新Selenocyanates和培养的小鼠神经元及其影响评价提交氧化应激的合成

摘要

在此，我们报道了新型硒酸盐的合成及其对过氧化氢(H₂O₂)在培养的小鼠神经元中。首先,α亚甲基β-羟基酯是烯丙基溴化物的前体。将生成的溴化物和硒氰酸钠进行反应，以生产所需的硒氰酸盐(3a-f)。接下来我们准备了7天大小鼠( )。H₂O₂(10⁵M)作为氧化应激诱导剂单独或与每种设计的化合物中的一种结合加入培养瓶中。(PhSe)₂用作阳性对照。据进行脂质评估（硫代巴比妥酸反应性物质，4-羟基-2- -壬烯醛，8-异前列烷)，DNA(8-羟基-2 -脱氧鸟苷)和蛋白质(羰基)修饰参数。最后对过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性进行了评价。在这些化合物中，3b、3d和3f表现出最明显的抗氧化活性模式，类似于(PhSe)₂。这些新型芳香硒酸盐有望在最复杂的环境中进行试验在体外研究甚至在临床前的水平。

1.介绍

硒是一种微量元素，被认为是人类和其他哺乳动物所必需的。[1]。这种金属的主要生物学作用与硒蛋白的结合有关，硒蛋白主要参与氧化还原(特别是谷胱甘肽过氧化物酶[GPx, EC 1.11.1.9]和硫氧还蛋白还原酶[EC 1.8.1.9])、甲状腺激素代谢和其他含硒蛋白的生物合成[2，以及在精子发生过程中[3.]。此外，适当补充硒有助于重金属，包括汞和相关化合物[解毒4]。至少在一定程度上，这种效果归因于硒及其有机类似物的显著抗氧化特性[5]。

在这方面，许多论文指出了称为有机硫化合物的合成多功能性[6- - - - - -13]。含硒organochalcogenides似乎是巨大的治疗关联性的，主要是由于这些化合物以模拟天然物质具有抗氧化，抗肿瘤，抗微生物的能力，和抗病毒活性[14- - - - - -20.]。这类药物中最著名的一种叫做Ebselen(图)1），其中介绍的GPx样活性，并已搜索到了一些人类疾病的治疗[21]。关于当前冠状病毒(COVID-19)大流行，文献中刚刚出现了一项非常有趣的研究，其中有机硒化合物Ebselen在浓度为10时抗病毒效果最强μM治疗COVID-19病毒感染的Vero细胞[22]。二苯基二硒化物（（PHSE）₂）是具有GPx的样活性（图另一有机硒化合物1)[23]。

考虑到这些化合物的生物学作用，开发新的高效合成有机塞内酯的途径是一个诱人的研究领域[12,24,25]。因此，作为正在进行的旨在设计新型有机丝内酯和药物化学的额外步骤[26- - - - - -28，本研究报道了新型芳香硒酸盐的合成，包括第二代硫族化合物酯。此外，评估这些化合物对过氧化氢(H₂O₂）在小鼠的神经元的混合培养物中进行的，以提供对它们的生物活性有见地的线索。

2。材料和方法

2.1。合成烯丙基溴的一般方法

5.0 mmol of LiBr was added to a stirred solution of 2.5 mmol ofα亚甲基β-hydroxy esters (Morita-Baylis-Hillman adduct) 1 in 10.0 mL of acetonitrile at 0-5°C, followed by the addition of 6.3 mmol of 96% H₂所以₄。随后，将反应混合物被允许参加室温，并继续搅拌，直到1完全消耗（监视我通过TLC）。将反应混合物用CH稀释₂氯₂(20 mL)，用H连续提取有机相₂O,饱和NaHCO_3.，盐渍后，用硫酸镁干燥₄。减压浓缩有机相，用flash硅胶柱层析(己烷/乙酸乙酯9:1)纯化得到相应的烯丙基溴化物2a-f。(数据S13-S18，FTIR用于补充材料化合物2A-F，PG 11-13）。

2.2。合成丙烯酸硒氰酸酯的一般方法

将聚合溴化物2a-f (1.0 mmol)加入到4.0 mL丙酮/H的搅拌溶液中₂O(4 : 1 )在25℃下加入1.25 mmol KSeCN。搅拌10h后，用CH将最终混合物稀释₂氯₂用H洗涤₂O和盐水。将有机萃取物经硫酸钠干燥₂所以₄、过滤、减压浓缩。所得残基经色谱(己烷/乙酸乙酯9:1)纯化得到相应化合物3a-f。

2.3。甲基(Z()3-phenyl-2) - selenocyanatomethyl丙烯酸酯(3)

收益率96%;一下。72 - 73°C。IR（KBr压）：νmax /厘米¹305 3003 2956 2935 2849 2141 1693 1619 1435 1346 1255 1077 754 4821H NMR (200mhz, CDCl_3.):δ7.88(年代,1 h), 7.59 - -7.36 (m, 5 h), 4.17 (s, 2小时),3.86(年代,3 h)。13C NMR (50mhz, CDCl_3.):δ166.8 143.0 133.7 129.5 129.1 128.8 126.9 102.4 52.5 25.5肛交。计算的C₁₂H₁₁没有₂Se: C, 51.44;H, 3.96;Br, 22.25;N, 5.00;啊,11.42;,28.18。发现:C, 50.53;3.70 H,。(图S1， 1H和13C NMR谱图和图S7，补充材料中化合物3a, pg 2和8的红外光谱分析)。

2.4。甲基(Z2 - (3 - (4-bromophenyl) selenocyanatomethyl)丙烯酸酯(3 b)

收益率86%;一下。72 - 74°C:νmax /厘米¹三十62,2952,2840,2156,1710, 1625, 1487, 1435, 1273, 1198, 1154, 1068, 1008, 808, 503. 1H NMR (400 MHz, CDCl_3.):δ7.82 (s, 1H)， 7.61 (d，J=8.4 Hz, 2H, 7.31 (d， ,2H)， 4.14 (s, 2H)， 3.89 (s, 3H)。13C NMR (101mhz, CDCl_3.):δ166.8 141.9 132.7 132.4 130.8 127.8 124.2 102.4 52.9 25.4肛交。计算的C₁₂H₁₀布尔诺₂Se: C, 40.14;H, 2.81;Br, 22.25;N, 3.90;啊,8.91;,21.99。实测值：C，40.13;H，2.80。(图S2， 1H和13C NMR谱图和图S8，FTIR用于补充材料化合物3b，分别脉冲发生器3和8）。

2.5。甲基(Z基）-3-（2-溴苯基）-2-（selenocyanatomethyl）丙烯酸酯（3c）的

收率98％;白色固体，熔点71.5-73.0℃。IR（KBr压）：νmax /厘米¹3032 2953 2926 2850 2150 1678 1438 1363 1295 1090 758 5861H NMR (400mhz, CDCl_3.):δ7.88 (s, 1H)， 7.66 (dd， ,1.3赫兹,1 h), 7.48 - -7.39 (m, 2 h), 7.31 - -7.26 (m, 1 h), 4.00 (s, 2小时),3.91(年代,3 h)。兆赫,CDCl_3.):δ166.7 142.1 134.5 133.2 130.9 130.0 129.1 127.8 123.9 102.7 52.9 25.5肛交。计算的C₁₂H₁₀布尔诺₂Se: C, 40.14;H, 2.81;Br, 22.25;N, 3.90;啊,8.91;,21.99。发现:C, 40.12;2.78 H,。(图S3， 1H和13C NMR谱图和图S9，补充材料中化合物3c的红外光谱(p4, p9)。

2.6。甲基(Z2 - (3 - (4-chlorophenyl) selenocyanatomethyl)丙烯酸酯(3 d)

收益率94%;白色固体，m.p 73-75℃。IR（KBr压）：νmax /厘米¹3088 2952 2854 2149 1716 1583 1453 1287 1197 1082 7931H NMR (400mhz, CDCl_3.):δ7.84 (s, 1H)， 7.45 (d， ,2H），7.37（d， ,2H)， 4.15 (s, 2H)， 3.88 (s, 3H)。13C NMR (101mhz, CDCl_3.):δ166.8 141.8 135.8 132.2 130.6 129.3 127.7 102.4 52.8 25.4肛交。计算的C₁₂H₁₀ClNO₂Se: C, 45.81;H, 3.20;Cl, 11.27;N, 4.45;啊,10.17;,25.10。发现:C, 45.80;3.18 H,。(图S4， 1H和13C NMR谱图和图S10， FTIR用于补充材料中的化合物3d，分别为pg 5和9)。

2.7。甲基(Z3 - (2,4-dichlorophenyl) 2 - (selenocyanatomethyl)丙烯酸酯(3 e)

收益率89%;白色固体，m.p. 75.0-78.0℃。IR（KBr压）：νmax /厘米¹3088 2952 2854 2149 1716 1583 1435 1287 1167 1082 7631H NMR (400mhz, CDCl_3.):δ7.86 (s, 1H)， 7.50 (d， ,1H），7.41-7.37（M，2H），3.98（S，2H），3.91（S，3H）。13C NMR (101mhz, CDCl_3.):δ166.5, 138.8, 136.3, 135.0, 131.1, 130.8, 130.1, 130.0, 127.7, 102.6, 53.3, 25.4。肛交。计算的C₁₂H₉氯₂没有₂Se: C, 41.29;H, 2.60;Cl, 20.31;N, 4.01;啊,9.17;,22.62。发现:C, 41.31;2.58 H,。(图S5， 1H和13C NMR谱图和图S11，补充材料中化合物3e的红外光谱，分别为pg 6和10)。

2.8。甲基(Z2 - (3 - (4-nitrophenyl) selenocyanatomethyl)丙烯酸酯(3)

收益率95%;黄色固体，m.p 83-84℃。IR（KBr压）：νmax /厘米¹3106 2955 2846 2150 1721 1599 1516 1429 1342 1272 1202 1158 854 7691H NMR (400mhz, CDCl_3.):δ8.32（d， ,2H、7.93 (s, 1H)、7.61 (d， ,2H)， 4.10 (s, 2H)， 3.92 (s, 3H)。13C NMR (101mhz, CDCl_3.):δ166.2，147.9，140.3，140.1，130.5，130.0，124.1，102.1，53.0，24.8。肛交。计算的C₁₂H₁₀N₂O₄Se: C, 44.32;H, 3.10;N, 8.61;啊,19.68;,24.28。发现:C, 44.29;3.11 H,。(图S6， 1H和13C NMR谱图和图S12，补充材料中化合物3f的红外光谱，pg 7和10)。

2.9。动物

三十六、七天大鼠(亩骶;从南部的圣卡塔琳娜州大学（UNESC）中央动物之家获得BALB / C株）。接受动物自由采食水和食物，并保留在菌落间带 温度和12小时的明暗循环。实验组:阳性对照(培养基和样品);阴性对照或胁迫(培养基、样品和H₂O₂);每组检测3a-f化合物(培养基、样品、H)₂O₂，以及相应的组合-七组);每组4只动物。小鼠在没有麻醉的情况下被斩首，打开头骨，整个大脑被切除和清洁。所有实验步骤都经过了联合国esc伦理委员会的批准(方案# 012/2016-1)。

2.10。细胞培养和过氧化氢挑战

安乐死后，动物的大脑立即被放置在一个有恒定空气流量和紫外线照明的房间中进行孵化。两个大脑半球的细胞在磷酸盐缓冲生理盐水(0.9%)中分离，并以10的密度镀膜⁵细胞/平方厘米²在75厘米²培养瓶中添加了10%胎牛血清和20%抗生素的改良Eagle 's培养基。H₂O₂(10⁵根据文献，M)作为氧化应激诱导剂随后被加入[29]。每个3a-f化合物也加入到培养基中，目标是达到10μ这项研究是基于Posser和同事们的研究。23]。(PhSe)₂，具有类似gpx的活性，被用作阳性对照[23]。（将板保持在二氧化碳CO₂在24小时期间）培养箱内。此后，样品储存在-80℃用于后续的分析。

2.11。脂质过氧化的评估

硫代巴比土酸反应性物质的定量（TBARS）通过参考进行的丙二醛（MDA）的内容的基础上[三十]。简单地说,样品(200μL aliquot) were mixed with 1 mL 10% trichloroacetic acid and 1 mL 0.67% thiobarbituric acid and heated in boiling water during 30 minutes. MDA equivalents absorbance was measured at ,以1,1,3,3-四甲氧基丙烷为标准。数据以MDA当量(nmol/mg蛋白)表示。

使用Cell Biolabs公司(Cell Biolabs, Inc.， San Diego, California, USA)的检测试剂盒测定4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)含量。使用ACE™Competitive EIAs试剂盒(Cayman)测定8-异前列腺素(8-ISO)水平，8-异前列腺素-乙酰胆碱酯酶(EC 3.1.1.7)偶联作为示踪剂，8-异前列腺素特异性兔抗血清。根据Kimura等人的免疫分析法，对蛋白质中4-HNE与赖氨酸、组氨酸或半胱氨酸残基的加合物进行了定量分析[31]。

2.12。DNA和蛋白质修饰参数

使用PureGenome™现场组织DNA试剂盒(EMD Millipore, Burlington, Massachusetts, USA)从细胞中分离细胞核DNA。使用NanoDrop (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)测定提取物中的DNA含量。8-hydroxy-2水平 -脱氧鸟苷(8-OHdG)， 2氧化生成的化合物 -使用OxiSelect™氧化DNA损伤ELISA试剂盒(Cell Biolabs, Inc.， San Diego, USA)检测脱氧鸟苷残留。

根据Levine和同事描述的方法，通过羰基含量测定来估算蛋白质氧化损伤[32]。在样品(400)中加入20%的三氯乙酸进行蛋白质沉淀μ然后将其溶解在二苯肼(DNPH)溶液中。数据以nmol/mg蛋白表示。测定样品的吸光度 。

2.13。过氧化氢酶活性

过氧化氢酶(CAT);(EC 1.11.1.6)活性评估基于在体外H₂O₂按标准化方法分解[33]。脑组织在50 mM磷酸缓冲液(pH 7.0)中超声处理，所得悬浮液经3000 g离心10分钟。一个20μ980增加了样品μL底物混合物，含0.3 mL H₂O₂在50 mL 0.05 M磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中。记录初始和最终吸光度值 分别在1分钟和6分钟后。在相同的实验条件下，使用纯化CAT (Sigma-Aldrich，圣路易斯，密苏里州，美国)建立标准曲线。

2.14。超氧化物歧化酶活性

超氧化物歧化酶(SOD)的测定EC 1.15.1.1)的活性是基于其自发抑制肾上腺素氧化为肾上腺素红的能力[34]。碳酸钠缓冲液(2.78 mL;0.05毫米;pH值10.2),100年μL EDTA (1.0 mM), and 20 μL上清或蔗糖溶液(空白)30℃孵育45分钟。此后，反应开始于加100μL肾上腺素溶液(9.0 mM)。记录吸光度的变化 8分钟。在整个检测过程中，温度保持在30℃。一个单位的SOD产生50%的肾上腺素自氧化。数据以单位/mg蛋白表示。

2.15。样品中蛋白质含量的测定

生化分析与样品中蛋白质含量相关，进行归一化。一个10μ每个样品都在这个程序中使用。测量是根据彼得森的方法进行的[35]。牛血清白蛋白用作标准。

2.16。统计分析

数据表示为 (美国)。组间差异采用双因素方差分析(ANOVA)及Tukey方差分析事后测试。用于比较的软件是统计软件包社会科学（SPSS）20（IBM，纽约Armonk，USA）。差异被定为在统计上显著 。

3.结果

3.1。硒酸盐的合成(3)

α亚甲基-β采用Morita-Baylis-Hillman反应制备了适于有机合成的-羟基酯。这些化合物是合成几种物质的基础，它们把羟基转化为醋酸盐、溴化物和硫氰酸盐，在许多有用的合成方法中充当受体。因此，烯丙基溴化物(2)根据Ferreira和同事描述的方法得到[36]。在这个过程中，溴化锂(LiBr)和H₂所以₄加入先前搅拌过的贝里斯-希尔曼加合物溶液(即α亚甲基β羟基酯，1）在乙腈中，在0-5℃（表1)。将反应混合物搅拌直到起始材料的消耗。该反应，二氯甲烷的完成（CH后₂氯₂）加入，并用水洗涤，用碳酸氢钠饱和碳酸氢钠（NaHCO_3.）和盐水洗涤，用硫酸镁干燥（MgSO₄)、过滤、减压浓缩。所得残留物经柱层析纯化得到相应的2-溴甲基-2-烯烃酸酯2。

在下一步骤中进行反应，反应进行涉及所生成的2和硒氰酸钾（KSeCN）以产生所需的烯丙基selenocyanates [37]。简单地说，这个过程是通过溴与丙酮中的KSeCN的亲核置换，而不使用外部碱。具体来说，将相应的溴化物(2)与1.25摩尔等的KSeCN在25℃的丙酮中混合10 min，可以得到芳香取代的烯丙基硒酸盐(3)。以丙酮为洗脱剂，在硅胶短塞子中纯化得到相应的产物(3)(见表)1)。Assignment of the organoselenium structures (3a–f) was based on the characteristic signals for the selenocyanate (SeCN) functional group at infrared (IR; sharp band at 2140–2157 cm¹）和碳-13核磁共振（¹³C NMR, 102ppm)所有纯化产物的光谱(补充材料)。

3.2。不同硒酸盐(3)对H诱导的脂质过氧化的影响₂O₂

首先测量样品中的tbar水平(图)图2（a）)。与预期的一样，只接受H的细胞培养中tbar含量显著增加₂O₂(压力组)，而对照组( )。此外，与对照组相比，在氧化应激和接受化合物3a的细胞中检测到MDA水平的升高( )。相比之下，添加化合物3b、化合物3c、化合物3d、化合物3e、化合物3f或(PhSe)₂到培养基中的细胞显著降低TBARS水平暴露至H₂O₂相比，从应力组的培养物（ )。

评估样品脂质过氧化的下一步是测定4-HNE含量(图)图2（b）)。在细胞培养物中检测到在该参数显著增加暴露至H₂O₂与对照细胞(H₂O₂: ;化合物3: ;化合物3 c: )。然而，在细胞4- HNE水平暴露至H₂O₂其介质接收化合物3b，化合物3d，和化合物3F或（PHSE）₂与应激组相比，表现出下降趋势(化合物3b: ;化合物3 d: ;化合物3 e: ;复合3F： ;(PhSe)₂: )。

最后，8-ISO含量进行测定，以提供关于由H引起的脂质过氧化作用进一步洞察₂O₂(图图2（c）)。在暴露于H的细胞中，这种标记物的水平显著升高₂O₂单独或与化合物3a、化合物3c或化合物3e结合，与对照细胞(H₂O₂: ;化合物3: ;化合物3 c: ;化合物3 e: )。相比之下，添加化合物3b、化合物3d、化合物3f或(PhSe)₂进入H暴露的细胞培养基₂O₂与在无硒氰酸盐培养基中进行氧化处理的细胞相比，8-ISO含量降低(化合物3b: ;化合物3 d: ;复合3F： ;(PhSe)₂: )。

3.3。不同硒酸盐对H的影响₂O₂-对DNA和蛋白质的氧化损伤

在目前的贡献中，DNA损伤是在2的基础上估计的 -脱氧鸟苷残基氧化成8-OHdG。在接受H的细胞中，这种副产品的水平有所增加₂O₂单独或与化合物3a或化合物3c结合，对照细胞(H₂O₂: ;化合物3: ;化合物3 c: )。然而，与应激组细胞培养相比，在接受氧化挑战但在其培养基中分别接受剩余的一种硒酸盐的细胞中检测到8-OHdG含量降低(化合物3b: ;化合物3 d: ;化合物3 e: ;复合3F： ;(PhSe)₂: )。数字3(一个)描述细胞培养中8-OHdG水平测定的数据。

此外，细胞中羰基含量的增加——这是与蛋白质损伤相关的一个重要参数₂O₂单独或与化合物3a或化合物3c结合，对照细胞(H₂O₂: ;化合物3: ;化合物3 c: )。相比之下，添加化合物3b、化合物3d、化合物3e、化合物3f或(PhSe)₂细胞培养基暴露于H₂O₂与未添加硒氰酸盐的细胞培养液相比(化合物3b: ;化合物3 d: ;化合物3 e: ;复合3F： ;(PhSe)₂: )。数字3 (b)显示了测定培养物中羰基含量的结果。

3.4。合成化合物对抗氧化酶活性的影响

数字4描述了硒酸盐(3)对CAT活性的影响。H引起的氧化挑战₂O₂产生在该参数一个显著增加（ ,数字4(一))。与只接收H的神经元相比₂O₂，在所有添加了有机铯化合物的培养物中均检测到CAT活性下降(图)4(一); )。相比之下，在对照组培养和接受H的神经元之间SOD活性没有显著差异₂O₂(图4 (b); )。有趣的是，在加入化合物3a，化合物3b，化合物3c，化合物3d，或（PHSE）₂SOD活性的上调引起，因为与对照相比，或H₂O₂培养物（图4 (b); )。将化合物3e或化合物3f加入培养基中，没有观察到类似的效果(图)4 (b); )。

4。讨论

在接受镉的小鼠肝脏中，给药结构中含有硒氰酸酯功能基团的化合物与抑制脂质过氧化和增强抗氧化酶防御显著相关[38]。此外，抗氧化活性至少与有机铯化合物的部分治疗特性有关[39,40]。这种效应在细胞培养的研究中得到了进一步证实[41- - - - - -43]及动物物种，例如老鼠[44,45,鱼46),果蝇(47]，和秀丽隐杆线虫(48]。

本研究报道了H对细胞的氧化作用₂O₂在培养基中含有化合物3b，化合物3c，化合物3d，3e的化合物，化合物3F，或对照化合物（PHSE）₂表现出TBARS的水​​平比在类似条件下但不加入selenocyanates的细胞更低;化合物3a是唯一未能防止由H引起该氧化修饰₂O₂。此外，所有化合物都未能阻止H引起的4-HNE水平的增加₂O₂。然而，这种趋势在这样的参数减少在化合物3b，化合物3d，化合物3F，或存在进行氧化挑战细胞中观察到（PHSE）₂。相对于8-ISO内容，化合物3a，化合物3c，或化合物3E不能有效异常标记水平正常化在细胞中检测到助氧化剂培养环境。化合物3b，化合物3d，化合物3F，或存在（PHSE）₂在培养基中协同降低8-ISO水平在氧化应激下的细胞。此外，暴露于H的细胞中8-OHdG水平升高₂O₂当细胞接受化合物3b、化合物3d、化合物3e、化合物3f或(PhSe)时，发现该标记物含量下降。₂。同样，在接收H后的细胞中，羰基含量更高₂O₂单独或与化合物3a或化合物3c结合;相比之下，化合物3b、化合物3d、化合物3e、化合物3f或(PhSe)的存在₂在介质中引发了该参数的显著降低。所有合成的化合物都表明CAT活性显著衰减，而4个化合物(化合物3a-d)和(PhSe)₂将SOD活性添加到H暴露培养神经元中产生上调₂O₂。

因此，化合物3b、化合物3d和化合物3f表现出了最有利的抗氧化特性，可能对活性氧具有更高的清除活性。自(PhSe)₂呈现gpx类抗氧化活性，本研究借鉴gpx类抗氧化活性[23]，三个上述化合物可以部分作用模仿这种酶的活性。在另一方面，化合物3a和化合物3c是具有最差性能的物质。化合物3E，反过来，显示出适度的抗氧化剂分布，由于这样的事实的该化合物4-HNE和8-ISO的水平没有抵消改变。连接到结合到五碳分支带有硒氰酸基，硝基或溴官能团在芳环关于R基团对和氯基或者没有定位可能是关键的抗氧化配置的分子设计这样的R基团。因此，与溴化合于或者没有或氯基在对取向显示出较弱的抗氧化活性，这证实了在每个硒的活性的R基团的位置的重要性。事实上，在selenocyanates最小的结构改变可以严格影响它们的抗氧化活性，如在本文中所示进行通过Ibrahim和同事[40]。精确的机制支撑明显差异如此相似的抗氧化化合物的结构是未知的,但他们可能是由实验观察表明溴是一个较弱的官能团撤回电子,氯或硝基组相比,保持更高的电子密度在selenocyanate集团(49]。尽管(PhSe)₂并不是一种硒氰酸盐，其抗氧化活性可能与苯硒基有关，这是Vogt及其同事最近描述的[50作为7-氯-4-苯基-亚硒基喹啉抗氧化作用的关键。

双（2-羟基苯基）二硒化物等二苯基diselenides具有显着的自由基捕获活性，预防由氧化不平衡[引起在蛋白质羰基和脂质氢过氧化物的含量的增加51]。参考化合物(PhSe)₂，已被测试用于处理以氧化干扰为特征的几种病理状态。为了说明这一点，该化合物的抗病毒特性与它在感染2型病毒的小鼠中的抗氧化作用有关单纯疱疹Sartori和同事的论文中的病毒[52]。此抗氧化活性，其特征在于在MDA含量和在本研究评估CAT和SOD抑制参数减轻的降低。此外，（PHSE）₂研究表明，锰中毒可抵消总硫醇含量和抗氧化酶活性的降低以及活性氧和tbar的释放果蝇(47]。该化合物还能有效缓解蛋白和脂质氧化修饰，并协同使磺右旋糖酐诱导的大鼠结肠中的CAT和SOD活性正常化[53]。此外，（PHSE）₂小鼠脾脏活性氧水平明显降低，炎症反应减轻刚地弓形虫(54]。因此，我们对效果的调查结果（PHSE）₂证实了先前报道的抗氧化活性。

由于化合物3b、化合物3d和化合物3f具有显著的抗氧化作用，而且抗氧化活性被证明有助于有机铯化合物的治疗特性[40]，可以预期，这些新化合物可以在病理情况下，其中的氧化应激是强烈牵连进行实验性研究是有前途。我们不能确定参与这一抗氧化作用的确切机制。作为用于描述可能的方法可以包括在细胞培养基中的活性氧类物质的直接俘获（和最终的分解），模仿抗氧化酶的活性，（PHSE）₂和Ebselen。另一方面，化合物可以间接作用，触发旨在废除氧化应激的信号级联。事实上，一些抗氧化剂强烈激活一种参与氧化应激反应和细胞存活的信号分子，称为核因子红细胞2相关因子2 (Nrf2) [55]。例如，补充抗氧化剂p, p -甲氧基二苯二烯醚参与了实验性疼痛-抑郁双配对大鼠额叶皮层Nrf2激活[44]。3-Selena-1-dethiacephem和(PhSe)₂也参与Nrf2通路激活，有助于这些有机铯化合物的抗氧化作用[56,57]。因此，在本研究中不能排除新型硒酸盐的Nrf2激活，这可能证实了报道的抗氧化特性。

值得注意的是，硒酸盐已被测试用于治疗氧化应激引起的疾病，包括癌症[58]。在这方面，补充1,4-苯基双(亚甲基)亚硒酸盐(p-XSC)可以消除亚硝胺引发的肿瘤发生过程，增强小鼠肺的抗氧化防御能力[59]。此外，的8-OHdG水平，在本贡献测量的参数，提供癌症风险的估计。最近，吴和他的同事[60与健康受试者相比，癌症患者的白细胞中8-OHdG含量显著增加。关于亚硒酸盐在降低DNA氧化修饰中的潜在作用(估计为8-OHdG水平)的证据尚缺乏。尽管如此,p-XSC物还显示减少大鼠乳腺的8-OHdG水平，2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑灌胃[4,5-后6小时b吡啶-一种著名的致癌物质[61,62]。其他有机硒化合物能降低动物的8-OHdG含量（PHSE）₂（5 μ(mol/kg体重)，在口服甲基汞的小鼠大脑中可见，伴有脑源性神经营养因子水平下降、氧化障碍和大脑皮层的组织学改变[63]。Selenocyanates还可以减少通过某些化合物诱导的基因毒性在活的有机体内。举例来说，口服二苯甲基亚硒酸盐可显著减少急性四氯化碳摄入小鼠肝细胞的DNA损伤[64]。因此，化合物3b、化合物3d、化合物3e、化合物3f具有潜在的抗基因毒活性，其抑制H诱导的8-OHdG含量的增加₂O₂在细胞培养物。

5.结论

总之，我们描述了使用标准化和广泛使用的方法合成新型硒酸盐(3a-f)和临床前抗氧化评估。对所有硒酸盐的体外抗氧化能力进行了评价。化合物3b、化合物3d和化合物3f在H暴露培养小鼠神经元中表现出显著活性₂O₂，具有图案要求相似（PHSE）₂。的CAT和SOD活性的测量提供了进一步的证据，大部分合成的化合物的被赋予标记的抗氧化活性。我们没有使用各种浓度的各化合物在培养旨在确定具有最小潜在不良事件（或一个剂量 - 响应曲线），这是目前的工作中的一个限制的最佳值。我们使用这些有前途的selenocyanates将为他们在最复杂的病理实验方案中使用的和潜在的抗氧化药物具有治疗性质的新平台的方式争论的体外研究进一步。

数据可用性

支持本研究结果的数据可从通讯作者处获得。

信息披露

目前的一些工作的初步结果是，在第42届巴西化学学会-2019，若因维利-SC，巴西的年会海报节期间提出。

利益冲突

作者声明，本论文的发表不存在任何利益冲突。

作者的贡献

贾马尔·拉菲克，蒂亚戈E. A. FRIZON，何塞H. Cararo，Sumbal萨巴，费利佩DAL-Pizzol和萨米拉S. Valvassori构思项目和撰写文章。蒂亚戈E. A. FRIZON，Sumbal萨巴和贾马尔拉菲克执行的合成和表征分析（NMR，FTIR，HRMS）。Tairine皮门特尔和Hugo德C.布拉加执行图3a-f的纯化。古斯塔沃C. DAL-蓬，莫妮克米歇尔斯，菲利普DAL-Pizzol，和萨米拉S. Valvassori进行生物学评价。

致谢

我们感谢来自“提高高等教育人才协调(CAPES)”(巴西)-财务代码001和“国家科学和技术发展委员会(CNPq)”(巴西)的财政支持。Jamal Rafique感谢CNPq Universal(433896/2018-3)和“南马托格罗索联邦大学”(MS，巴西)的资助。我们也认可“圣卡塔琳娜州立研究和创新支持基金会(FAPESC) (2019TR1055)”(SC，巴西)、“南圣卡塔琳娜大学(UNESC)”(SC，巴西)和“圣卡塔琳娜联邦大学(UFSC)”(SC，巴西)。转化精神病学实验室(巴西)是国家分子医学研究所(INCT-MM)的中心之一，也是圣卡塔琳娜应用神经科学卓越中心(NENASC)的成员之一。其研究得到CAPES、CNPq、FAPESC、思想学院以及联合国教科文组织(巴西)。作者也承认CEBIME (Laboratorio Central de Biologia Molecular Estrutural)的HRMS分析。

补充材料

图S1:核磁共振光谱:(a) CDCl中1H NMR (200mhz)_3.CDCl中的13C NMR (50 MHz)_3.化合物3。图S2:核磁共振光谱:(a) CDCl中1H NMR (300 MHz)_3.CDCl中13C NMR (101 MHz)_3.对于化合物3b。数字S3:Nuclear Magnetic Resonance Spectra: (a) 1H NMR (400 MHz) in CDCl_3.CDCl中13C NMR (101 MHz)_3.化合物3 c。图S4:核磁共振光谱:(a) CDCl的1H NMR (300 MHz)_3.CDCl中13C NMR (100 MHz)_3.对于化合物3d上。数字S5:Nuclear Magnetic Resonance Spectra: (a) 1H NMR (400 MHz) in CDCl_3.CDCl中13C NMR (101 MHz)_3.化合物3 e。图S6:核磁共振光谱:(a) CDCl3的1H NMR (400 MHz)和(b) CDCl的13C NMR (101 MHz)_3.化合物3 f。图S7:化合物3a的红外光谱。图S8:化合物3b的红外光谱。图S9:化合物3c的红外光谱。图S10:化合物3d的红外光谱。图S11:化合物3e的红外光谱。图S12:化合物3f的红外光谱。图S13:起始材料2a的红外光谱。图S14:起始材料2b的红外光谱。图S15:原料2c的红外光谱。 Figure S16: infrared spectra of starting material 2d. Figure S17: infrared spectra of starting material 2e. Figure S18: infrared spectra of starting material 2f.(补充材料)

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版权

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