文摘

衰老是一个自然的进步的细胞的生物学功能下降。角膜与年龄相关的变化会影响其折射光或自我修复的能力。富含血小板血浆(PRP)一个有前途的角色在再生医学和证明它的效力在多个领域,但在角膜老化尚未阐明。目前的工作是评估再生PRP在角膜衰老大鼠的抗氧化作用。老鼠被分为两个主要的组:(GI)成人群体和(GII)岁组。成人群体分为GIa(成年鼠),直布罗陀海峡(adult-saline治疗)和新加坡政府投资公司(adult-PRP治疗)。老年人群体分为GIIa(年龄大鼠)和GIIb(年龄,PRP治疗)。PRP是由一个单一的结膜下注射。10天后、组织学、超微结构、免疫组织化学和morphometrical调查。岁组的检查角膜部分显示角膜上皮变薄,表面脱落的上皮细胞失去desmosomal结,和不规则性肾小球膜。 Disorganized widely spaced collagen bundles and neovascularization were detected in corneal stroma associated with thickening in Descemet’s membrane. Ultrastructural examination revealed shrunken hyperchromatic nuclei, swollen mitochondria, and scanty cytoplasm with a strong nuclear reaction for caspase-3 immunostaining. Moreover, antioxidant/free radicals’ imbalance was detected by the increase of malondialdehyde (MDA) level with a decrease of glutathione peroxidase (GPx) and superoxide dismutase (SOD) levels. In contrast, GIIb (aged, PRP treated) section examination revealed a restoration of the thickness of the corneal epithelial layer and Descemet’s membrane with an amendment of collagen fiber regularity that is associated with weak nuclear reaction to caspase-3 and recovery of the balance in the redox state. These findings proved the effectiveness of PRP as a promising regenerative treatment for the age-associated changes in the cornea.

1。介绍

眼睛的角膜是透明的前部,包括虹膜、瞳孔,前房。它的主要功能是支持泪液膜和表面折射率和传输光通过其半透明的镜头,然后视网膜组织(1]。角膜水合作用是至关重要的保护角膜上皮的损伤,保护角膜透明度(2]。

角膜是由五个不同组织学层从外到内,分别角膜上皮细胞,肾小球膜基质,角膜后弹力层和内皮。

角膜上皮(复层鳞状nonkeratinized)是一种最敏感和人体表面组织支配人口。它促进反射撕裂的维护生产和角膜上皮的生理更新(3]。角膜基质代表近90%的角膜厚度(4]。

基质的完整性和内皮细胞的正常代谢的重要因素来保护角膜透明度(2]。透明度取决于定期间隔和制服间质胶原束的直径(5]。

此外,角膜后弹力层角膜内皮细胞的基底膜层。内皮细胞层提供了一个屏障功能和作为一个活跃的水泵保持角膜的脱水(6]。人天生都有固定数量的角膜内皮细胞,随着年龄的增长逐渐减少1]。

衰老是一个自然生物进步的过程以减少细胞和分子组织功能(7]。角膜老化产生结构和功能变化,对视觉产生重大影响8]。这些变化可能包括圆锥形角膜、角膜高阶像差的变化,散光的轴的旋转导致从与规则转向against-the-rule散光(9]。与年龄相关的变化导致干眼,反过来会导致视力下降,身体不适,在底下的上皮损伤,炎症(1]。

富含血小板血浆(PRP)成为一个有吸引力的治疗方式在几个再生医学、牙科和整形外科应用,眼科手术,创伤,和皮肤烧伤10]。

PRP治疗技术是一个内生派生时这是一种无毒、nonimmunogenic技术用于加速和促进组织愈合(11]。PRP从离心获得血液样本获取细胞构成的血小板浓度高于血液循环(12]。

PRP发现促进组织再生通过增强细胞增殖和分化13]。血小板分泌多种生长因子,包括胰岛素样生长因子、血小板源生长因子,血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子(11,14]。这些生长因子促进胶原蛋白形成的过程中,血管生成和再生。此外,PRP的抗菌能力是白细胞的存在证明,降低感染的风险(13]。

本研究评估的有效性进行自体富含血小板血浆在角膜组织病理学变化,发生在衰老的过程。

2。材料和方法

2.1。动物

三十男性白化病老鼠纯种菌株被用于本研究。十八岁的老鼠3 - 6个月大,被视为成年老鼠,和其他年龄在22日至26日个月大,被认为是老年大鼠(15]。动物从动物研究中心和获得Bilharzial医学院的研究单位,Ain Shams大学。

老鼠被允许免费的水和食物被安置在铁丝和12小时日夜循环。动物被关在实验室条件下(温度调整 ,通风良好的金属笼中)。动物是离开一个星期适应环境开始之前的实验。

2.2。道德的考虑

所有实验和动物程序按照国家指导方针进行动物研究伦理委员会批准的(保健),医学院,Ain Shams大学和美国国立卫生研究院实验室动物保健和使用指南第八版。

2.3。实验设计

在我组,12个成年老鼠被随机分为两组,如下所示:

Ia(成人,治疗组):六个成年老鼠并没有受到任何程序

Ib(成人,saline-treated组):六个成年老鼠收到一个结膜下注射0.5毫升的生理盐水然后不及时治疗的实验(10天)

Ic(成人,PRP治疗组):六个成年老鼠收到一个结膜下注射0.5毫升的富含血小板血浆(PRP),那么剩下的未经处理的实验(10天)14]

在第二组中,十二岁的老鼠被随机分为两组,如下所示:

花絮(年龄,治疗组):六岁的老鼠没有受到任何程序

IIb(年龄,PRP-treated组):六岁的老鼠收到一个结膜下注射0.5毫升的富含血小板血浆(PRP),那么剩下的未经处理的实验(10天)14]

2.4。制备富含血小板血浆(PRP)

收集血液样本的PRP老鼠被注入。老鼠被腹腔内注射10%水合氯醛麻醉(350毫克/公斤体重)16]。从尾静脉静脉血液收集酸柠檬酸葡萄糖(ACD)管。样本离心机在1480 rpm 6分钟20°C到沉积物下红细胞(红血球)。浮在表面的等离子体包含血小板被转移到另一个无菌管无抗凝。其次,离心机是在4000 rpm 15分钟20°C分离富含血小板血浆(PRP)(低1/3)platelet-poor等离子体(PPP)(上层2/3rd) [17]。样本离心机使用Jouan ki22冷冻离心机(实验室装备有限公司、法国)和加工组织文化和研究中心在医学院,埃及爱资哈尔大学。

在实验的最后,所有老鼠安乐死的腹腔内注射苯巴比妥(50毫克/公斤体重)(18]。然后,眼睛被阐明。一些正式的固定在10%盐水;角膜是光学显微镜切割和加工。人被固定在戊二醛处理和超微结构的研究。

2.5。光显微镜研究

标本在neutral-buffered 10%福尔马林固定,在梯度酒精脱水,二甲苯清除,嵌在石蜡中。部分5μ米厚度沾。(1)苏木精和伊红染色法(他)19](2)马森三色的染色方法:胶原纤维的检测(19]

幻灯片是检查和拍照Lecia ICC50相机。

2.6。免疫组化染色

五μ米厚角膜部分取自石蜡块,干和deparaffinized和幻灯片。幻灯片在PBS洗。抗原检索的解决方案是申请10分钟3%过氧化氢和内源性孵化10分钟。部分与兔多克隆anticaspase-3孵化(Abcam ab4051;英国剑桥稀释1:100)在室温下为90分钟。部分被洗了几次与PBS然后孵化与二次抗体(目录ab205718数量、Abcam剑桥,英国)在室温20分钟(20.]。消极的控制部分进行了相同的过程,但是主要抗体是多发地兔血清。

2.7。超微结构的研究

角膜标本牺牲老鼠获得和戊二醛和锇酸固定。固定部分脱水和嵌入在环氧树脂树脂。Semithin部分,1μ米厚的剪切和1%甲苯胺蓝染色,光学显微镜检查选择合适的取向的选择区域。(80 - 90 nm)超薄部分被剪掉了一颗钻石刀和彩色醋酸双氧铀及柠檬酸铅21]。

电子显微镜研究了Jeol 1010透射电子显微镜(日本)地区真菌学和生物技术中心,埃及爱资哈尔大学。

2.8。在角膜组织匀浆(测定氧化还原状态)

组织样本均质在寒冷的磷酸缓冲盐(PBS;10% )使用组织均质器。匀浆离心机在10000 rpm 20分钟在4°C,和上层的收集。

2.8.1发布。丙二醛(MDA)水平

它是脂质过氧化的指示器(比色/荧光测定装备,目录# k739 - 100, BioVision,美国)。10毫克的样本组织是150年混合了μl dH2O 3μl二叔丁基对甲酚,1卷2 N高氯酸,涡流然后离心去除沉淀蛋白10分钟(4000 rpm)。

2.8.2。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动

谷胱甘肽过氧化物酶的酶起着重要的作用在免受氧化损伤(比色测定装备,目录# k762 - 100;100的反应;存储设备在-20°C)。0.1 g组织样本均质然后离心机,持续15分钟。

2.8.3。超氧化物歧化酶(SOD)

它是一组酶催化过氧化氢的超氧化物自由基从而提供细胞防御活性氧(比色测定装备,目录# k335 - 100;存储设备在4°C)。组织样本PBS然后在500 rpm离心机的清洗5分钟。

所有组织匀浆处理样本在组织培养和研究中心,组织学,爱资哈尔大学。

2.9。的形态学研究

使用计算机图像分析软件,图像分析仪徕卡(Q 500 MC项目,位于德国)在组织学,医学院,埃及爱资哈尔大学。六种不同的不重叠的随机选择的领域从不同的动物从同一组是用来测量:(1)在他的部分角膜上皮的厚度(2)在他的部分角膜后弹力层的厚度(3)面积的百分比caspase-3阳性细胞在免疫组织化学染色的部分

2.10。统计分析

获得的数据使用SPSS统计软件包进行统计分析(IBM公司,纽约,美国),和数据了 (SD)。执行统计分析使用单向方差分析(方差分析),后跟一个图基的事后多重比较检验。的差异被认为是显著的 和高度统计学意义 。

3所示。结果

光和电子显微镜检查部分的角膜组织Ia, Ib, Ic显示出类似的结果没有显著的差异。因此,他们表示为成人的数据组(I)。

3.1。组织学结果

检查他的彩色部分从成人集团获得角膜角膜的典型结构;角膜上皮细胞的外层,形成复层鳞状nonkeratinized上皮出现表面平坦的鳞状细胞有平坦的核,中间多边形和圆形的细胞核,细胞和基底柱状细胞与椭圆形的细胞核。第二层是肾小球膜是一层薄薄的同质层组成的谎言角膜上皮下纤维组织(数字1(一)和1 (b))。第三次无血管的角膜基质层。它包含定期安排之间的与纺锤形,可见胶原纤维束(数字1(一)- - - - - -1 (c))。下一层的角膜后弹力层出现同质连续下基质,并由一个内部的扁平的内皮细胞单层第五层(数据1(一)和1 (c))。

检查HE-stained岁组的部分显示正常的角膜组织结构的缺陷。角膜上皮细胞层显示焦点不连续表面上皮和剥蚀。苍白的基底和中间层出现有液泡的细胞质和细胞核染色。出现肾小球膜很薄,不规则的中断(数字1 (d)和1 (e))。间质炎性细胞浸润和新血管形成观察伴随着中断,不定期安排和广泛胶原束间距(数字1 (d)和1 (f))。角膜后弹力层出现不规则和退化地区角膜基质的分离。伴随着一个不规则的安排或损失的内皮细胞(图1 (f))。

检查他的彩色部分年龄,PRP-treated集团透露一个看上去正常的角膜上皮相比成人群体与普通完整肾小球膜(图1 (g))。胞质空泡形成注意到在一些上皮细胞。角膜基质有定期安排与一些空间和可见胶原纤维之间。内皮细胞和角膜后弹力层显然是正常的(数字1 (h)和1(我))。

3.2。马森三色的染色结果

检查马森成人群体的三色的彩色部分显示定期安排基质胶原束(图2(一个))。然而,马森的三色的彩色岁组的角膜部分显示混乱,打断,相隔基质胶原纤维(图2 (b))。另一方面,马森的三色的彩色角膜部分从年龄,PRP-treated组定期显示胶原纤维排列(图2 (c))。

3.3。免疫组织化学结果

免疫组织化学,caspase-3彩色成人组角膜部分显示弱的免疫反应在角膜上皮细胞核(图3(一个))。岁组中,免疫组织化学染色的部分caspase-3显示强烈的免疫反应在角膜上皮细胞核和一些,可见(图3 (b)PRP-treated集团),但在老年人免疫组织化学染色部分显示弱免疫反应在角膜上皮(图3 (c))。

3.4。Semithin部分

检查semithin从成年大鼠角膜组织的部分显示角膜上皮排列的三层内底柱状细胞,中间多层多边形细胞,外层鳞状层。肾小球膜出现作为常规薄膜基底细胞休息(图4(一))。无血管的基质出现之间的定期安排与纺锤形,可见胶原蛋白层(数据4(一)和4 (b))。角膜后弹力层层出现厚和同质的内心的单层扁平的内皮细胞(图上休息4 (b))。

然而,考试semithin岁组的角膜部分显示混乱和脱落的上皮细胞表面。基底和中间层显示苍白深深有液泡的细胞质和细胞核染色,其中一些是致密的和其他人是缩小的。肾小球膜出现不规则,薄,难以被发现(图4 (c))。不规则的胶原纤维在角膜基质伴随着间距宽,核可见的变化,和新血管形成(图4 (d))。

岁,PRP-treated集团semithin角膜部分显示明显正常角膜组织学与对照组相比。角膜上皮基底细胞层、过渡层和表面的鳞状细胞层出现像控制(图4 (e))。间质胶原纤维显示定期安排,可见中间。不能检测到新血管形成和炎症浸润(数字4 (e)和4 (f))。角膜后弹力层出现同质和定期定期与内皮细胞排列(图4 (f))。

3.5。超薄的部分

电子显微镜检查成年大鼠角膜的组织显示组织学结构。角膜上皮似乎形成一层基底的柱状细胞,常染色质的核,放在基底膜(肾小球膜(图)5(一个))。中间细胞层和表面层出现附加许多电子致密细胞桥粒与狭窄的细胞间隙。这些细胞显示一些细胞质细胞器(图5 (b))。定期安排的角膜基质形成与中间可见胶原纤维。可见纺锤状细胞和一个椭圆形的细胞核,著名的核仁,稀疏的细胞质(图5 (c))。角膜后弹力层出现作为一个非细胞厚均匀电子致密层。的内皮细胞单层平面电子致密核和细胞质稀疏是角膜后弹力层(图上休息5 (d))。

岁组的超微结构检查角膜部分显示正常角膜超微结构的明显缺陷。角膜上皮显示多个细胞质空泡形成,局部分离,扩大损失的细胞间隙desmosomal连接。角膜上皮细胞显示缺陷的形状。他们出现不规则的核膜,浓染的细胞核萎缩,线粒体肿胀(图6(一))。角膜基质显示不规则胶原纤维排列和广阔的空间。与核萎缩退化,可见出现退化线粒体和细胞质空泡形成(图6 (b))。内皮细胞出现退化电子致密核和萎缩的线粒体和细胞质空泡形成(图6 (c))。

此外,超微结构检查的角膜部分年龄,PRP-treated集团透露显然像对照组。然而,角膜上皮显示细胞质空泡形成细胞间隙(图略有扩大6 (d))。基质中出现与狭窄的空间几乎正常,定期安排胶原纤维,可见常染色质的细胞核和细胞质稀疏(图6 (e))。角膜后弹力层出现厚同质与正常内皮细胞和一个电子致密细长的细胞核。几个小液泡观察内皮细胞(图6 (f))。

3.6。形态学和生化结果

形态学和生化结果组Ia、Ib、Ic显示类似的结果没有统计学差异。

3.6.1。角膜上皮的厚度

组Ia(成年鼠),角膜上皮厚度 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示高度组相比显著降低Ia ( )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示一个高度显著增加相比,集团活动花絮( )(图7(一))。

操作。角膜后弹力层的厚度

组Ia(成年鼠),角膜后弹力层厚度 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示高度显著增加组Ia(相比 )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示一个高度相比显著降低组活动花絮( )(图7 (b))。

3.6.3。面积的百分比Caspase-3阳性细胞

在Ia(成年鼠),组的百分比caspase-3阳性细胞 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示高度显著增加组Ia(相比 )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示一个高度相比显著降低组活动花絮( )(图7 (c))。

3.6.4。丙二醛(MDA)水平

在Ia(成年鼠)组,MDA水平 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示高度显著增加组Ia(相比 )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示相比显著减少组活动花絮( )(图8(一个))。

3.6.5。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动

Ia(成年鼠)组、GPx水平 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示组相比显著降低Ia ( )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示组相比显著增加活动花絮( )(图8 (b))。

3.6.6。超氧化物歧化酶(SOD)

在Ia(成年鼠)组,SOD水平 ( )。组活动花絮(年龄大鼠) 。它显示高度组相比显著降低Ia ( )。IIb组(年龄,PRP-treated老鼠) 它显示组相比显著增加活动花絮( )(图8 (c))。

4所示。讨论

角膜是主要的折射视觉系统的组件,这是一个眼睛的前部分的一部分,就像一个盾牌,保持清晰的视觉和防止液体和病原体入侵的损失(22]。

衰老是一种内在的复杂的过程。伴随着功能的逐步丧失,增加死亡率(23]。老化的自由基诱导的改变伴随着细胞膜的属性包括减少流动性,改变在电子传递链复合物活动,和线粒体失败24]。

氧化应激中扮演一个重要的角色在衰老过程的开发和进展发生由于自由基和抗氧化剂系统之间的不平衡(23,24]。的眼睛,氧化损伤可能会导致新分子变化导致的发展与年龄相关的疾病,如白内障和青光眼(25]。

活性氧(ROS)可能是细胞有氧代谢的副产品或信号分子的压力响应细胞损伤(25,26]。ROS的产生与减少平衡剂和抗氧化酶保护组织免受氧化应激。然而,当他们生产超过了抗氧化能力,它们诱发损伤细胞组件如DNA、蛋白质和脂质(25]。

氧化应激强度测量可以估计的丙二醛(MDA) (26]。MDA的主要产品是自由基和脂质过氧化反应的指标被认为是一个衰老的生物标志物27,28]。在目前的研究中,有一个高度老年人MDA水平显著增加大鼠组相比成年大鼠组。

相反,主要减少系统的眼睛是谷胱甘肽系统。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)是一个家族的酶起着重要的作用在免受氧化损伤导致谷胱甘肽(GSH)的氧化氧化谷胱甘肽(GSSG) [25,29日]。显著降低GPx水平检测鼠岁组相比,成年大鼠组。

此外,超氧化物歧化酶(SOD)是一种抗氧化剂酶,这种酶起着重要的保护作用与ROS和被认为是抗氧化防御的第一行(25,26]。自由基转化SOD的过氧化氢,可以形成一种高活性氢氧离子能够与细胞膜上的磷脂和蛋白质(30.]。高度显著降低SOD水平在老年人中发现老鼠组相比,成年大鼠组。

在最近的研究中,角膜的组织学和超微结构检查的老年大鼠的研究小组显示显著的结构性变化,影响角膜层。

焦不连续表面脱落的上皮细胞检测伴随着一个高度显著减少角膜上皮的岁组相比,成人组。变薄的角膜上皮可能是因为减少角膜上皮细胞增殖的能力(15]。Aseta et al。31日)报道,上皮变薄和细胞损失检测的闭目可能继发于缺氧。

矢量和Kassab18]演示角膜上皮变薄的capecitabine-induced角膜毒性可能是由于细胞变性和细胞再生和扩散的速度。

Faragher et al。8]提到,衰老与减少上皮屏障功能和增加上皮通透性与整合素亚单位的分布的变化。

与此同时,在角膜的上皮细胞萎缩细胞核浓染,不规则的核膜,与苍白有液泡的细胞质和线粒体肿胀。矢量和Kassab18]证明了致密的原子核在角膜的角膜上皮细胞毒性。这些发现被作者解释为细胞凋亡。

Aseta et al。31日)解释了细胞质空泡状态观察的眼睛闭包作为一种反映程序性细胞死亡(III型胞质细胞死亡)所引起的胰岛素样生长因子和肿瘤坏死因子。

此外,鲍曼在老年人角膜膜非常薄,不规则,与细胞间隙扩大,desmosomal连接。Ebrahim et al。17]提到类似的发现在角膜碱烧伤大鼠角膜上皮细胞脱屑和坏死。此外,Aseta et al。31日)检测到这些变化的眼睛关闭和澄清任何变化发生于角膜上皮的屏障功能会影响角膜的完整性,导致感染的风险增加,角膜疾病,和角膜损伤。

在当前的研究中,角膜基质在他岁角膜的部分显示各种结构性变化检测的形式混乱和胶原束间距与新血管形成的外观和炎性细胞浸润。Halawa [15)观察基质,广泛分离角膜片晶的入侵血管。她认为这将导致角膜水肿,影响角膜的透明度。dax et al。32)报道,间距glycation-induced引起交联,减少胶原原纤维内部分子的倾斜角度。

马森的考试三色的彩色部分证实了他的基质发现部分。角膜透明度和干眼病是一个常见的抱怨年老时引起的角膜水肿有关,因为宽大的胶原层和减少钠和potassium-dependent atp酶酶水平(2]。

矢量和Kassab18)报道,间质炎性细胞浸润可能是由于释放白介素1β(摘要意思β从受伤的角膜上皮细胞在capecitabine-induced损伤的大鼠模型。

一个健康的角膜是无血管的功能。循环血管内皮生长因子(VEGF)在角膜无血管受体发挥重要作用通过与自由绑定VEGF从而使它无法绑定细胞膜受体(33]。

Faruk et al。34)发现了新血管形成的组织学和超微结构的部分诱导角膜碱烧伤大鼠模型。Berthaut et al。33]提到,VEGF受体的表达在人类随着年龄下降。另一方面,Tendler et al。35)透露,新血管形成可能继发角膜炎症和水肿有关。

角膜新生血管形成是一个重大的,影响视觉一些眼部疾病的并发症。结果从血管生成和血管生成因素之间的不平衡,特点是overproliferation迁移,形成毛细管内皮细胞(36]。

在最近的研究中,在年龄在角膜部分出现,可见细胞核萎缩,萎缩线粒体和细胞质有液泡的。可见是角膜成纤维细胞参与炎症的过程(37]。王等人。38]显示胶原纤维的混乱由于角膜细胞凋亡。

这个理论得到了结果caspase-3 immune-histochemical彩色部分检查显示高度显著增加caspase-3阳性细胞在角膜上皮和可见。

Rhim et al。39)提到了一个更高层次的caveolin-1检测角膜上皮的老年病人比年轻人显示平均增加的细胞损伤。同时,增加TGF-b在角膜反射增加凋亡岁死亡7]。

另一方面,一个高度显著增加角膜后弹力层厚度检测岁组相比,成人集团与地区之间的分离膜和角膜基质。与退化电子致密核内皮细胞肿胀,萎缩线粒体和细胞质空泡形成被观察到。

角膜后弹力层(DM)角膜内皮细胞的基底膜主要由八世型胶原蛋白。它起着至关重要的作用在内皮细胞分化和增殖和结构完整性40]。角膜内皮细胞层有一个重要的功能来维持角膜的透明度。内皮细胞的缺失可导致不可逆的角膜水肿(41]。

小君et al。42)年龄相关性发现焦点在小鼠角膜后弹力层增厚。卢武铉et al。43]证明了角膜后弹力层的增厚和电子显微镜检查。Mousa et al。2)和法等。44)解释了这些层的变化导致胶原蛋白的交联的失败与内皮细胞的退化。小君et al。42)显示,有一个aging-associated积累后,非带状部分这一层。

PRP的自体血清是安全、有效和强大的修复组织损伤根据其高浓度的血小板含有多种生长因子(45,11]。PRP应用程序有前景的结果在急性以及慢性损伤(46]。最近,PRP中使用许多医学领域如再生医学,牙科植入假体,颌面外科,塑料、矫形手术,治疗糖尿病溃疡和干眼13,47]。

我们所知,还没有报道使用PRP在自发的与年龄有关的角膜的变化。

在当前的工作,考试的组织学和超微结构的角膜部分年龄,PRP-treated组显示正常的组织学结构与成人群体。调查显示完整的肾小球膜和角膜上皮排列的三层。此外,组织胶原蛋白层基质中可见位于中间,定期连续正常角膜后弹力层位于内皮细胞。然而,上皮细胞的超微结构检查发现有液泡的细胞质与广泛的细胞间隙。高度显著增加和减少角膜上皮厚度、角膜后弹力层厚度检测,分别。

谢拉夫Eldin et al。14)和Charalambidou et al。48)检测到类似的发现在使用PRP在大鼠角膜碱烧伤模型,和Tanidir et al。49]报道同样在一只兔子模型的角膜上皮愈合伤口。

他们解释说,由于高浓度血小板含有生长因子附着在角膜表面,加速组织修复机制。郑et al。16)和Mansy et al。50]提到PRP细胞迁移和增殖中发挥了主导作用。

此外,考试的部分显示减少炎性细胞浸润,空泡形成,新生血管形成。Circi et al。51)和马提尼et al。52)解释说,PRP有很强的消炎和抗菌效果,减少细胞炎症标记。李等人。45)报道,使用PRP治疗可以减少炎症和疼痛和提高愈合过程。

在当前的研究中,考试caspase-3免疫组织化学染色部分显示了疲软的免疫反应和高度显著减少老年人,PRP-treated组相比,老年人组。好啊等。53)表示,PRP作为细胞凋亡监管信使减少ASK-1的表达,一个典型的增殖作用的蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家庭和ROS-induced细胞凋亡的关键组件。

此外,显著降低MDA水平伴随着GPx和SOD水平显著增加。好啊等。53和陈等。54]提到PRP有抗氧化作用由于其内容的大量的生长因子。这些生长因子导致氧化应激,减少活性氧的减少。此外,这些生长因子增强愈合过程,如细胞增殖,分化和再生受损组织通过增加营养和血液涌入供应55,56]。

5。结论

当前研究的结果可以强调证据的有效再生作用单一的自体结膜下注射PRP在改善老年大鼠角膜的变化。可以得出通过氧化还原状态的改善和恢复正常的健康的角膜的结构。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果可按照客户要求定制。

的利益冲突

没有利益冲突。

确认

作者想表达我真诚的感谢教授Soheir易卜拉欣萨利赫,解剖学和胚胎学教授,医学院,Ain Shams大学对她的指导、支持和帮助很大在回顾研究。屁股也深刻的感恩。教授Basma Hamdy阿明,微生物学助理教授区域真菌学和生物技术中心,爱资哈尔大学的专业电子显微镜的样品制备。