文摘
N-methyl-N´-nitro-N-nitrosoguanidine是一个明确的致癌物质,越来越多的证据表明,表明人类乳头状瘤病毒在中晚期食管癌的病因的作用。研究报道了协同效应近年来环境致癌物和病毒。的基础上建立Het-1A细胞诱导的恶性转化模型的协同HPV18 MNNG,本研究旨在探讨MNNG和人乳头状瘤病毒的协同致癌作用。我们的研究表明,HPV&MNNG导致原癌基因的蛋白表达水平显著增加,cyclinD1、bcl - 2、BAX、钙N-cadherin, mTOR, LC3II, p21和p62,随之而来的减少和LC3I。HPV18和MNNG诱导积累与KEAP1 p62及其互动,提升NRF2核易位。p62损失防止经济增长和增加恶性肿瘤细胞的自噬激活KEAP1 / NRF2-dependent抗氧化反应。此外,PI3K和p-AKT被HPV&MNNG刺激,和PI3K / AKT / mTOR正与细胞增殖,迁移,入侵,自噬在恶性转变。综上所述,MNNG&HPV调节自噬和加速细胞进一步升值通过激活p62 / KEAP1 / NRF2和PI3K / AKT / mTOR通路。MNNG&HPV改善Het-1A细胞自噬可能导致过度的细胞增殖,减少细胞凋亡,并免受氧化损伤,从而加速细胞恶性转化的过程,导致癌细胞。
1。背景
食道癌(EC)是恶性肿瘤的第四大死因,在中国和第七世界上最常见的恶性肿瘤(1),对人类健康构成了严重威胁。电子商务是一个环境相关肿瘤与多个因素和多个发展阶段。有复杂的内部和外部之间的相互作用会导致食道癌的发展。流行病学和实验室数据证实,某些化学因素(亚硝胺,mycosin、烟草和酒精)、物理因素(粗和过热的食物),营养不良和微生物感染(细菌、真菌,人乳头状瘤病毒,单纯疱疹病毒,巴尔病毒和巨细胞病毒)是电子商务的风险因素2- - - - - -5]。Syrjanen et al。6)首先报道的特征变化人类乳头状瘤病毒(HPV)感染在食管癌组织中自1982年以来,和研究人员广泛的关注转向食道癌之间的相关性和人乳头状瘤病毒感染。的过程中利用其病因复杂,更多的证据表明,HPV感染发生相关(7和食道癌的发展8),和人乳头状瘤病毒可能是一个重要的生物因素导致食道癌。
人乳头状瘤病毒是一个双链DNA病毒,吃鳞状上皮和可能导致增生性病变9)、乳头状瘤、鳞状细胞疣状病变(10,11]。各种研究发现HPV感染显著增加食道癌的风险(12,13]。分子流行病学研究令人信服地表明,50% ~ 80%的食管癌组织中HPV亚型感染不同(14),发现高危HPV感染显著增加食道癌的风险(8,12]。然而,HPV感染EC病因的作用仍存在争议,地理变化的速度在EC发现HPV感染情况下(15,16]。HPV可能发挥重要作用只在高发病率地理区域(16]。例如,邓et al。17)发现HPV缺席食管鳞状细胞癌在中国东部,尽管研究指出,HPV感染可能发展的众多因素之一ESCC在中国北方14]。此外,曹等人研究表明HPV感染可能发挥作用在安阳地区食道癌的发展(18]。
怀安是中国江苏省的一个城市中晚期食管癌的发病率高(19]。我们的初步研究显示HPV感染的高发中晚期食管癌标本从这个区域20.]。进一步,我们发现有一个食道癌之间的相关性和HPV18感染怀安地区(21],也有一定的风险暴露在含氮胺在这个区域(22]。在此基础上,我们建立了一个细胞模型,HPV18和MNNG协同促进Het-1A细胞恶性转化。恶性转化过程中,HPV&MNNG加速扩散和周期的进展,提高了抗凋亡能力,提高了入侵和迁移能力,并使细胞有能力独立nonanchor增长和在裸鼠肿瘤形成23]。然而,人乳头状瘤病毒的病因作用和致癌作用导致MNNG ESCC仍不清楚。p62,称为p62 / sequestosome-1 (p62 / SQSTM1),其积累的发展需要初癌恶性肿瘤,和p62 / KEAP1 / NRF2途径提交细胞恶性的命运条件下的代谢和增殖功能mTORC1和原癌基因被激活24]。研究发现,两人乳头状瘤病毒癌基因蛋白编码的E6、E7在致癌作用发挥关键作用的细胞蛋白相互作用(例如,p53和PI3K)参与细胞周期、细胞凋亡和分化(25]。mTOR / PI3K / AKT信号通路可以调节细胞凋亡和自噬在肿瘤细胞和分子癌症治疗的目标(26]。在这项研究中,我们计划确定的变化p62 / KEAP1 NRF2途径和PI3K / AKT / mTOR途径的亚硝胺和人乳头状瘤病毒协同诱发食道癌,探讨食道癌的可能的分子机制,并最终建立一个科学合理的控制策略和措施对预防食道癌在怀安地区。
2。材料和方法
2.1。细胞系,细胞培养
人食管上皮细胞Het-1A是购自中国科学院细胞银行(上海,中国)。Het-1A细胞稳定表达HPV18 E6E7基因(Het-1A-E6E7细胞)和控制(Het-1A-control细胞)是由我们的学习小组。Het-1A-E6E7 Het-1A-control细胞培养在完全培养基含有100 U /毫升青霉素和链霉素(美国表达载体)和维持在37°C在湿润的气氛中有5%的公司2。
2.2。亚硝胺暴露Het-1A-E6E7
在60% - -70%融合,Het-1A-E6E7 Het-1A-control细胞暴露在2摩尔/ L MNNG或未经治疗的24 h,一旦每通道。然后,细胞10th通道(Het-1A-E6E7-10) 20th通道(Het-1A-E6E7-20)和35th通道(Het-1A-E6E7-35)进行分子机制的研究。
2.3。检测细胞的功能
2.3.1。细胞生存能力分析
细胞增殖试验使用CCK-8细胞增殖/执行可行性分析工具包(7 seabiotech,中国上海)建议制造商的协议。
2.3.2。流式细胞术分析
细胞周期检测通过流式细胞术使用细胞周期分析工具包(南京凯基生物,中国)根据协议。增殖指数计算公式 。
细胞凋亡的检测是通过流式细胞术使用膜联蛋白V异硫氰酸荧光素工具包(APC / 7-AAD)(南京凯基生物,中国)根据协议。
2.4。总RNA提取和存在
总RNA提取使用试剂盒/氯仿(美国英杰公司)根据制造商的指示。反转录后,放大进行了总量的20倍μL包含SYBR绿色实时PCR掌握混合。引物序列描述用于补充表S1。转录水平正常化β肌动蛋白。
2.5。基因沉默的小核RNA)
沉默p62表达式使用核(RiboBio、广州、中国)后执行制造商的指示。总之,35thHet-1A-HPV-MNNG Het-1A-HPV细胞转染和p62核或消极的控制在5 nM使用Lipofectamine 2000®(热,沃尔瑟姆,MA)。新鲜Opti-MEM介质(美国Gibco)然后添加24 - 48 h / 37°C孵化。
2.6。细胞内氧化损伤测量
由纳米级氧化损伤检测集群使用ROS检测工具(凯基生物生物科技,中国)。细胞( /)在对数生长阶段被接种到24-well板块被放置无菌圆形提前幻灯片。24小时后,细胞培养介质包含1毫米(Ag)(谷胱甘肽))+并培养15小时。删除中,用PBS清洗三次,密封清洗玻璃幻灯片。最后,细胞观察,共焦荧光显微镜下拍照,保存。
2.7。核内蛋白提取
核蛋白质提取协议执行NE-PER工具包(地址:Beyotime P0028生物技术)根据制造商的指示。简而言之,细胞放置在1毫升胞质蛋白提取试剂混合物含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂。暂停是孵化冰上10 - 15分钟。然后,胞质蛋白提取试剂B是补充道。这种混合物是孵化为1分钟,其次是在14000×g离心5分钟,并代表胞质部分收集的上清液。颗粒在50毫升resuspended核蛋白质提取试剂含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂和漩涡,持续30秒。此后,暂停在14000×g离心10分钟,和上层清液保存为核蛋白质提取。
2.8。免疫印迹
蛋白质从细胞中提取使用里帕缓冲区,解决SDS-polyacrylamide凝胶,然后转移到聚乙二烯二氟化物膜。主要的抗体β肌动蛋白(1:1000年,圣克鲁斯)GAPDH, p62,原癌基因,cyclinD1、p21, bcl - 2、BAX、钙N-cadherin, LC3, mTOR, Beclin1, KEAP1, NRF2 (Abcam 1: 1000年,剑桥,MA)。Peroxidase-conjugated二级抗体(1:5000年,圣克鲁斯)使用。最后,增强化学发光测定的抗原抗体反应是可视化(ECL,热)。
2.9。免疫沉淀反应
细胞细胞溶解在IP裂解缓冲和蛋白酶抑制剂(美国σ),然后是规范化使用皮尔斯™快速黄金BCA蛋白质测定试剂盒(没有。A53225)。免疫沉淀反应进行了使用热科学皮尔斯免疫沉淀反应(CO-IP)工具包(26149号)根据制造商的指示。抗体NRF2(美国波士顿1:200)和KEAP1(1: 200年,波士顿,美国)被添加到溶解产物和孵化一夜之间在4°C,与兔子或鼠标控制抗体免疫球蛋白。
2.10。统计分析
数据分析是由SPSS 20.0和GraphPad棱镜7软件;数据的描述 至少有三个独立的实验。学生的 - - - - - -测试和分析变量进行方差分析分析。组之间的差异被认为是具有统计学意义 。
3所示。结果
3.1。HPV&MNNG促进Het-1A细胞增殖、Antiapoptosis入侵,移民和自噬
我们发表的研究表明,协同造成的HPV和MNNG Het-1A通过显著增强细胞恶性转化细胞增殖,antiapoptosis,入侵,迁移,nonanchorage-independent增长23]。此外,我们发现关键蛋白质分子的表达。在图1、cyclinD1表达式的HPV + MNNG组首先抑制,然后增加,和cyclinD1的表达高于MNNG组35。原癌基因表达的HPV + MNNG组和MNNG组增加感染通道和在人乳头状瘤病毒转染细胞显著增加。四组的p21表达低10th和35th文章从20增加th段落,HPV + MNNG组最高。Het-1A-HPV-MNNG细胞凋亡bcl - 2蛋白的表达和Het-1A-HPV细胞明显高于对照组。每组的凋亡蛋白伯灵顿增加了通道,这可能是由老化引起的。Het-1A-HPV-MNNG细胞的凋亡能力强于MNNG集团。
在人乳头状瘤病毒+ MNNG组和MNNG组,增加文章的钙粘蛋白表达减少,而N-cadherin蛋白的表达增加,两组之间没有显著差异。p62表达式的HPV + MNNG HPV和MNNG组增加随着代数的增加过程中恶性转变。mTOR表达式的HPV + MNNG组先下降,然后上升,但仍低于对照组。LC3II表达增加与对照组相比,表明HPV的综合效应和MNNG刺激自噬的发生在初始阶段。
3.2。p62损失防止Het-1A-E6E7-MNNG-35细胞的生长
接下来,我们检查是否HPV&MNNG-stimulated p62 upregulation功能与HPV&MNNG-induced激活扩散有关。Het-1A-E6E7-MNNG-35细胞转染p62 siRNA和数控核(控制)。如图2(一个),p62表达显著抑制p62 siRNA-transfected细胞与控制( )。然后,细胞增殖指数的抑制p62 siRNA-transfected细胞( 小干扰rna(%)与控制 %),细胞周期G1阶段被(图2 (b))。在图2 (c),p62沉默提升Het-1A-E6E7-MNNG-35细胞的凋亡。在图2 (d)p62沉默cyclinD1表达降低,但没有影响第21页。apoptosis-related原癌基因蛋白升高,bcl - 2表达下调,和伯灵顿是调节。Autophagy-related蛋白质LC3II Beclin1调节,mTOR和p-mTOR被降低了。
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3.3。p62损失增加恶性Het-1A细胞自噬
的过程中HPV和MNNG协同致癌作用,autophagy-related蛋白质水平的变化(图1)。进一步阐明人乳头状瘤病毒的影响,MNNG和HPV&MNNG p62自噬,自噬和监管效应Het-1A-HPV细胞暴露于MNNG 24 h在不同浓度(0、2、4、8μmol / L)。如图3(一个),p62蛋白质和mTOR蛋白质调节主要由HPV-E6E7,两种蛋白质的表达变化与MNNG浓度的增加不明显。LC3II调节主要由MNNG,这意味着自噬功能显著增强(图3(一个))。然后,p62撞倒在Het-1A-HPV细胞(图3 (b)),和si-p62-Het-1A-HPV si-control-Het-1A-HPV受到MNNG 24 h。我们发现mTOR p62损失组显著减少(图3 (c)),而Beclin1和LC3II表达式被p62失踪(图调节3 (c))。mTOR蛋白的表达与p62呈正相关。
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3.4。p62损失促进恶性Het-1A细胞自噬通过激活KEAP1 / NRF2-Dependent抗氧化反应
Moscat et al。27)指出,p62激活隔离KEAP1 NRF2-dependent抗氧化反应。在我们的研究中,如图4(一)、mRNA表达SOD-1 SOD-2 HO-1, NQO-1,和NRF2减少第十代,然后逐渐恢复20代,最后在35代增加。在每一组中,HPV + MNNG集团第十代最大的减少并逐渐增加,达到峰值在35代,表明结合组对氧化损伤更敏感的压力。在35代转染后,恶性细胞的抗氧化损伤能力增强。在图4 (b)在35th四组的通道细胞KEAP1 HPV + MNNG组中表达增加是与p62水平(图一致1)。NRF2表达人乳头状瘤病毒的核是调节+ MNNG组和MNNG组蛋白和mRNA水平(图4 (b), )。和下游NRF2基因HO-1调节在HPV + MNNG, HPV和MNNG组相比,控制( ,图4 (b))。NQO-1, HPV集团有一个峰值,水平HPV + MNNG仍高于控制( ,图4 (b))。此外,荧光共焦显微镜的结果表明,红色荧光的发光机制p62删除后明显增强,这表明,活性氧积累增加细胞的氧化损伤。(图4 (c);绿色荧光代表绿色荧光蛋白;红色荧光代表银制备的激进分子正在兴奋的波长580 NM)。p62撞倒,NRF2 mRNA水平( ,图4 (d))和HO-1 ( ,图4 (d))明显下调,NQO1水平略增加( ,图4 (d))。然后,Het-1A-HPV-MNNG-35细胞中p62删除导致KEAP1的不变的水平,减少水平的NRF2(图4 (e))。最后,我们证实p62之间的交互和KEAP1的coimmunoprecipitation Het-1A-HPV-MNNG-35细胞。如图5 (f),可以绑定到p62 KEAP1。这些数据表明,p62 Het-1A-HPV-MNNG-35细胞激活NRF2通过调节KEAP1丰富;因此,NRF2抑制ROS生产和促进了肿瘤的发展。
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3.5。HPV&MNNG Het-1A细胞的激活自噬PI3K / AKT / mTOR通路
如图5(一个),表达PI3K和p-AKT调节过程中HPV和MNNG协同致癌作用。PI3K / AKT信号通路的上游mTOR的监管机构。PI3K / AKT / mTOR是经典的自噬通路,介导细胞生存(28]。如前所述,自噬水平提高恶性转化的过程中,和p62 mTOR被激活,抑制自噬(图1)。值得注意的是,这一趋势PI3K / AKT通路的所有组的类似LC3II和p62蛋白质(数字1和5(一个))。证明是否HPV&MNNG调节自噬通过PI3K / AKT / mTOR通路,我们对待PI3K抑制剂LY294002 35th20 Het-1A-HPV-MNNG细胞和决定μ为干预浓度(图5 (b))。免疫印迹检测表明,LY294002治疗表达下调HPV&MNNG诱导增加p-mTOR, p-AKT, PI3K,没有mTOR的总蛋白质含量的变化(图5 (c)),这表明抑制mTOR / PI3K / AKT通路。Autophagy-related蛋白质LC3II / LC3I比率(图S1B)和p62降低(图5 (d)),这意味着该抑制自噬流量。钙粘蛋白表达增强,N-cadherin抑制PI3K后表达降低,表明细胞的EMT是削弱。然后,流式细胞仪分析表明,细胞周期G1期,被捕的扩散指数 ,明显低于对照组( %)(图5 (e), ),和细胞凋亡率( %)高于对照组( %)(图5 (f), )。此外,cycle-related蛋白质cyclinD1和p21表达下调,伯灵顿apoptosis-related蛋白质调节,而凋亡蛋白bcl - 2表达下调。原癌基因的表达,从而影响细胞增殖和细胞凋亡明显减少(图5 (g))。因此,促进细胞增殖引起HPV&MNNG介导通过PI3K / AKT / mTOR的激活。
4所示。讨论
4.1。协同致癌作用MNNG和HPV Het-1A细胞
本文旨在阐明环境致癌物的协同致癌机制MNNG和病毒HPV在人类食管上皮Het-1A细胞永生化。致癌作用是一个多步骤的过程(29日]。癌症生物学的基本方面包括细胞增殖失调,细胞凋亡(30.),转移(31日),基因畸变(32],anchorage-independent增长(AIG) [33),和肿瘤的形成。研究发现,人乳头状瘤病毒E6 p53,差别介导对这些导致DNA损伤(34- - - - - -36]。人乳头状瘤病毒E7蛋白表达下调p21和p27的表达,影响细胞周期,细胞overproliferate,导致诱导肿瘤的发生(34,36,37]。在我们的研究中,p21绝对是表达下调。cyclinD1表明,细胞周期阻滞的表达,然后从G1期提升HPV&MNNG S期,表明细胞增殖能力经历了一个阶段的抑制,然后增强恶性转化的过程中。
作为一个重要的癌基因,原癌基因通过几种机制促进肿瘤发生,包括调节DNA合成、细胞增殖、分化、生存,和不朽38- - - - - -40]。在我们的研究中,原癌基因被激活特别是HPV,表明人乳头状瘤病毒起到了催化的作用在促进增殖和恶性转化过程中不灭的进步。bcl - 2家族蛋白bcl - 2(凋亡和proapoptotic伯灵顿)在细胞凋亡发挥中央监管作用41,42]。我们的结果显示,upregulation的bcl - 2、BAX bcl - 2 /伯灵顿比率增加(图S135)和促进细胞增殖thHet-1A-HPV-MNNG。
Epithelial-mesenchymal转换(EMT)被认为是至关重要的事件,癌细胞获得入侵表型通过特定转录因子和信号通路的激活43,44]。EMT允许癌细胞获得迁徙,侵入性,和远处转移45]。证据指出,减少N-cadherin和增强钙粘蛋白的表达水平是至关重要的标记EMT过程(46]。在这项研究中,表达下调钙粘蛋白和调节N-cadherin增强入侵和迁移能力(23),这表明EMT被提拔,这表明HPV和MNNG提升Het-1A细胞的恶性转化。
总之,恶性转化过程中,HPV&MNNG组合在一起的效果显示细胞增殖能力更强,抗凋亡能力,入侵和迁移能力。
4.2。协同致癌作用的HPV18和MNNG Het-1A通过p62-KEAP1-NRF2细胞信号通路
自噬是一个基本的细胞通路真核生物,维持体内平衡函数,其失衡将导致异常积累的细胞器,甚至肿瘤的发生(47,48]。健康细胞似乎精通自噬来防止恶性转化反应(49]。p62被描述角色扮演多样化的生物从氧化应激和炎症肿瘤发生[50]。p62,自噬的基质蛋白,也被发现在自噬发挥关键的作用[51,52]。在我们的研究中,在cocarcinogenic过程中p62是调节的HPV&MNNG Het-1A细胞,以及mTOR autophagy-related蛋白质的表达和LC3II(图2)。因此,积累p62建议自噬的堵塞。研究表明,自噬调节oncosuppressive相应的影响;致癌蛋白可以抑制自噬(53]。
因此,我们假设p62调节自噬作为Het-1A-HPV-MNNG致癌基因细胞,支持增长、入侵和转移的肿瘤。进一步验证的作用p62恶性转化和MNNG的影响和/或HPV p62,耗尽了p62 Het-1A-HPV-MNNG-35细胞和Het-1A-E6E7细胞成分。首先,在Het-1A-HPV-MNNG-35细胞,抑制p62导致细胞周期阻滞,抑制增长,增加了细胞凋亡率,增加了自噬(图3),这意味着p62基因在恶性转化的过程中扮演着重要的角色。在Het-1A-E6E7细胞(图4(一)),高浓度的MNNG、p62 mTOR, LC3II调节Het-1A-NC细胞进行比较。但p62和mTOR也调节没有MNNG Het-1A-E6E7细胞,表明HPV导致upregulation p62 mTOR。缺乏p62之后,mTOR的活性降低,LC3II和Beclin1的表达增加。因此,mTOR p62表达呈正相关。因此,在我们的研究中,人类乳头瘤病毒可以通过p62激活mTOR信号蛋白,导致自噬障碍,使高危人乳头状瘤病毒逃避清除机制,促进恶性转化的过程。哺乳动物雷帕霉素或机械的目标(mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,形成两种截然不同的复合物名叫mTOR复杂1 (mTORC1)和2 (mTORC2),参与调节细胞生存、细胞生长、细胞代谢、蛋白质合成、和自噬,以及体内平衡(54- - - - - -56]。致癌基因的激活mTOR信号诱发癌症细胞生长所需的几个过程,生存和增殖和显著增加肿瘤细胞的恶性肿瘤54,55]。p62发挥致癌作用可能通过增强mTOR的激活。人乳头状瘤病毒的联合行动和MNNG导致自噬的紊乱,细胞的过度增殖,连续的抗肿瘤能力的弱化。
氧化应激是肿瘤细胞的一个特征,KEAP1-NRF2信号通路是细胞抗氧化过程的中央监管机构(57]。p62 KEAP1-binding域,这可能与NRF2争夺绑定KEAP1,这削弱了KEAP1-mediated NRF2泛素化,导致激活NRF2和促进抗氧化基因的转录58]。此外,p62还可以直接与NRF2异位细胞核,进一步激活下游抗氧化基因的表达抗氧化反应控制的元素(59]。NRF2更多的是释放NRF2-KEAP1复杂氧化应激和逃脱随后的退化和转移到细胞核,激活靶基因的表达60]。
在我们的研究中,抗氧化剂的mRNA表达因素SOD-1, SOD-2, HO-1,和NQO-1降低,然后增加转染代数,和相关的基因的表达趋势符合p62和自噬,HO-1的表达趋势和NQO-1与NRF2是相一致的。NRF2核易位增加MNNG +人乳头状瘤病毒组和MNNG组。p62基因沉默后,NRF2在细胞核的表达明显下调,SOD-1的mRNA水平,SOD-2, NRF2及其下游抗氧化基因HO-1和NQO-1减少,和氧化损伤增加,而抗氧化能力被抑制。机械化、MNNG合作人乳头状瘤病毒诱导自噬流量妥协,然后积累与KEAP1 p62及其互动,提升NRF2核易位。值得注意的是,细胞对氧化应激能力受到p62基因沉默。总的来说,这些发现表明,HPV主体性与MNNG促进细胞恶性转化至少部分通过p62 / KEAP1 / NRF2通路。
4.3。协同HPV18和MNNG Het-1A细胞的激活自噬mTOR / PI3K / AKT途径
畸变的PI3K / AKT信号及其路径组件与肿瘤发生[61年]。它发现,PI3K / AKT / mTOR信号是最重要的细胞内途径之一,调节细胞生长,能动性,生存、新陈代谢,和血管生成62年]。mTOR / PI3K / AKT通路的激活有助于肿瘤的发展(63年]。此外,实验研究证实了肿瘤发生的潜力PI3K信号突变使用转基因小鼠模型(GEMMs) [64年,65年]。裴et al。66年)验证HO-1感应可以调解pharmorubicin阻力通过促进乳腺癌细胞自噬通过PI3K / AKT通路。mTOR / PI3K / AKT通路被发现几乎所有的人类癌症特异表达,如乳腺癌、结肠直肠癌,血液恶性肿瘤,强调针对这个途径的价值作为一个潜在的治疗方向在治疗癌症的67年]。在这项研究中,mTOR / PI3K / AKT途径刺激HPV&MNNG的协同致癌作用过程,和PI3K / AKT通路也有类似的表达趋势LC3II和p62蛋白质。因此,PI3K / AKT信号可能与自噬在Het-1A细胞恶性转化有关。处理后PI3K抑制剂LY294002, PI3K / AKT / mTOR和自噬在Het-1A-HPV-MNNG细胞表达下调,以及抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并削弱了EMT。因此,恶性转化过程中,HPV18和MNNG激活自噬Het-1A细胞加速升值的PI3K / AKT / mTOR通路。
5。结论
综上所述,目前的研究显示,协同效应的MNNG和人乳头状瘤病毒可以促进Het-1A细胞的恶性转化,包括过度的细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加了迁移和入侵,自噬流量增加。进一步发现MNNG&HPV激活P62 / KEAP1 / NRF2信号通路增加抗氧化基因的转录HO-1和NQO-1上调P62表达,增强肿瘤细胞的抗氧化能力,进一步促进了肿瘤的发生和发展。此外,我们阐明MNNG&HPV加速自噬流量通过积极促进增殖和细胞恶性程度调节mTOR / PI3K / AKT通路。
数据可用性
和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
应张原创作品的草案、方法和调查。悦马进行数据管理。曹国伟胡赵和张了验证和可视化。Yuepu Pu writing-review和编辑;音)阴了项目管理、监督和概念化。这个手稿已经阅读和批准所有作者出版和尚未提交,不考虑其他地方出版。
确认
这项研究得到了国家自然科学基金(81872588和81872588号)和东南大学研究生院的科研基础(YBPY2047)。
补充材料
表S1:引物的序列中存在用于这项研究。引物序列描述用于补充表S1。转录水平正常化β肌动蛋白。图S1: bcl - 2 /伯灵顿比Het-1A恶性过程(V +: HPV&MNNG组;V -:人乳头状瘤病毒组;N +: MNNG组;N -:对照组;P10: 10th通道;P20: 20th通道;P35区域:35th通道)。图印地:LC3II / LC3I比35thHet-1A-HPV-MNNG细胞抑制PI3K之后。(补充材料)