黄白搽剂加速伤口愈合通过激活Nrf2信号在糖尿病

文摘

糖尿病的严重并发症,愈合的皮肤溃疡导致高死亡率在糖尿病患者和残疾。然而,有限的疗法在管理糖尿病伤口。在这项研究中,RNA-seq技术被用来系统地探讨黄白的影响(HB)搽剂、中药,对链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病伤口。HB搽剂显著加速伤口关闭和增强在糖尿病大鼠,细胞外基质的生成和氧化应激被确定在伤口愈合HB-mediated发挥至关重要的作用。重要的是,HB搽剂激活核因子erythroid-derived 2 2 (Nrf2)及其下游抗氧化基因(如基因参与谷胱甘肽系统、硫氧还蛋白系统,和GAPDH代以及其他抗氧化基因),抑制氧化损伤和细胞凋亡。通过将药物靶点的HB搽剂与Nrf2及其下游基因,54组件HB搽剂筛选出来,还有很大一部分是来自黄柏和连翘suspensa。此外,HB搽剂增强TGF -β1和MMP9水平降低,加速伤口愈合的糖尿病。的在体外实验显示,HB促进细胞增殖和抑制氧化损伤在高glucose-induced HaCaT细胞。我们的发现为糖尿病的治疗提供了实验证据与HB伤口,澄清了HB的潜在机制,改善我们的理解糖尿病伤口愈合。

1。介绍

慢性伤口愈合是一个严重的糖尿病并发症,导致严重的糖尿病发病率和死亡率的人口和带来了巨大的社会和经济负担(这个词1,2]。仅在美国,费用高达130亿美元每年治疗糖尿病伤口。与典型的凝固顺序出现的生物过程,炎症扩散,在正常组织重构,伤口愈合的正常发展是糖尿病、干扰和延迟导致长期的伤口不愈合3,4]。传统治疗糖尿病伤口只有有效的管理在一定程度上,而大量的糖尿病伤口依然存在,恶化,并导致截肢(5]。值得注意的是,降低糖尿病伤口愈合的效率通常是伴随着血液供应减少,延迟细胞外基质营业额,减少伤口收缩,反复感染,慢性炎症,阻碍伤口愈合(4,6]。因此,迫切需要开发一个有效的疗法治疗糖尿病伤口。

氧化应激中起着至关重要的作用在阻止糖尿病伤口愈合的过程(7,8]。氧化应激在糖尿病伤口的特点是明显升高活性氧(ROS)水平,由于增加活性氧生成途径和减少ROS清除防御(9]。过度繁殖ROS糖尿病损害不同脂质等大分子蛋白质和DNA双链,最终影响伤口愈合。适当的氧化应激已经证明了细胞外基质(ECM)一代受益,而高活性氧水平妨碍正常的ECM的合成和严重损坏现有ECM (10,11]。例如,H₂O₂可以破坏组织生长,尤其是胶原蛋白的生产,从而防止伤口关闭(12]。此外,TGF -βECM生产1信号是一个重要的信号通路,可以干预过度繁殖ROS。重要的是,高活性氧水平促进代的基质金属蛋白酶(MMPs),进而影响ECM重塑(13]。因此,针对氧化应激可能是一个潜在的有效治疗糖尿病伤口愈合。

越来越多的研究人员展示了中药(TCM)是必不可少的治疗各种疾病的演讲(14,15]。丰富和健壮的证据积累随着时间的推移,中医是有效的用于糖尿病并发症(16]。黄白搽剂(HB)是一个标准化的规定用于伤口药品临床管理和由黄柏、连翘suspensa,金银花的研究。,蒲公英mongolicum手。-Mazz,蜈蚣科(17]。HB搽剂的疗效观察伤口管理,包括糖尿病溃疡愈合的(18,19]。这些研究表明,HB搽剂可以降低年龄和炎症因素如il - 1β同时增加的分泌生长因子(20.]。然而,HB在促进糖尿病伤口愈合的机制仍不清楚。在这项研究中,HB对糖尿病伤口愈合的影响评价STZ-induced iabetic伤口和高glucose-induced细胞模型,并使用RNA-seq技术机制是系统地调查。

2。材料和方法

2.1。材料

链脲霉素(STZ SigmaS0130)和4 ,从Sigma-Aldrich 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)购买。黄白搽剂(批号:18010111)请提供山东Hanfang药业有限公司有限公司(中医特点:Z10950097)。重组人表皮生长因子外用导数(rhEGF)从深圳购买Huashengyuan基因工程发展有限公司有限公司的抗体用于这项研究如下:Ki67 (ab92742) 8-OHdG (sc - 66036), Nrf2 (ab137550) NQO1 (ab28947)裂解半胱天冬酶3 (CST, 9664年代),TGF -β1 (ab92486),山羊anti-mouse免疫球蛋白(H + L)(合杰克逊,115-035-003),和山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L)(杰克逊,111-035-003)。A003丙二醛(MDA)是购自南京建成生物工程研究所。MMP9的ELISA试剂盒(dy - 0075)和8-OHdG (dy - 0223)从影片获得测试有限公司有限公司细胞计数Kit-8 (CCK-8)包从Dongren获得化学科技有限公司有限公司的丙二醛ROS (S0033)及谷胱甘肽(A119)从Beyotime购买生物技术和南京建成生物工程研究所,分别。

2.2。在活的有机体内动物研究

男性Sprague-Dawley老鼠(170 - 200克)是购自北京大学健康科学中心实验动物中心,北京,中国((证书号SCXK (Jing) 2009 - 0017))。所有程序都按照规定进行动物保健和使用委员会发表的中药学的研究所,中国中医科学院。老鼠被安置在12 h光/暗周期设备与控制温度和保持免费的水和食物。链脲霉素(STZ 60毫克/公斤,i.p)。在柠檬酸钠缓冲(pH值4.5)被用来生成糖尿病模型根据先前的报道(21]。空腹血糖水平(备受)注射STZ后评估1和2周。老鼠在备受超过16.7更易与包括下列实验。控制动物收到同样体积的柠檬酸钠缓冲(pH值4.5)。STZ诱导两周后,大鼠与戊巴比妥钠麻醉(50毫克/公斤,腹腔内注射,i.p)。然后接受全层伤口。两个伤口直径2厘米的老鼠。老鼠被随机分配到不同的组接受生理盐水,低剂量的黄白搽剂(STZ + HB-L,相同体积的HB +相同体积的生理盐水,2毫升/天,局部),高剂量的黄白搽剂STZ + HB-H(原始解决方案,2毫升/天,局部),或rhEGF (4000 IU / ,局部),直到研究结束。第一个三天伤口手术后,伤口覆盖双层无菌纱布来减少外部刺激和每日更换。伤口拍摄1、6、9和13天后手术伤口。伤口关闭照片的分析计算,分析了使用ImageJ伤口面积从原来的伤口面积的百分比。13天后,皮肤组织收集,其中一半是组织学石蜡包埋,另外一半被用于免疫印迹、ELISA和其他相关实验。

2.3。在体外细胞实验

人类永生的角化细胞(HaCaT)从国家基础设施的购买细胞株用于我们的资源在体外实验。短暂,HaCaT细胞与装有DMEM培养基培养(美国Gibco)和葡萄糖(1 g / L, LG),胎牛血清(10% v / v的边后卫)和青霉素和链霉素(100μ在37°C g / mL),刺激HaCaT细胞培养基含有4.5 g / L d -葡萄糖DMEM (HG) 48小时用于慢性高血糖的细胞模型。聚维酮碘和槲皮素从湖北Ketian药业有限公司,购买食品和药物控制有限公司和国家机构,分别。首先,HaCaT细胞治疗各种浓度的HB,槲皮素,和聚维酮碘,分别为48小时搜索安全浓度。评价治疗效果,细胞治疗与HG介质和药物如HB(1/50和1/5000,稀释),槲皮素(1.5625和6.25μ米)和聚维酮碘(0.00001%和0.001%,M / v)同时检测前48小时。CCK-8用于检测细胞生存能力与标(美国分子设备)。

2.4。丙二醛的测定,谷胱甘肽、ROS 8-OHdG, MMP9

根据生产丙二醛(MDA)检测仪器,采用可见分光光度计721 g(上海精密科学仪器有限公司)。谷胱甘肽和ROS水平也是根据他们的执行指令使用标(美国分子设备)。皮肤组织的蛋白质提取用于MMP9的检测和8-OHdG使用商用设备。短暂的,盘子是固定化与特定的抗体(MMP9或8-OHdG)和孵化蛋白质样品,紧随其后的是二次抗体结合辣根过氧化物酶。认为测量进行北京- 9602 g酶标记分析仪。

2.5。西方墨点法

皮肤组织收割,根据指令的执行和蛋白质提取Beyotime蛋白质分析工具包(P0013,南京,中国)。分离后10% sds - page (P0014,中国),样本的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜(微孔,IPVH00010),这是阻止与牛血清白蛋白(BSA)。之后,主要抗体特定Nrf2 (ab137550)或NQO1 (ab28947)添加到膜和孵化24小时在4°C。第二抗体山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L)加载(杰克逊,111-035-003),和蛋白质检测的信号扫描测密度术。

2.6。组织学和免疫荧光染色

厚度的石蜡组织切片幻灯片5μm是用于组织学和免疫荧光染色。deparaffinized后,幻灯片被苏木精和伊红染色(他)和马森的指令后,三色的污点。免疫荧光(如果)染色,部分被5% BSA (m / v),后permeabilized Triton x - 100的0.5%。主要抗体是在一夜之间加载并保持在4°C。然后Alexa萤石488 -和Alexa萤石647 -共轭二次抗体被加载在室温下1 h。细胞核是沾染了4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)。使用lsm - 880共焦显微镜图像可视化(卡尔蔡司、从、德国)。和实时胶原蛋白生长评价进行了使用双光子显微镜(奥林巴斯FV1000) 6和13天后伤口的一代。

2.7。调查和分析差异表达基因被RNA-Seq技术

皮肤组织是收获,用总RNA分离试剂盒试剂(猫# 15596 - 018,生活技术,美国)后指令。RNA的完整性与RNA量化纳米6000试验装备使用生物分析仪2100系统(安捷伦科技、钙、美国)。RNA (1μg)每个样本用于以下图书馆建设。RNA序列执行根据先前的研究[15]。简而言之,NEBNext®超™RNA图书馆准备装备应用于生产序列库Illumina公司®(美国内)。首先,净化的信使RNA是由使用poly-T oligo-grafted磁珠之前生成RNA碎片。之后,通过使用M-MuLV合成第一链cDNA逆转录酶(核糖核酸酶H)和随机六聚体底漆。第二个链互补脱氧核糖核酸和核糖核酸酶合成H和DNA聚合酶i的浓缩cDNA模板后,进行PCR结适配器和腺苷酸的3结束在DNA片段。净化后的PCR结果,图书馆质量评估,样本的聚类进行TruSeq PE150集群装备v3-cBot-HS (Illumia)和芝加哥期货交易所集群生成系统。最后,图书馆的序列是由使用一个Illumina公司HiSeq 4000平台代paired-end读取150个基点。Novogene生物信息学技术有限公司(中国,北京)做了测序实验。

老鼠参考基因组(合奏释放91)申请成绩单装配和量化。读取计算的数字是HTseq v0.6.1映射到每一个基因。基因表达是通过评估每千碱基的片段数量记录序列规范化,每百万碱基对序列和表达为FPKM。差异表达的基因与磨边机软件计算。相关的原始数据HB-mediated保护STZ-induced糖尿病伤口被上传https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/PRJNA532974(SRP193129)。差异表达的基因识别通过ClueGO RNA-seq进行了分析。和网络“components-drug targets-differentially表达基因”是由Cytoscape v3.4.0。(22]。短暂,乙肝的药物靶点搽剂是通过BATMAN-TCM,差异表达基因和下游Nrf2和Nfe2l2相关药物靶点通过字符串到屏幕相关药物靶点,和网络构建通过Cytoscape v3.4.0。

2.8。统计分析

数据分析使用单向方差分析和图基事后测试通过SPSS软件,和数据了 (标准差)。^# 与反对或LG组相比, 与STZ或HG组被认为是统计学意义。

3所示。结果

3.1。HB搽剂加速伤口关闭STZ-Induced糖尿病大鼠

HB搽剂对糖尿病伤口愈合的影响是通过调查评估伤口关闭和组织学染色。在数据显示1 (b)和1 (c),伤口关闭STZ组低于对照组。低收入和高剂量乙肝效果增加伤口闭合的STZ + rhEGF集团STZ-induced糖尿病伤口,但不能促进伤口愈合的非糖尿病的老鼠,直到术后13天。此外,HB搽剂和染色rhEGF治疗大鼠表现出强于STZ组的马森他染色,染色(图所示1 (d)),表明改进的ECM合成和胶原蛋白生产HB和rhEGF治疗。这些结果表明,乙肝治疗促进伤口愈合STZ-induced糖尿病大鼠。

3.2。HB-Mediated伤口愈合的机制是系统地调查RNA-Seq技术

底层机制,揭示RNA-seq技术应用于系统地研究各种治疗后的基因表达。与控制,有4088调节和4381 STZ组中表达下调的基因。3250 HB搽剂显著调节基因和基因表达下调3301年相比STZ组(图2(一个))。的基因模式STZ +乙肝组更类似于对照组,而不是STZ组(图2 (b))。此外,STZ之间的DEs和控制被浓缩进过多术语包括“氧化应激反应,”“氧化应激细胞死亡反应”,“细胞骨架组织的监管,”“细胞死亡,”“凋亡信号通路,”等等(图3,)。然而,皮肤与生长有关的术语如“皮肤发展”,“调节细胞外基质的组织,”“结缔组织发展”和“上皮细胞增殖”乙肝治疗后观察,表明乙肝治疗改善伤口愈合STZ-induced糖尿病模型。重要的是,氧化应激相关术语如“活性氧代谢过程”和“氧化应激反应和细胞移民相关术语如“积极的监管运动”和“上皮细胞迁移”也发现STZ +乙肝组。这些数据表明氧化应激和细胞外基质的分泌可能在HB-mediated伤口愈合的重要因素。

3.3。HB搽剂抑制氧化损伤和细胞凋亡在STZ-Induced糖尿病大鼠

验证HB糖尿病大鼠的抗氧化能力,MDA和8-OHdG相应测量。所显示的图4(一),增加氧化产品,如MDA和8-OHdG STZ组中观察到。然而,增加MDA和8-OHdG STZ组降低了HB和rhEGF治疗。免疫荧光染色也证实了低染色的8-OHdG STZ +乙肝组比STZ组。然而,对照组之间没有发现意义和体质+乙肝组(图4 (b))。此外,细胞凋亡也压抑了HB搽剂和rhEGF表示不染色的裂解半胱天冬酶3比STZ组(图4 (c))。综上所述,氧化损伤和细胞凋亡显著地抑制了HB搽剂和rhEGF。

3.4。HB搽剂激活Nrf2及其下游基因STZ-Induced糖尿病大鼠

自核因子erythroid-derived 2 2 (Nrf2)扮演的中央监管机构维护识别抗氧化剂的氧化还原内稳态响应元素和激活抗氧化基因,Nrf2水平及其下游NQO1相应确定。在数据显示5(一个)和5 (b)STZ组有明显减少Nrf2表达式,由HB搽剂显著逆转和rhEGF治疗。重要的是,核染色Nrf2在STZ-induced糖尿病老鼠显然弱而增强了HB搽剂。此外,减少NQO1 STZ组也增强了HB搽剂和rhEGF(数字5 (b)和5 (c))。

进一步验证Nrf2活性,其下游DE基因参与抵抗氧化应激是列在图6。大量Nrf2基因下游的抗氧化剂如Gclc Slc7a11, Glrx5, Ggt1, Glrx3, Gsta4, Gpx1, Prdx1, Srxn1, Txnrd1, Tkt, G6pd, Taldo1, Idh1, Sod1, Sod3, NQO1显著压抑STZ组。重要的是,GSH-based抗氧化剂包括Gclc基因、Gclm Slc7a11, Glrx5, Ggt1, Glrx3, Gsta4, Gpx1;Trx-based抗氧化基因包括Prdx1、Srxn1 Txnrd1;NADPH generation-related抗氧化基因包括组织、Tkt G6pd, Taldo1, Idh1,以及其他抗氧化剂包括Sod1基因,Sod3, NQO1都激活HB搽剂。此外,Nrf2及其下游的基因关系密切观察(图6 (c))。因此,HB搽剂治疗增强Nrf2基因及其下游的抗氧化剂的氧化损伤。

3.5。识别关键部件在HB Nfe2l2影响和其下游基因网络药理学分析

确定受影响的组件Nfe2l2及其下游差异表达基因(DEs),药物靶点的HB搽剂与Nfe2l2及其相关下游DEs和网络components-drug targets-DE基因了。所显示的图7HB搽剂中,54岁组件被确定在169年药物靶点与Nfe2l2及其下游DEs。具体地说,从黄柏21组件包括肉桂酸、咖啡酸、Jatrorrhizine, 3, 4-dihydroxybenzoic酸,sanleng酸,和16其他组件而18组件从连翘suspensa包括suspensine, hydroxytyrosol,香草酸,琥珀酸和其他14个组件筛选出来。此外,有9个组件从蒲公英mongolicum手。-Mazz 5从金银花的研究,从发现蜈蚣科7基因差异表达的氧化产生影响。在这些组件,有几个组件来自多个药物。例如,生成槲皮素从连翘悬念,忍冬研究,和Taraxacusm mongolicum Hand.-Mazz。

3.6。HB搽剂调制MMP9的表达和TGF -β1,提高胶原蛋白生长

为了进一步揭示了HB的机制,TGF -β1、MMP9水平和胶原蛋白增长相应地进行评估。所显示的图8,减少TGF -β1和高架MMP9 STZ组被HB搽剂和rhEGF显著逆转。neo-collagen增长在伤口愈合的前面增加了HB搽剂和rhEGF与STZ组。这些结果显示乙肝搽剂和rhEGF增强TGF -β1、MMP9减少和改善胶原蛋白生长。

3.7。HB搽剂和槲皮素促进细胞增殖,减少氧化损伤在HG-Induced模型

进一步确认机制,HB和槲皮素的效果(它的一个组件),据报道,这是影响糖尿病患者的伤口,测试使用HaCaT细胞。所显示的图9HB和槲皮素不抑制细胞生存能力,但增强的低糖培养基中细胞增殖。HG刺激引起的细胞生存能力显著降低,而这是改善HB、槲皮素、聚维酮碘。确认HB对氧化应激的影响,相应地ROS和谷胱甘肽的水平测量。HG刺激导致谷胱甘肽水平明显降低,显著增加了HB和槲皮素。此外,ROS水平诱导增加了HG也显著降低了HB和槲皮素,但不是由聚维酮碘。Ki67的积极率(细胞增殖标记)是减少了HG刺激,由HB显著增加,但不是通过槲皮素或聚维酮碘(图9 (c))。这些数据表明,乙肝在衰减氧化损伤有很好的效果和促进细胞增殖。

4所示。讨论

糖尿病伤口导致大量的高死亡率和伤残糖尿病患者,而有一个有限的有效疗法。在这项研究中,黄白的影响(HB)搽剂STZ-induced糖尿病伤口是系统地调查,和机制了。HB搽剂显著加速伤口关闭和增强细胞外基质的生成STZ-induced糖尿病大鼠。通过使用RNA-seq技术分析,氧化应激被认定为HB-mediated伤口愈合的重要过程。重要的是,Nrf2及其下游基因的激活参与谷胱甘肽系统,硫氧还蛋白系统,NADPH代以及其他抗氧化基因乙肝治疗后观察。激活Nrf2及其下游基因开发抗氧化稳定网络,有助于减少氧化损伤和细胞凋亡(图10)。此外,HB搽剂增强TGF -β1、减少MMP9水平,促进胶原蛋白生长,从而在糖尿病条件下加速伤口愈合。的在体外实验证明了HB的良好的效果在抑制氧化损伤,提高细胞增殖。通过将药物靶点的HB搽剂与Nrf2及其下游差异表达基因,54组件筛选出来,大多数组件来自黄柏和连翘suspensa。

越来越多的证据表明积累了氧化还原体内平衡是一个重要的角色在调节糖尿病伤口愈合23]。过度繁殖ROS糖尿病破坏大分子如脂类、蛋白质和DNA双链,从而导致受损的伤口愈合和细胞凋亡。在我们的研究中,氧化应激被认定为HB-mediated伤口愈合(图的重要过程3),随后证实了降低高DNA损伤(8-OHdG),过氧化氢产品(MDA),降低STZ大鼠细胞凋亡。作为一个中央监管机构细胞氧化还原状态,Nrf2负责调制cytoprotective和抗氧化基因的转录,从而影响糖尿病患者的伤口愈合的能力(24]。激活Nrf2的激活或抑制其阻遏Keap1减轻活性氧生成,减少氧化损伤,加速伤口关闭在糖尿病25,26]。相反,Nrf2^{- / -}老鼠被延迟伤口愈合的特点(25),表明Nrf2的至关重要的作用在促进伤口关闭在糖尿病。一直以来都是展示在我们的研究中,阻碍了糖尿病Nrf2活动未能调节氧化还原体内平衡,导致受损伤口闭合,而Nrf2信号恢复了乙肝治疗抑制氧化损伤和促进伤口愈合。此外,我们的研究结果证明了其目标基因的功能障碍在GSH-based Trx-based抗氧化系统,以及NADPH-generating过程和其他抗氧化剂如NQO1基因,Sod1, Sod3也解救了乙肝治疗STZ-induced糖尿病伤口(图6)。Gclc Nrf2激活增强表达和Gclm测定谷胱甘肽的生物合成,Gpx1帮助分解H₂O₂和生产GSSG, Ggt1启动细胞外谷胱甘肽(GSH)崩溃。GSH-based抗氧化基因维持谷胱甘肽的水平升高体内平衡和确保其抗氧化效果实现27]。此外,Nrf2 Txnrd1激活调节基因表达,Srxn1 Prdx1,允许减少氧化硫醇的蛋白质(28]。作为一种重要资源,减少NADPH所需谷胱甘肽和硫氧还蛋白再生,消除过剩的活性氧(29日]。组织的基因表达升高,Tkt Idh1和Taldo1 Nrf2 NADPH的改进功能演示生成和维护基于谷胱甘肽-硫氧还蛋白的抗氧化功能。因此,激活Nrf2,连同其下游基因参与GSH-based, Trx-based抗氧化系统,以及NADPH生成过程和其他抗氧化基因,消除活性氧,减少氧化损伤和细胞凋亡,在糖尿病加速伤口愈合。

HB搽剂的化合物影响Nle2l2及其相应的下游基因被确定。具体地说,54组件HB搽剂被发现影响Nle2l2及其下游抗氧化基因。值得注意的是,在21日确认组件从黄柏、肉桂酸(30.),咖啡酸(31日],Magnoflorine [32,33],Jatrorrhizine [34phellodendrine], 3, 4-dihydroxybenzoic酸已经证明降低氧化应激。的提取连翘suspensa表现出显著的降糖药和antihyperlipidemic效应治疗糖尿病通过调节氧化应激和胰岛素分泌(35]。从连翘suspensa 18个化合物,包括槲皮素(36),香草酸(37],Arctiin [38],hydroxytyrosol [39]和Protocatechualdehyde [40),改善氧化损伤。此外,蒲公英mongolicum手。-Mazz [41]。及其识别组件,比如p-Coumaric酸和七叶亭[42,43),以及金银花的研究。,和its identified components such as Luteolin had a beneficial antioxidant effect by removing ROS [44,45]。此外,没有研究表明,蜈蚣科与糖尿病有关,尽管他们已经证明具有良好的抗氧化能力(46]。在这项研究中,HB搽剂的抗氧化特性观察治疗STZ-induced糖尿病伤口用黄柏、连翘suspensa,金银花的研究。,蒲公英mongolicum手。-Mazz,蜈蚣科。此外,槲皮素,来自三个HB搽剂的五个作品,展示了多个影响在促进伤口愈合47]。研究表明,它不仅具有良好的抗菌作用,类似于其他标准药物(如聚维酮碘)48),但也减少了炎症,抑制氧化损伤,增强VEGF的分泌和TGF -β1,调节整合素表达减少纤维化在伤口愈合(47,49]。在这项研究中,乙肝的影响,槲皮素、聚维酮碘抑制氧化损伤是比较HG-induced HaCaT细胞模型。它证明了HB和槲皮素在抑制氧化损伤有很好的效果而不是聚维酮碘(图9)。因此,四个草药和蜈蚣科HB搽剂分享了一些相同的组件,实现协同和54确定化合物抑制的影响通过调节氧化应激Nrf2基因及其下游的抗氧化剂。

随着HB搽剂的抗氧化能力增强,增加转化生长因子-β1 (TGF -β1)和基质金属蛋白酶(MMP)的减少导致了细胞外基质增长和增强糖尿病伤口愈合。高浓度的活性氧阻碍组织生长,尤其是对胶原蛋白的生产和阻止伤口关闭(12),而ECM生产的干扰通过中断TGF -突出显示β1信号[10,11]。此外,高活性氧水平影响ECM重塑通过调节基质金属蛋白酶的表达,和活性氧的生产需要合成基质金属蛋白酶(13]。这些都是与我们的结果一致,严重的氧化损伤在糖尿病大鼠与低ECM合成和胶原蛋白的生成。糖尿病延迟伤口愈合通常具有较低的TGF -β1、高基质金属蛋白酶在糖尿病足溃疡患者的皮肤组织50- - - - - -52]。TGF -β1信号作为监管机构中扮演着一个关键的角色在一系列生物过程的皮肤再生和伤口愈合,如血管生成和reepithelialization。(53]。MMP9负责消除受损的细胞外基质,使皮肤组织重构(54]。糖尿病MMP9的生产过剩导致过度ECM降解,导致延迟伤口愈合54),但抑制或淘汰赛MMP9促进糖尿病伤口愈合(55]。这表明MMP9的关键作用在治疗糖尿病溃疡。与这些研究结果一致,减少TGF -β1和MMP9升高是糖尿病伤口模型中观察到,这些被乙肝治疗的显著缓解明显高于TGF -β1,减少MMP9的水平。最近的研究表明,Nrf2激活可以促进TGF -β1代和抑制MMP9在糖尿病伤口的生产过剩25)我们的研究结果表明,升高TGF -β1和减少MMP9的激活与Nrf2 HB-mediated伤口愈合。

综上所述,我们的研究结果显示激活的Nrf2 HB搽剂加速糖尿病伤口愈合。这项研究提供了实验证据表明局部HB搽剂治疗糖尿病伤口和高亮显示激活Nrf2在糖尿病伤口愈合的影响。然而,我们只集中在HB对氧化损伤的影响,是否会影响炎症,血管生成和抗生仍然进一步调查。此外,组件HB搽剂中确实扮演了一个角色在激活Nrf2未来研究中需要澄清。

5。结论

总之,一个明显的保护效果观察乙肝治疗糖尿病伤口愈合,减少氧化应激可能在HB-mediated伤口愈合起着至关重要的作用。RNA-seq进一步分析和实验表明,Nrf2及其下游抗氧化基因的激活减少细胞凋亡和氧化损伤,从而提高HB-mediated伤口愈合。和54的化合物在HB搽剂被发现影响Nfe2l2及其下游基因,这对氧化应激抑制的协同作用。此外,HB搽剂,增加TGF -β1水平,减少MMP9,从而导致糖尿病伤口愈合的加速度。我们的发现提供了实验证据HB搽剂治疗糖尿病伤口,也改善了我们理解糖尿病伤口愈合,支持发展Nrf2-based疗法治疗糖尿病溃疡。

数据可用性

数据上传到NCBI RNA-seq分析https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/PRJNA532974(SRP193129)可以下载。至于其他数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

晶晶张和鲁伊·周贡献同样这项工作。

确认

作者要感谢金融支持国家重点研发计划(没有。2017 yfc1702605),中国国家自然科学基金(没有。81974550),基础研究基金为中央大学(没有。zz13 - yq - 046)。作者感谢鑫李网络分析的助理。作者透露,该项目部分由山东Hanfang药业有限公司,有限公司,他们也提供了黄白搽剂(中医特点:Z10950097)研究。作者promisse,这项研究的真实性和结论将不会受到资金的影响。

补充材料

表S1。RNA-seq数据的非糖尿病患者伤口”(体质)、“STZ-induced糖尿病伤口有或没有乙肝治疗。不同的党卫军的基因表达式表示为FPKM和褶皱变化和错误发现率(罗斯福)。(补充材料)

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