependent-L-lactate NAD-dependent-D-lactate脱氢酶和脱氢酶。LDH主要存在于细胞质中,不能穿透细胞膜在正常情况下。当细胞膜受损,然而,LDH可以退出细胞(16,50]。因此,培养基中LDH活性是反映NPs的细胞毒性。在我们的研究中,SNS导致最多的LDH释放所有NP组明显高于数控。这些结果符合我们发现SNS也导致最大的细胞内蛋白质含量下降。因此,观察到的LDH释放的增加可能是由于细胞死亡,不仅细胞膜损伤。

ROS包括免费和非自由激进分子氧的来源,包括超氧化物阴离子(O^{2 -}),H₂O₂氢氧自由基(OH)、臭氧(O₃1)和单线态氧(o₂)。这些每一个具有未成对电子,导致较高的化学反应活性。在自然生物,ROS是氧代谢的副产品和扮演重要的角色在细胞信号和体内平衡51,52]。然而,ROS水平可以大大增加在环境压力(如紫外线或热暴露后),可能导致氧化应激或严重破坏细胞结构(1,31日]。因此,我们可以通过确定衡量可能的细胞毒性SNS ROS生产和代谢的影响。在所有测试NPs, SNS没有MnO₂导致细胞内ROS水平最高,可能因为MnO₂与H反应₂O₂在酸性环境中生产O₂消费,增加活性氧,导致缺氧的状态(31日]。SNS没有Nano-Ag导致细胞内ROS的最低水平,还可能因为Nano-Ag可以产生活性氧。SNS已经MnO₂和Nano-Ag,所以产生的ROS SNS在治疗水平之间没有MnO SNS引起的₂和没有Nano-Ag SNS。治疗所带来的ROS SNS没有anti-PD-L1低于SNS,进一步支持anti-PD-L1目标一半的细胞毒性作用,在良好的协议与LDH释放试验和胞内蛋白质化验的结果。

il - 1β家族细胞因子发挥重要作用在宿主防御机制以及各种免疫疾病的发病机理。当地的超表达il - 1β早期的慢性炎性环境促进肿瘤发展。肿瘤发生后,il - 1β与血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤微环境来推动血管,使肿瘤转移和扩散53,54]。此外,il - 1β还支持转移通过促进癌症干细胞的变换和上皮间充质转变(EMT)。肿瘤微环境中肿瘤细胞产生il - 1β和行动在其他细胞通过自分泌功能,从而避免细胞凋亡和促进增殖和入侵55]。在肿瘤部位,低级il - 1β表达式通常诱导免疫抑制疾病的早期阶段,但高水平的il - 1β通常会导致细胞入侵(40]。

作为一个生长因子,TGF -β1发挥生物功能调节细胞增殖、分化、凋亡和免疫。TGF -β1诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的生长通过调节下游信号转导分子Smad在肿瘤发展的早期阶段55,56]。与肿瘤的进一步发展,基因突变的TGF -β1受体或其下游Smad通路在肿瘤细胞中积累,导致削弱TGF -β1抑制[55]。TGF -的激活β1受体促进EMT,极化上皮细胞可以转化为活性基质入侵和迁移的能力。这个过程是肿瘤发生的关键阶段,经济增长,和转移(56,57]。TGF -β1是一种趋化因子,可以吸引巨噬细胞和成纤维细胞,导致bFGF的释放,PDGF, TNF-a,和其他血管活性的因素,从而促进血管生成,诱导肿瘤转移24,56]。在这项研究中,THP-1细胞成功地诱导和分化成巨噬细胞附着,il - 1βSNS-treated集团的释放与NC组没有明显不同。然而,TGF -的程度β1版本SNS-treated组显著低于NC组。TGF -β1有能力促进肿瘤发展。这些发现表明,SNS TGF -可以增强抗肿瘤效果β1通路。TGF -β1版本由于SNS治疗没有anti-PD-L1明显大于SNS-treated组。这个发现支持的重要性anti-PD-L1瞄准SNS的免疫治疗效果的一部分。

检测细胞内蛋白质合成的解释类似于MTT测定的结果,反映了药物的细胞毒性。细胞内蛋白质和LDH释放化验的结果一致,表明SNS导致强烈的细胞毒性和治疗可能代表一个有前途的战略目标免疫疗法。

5。结论

仍然是一个强大的需要改善的治疗difficult-to-target TNBC等癌症。在这项工作中,我们评估了SNS的细胞毒性和生物相容性,一个新的候选人治疗平台。TEM和DLS建议球形粒子的结果约95海里没有聚合的倾向。紫外可见光谱分析SNS建议SNS与Nano-Ag成功加载,阿霉素,MnO₂和阿霉素的载药率是10.2%左右。稳定性测试表明,SNS在PBS的颗粒大小,5%的边后卫,2% BSA溶液72小时内没有显著改变。与此同时,我们发现孵化低pH值的解决方案导致更小的粒子。SNS并未导致溶血或血小板激活和没有显著影响凝固或纤维蛋白溶解。动物实验表明,SNS不影响血液细胞计数或肝肾功能。在细胞实验中,SNS LDH释放和胞内活性氧增加,这与细胞内蛋白质分析是一致的。免疫相容性试验发现,SNS没有诱导释放il - 1β从巨噬细胞,但诱导释放TGF -β1。总之,SNS似乎有良好的生物安全及抗肿瘤活动,支持其潜在的抗癌药物临床使用。

数据可用性

任何显示项目和相关数据可按照客户要求定制。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突存在。

作者的贡献

H.Z.和Z.H.同样实现和写作;L.H.贡献图和语言修改;W.Y.,Q.J., C.X., and S.L. contributed the support studies and statistics assay; H.J. conceived and supervised the project. Zelai He and Huijun Zhang contributed equally to this work. All authors have reviewed the paper and agreed to publish.

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金资助(81602545号),安徽蚌埠医学院第一附属医院杰出青年科学基金(2019号byyfyjq04),自然科学基金的项目的安徽高等教育机构(没有。KJ2019A0313),安徽蚌埠医学院科学基金在512年“优秀青年教师人才发展计划(没有。BY51201314)”,一个Bengbu-Bengbu医学院联合研究项目(没有。BYLK201810),翻译医学关键项目,蚌埠医学院(没有。BYTM2019013),复旦大学附属华山医院的科研项目(2016号q018),北方华山医院的科研项目隶属于复旦大学(2015115),和自然科学基金会的蚌埠医学院(没有。BYKY1726ZD)。

引用

1. y, z, z通et al .,“肿瘤microenvironment-responsive超微金纳米颗粒涂敷的多功能肽及其应用在癌症放疗、”开展,10卷,不。12日,第5208 - 5195页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. j . y .太阳,问:Wang Chen等人“热敏黄金nanoparticle-coated pluronic-PLL纳米药物输送和chemo-photothermal疗法,”开展,7卷,不。18日,第4444 - 4424页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. e·d·理a . n . Plotnik t .希望,和d·塞隆纳“Ferumoxytol-enhanced MRI在外围血管,”临床放射学,卷74,不。1,37-50,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. d . Adrianzen Herrera, n . Ashai r . Perez-Soler和h . Cheng“纳米白蛋白bound-paclitaxel晚期非小细胞肺癌的治疗:一项评估的临床证据,”专家意见在药物治疗,20卷,不。1,第102 - 95页,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. s . Palchetti d·卡普托l . Digiacomo et al .,“蛋白脂质体的电晕指纹:新的机遇在胰腺癌靶向药物输送和早期发现,“制药学,11卷,不。1,p。31日2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. p•施密德s·亚当斯,h . s . Rugo et al .,“Atezolizumab和nab-paclitaxel先进三阴性乳腺癌,”《新英格兰医学杂志》上,卷379,不。22日,第2121 - 2108页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 他张x, z, l .香et al .,“Codelivery GRP78的siRNA并通过RGD-PEG-DSPE /多巴/帽多烯紫杉醇纳米粒子治疗castration-resistant前列腺癌,”药物设计、发展和治疗13卷,第1372 - 1357页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 江h . j . Zhang, j . et al .,“Doxorubicin-loaded碳点lipid-coated磷酸钙纳米颗粒视觉的靶向肿瘤的治疗,”国际期刊的纳米15卷,第444 - 433页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. f·m·陈l . Wang Wang et al .,“快速合成一种新型组合输送系统小干扰rna和阿霉素的协同抗癌作用,”国际期刊的纳米卷卷14日,第3569 - 3557页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. j .施p . w . Kantoff r·伍斯特和o . c . Farokhzad“癌症纳米:进步,挑战和机遇。”自然评论癌症,17卷,不。1,20-37,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. w . Lv, b . Cai, y歌et al .,“准备hemocompatible纤维素纸基于P(深度贴图)功能化表面,”胶体和表面B: Biointerfaces卷,116年,第543 - 537页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. k·g·k·迪帕克,r . Vempati g . p . Nagaraju et al .,“肿瘤微环境:挑战和机遇在针对三阴性乳腺癌的转移,“药理研究第104683条,卷。153年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a . Schneeweiss诉Mobus唐普德h . et al .,“强烈dose-dense盐酸表柔比星、紫杉醇、环磷酰胺和每周紫杉醇脂质体阿霉素(三阴性乳腺癌+卡铂)高危早期乳腺癌的新辅助治疗(GeparOcto-GBG 84):一个随机III期试验,”欧洲癌症杂志卷,106年,第192 - 181页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. y . c·苏·a . Burnouf k h .壮族b . m . Chen t . l . Cheng和s . r . Roffler”条件的聚乙二醇纳米药物内化挂钩衔接器三阴性乳腺癌药物治疗”自然通讯,8卷,不。1,第15507条,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. t·h·h·陈。l . Lu i刘et al .,“吲哚菁绿/ doxorubicin-encapsulated功能化纳米粒子对人类有效的联合治疗MDR乳腺癌,”胶体和表面B: Biointerfaces卷,177年,第305 - 294页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 吴j .黄张x, z . et al .,“准备和生物相容性评价PEG-PLL / RGD-PEG-DSPE /磷脂/帽纳米颗粒,”生物医学纳米技术杂志》,14卷,不。1,第113 - 98页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. d .索宁e . Pochkaeva s Zhuravskii et al .,“壳聚糖纳米粒子的生物安全和biodistribution,”纳米材料,10卷,不。4篇文章E810 p。810年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. c .太阳,r . Mezzadra, t·n·舒马赫”PD-L1检查点的监管和功能”,免疫力,48卷,不。3、434 - 452年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 沈x和b .赵”的功效PD-1癌症或PD-L1抑制剂和PD-L1表达状态:荟萃分析,“BMJk3529条,卷。362年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. f·舒兹,假摔,l·迈尔·冯·盟,c . Domschke孙和c,“PD-1 / PD-L1通路在乳腺癌,”肿瘤研究和治疗,40卷,不。5,294 - 297年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. g .杨l .徐y曹国伟et al .,“空心MnO₂作为联合治疗tumor-microenvironment-responsive可生物降解nano-platform有利于抗肿瘤免疫反应,”自然通讯,8卷,不。1,p。902年,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. x c . Liu, j .壮族l . Liu和c的太阳,“doxorubicin-based癌症治疗的毒性:植物化学物质提供的防护认知我们是什么?”药理研究第105062条,卷。160年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. z, z, w .太阳et al .,“不够的folic-acid-conjugated两亲性PEG-PLGA共聚物co-delivery顺铂和紫杉醇纳米粒子:为非小细胞肺癌的治疗效果,”肿瘤生物学,37卷,不。6,7809 - 7821年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 江l . l . Wang, P.-f。李et al .,“积极的表达程序死亡ligand-1与优越的结果和可能是原发性肺淋巴上皮癌治疗目标,“OncoTargets和治疗,8卷,第1457 - 1451页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. y z,他问:Wang太阳et al .,“mPEG-PLGA-PLL共聚物的生物相容性评价,不同的生物相容性,LA / GA比率影响”高分子生物材料科学版》杂志上,25卷,不。9日,第964 - 943页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. a·梅塔大肠装饰板材Vedove, l . Isert和o·m·默克尔“针对KRAS突变的肺癌细胞与siRNA-loaded牛血清白蛋白纳米粒,”医药研究,36卷,不。9,133年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. r . Mukhopadhyay, r·森b·保罗j . Kazi s Ganguly和m . c . Debnath吉西他滨与姜黄素co-encapsulated叶酸装饰PLGA纳米粒;一个新颖的方法来治疗乳腺腺癌。”医药研究,37卷,不。3,56页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. z, y太阳、j .曹和y段,“mPEG-PLGA-PLL共聚物的降解行为和生物安全研究,“物理化学化学物理,18卷,不。17日,第11999 - 11986页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. o . m . Daraba a . n . Cadinoiu d . m .装l . i Atanase和g . Vochita”Antitumoral药物可以使非水乳液聚合得到的聚合物纳米粒子的生物相容性,”聚合物,12卷,不。5篇文章E1018 2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. z,鑫,j . Zhang et al。”新的共轭聚合物纳米颗粒高效光声成像和光热光谱分析疗法在NIR-II窗口中,“化学通讯卷,56号7,1093 - 1096年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. l·s·林,j .的歌,l .歌et al。”同时fenton-like离子递送和MnO2-based谷胱甘肽耗竭的nanoagent加强chemodynamic疗法,”《应用化学》卷,57号18日,第4906 - 4902页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. s . a . Adeyemi y . e . Choonara p·库马尔et al .,“Folate-decorated endostatin-loaded,纳米粒子对anti-proliferative esophaegeal鳞状细胞癌化疗,”生物医学和药物治疗第109450条,卷。119年,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. y, j .锅h·李et al .,“基于白蛋白纳米增强他克莫司安全和淋巴靶向效率,”生物医学纳米技术杂志》,15卷,不。6,1313 - 1324年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a . Huguet-Casquero m . Moreno-Sastre t . b . Lopez-Mendez e . Gainza和j·l·Pedraz”封装的oleuropein纳米脂质载体:肺上皮细胞的生物相容性和抗氧化功效,“制药学,12卷,不。5篇文章E429 2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. j·b·胡j . Wang李,李,李和h”的优越性L-tartaric酸改性手性介孔二氧化硅纳米颗粒作为药物载体:结构、润湿性、退化,bio-adhesion和生物相容性,”国际期刊的纳米15卷,第618 - 601页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. x p . j .秦z s . j . Wang郑et al .,“比较hemocoagulase atrox和氨甲环酸用于全膝关节置换术主:一个随机对照试验,”血栓形成的研究卷。188年,39-43,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. x (j .廖z Davoudi et al .,“叶酸receptor-targeted和GSH-responsive羧甲基壳聚糖纳米粒子含有共价裹入6 -巯基嘌呤增强细胞内药物输送的白血病,”3月的药物,16卷,不。11篇文章E439 2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. z魏、吴m ., s .局域网et al .,“半导体聚合物基纳米粒子在第二个近红外光照治疗窗口,“化学通讯,54卷,不。96年,第13602 - 13599页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. 徐n . y . Chen Li b . et al .,“聚合物基纳米粒子对化疗/基因治疗:评价与结直肠癌的治疗效果和毒性,”生物医学和药物治疗第109257条,卷。118年,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. m . Moniri a Boroumand穆贾达姆,美国阿齐兹et al .,“体外分子伤口愈合的研究使用biosynthesized细菌nanocellulose /银纳米复合材料在生物信息学数据库的帮助下,“国际期刊的纳米13卷,第5112 - 5097页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. r·l·西格尔,k·d·米勒和a . Jemal癌症统计数据,2020年,“CA:临床医生的癌症杂志》上,卷70,不。1,7-30,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. c . e . DeSantis j . Ma m . m . Gaudet et al .,“乳腺癌的统计数据,2019年,”CA:临床医生的癌症杂志》上,卷69,不。6,438 - 451年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 陈y, y, j .壮族et al .,“海绵Cell-membrane-cloaked石油启用dual-modal解毒,”ACS Nano,13卷,不。6,7209 - 7215年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. y郑,x l . Chen等人“Biotherapeutic纳米粒子的聚(阿魏酸)交付阿霉素对癌症治疗,”生物医学纳米技术杂志》,15卷,不。8,1734 - 1743年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. z魏、李z . et al .,“m . Wu掺入钆空心CeO₂-ZrO₂nanoplatform多功能MRI / CT dual-modal显像剂和药物运载工具,”药物输送,25卷,不。1,第363 - 353页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. m . Modic和m . Mozetic”vitroscreening过程表征形成血栓的等离子体处理的表面的性质,“Biointerphases,11卷,不。2、第029808条,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 陈y, y, m . Chen等人“仿生纳米海绵体内抑制引起的致命性的分泌蛋白致病细菌,”小,15卷,不。6篇文章e1804994 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. 美国阿特金斯和f .他化疗和超越:新旧时代的感染血液恶性肿瘤的治疗方法,”北美的传染病医院,33卷,不。2、289 - 309年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. w·歌,问:曾庆红,x阴,l .朱t·龚和c盘,“准备和类肝素的抗凝性能实际上电纺膜从羧甲基壳聚糖和硫酸细菌纤维素,”国际期刊的生物大分子B部分,卷。120年,第1405 - 1396页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. d·t·萨维奇j . z柄,t·d·Dziubla“体外评估纳米毒性的方法,”分子生物学方法卷,1894年1至29,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. j·刘,刘x, y太阳et al .,“高密度高体积和超级ultra-microporous-activated碳macrospheres CO2Capture的能力,”先进的可持续发展系统,卷2,不。2,1700115条,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. x Lai h . Liu y, z . Wang和y陈,“药物纳米颗粒有机框架加载高胶体稳定性对于抗癌应用程序,”生物医学纳米技术杂志》,15卷,不。8,1754 - 1763年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. p .歌曲,c .杨j·s·汤姆森et al .,“Lipidoid-siRNA nanoparticle-mediated il - 1β基因沉默系统关节炎药物治疗在老鼠模型中,“分子治疗,27卷,不。8,1424 - 1435年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. x y . j . Wu汉,邹et al ., il - 1的“硅纳米颗粒作为增强剂β全身炎症的A549细胞周期。”免疫药理学和Immunotoxicology第41卷。。2、199 - 206年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. y, t·朱y李et al .,“反复静脉的二氧化硅纳米粒子诱发肺部炎症和胶原蛋白积累通过JAK2 / STAT3和TGF -β/ Smad3通路体内。”国际期刊的纳米,14卷,第7247 - 7237页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. p . p . y . Chen Liu太阳et al .,“致癌MSH6-CXCR4-TGFB1反馈回路:一种新的治疗目标多形性成胶质细胞瘤的光照疗法”开展,9卷,不。5,1453 - 1473年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. 问:张x Chang王h . et al .,“TGF所致β1介导Smad信号通路和EMT在肝纤维化引起的纳米氧化镍在体内和体外,”环境毒理学,35卷,不。4、419 - 429年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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