Coccoloba alnifolia叶提取物作为一种潜在的抗氧化剂分子使用体外和体内试验

文摘

属Coccoloba广泛应用于民间传统医学,但很少科学数据存在属。本研究的目的是描述的化学成分和抗氧化活性c . alnifolia叶提取使用在体外和在活的有机体内化验。六个提取得到:己烷(他),氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),水提取物(凌晨),和水提取物(我们)。薄层色谱法(TLC)分析表明酚类的存在,皂甙,萜烯和类黄酮。在体外化验证明大量的抗氧化潜力,特别是对于极性提取物(EE,我,凌晨,我们)。此外,没有观察到毒性作用的哺乳动物细胞系对大多数提取物浓度的评估。的线虫秀丽隐杆线虫也用作吗在活的有机体内模型测试的抗氧化潜力。EE和选择,根据之前获得的结果。观察到EE和我们有任何毒性作用秀丽隐杆线虫发展。此外,抗氧化潜力评估使用叔丁基氢过氧化物作为一种压力源代理。EE的寿命增加秀丽隐杆线虫28%的控制,我们增加了39.2 - -41.3%的范围。高效液相色谱法(HPLC-DAD)显示没食子酸的存在,p香豆酸和牡荆素的我们。因此,在体外和在活的有机体内数据显示的抗氧化潜力c . alnifolia提取及其可能的生物技术的应用程序。

1。介绍

自由基产生线粒体代谢的正常组成部分,过氧化物酶体,吞噬作用,炎症过程,局部贫血,和体育锻炼1]。之间的平衡的生产和中和活性氧(ROS)的抗氧化系统是非常重要的,和一个失衡往往对ROS生产过剩导致所谓的氧化应激(2,3]。

此外,通常目标的活性物种的细胞如活性氧(ROS),活性氮物种(RNS)和活性硫物种(RSS)。这种不平衡可能损伤分子如蛋白质、脂质、DNA和RNA和导致代谢紊乱和疾病,如癌症、心血管疾病、糖尿病、动脉粥样硬化、中风、神经系统疾病、肾脏疾病,肝脏疾病,高血压,和风湿性关节炎等相关的氧化应激(2- - - - - -5]。

植物产生化合物的混合物称为次生代谢物,具有不同的生物和药理性质。这些次生代谢物是已知的抗氧化潜力,维持这种氧化平衡是很重要的。这些分子可能从不同的植物组织如树叶、树皮、根,和水果6]。因此,识别和隔离的化合物是重要的在这个领域的研究主题(7]。

蓼科(石竹目)约51属1100种分布在全球不同的生物群落。一些物种作为观赏植物,种植药用用途,和一些经济重要的木材生产家居用品的供应(8]。属Coccoloba由大约46种。其中,21日巴西和特有分布在几个生物群落:亚马逊森林,大西洋森林,Caatinga,巴西稀树大草原(塞拉多),和潘塔纳。Coccoloba植物的茎,互生和全简单的叶子,与concresced乔木,和动脉。草本,灌木的、树栖或藤本植物(9]。

的化学成分Coccoloba被描述;它含有三萜、二萜醌类化合物、phytosteroids生物碱苯环型的,皂甙、黄酮类、单宁酸、没食子酸、儿茶素、没食子酸盐,myristin-3-O-8-rhamnoside,β谷甾醇,β羽扇豆醇、乌索和betulic酸、羧酸酯类、醛类、鞣花酸,苯甲酸,o香豆酸、芦丁、杨梅酮、槲皮素(10- - - - - -12]。这个物种c . uvifera,c . cereifera,c . mollis被评估为杀灭幼虫代理商对吗埃及伊蚊蚊子(13),以及抗真菌(14),细胞毒性15),抗菌10)、wood-biofungicidal phytopatogenic细菌(12]。

Coccoloba alnifolia,俗称“pau-de estalo”或“cabucu,”是一个流行的巴西物种属。尽管所有这些用在传统的民间医学中,没有科学的次生代谢物成分的信息c . alnifolia也对自己可能的生物活性。本研究的目的是描述化学成分和抗氧化活动c . alnifolia提取使用在体外和在活的有机体内模型。五叶提取物通过一个串行提取(使用非极性溶剂极性溶剂),和第六提取只有水(基于民间使用)。一般来说,这些提取并不影响六个不同的哺乳动物细胞系的可行性。此外,在体外和在活的有机体内化验显示四极性提取物,情感表达,我,喂,和我们的抗氧化分子来源。此外,情感表达,我们提取不影响生育能力秀丽隐杆线虫线虫作为一个测试模型。因此,Coccoloba alnifolia叶子有优秀的草药和抗氧化剂的发展潜力的产品。

2。材料和方法

2.1。试剂

铁氰化钾,硫酸亚铁II,三氯乙酸、硫酸从默克公司购买(达姆施塔特,德国)。硝基蓝四唑(电视台)、单糖、diaminoethanetetraacetic酸(EDTA),葡萄糖,没食子酸,抗坏血酸,牛血清白蛋白蛋白质、抗坏血酸,蛋氨酸,3 - (4 5-dimethylthiazolyl-2) 2、5 -溴化diphenyltetrazolium (MTT),邻苯二酚紫、核黄素、钼酸铵、叔丁基过氧化氢(t-BOOH)从Sigma-Aldrich有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。碳酸氢钠、不必要的氨基酸和磷酸盐(PBS)从英杰公司购买公司(Burlington,加拿大)。杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)和胎牛血清(的边后卫)获得CULTILAB(巴西坎皮纳斯,SP)。青霉素和链霉素获得Gibco(美国TX沃思堡)。所有其他的溶剂和化学试剂均为分析纯Synth (Diadema、SP、巴西)。

2.2。植物材料

Coccoloba alnifolia成熟叶收获在2015年5月从标本坐落在帕克das Dunas Natal, RN,巴西(UTM区250257315 m E 9357108 m N-GPS Garmin Etrex)。这个区域对应于大西洋森林生态区。识别后,代金券存入UFRN标本数量:UFRN 17133。这项研究是在SISBIO没有注册。54064 - 1,SISGEN不。A39FD4C。

2.3。准备的提取

收获后,新鲜的叶子被分成小块,转移到一个烧瓶的比例1:10 ( )(100克新鲜树叶1000毫升溶剂)为每个溶剂浸渍在24小时使用。连续萃取的方法是使用不同的溶剂后的顺序从无极的极性溶剂,如正己烷(他),氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),和水提取物(凌晨)结束。准备使用的方法提取是一个串行使用不同的溶剂提取树叶浸软,这是添加每个溶剂(无极的极性溶剂),24 h。然后,叶子都过滤了,搬回瓶,和下一个溶剂是补充道。以这种方式,水提取物(凌晨)对应于最后溶剂用于此连续萃取。连续萃取分离的想法基于溶剂的化合物。此外,提取了只使用water-WE-was基于民间使用。

为了防止光降解,满瓶是铝箔。然后,它被放在一个瓶表在150 rpm 24小时24°C (Tecnal小屋)。提取是透过绘画纸1号。树叶转回烧瓶与第二溶剂后在相同条件下齿轮的提取。提取物在rotaevaporator干(Tecnal-TE 210)在40°C。提取被恢复到1% DMSO(默克公司),然后冻干(Labconco FreeZone 4.5)。所有提取resuspended成水最终浓度为100毫克/毫升(股票提取)和保持在-18°C到使用。

2.4。总糖含量、酚类化合物和蛋白质

2.4.1。总糖

为了验证糖的提取量,phenol-H₂所以₄法和葡萄糖(Sigma-Aldrich)作为标准。总糖测定在490 nm(日本东京日立u - 2000) [16]。

2.4.2。总酚类化合物

总酚类化合物的含量是衡量使用Folin Ciocalteu方法,和没食子酸(Sigma-Aldrich)作为标准。它为765 nm(美国加州BioTek时代微型板块,CA) (17]。

2.4.3。总可溶性蛋白

总蛋白质含量测定使用布拉德福德方法,和牛血清白蛋白蛋白质(Sigma-Aldrich)作为标准。反应为595 nm(美国加州BioTek时代微型板块,CA) (18]。

2.5。体外抗氧化活性

每一个抗氧化试验是在一式三份,重复做3次。所有数据都通过使用分光光度计BioTek时代微型板块(美国加州,CA)。的提取c . alnifolia使用250μ克/毫升。

2.5.1。总抗氧化能力(TAC)

抗氧化活性测定考虑减少^{+ 6}在密苏里州^{+ 5}一个绿色的植物提取物和随后形成磷酸/ Mo^{+ 5}复杂在酸博士所用的提取浓度是250年μg / mL,混合硫钼酸acidammonium 600毫米),并为90分钟(在100°C的环境19]。这一次后,混合物在室温下保持冷静,和吸光度测量在695海里。负控制的结果进行了比较(蒸馏水)。表达的总抗氧化能力的抗坏血酸(EAA / g)。

2.5.2。DPPH

抗氧化活性测定的抗氧化剂的能力存在于样本来清除自由基DPPH (20.]。提取了250年的浓度μ克/毫升和100年μL (DPPH(0.1毫米)。混合物混合大力,它被允许站在室温下在30分钟。然后,吸光度测量517海里。空白控制乙醇99.5% (Synth,巴西),和消极的控制是蒸馏水。DPPH清除活动计算如下: 。

2.5.3。还原能力测定

样本的还原能力评估铁氰化钾还原成亚铁氰化钾(21]。250年的植物提取物μg / mL被添加到解决方案包含0.2磷酸盐缓冲剂(pH值6.6)和铁氰化钾(1% )在最后一卷4毫升。50°C的反应是孵化20分钟;这段时间之后,它通过添加柠檬酸溶液(10%停止了 )。当时的解决方案与蒸馏水混合和氯化铁(0.1% )。吸光度测量700海里。磷酸缓冲作为空白控制。结果被表示为一个百分比的活动0.1毫克/毫升抗坏血酸(standard-Sigma-Aldrich)。

2.5.4。过氧化物清除活动

分析是基于从提取抑制能力的光化学还原氮蓝四唑(电视台)riboflavin-light-NBT系统[21,22]。要做到这一点,250年浓度的提取μg / mL被添加到50毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.8),13毫米蛋氨酸,EDTA 100毫米,75毫米电视台,核黄素和2毫米。后,混合物,公开的解决方案是10分钟日光灯。颜色,蓝色的变化是由于甲瓒生产,吸光度监测的560海里。在分光光度计。EDTA被用作控制和蒸馏水为空白。结果表示为百分数清除:

2.6。细胞Viability-MTT化验

的影响c . alnifolia提取物对细胞生存能力评估。nontumour细胞系之一是使用:NIH / 3 t3(写明ATCC crl - 1658小鼠成纤维细胞)以及五种肿瘤细胞系:海拉(写明ATCC CCL-2-an腺癌人类子宫的细胞),SiHa(写明ATCC HTB-35-a人类细胞鳞状细胞癌)、曲泽写明ATCC crl - 1435人类前列腺腺癌(细胞),B16-F10(写明ATCC crl - 6475小鼠皮肤黑色素瘤细胞),和PANC-1写明ATCC crl - 1469 a(胰腺癌细胞)。首先,细胞系生长在培养瓶使用修改后的杜尔贝科鹰介质(DMEM)补充的边后卫(10% )和抗生素青霉素(100 U /毫升和100年μg / mL链霉素)。这些培养瓶中维护一个湿润有限公司5%₂气氛在37°C。对细胞生存能力评估提取影响,这些细胞被转移到96孔板 细胞每口井,直到他们达到融合。提取(他、CE、情感表达、我,喂,和AE)被添加在0,100,250,500μg / mL为24小时37°C公司5%₂的气氛。潜伏期后,介质改为100μL (MTT(1毫克/毫升溶解在DMEM)。然后,细胞培养4 h有限公司5%₂气氛在37°C。接下来,井是吸气,甲瓒晶体可溶性的100μ信用证以及乙醇(23,24]。板是在570 nm吸光度使用一个时代微型板块分光光度计(Winooski BioTek仪器公司,VT,美国)。细胞生存能力决定,而消极的控制(只有DMEM)使用以下公式: ,在这对应的吸光度实验组,的吸光度-控制。

2.7。体内抗氧化活性

2.7.1。秀丽隐杆线虫维护和治疗

秀丽隐杆线虫N2(野生型线)获得的秀丽美国遗传学中心(明尼苏达大学),并保存在线虫生长培养基(NGM)播种大肠杆菌根据布兰诺OP50 20°C (25]。蠕虫是同步使用漂白溶液在妊娠雌雄同体(NaOCl 1%,氢氧化钠0.25米)有动物在L1阶段(Sulston何杰金氏病,1988)。治疗,EE和凌晨提取过滤使用0.22μm过滤器(默克公司)和添加到NGM最终浓度1或10毫克/毫升。同步L1种植在NGM板块包含提取和播种大肠杆菌OP50 48 h在20°C,直到他们达到L4阶段。

2.7.2。毒性在秀丽隐杆线虫鸡蛋

化验,30个鸡蛋放入三NGM板块包含EE和凌晨0,1,10毫克/毫升,保持在20°C 48 h。在这之后,L4和鸡蛋的数量计算。这个试验是在三个独立做化验的总数90个鸡蛋/组。

2.7.3。氧化压力分析

氧化应激试验了用叔丁基过氧化氢(t-BOOH)作为ROS生产商(26,27]。四十蠕虫在L4阶段接受EE和浓度在0,1,10毫克/毫升为48小时20°C。之后,虫子被转移到12-well板与8毫米t-BOOH M9缓冲区和评估每半个小时。那些虫子没有反应刺激被认为是死(无运动)。一些蠕虫被审查的,这意味着当蠕虫不存在或氧化应激死亡以外的原因。这些分析都是在五个独立的化验。

2.8。薄层色谱法(TLC)

Chromatoplates硅胶的被用于分析。移动阶段使用如下:(i)乙酸乙酯:甲酸:水(8:0.8:1, ),(2)乙酸乙酯:甲酸:甲醇:水(10:0.5:0.6:0.2, ),和(3)甲苯:乙酸乙酯:甲酸(5:5:0.5, )。复合可视化被喷洒硫酸香兰素的解决方案及实现,0.5%天然试剂(difenilboriloxietilamina),甲醇,1%氯化铁和Dragendorff。在薄层色谱使用的标准如下:槲皮素,乌索酸、没食子酸,isoquercetin,绿原酸,鞣花酸,异槲皮苷,luteonin, canferol,芦丁,咖啡酸,儿茶素,orientin, isoorientin,牡荆素,isovitexin (Sigma-Aldrich )。然后,观察颜色,保留因子(Rf)的点测量并与文献[28]。我和EE, Co-TLC做是为了证实存在的糖苷类黄酮牡荆素,isovitexin。

2.9。高效液相色谱法(HPLC-DAD)

我们的分析是HPLC-DAD(安捷伦1260)配备了C18柱(Zorbax - )。的梯度洗脱是0.1%醋酸(a)和乙腈(B)如下:10% B(6分钟),10 - 15% B(6 - 7分钟),15%(7-22分钟),15 - 50%的B(22-32分钟),50 - 100% B(32-42分钟),和100%的B(42-50分钟),以恒定流量的1毫升/分钟。样品准备在1毫克/毫升使用甲醇(高效液相色谱级)和注射的体积是3μl .列温度是45°C,和检测是在228年,254年,280年,290年,320年,340和352海里。酚类化合物的识别是通过比较保留时间和紫外可见吸收光谱与标准化合物。

中使用的标准HPLC-DAD如下:3-hydroxycinnamic酸(501-52-0),苯甲酸(65-85-0),咖啡酸(331-39-5),92年肉桂酸(621-82-9)、绿原酸(327-97-9),鞣花酸(476-66-4),阿魏酸(1135 - 93年24-6)、没食子酸(149-91-7)、龙胆酸(490-79-9),o-coumaric酸(583-17-5),p-coumaric酸(501-98-4),rosmarinic酸(20283-92-5)、芥子酸(530-59-6),芹黄素(520-36-5),apiin-apigenin-7——(2-O-apiosylglucoside)(26544-34-3),山柰酚(520-18-3)、山柰酚3-O-D-galactoside (23627-87-4), 3-O-methylkaempferol (1592-70-7), biorobin-kaempferol 3 -β-robinobioside (17297-56-2), nicotiflorin-kaempferol 3 -βrutinoside(17650-84-9),儿茶素(154-23-4),chrysin-5, 7-dihydroxyflavone (480-40-0), chrysoeriol-3 - - - - - -O-methylluteolin (491-71-4)、daidzein-4 7-dihydroxyisoflavone(486-66-8)表儿茶素(490-46-0),genistein-4 ,5,7-trihydroxyisoflavone (446-72-0), gossypetin-8-hydroxyquercetin(489-35-0),橘皮苷(520-26-3),hesperitin (520-33-2), hispidulin-6-methoxyapigenin (1447-88-7), homoorientin-luteolin 6 c -β-葡萄糖苷(4261-42-1)、异鼠李亭3 -β半乳糖苷(6743-92-6)、异鼠李亭3 -β-D-glucoside (5041-82-7), keioside-isorhamnetin 3-O-robinobioside (107740-46-5), narcissin-isorhamnetin 3 -βrutinoside(604-80-8),毛地黄黄酮(491-70-3),杨梅酮(529-44-2),柚苷配基(480-41-1),neohesperidin (13241-33-3), orientin-luteolin 8-C-glucoside (28608-75-5), quercetagetin-7-O-glucoside(548-75-4)、槲皮素(117-39-5),hyperin-quercetin 3 -β半乳糖苷(482-36-0),isoquercetrin-quercetin 3 -β葡萄糖苷(482-35-9)、槲皮素3 -β-gentiobioside(7431-83-6)、槲皮素3-O-robinobioside (52525-35-6), quercitrin-quercetin 3-O-rhamnoside(522-12-3),鼠李亭(90-19-7),rutin-quercetin 3 -βtaxifolin-dihydroquercetin -rutinoside (153-18-4) (480-18-2), tiliroside-kaempferol 3 - (6 - - - - - -O-p-coumaroyl)葡萄糖苷(20316-62-5),vitexin-apigenin 8-C114葡萄糖苷(3861-93-4)。其他标准对应于图书馆在植物化学实验室,植物学,圣保罗大学。

2.10。生物信息学分析

通过薄层色谱分析,存在两种糖苷类黄酮牡荆素isovitexinc . alnifolia叶提取物被观察到。这些化合物被用来搜索在中医系统药理学(TCMSP)数据库基因目标(29日]。获得的数据在使用TCMSP京都基因和Gnome百科全书(KEGG)数据库(30.]。中列出的路径识别在KEGG降序排列显示价值。这些数据被用来建立一个网络使用字符串10版本11 (https://string-db.org/)。

2.11。统计分析

所有结果都表示为 。每一个试验是一式三份或五个一组,和每一个重复了至少3次。统计分析是使用GraphPad棱镜6.0 (GraphPad软件公司,圣地亚哥、钙、美国),使用变异分析(ANOVA)和图基检测后比较不同组。的差异,值≤0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。总糖含量、酚类化合物和蛋白质

5从非极性提取得到一系列极:己烷(他)、氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),和水提取(凌晨),和第六只与水水提取物(我们)。表1总酚类化合物显示了从2.3不等μ61.26 g / gμg / g,他< CE <我们< < EE <我。糖含量范围从33.45μ225.00 g / gμg / g,订单was CE < <凌晨< EE <我们<我。蛋白质含量很低,从1.1到4.5μg / g。

3.2。在体外抗氧化活性

考虑到存在的酚类化合物和理解这些植物化学物质可能与抗氧化活性有关,每个六的抗氧化潜力c . alnifolia提取使用四个化验分析:总抗氧化能力(TAC)、DPPH (2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl-hydrate)自由基方法,还原能力测试和过氧化物清除活动。

TAC试验评估样本捐赠电子的能力,从而中和活性物种。TAC的最高价值被发现对我来说(111.38 EEAq毫克)和EE (96 EEAq毫克)。凌晨(58.25 EEAq毫克),我们(59.89 EEAq毫克)等价的结果(图1(一))。DPPH实验,抗氧化活性范围从49%到114%(图1 (b))。此外,极性提取物显示最高的活动还原能力测定,值的范围从83.9%到105.4%(图1 (c))。相似的结果也为超氧化物自由基清除实验观察,极性提取物的最高价值观观察,这些值的范围从76.4%到91%(图1 (d))。

皮尔森系数分析显示出积极的酚类化合物含量之间的相关性c . alnifolia提取和抗氧化剂化验。TAC之间有很强的相关性和还原能力测定(吃晚饭。表1),一个温和的相关性与超氧化物自由基清除。此外,糖含量呈现很强的相关性为还原能力测定和TAC和温和的相关性与超氧化物自由基清除(吃晚饭。表1)。

3.3。在活的有机体内分析

上述抗氧化剂化验数据促使我们进行抗氧化试验在活的有机体内。然而,在进行这些分析之前,有必要评估这些提取物的毒性潜在排除可能对动物使用的有害影响在活的有机体内实验。然后,他们影响nontumour细胞3 t3和五种肿瘤细胞系,海拉,SiHa、曲泽、B16-F10, PANC-1,进行了分析。在那之后,秀丽隐杆线虫被用来作为在活的有机体内模型。

3.3.1。细胞生存能力

细胞系,六个提取的影响在三个浓度(100μg / mL, 250μ克/毫升和500μg / mL)进行评估(图1)。这些提取物对细胞没有任何影响在任何浓度的三个分析可行性。然而,我和小,减少细胞生存能力观察nontumour细胞约25% - -35%(我在250年或500年μg / mL,凌晨在500μg / mL)(表2)。此外,对于肿瘤细胞系,在一般情况下,细胞生存能力没有显著变化。减少细胞生存能力为他10 - 25%不等,CE,我们观察海拉和SiHa细胞系(表2)。因此,在一般nontumour和肿瘤细胞系,c . alnifolia提取没有细胞毒性的在活的有机体内细胞系模型。

3.3.2。毒性的秀丽隐杆线虫鸡蛋

秀丽隐杆线虫不渗透角质层,这是一种细胞外基质的胶原蛋白,形成一个多功能的外骨骼,使得通过物质困难(31日]。因此,更高的提取浓度比细胞系化验使用。考虑获得的结果与抗氧化剂和细胞系,提取,EE和我们选择的评估。这个模型中,1和10毫克/毫升浓度提取被用来评估可能的毒性影响鸡蛋孵化(图2)。控制相比,70%的蛋孵化,提取,我们和情感表达,也有类似的效果在1毫克/毫升和10毫克/毫升,从70%到91%不等(图2)。因此,情感表达和我们没有任何毒性作用在蛋中孵化秀丽隐杆线虫模型。

3.3.3。在活的有机体内使用C的抗氧化活性。线虫模型

因为我们提取的情感表达和没有对卵孵化的毒性和胚胎发展,这些提取追究他们在活的有机体内抗氧化效果秀丽隐杆线虫。对于这些化验,野生动物(N2)被使用和接受EE和我们在1和10毫克/毫升。随后,这些蠕虫分析氧化应激条件下为生存(治疗叔丁基氢过氧化物(t-BOOH))。增加公差对氧化应激条件下推行t-BOOH治疗观察EE和我们治疗(数据3(一个)和3 (b))。EE控制动物的治疗,平均生存时间为7.5 h,相比之下,平均生存时间为10.5 h和EE(1毫克/毫升和10毫克/毫升),表明增长了28.6%(表3)。

控制动物的治疗,平均生存时间为4.8 h为7.9 h和8.2 h 1毫克/毫升,10毫克/毫升,我们分别(图3 (b))。这种差异代表(1毫克/毫升)增长了39.2%和41.3%(10毫克/毫升)下t-BOOH治疗(表4)。

3.4。植物化学的化合物被薄层色谱法(TLC)

薄层色谱分析显示,酚类化合物的存在,如类黄酮及其化合物可能与抗氧化活性有关中观察到在体外和在活的有机体内化验。当chromatoplates透露使用硫酸香草醛,五颜六色的斑点的皂甙(CE、情感表达、我,我们),和萜烯(CE、情感表达和我)被观察到。此外,chromatoplates接触氯化铁溶液发达点表明极性提取物中酚类化合物的存在(EE,我,小,和EE),并与自然试剂,观察极地提取黄酮类化合物的存在(EE,我,凌晨,我们)。为了确定一些化合物存在于极地活性提取物,标准被用于co-TLC分析和牡荆素( ,绿色荧光)和isovitexin ( ,绿色荧光)被发现在EE和我。酚类和黄酮类化合物极性提取物,尤其是EE和我,观察。

3.5。我们通过HPLC-DAD化学调剖

根据观察结果在体外和在活的有机体内化验EE和我们和传统民间浸渍的方法提取的水,我们选择我们的高效液相色谱进一步描述(HPLC-DAD),作为薄层色谱显示牡荆素,isovitexin的存在。

HPLC-DAD显示几个峰(图4),评估在不同的紫外光谱(228 - 352海里)。与标准相比,峰值# 2与没食子酸( -280海里),峰值# 16对应p香豆酸( -280海里),峰值# 19牡荆碱( 280 - 352 nm)。牡荆素的存在是在协议与薄层色谱数据。

3.6。生物信息学分析

生物信息学是一个很好的工具,数据挖掘潜在目标考虑的两个生物活性分子中标识c . alnifolia摘要:牡荆素,isovitexin。基因和基因组的京都百科全书(KEGG)数据库是用来识别可能的这些生物活性分子的目标。这些分子可能与路径相关的免疫系统,心血管疾病,信号通路,癌症,神经系统,和其他人。超过32个目标是观察(表5)。重叠的目标分析时,一些基因目标如IKBKB PTGS2, RELA, TNF, MAPK7, AR, NF-B观察(表5和图5)。此外,生物信息学方法建议中标识的生物活性分子c . alnifolia可能有抗氧化和抗炎活动。

4所示。讨论

Coccoloba alnifolia已经在巴西东北部民间医学中使用,但是没有科学的信息关于其化学成分或抗氧化活动。在这项研究中,六叶提取物的化学成分和生物活性的特征是通过一系列的溶剂(无极的极地串行方法)32]。化学分析显示存在的糖,蛋白质和酚类化合物。这些成分之间的比例提取;EE,我,凌晨,我们提取含有大量的糖和温和的酚类化合物,而蛋白质是非常低的提取物。

阿拉姆et al。5]表明,极性溶剂有利于提取酚类化合物,和本文提供的数据显示,这些更高浓度的酚类化合物和黄酮类提取物(EE,我们,我,凌晨,我们)。TLC还显示存在的萜烯(CE、情感表达、我,我们)和皂甙(CE、情感表达、我,凌晨)。co-TLC、牡荆素的存在和isovitexin被观察到,虽然HPLC-DAD显示没食子酸的存在,p香豆酸和牡荆素我们。虽然这些化合物被确定,以前在其他Coccoloba物种(10,33,34),我们的研究是第一个报道他们的存在c . alnifolia。在此基础上,重要的是要评估的抗氧化活性和其他生物的活动c . alnifolia提取含有生物活性分子的混合物除了牡荆素和isovitexin,由co-TLC识别(35)和HPLC-DAD我们。

这里获得的结果显示,优秀的抗氧化潜力EE,我,凌晨,我们,特别是减少权力和DPPH自由基清除。TAC显示更高的抗氧化活性EE和我。DPPH评估样本的能力清除DPHH自由基,还原能力和TAC化验分析样品捐赠电子的能力。Gusman et al。34)使用的DPPH实验观察抗氧化活性c . cereifera和抗氧化活性利用DPPH也一直在观察等其他物种从蓼科Rumex对虾(36),蓼属植物maritimum(37]。这些物种已经被用于传统医学在亚洲,欧洲,非洲,加强在这里获得的数据c . alnifolia。酚类化合物的抗氧化潜力可能以及糖中提取,如图所示皮尔森的相关性。可能与酚类化合物有关标识的糖与糖分子,如类黄酮苷、浓缩单宁,和糖苷三萜烯,这或许可以解释糖的存在c . alnifolia提取(38,39]。这些提取物的抗氧化剂可能观察到可能与不同的生物活性分子,可能采取行动,清除自由基,减少活性氧对细胞的影响,因此维持之间的平衡生产和退化35,40,41]。

在体外化验显示,c . alnifolia有趣的抗氧化潜力,在活的有机体内化验使用细胞系表明,一般来说,六提取是3 t3 nontumour细胞株的细胞毒性和海拉,SiHa、曲泽、B16-F10, PANC肿瘤细胞系。另一方面,Tsuboy et al。15观察到根提取物c . mollis更比叶提取物对HTC肿瘤细胞株的细胞毒性。他等。42)表明,牡荆素,isovitexin是优秀的抗氧化分子,有广泛的抗氧化剂,抗增殖、抗炎和其他属性。此外,它已被证实的摘录c . uvifera和c . cereifera促炎的活动和可能作用于肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)[33,34]。这里使用的生物信息学方法,考虑到存在的牡荆素isovitexin,建议c . alnifolia提取可能作用于TNF -α和prostaglandin-endoperoxide合成酶(发现或COX)。Habtemariam [35)提到,提取生物活性分子的混合物可能单独或协同作用着。此外,它已被观察到,自然产品可能采取行动的信号途径,例如,NF -κB信号通路(4,35,43- - - - - -45]。使用牡荆素,isovitexin生物信息学数据显示,一些基因目标是抗炎基因如NF -κB和cox - 2。

此外,秀丽隐杆线虫已被证明是一个优秀的模型确定化合物的毒性。一些分析可能显示毒性,如蛋孵化和线虫发展(46,47]。获得的结果表明,EE和我们没有有毒,因为他们并不影响蛋孵化,而这些提取物有抗氧化应激的作用当t-BOOH用作压力源代理。这些提取增加1毫克/毫升EE存活率28%,31%为1毫克/毫升,42% 10毫克/毫升的我们相比,控制动物。悦et al。48观察到,p香豆酸能够降低氧化应激秀丽隐杆线虫以及增加其寿命在氧化应激条件下,类似于情感表达,我们观察到的是什么。Choubey et al。49)显示不同的活动没食子酸由于其抗氧化的潜力。因此,p香豆酸、没食子酸和牡荆素可能有些生物活性分子存在于我们提取的抗氧化潜力,没有毒性,为本文提供的数据中观察到Coccoloba alnifolia提取物。

其他研究显示,酚类化合物Coccoloba属。科塔(10)处理c . acrostichoides确定了桦木醇,β用TLC谷甾醇。Ashmawy et al。12)处理c . uvifera叶子发现鞣花酸,苯甲酸,o香豆酸、芦丁、杨梅酮、槲皮素在水、丙酮和乙醇提取物。此外,为c . mollisphytosteroids三萜、二萜醌类化合物,苯被确定在叶和芽11]。

为c . alnifolia,在目前的研究中,没食子酸等酚类化合物,p香豆酸、牡荆素、isovitexin观察,HPLC-DAD显示,还有许多其他的化合物。这些提取物可能有其他生物活性分子,这可能与酚类化合物协同作用,导致氧化保护,从而降低ROS效果和有助于维持氧化还原平衡(ROS生产与ROS退化)在细胞和组织35,40]。本文提供的数据表明,EE和我们有很大的潜力作为天然抗氧化剂的产品。

5。结论

五Coccoloba alnifolia叶提取物是通过连续萃取(使用非极性溶剂极性溶剂),和第六提取只有水(基于传统民间使用)。获得的数据表明,这些提取物含有酚类化合物、萜烯、皂甙、黄酮类化合物(牡荆素,isovitexin)。在在体外和在活的有机体内化验,四极性提取物,情感表达,我,凌晨,我们证明抗氧化剂分子的来源。一般来说,这些提取并不影响六个不同的哺乳动物细胞系的可行性。此外,EE和我们没有繁殖能力的影响秀丽隐杆线虫线虫作为一个测试模型和保护他们对t-BOOH压力源,增加寿命。因此,Coccoloba alnifolia叶子有优秀的草药和抗氧化剂的发展潜力的产品。其他生物的活动也可以探索,以确定潜在的抗氧化剂在细胞。

数据可用性

在这项研究中获得的数据可从相应的作者。

的利益冲突

作者没有利益冲突的声明。

作者的贡献

S.M.Z.L.,R.P.O.,H.A.O.R., and K.C.S. conceived and designed the experiments. L.F.M.M., D.L.G., L.F.S., L.M.P.S., M.L.M., C.O.M.C, S.M.Z.L., R.P.O., H.A.O.R., and K.C.S. performed the experiments, analyzed the data, and wrote the paper. All authors read and approved the manuscript.

确认

作者要感谢Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(披肩),慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq)和Ministerio da Ciencia Tecnologia e Inovacao (MCTI)财政支持。作者要感谢艾琳Bertinatto克鲁斯从Laboratorio de Fitoquimica Departamento de神物铺子,圣保罗(USP)在HPLC-DAD帮助我们分析。H.A.O. r和R.P.O. CNPq奖学金荣誉研究员。L.F.M.M.,L.M.P.S., and C.O.M.C. received a scholarship from CAPES.

补充材料

补充表1显示了皮尔森系数分析的糖,蛋白质,酚类化合物的Coccoloba alnifolia提取物。获得的值显示为红色,它被认为是一个非常强大的关联值高于0.9,强烈的相关性值从0.7到0.9。皮尔森系数分析表明积极的酚类化合物含量之间的相关性Coccoloba alnifolia提取和抗氧化试验。TAC之间有很强的相关性和还原能力测定超氧化物自由基清除的中度相关。此外,糖含量呈现很强的相关性为还原能力测定和TAC和超氧化物自由基清除中度相关。(补充材料)

引用

1. 诉Lobo a·帕蒂尔a Phatak, n .钱德拉”自由基,抗氧化剂和功能食品:对人类健康的影响,”生药学的评论,4卷,不。8,118 - 126年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d . Krishnaiah r . Sarbatly, r . Nithyanandam”回顾药用植物的抗氧化潜力的物种,”食品和Bioproducts处理,卷89,不。3、217 - 233年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. c . Lopez-Alarcon和a . Denicola”天然产物的抗氧化能力评价:回顾化学和基于手机化验,”分析Chimica学报卷,763年,页1 - 10,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m . Carocho i c·f·r·费雷拉,“回顾抗氧化剂,prooxidants和相关争议:天然和合成的化合物,筛选和分析方法和未来的视角,“食品和化学毒物学卷,51岁,15 - 25,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m·d·努尔阿拉姆,n . j . Bristi和m . d . Rafiquzzaman”审查在体内和体外抗氧化活性评价方法,”沙特医药杂志,21卷,不。2、143 - 152年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b . Armendariz-Barragan:征服者,w·巴蒂尼et al .,“植物提取物:从封装到应用程序中,”专家意见在药物输送,13卷,不。8,1165 - 1175年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. p . Rajendran n . Nandakumar t Rengarajan et al .,“抗氧化剂和人类疾病”,我们共同Chimica学报卷,436年,第347 - 332页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. k . s . m .桑德拉·l·。l·安德森,d。Naiane et al .,”酯化脂肪酸的gc - ms分析获得的叶子和种子Triplaris gardneriana Wedd,”非洲药房和药理学杂志》上,10卷,不。30日,第630 - 623页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. e . de Melo”especies de Coccoloba·布朗(蓼科)亚马逊brasileira”Acta Amazonica,34卷,不。4、525 - 551年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. b·巴罗斯科”,抗菌活性和选民的Coccoloba acrostichoides,”Fitoterapia,卷74,不。7 - 8,729 - 731年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p·e·s·奥利维拉w·s。桑托斯、l . m .闭路和r·p。l . Lemos”Constituintes quimicos das folha e caule deCoccoloba mollisCasaretto(蓼科),“航空杂志上Brasileira de Farmacognosia18卷,第717 - 713页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. n . a . Ashmawy m z . m .萨勒姆n . e . Shanhorey a . a . Al-Huqail h . m .阿里和s . i Behiry”环保wood-biofungicidal和抗菌活动各种Coccoloba uvifera l .叶提取物:高效液相色谱法分析酚类和黄酮类化合物,”生物资源,15卷,不。2、4165 - 4187年,2020页。视图:谷歌学术搜索
13. p . v .奥利维拉,j·c·费雷拉Jr .) f·s·莫拉et al ., 94年“杀灭幼虫活动提取物10巴西东北部的植物物种埃及伊蚊l .(双翅目蚊科):“寄生虫学研究,卷107,不。2、403 - 407年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. i . b . de Barros j . f . de Souza丹尼尔,j·p·平托Rezende, r . b .球场,和d·t·费雷拉,“植物化学的和抗真菌活性的蒽醌类和根和叶中提取的Coccoloba mollis植物病原体,”巴西生物学和技术档案,54卷,不。3、535 - 541年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m . s . Tsuboy j . c . Marcarini r·c·路易斯et al。”在体外评估基因毒性活性和细胞凋亡诱导的提取从药用植物根和叶Coccoloba mollis(蓼科),“杂志的药膳,13卷,不。3、503 - 508年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. m·杜布瓦k . a . Gilles j·k·汉密尔顿,p . a . Rebers和f·史密斯,”比色法测定糖和相关物质,”分析化学,28卷,不。3、350 - 356年,1956页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. y Athukorala K.-N。金,Y.-J。全”,抗增殖和抗氧化特性的生化酶水解的褐色海藻,Ecklonia静脉,”食品和化学毒物学,44卷,不。7,1065 - 1074年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m·m·布拉德福德”,一个快速和敏感微克量的蛋白质的定量方法利用protein-dye绑定的原则,“分析生物化学,卷72,不。1 - 2、248 - 254年,1976页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. p -普列托m .皮和m . Aguilar”光度法定量抗氧化能力的形成phosphomolybdenum复杂:具体应用维生素E的决心,“分析生物化学,卷269,不。2、337 - 341年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. k, k .藤、k . Yahara和t .中村”黄原胶的抗氧化特性的自氧化豆油在环糊精乳液,”农业与食品化学杂志》上,40卷,不。6,945 - 948年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 张问:j . Wang, z, z,“硫酸多糖抗氧化活性的分数从海带中提取粳稻,”国际期刊的生物大分子,42卷,不。2、127 - 132年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. n达斯古普塔和b . De”Piper betle l .叶提取物体外抗氧化活性的,”食品化学,卷88,不。2、219 - 224年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. t . Mosmann“快速比色测定细胞生长和存活的:应用程序来增殖和细胞毒性分析,“《免疫学方法,卷65,不。1 - 2,55 - 63、1983页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. r·f·Melo-Silveira g . p .忠诚m . s . s . p .科斯塔et al .,“体外抗氧化、抗凝和抗微生物活性和抑制肿瘤细胞增殖的玉米芯木聚糖提取,”国际分子科学杂志》上,13卷,不。1,第426 - 409页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. 布伦纳,“秀丽隐杆线虫的基因,”遗传学,卷77,不。1,第94 - 71页,1974。视图:谷歌学术搜索
26. a . Scheschonka m·E·墨菲和h . sy”颞维生素E的损失之间的关系,蛋白质巯基和微粒体脂质过氧化与不同prooxidants挑战,”Chemico-Biological交互,卷74,不。3、233 - 252年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. f . Aparecida Paiva, l . de Freitas Bonomo p·费雷拉Boasquivis et al .,“Carqueja (Baccharis trimera)防止氧化应激β-amyloid-induced毒性的秀丽隐杆线虫”,氧化医学和细胞寿命。卷。2015年,15页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. h·瓦格纳和s . Bladt植物药物分析:薄层色谱图谱施普林格,多德雷赫特;美国纽约,2009年。
29. j . p . j . Ru Li王et al .,“TCMSP:数据库系统从中药药理学,药物发现,“Cheminformatics杂志》第六卷,没有。1,p。13日,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m . Kanehisa m . Furumichi m .田边,佐藤y,和k . Morishima”KEGG:基因组的新视角,途径,疾病和药物,”核酸的研究,45卷,不。D1, D353-D361, 2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. i l·约翰斯通”线虫线虫的角质层:一个复杂的胶原结构,”BioEssays,16卷,不。3、171 - 178年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. a·r·c·里贝罗m l。s Cordeiro l·m·p·席尔瓦et al .,“Myrciaria tenella (DC)。o·伯格(桃金娘科)叶的抗氧化化合物,”抗氧化剂,8卷,不。8,310年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. k·r·c·贝利基督徒,美国普拉丹,m·g·奈尔和o . e .基督教“抗炎和抗氧化活动Coccoloba uvifera(Seagrapes),“植物化学,10卷,2011年。视图:谷歌学术搜索
34. g . s . Gusman p·r·v·坎帕纳·l·c·卡斯特罗,r . o . Castilho m . m .特谢拉和f·c·布拉加,”评估一些巴西的影响药用植物生产的TNF -α,CCL2 THP-1细胞。”以证据为基础的补充和替代医学卷。2015年,11页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. s . Habtemariam”回到过去的好时光:原油的价值植物药物混合物在21世纪,”国际化的补充和替代医学杂志》上》第六卷,没有。2、2017。视图:谷歌学术搜索
36. 答:a . Elzaawely t . d .宣,s . Tawata“抗氧化和抗菌活性Rumex对虾HOUTT。天线部分。”生物与制药公告,28卷,不。12日,第2230 - 2225页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. 中情局El-Haci, f . a . Bekkara w . Mazari f . Hassani和m·a·迪迪”筛选生物活性的蓼属植物maritimum l .从阿尔及利亚海岸”亚洲太平洋热带生物医学杂志》上,3卷,不。8,611 - 616年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. 即艾哈迈迪,m . s . a . Marzouk西北部城市白沙瓦f . a, m . r . El-Gindi和a . m . k .哈桑“Acylated Eugenia jambolana叶黄酮醇苷,”植物化学,卷。58岁的没有。8,1239 - 1244年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. A . k . Timbola Szpoganicz, A·布兰科f . d . Monache和m . g . Pizzolatti”一个新的黄酮醇从Eugenia jambolana叶子,”Fitoterapia,卷73,不。2、174 - 176年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. Y.-J。张,R.-Y。氮化镓,s .李et al。”抗氧化植物化学物质对慢性病的预防和治疗,”分子,20卷,不。12日,第21156 - 21138页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. n·s·穆罕默德Sairazi和k·n·s . Sirajudeen”天然产物及其生物活性化合物:神经电位对神经退行性疾病,”以证据为基础的补充和替代医学卷。2020年,30页,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. m .他J.-W。分钟,w l。香港,X.-H。他,J.-X。李,B.-W。彭”,审查牡荆碱的药理作用和isovitexin”Fitoterapia卷,115年,第85 - 74页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 郑胜耀李,e .月亮,郑胜耀Kim和k·r·李”奎尼酸衍生品从Pimpinella brachycarpa施加在lipopolysaccharide-induced小胶质细胞能够具有抗神经炎性反应活动,“生物有机和药物化学字母,23卷,不。7,2140 - 2144年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. b . m . Li Li y侯et al .,“抗炎作用的化学成分GINKGO BILOBAl .雄花在lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7巨噬细胞,”植物疗法的研究,33卷,不。4、989 - 997年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. m . Soukhtanloo e . Mohtashami a Maghrouni et al .,“天然产物作为有前途的多形性成胶质细胞瘤的目标:关注NF -κB信号通路。”药理报告,卷72,不。2、285 - 295年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. p·r·亨特,秀丽隐杆线虫模型在毒性测试中,“应用毒理学杂志,37卷,不。1,对于50 - 59页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. p·h·哈洛,s·j·佩里,s Widdison et al .,“线虫秀丽隐杆线虫作为一种工具来预测化学活性对哺乳动物发展和识别机制影响毒理学结果,“科学报告》第六卷,没有。1,第22965条,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. y悦,p .沈,徐y, y公园,“p-Coumaric酸提高氧化和渗透压力反应秀丽隐杆线虫”,粮食和农业的科学杂志》上,卷99,不。3、1190 - 1197年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. s . Choubey l . r . Varughese诉Kumar和诉Beniwal“药用没食子酸及其酯衍生品的重要性:专利审查,”药品专利分析师,4卷,不。4、305 - 315年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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