OMCL 氧化医学和细胞寿命 1942 - 0994 1942 - 0900 Hindawi 10.1155 / 2020/3928706 3928706 研究文章 Coccoloba alnifolia叶提取物作为一种潜在的抗氧化剂分子使用体外和体内试验 德梅洛 她曾Fentanes莫拉 1 2 戈麦斯 Dayanne洛佩斯 2 3 达席尔瓦 卢卡斯菲利普 1 席尔瓦 拉里萨滨佩雷拉 4 马查多 玛丽娜洛佩斯 5 6 Cadavid 塞萨尔奥兰多穆尼奥斯 5 Zucolotto 西尔瓦娜玛丽亚 4 德波拉奥利维拉 莉娃 5 多斯桑托斯 黛博拉雅苒阿尔维斯Cursino 7 罗查 雨果·亚历山大·奥利维拉 2 https://orcid.org/0000 - 0002 - 4690 - 2785 Scortecci 凯蒂Castanho 1 Cipak斯洛伐克总统加什帕罗维奇 安娜 1 Laboratorio de Transformacao足底e中em Microscopia (LTPAM) Departamento de Bioquimica 北里奥格兰德大学联邦做(UFRN) 59078 - 970年出生的 巴西 ufrn.br 2 Laboratorio de Biotecnologia de Polimeros Naturais(是) Departamento de Bioquimica 北里奥格兰德大学联邦做(UFRN) 59078 - 970年出生的 巴西 ufrn.br 3 西班牙联邦de Educacao Ciencia e Tecnologia做Piaui (IFPI) 校园de Sao Raimundo Nonato 圣Raimundo Nonato 64770 - 000 巴西 ifce.edu.br 4 Laboratorio de Produtos Naturais e Bioativos (PNBio) Departamento de Farmacia 北里奥格兰德大学联邦做(UFRN) 59010 - 180年出生的 巴西 ufrn.br 5 Laboratorio de遗传Bioquimica(激光) Departamento de Biologia Celular e遗传 北里奥格兰德大学联邦做(UFRN) 59078 - 970年出生的 巴西 ufrn.br 6 项目Pos-graduacao em Ciencias Biologicas Bioquimica Toxicologica Departamento de Bioquimica e Biologia分子 Centro de Ciencias Naturais e exata 联邦·德·圣玛丽亚大学 Camobi 97105 - 900年圣玛丽亚 RS 巴西 ufsm.br 7 Laboratorio de Fitoquimica Departamento de神物铺子 圣保罗(USP) 圣保罗 SP 05508 - 090 巴西 usp.br 2020年 10 10 2020年 2020年 6 6 2020年 9 8 2020年 2 9 2020年 10 10 2020年 2020年 版权©2020年曾Fentanes莫拉德梅洛et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

属<我talic> Coccoloba广泛应用于民间传统医学,但很少科学数据存在属。本研究的目的是描述的化学成分和抗氧化活性<我talic> c . alnifolia叶提取使用<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内化验。六个提取得到:己烷(他),氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),水提取物(凌晨),和水提取物(我们)。薄层色谱法(TLC)分析表明酚类的存在,皂甙,萜烯和类黄酮。<我talic> 在体外化验证明大量的抗氧化潜力,特别是对于极性提取物(EE,我,凌晨,我们)。此外,没有观察到毒性作用的哺乳动物细胞系对大多数提取物浓度的评估。的线虫<我talic> 秀丽隐杆线虫也用作吗<我talic> 在活的有机体内模型测试的抗氧化潜力。EE和选择,根据之前获得的结果。观察到EE和我们有任何毒性作用<我talic> 秀丽隐杆线虫发展。此外,抗氧化潜力评估使用<我talic> 叔丁基氢过氧化物作为一种压力源代理。EE的寿命增加<我talic> 秀丽隐杆线虫28%的控制,我们增加了39.2 - -41.3%的范围。高效液相色谱法(HPLC-DAD)显示没食子酸的存在,<我talic> p香豆酸和牡荆素的我们。因此,<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内数据显示的抗氧化潜力<我talic> c . alnifolia提取及其可能的生物技术的应用程序。

 Ministerio da Ciencia Tecnologia e Inovacao 慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府 Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量优越 1。介绍

自由基产生线粒体代谢的正常组成部分,过氧化物酶体,吞噬作用,炎症过程,局部贫血,和体育锻炼 1]。之间的平衡的生产和中和活性氧(ROS)的抗氧化系统是非常重要的,和一个失衡往往对ROS生产过剩导致所谓的氧化应激( 2, 3]。

此外,通常目标的活性物种的细胞如活性氧(ROS),活性氮物种(RNS)和活性硫物种(RSS)。这种不平衡可能损伤分子如蛋白质、脂质、DNA和RNA和导致代谢紊乱和疾病,如癌症、心血管疾病、糖尿病、动脉粥样硬化、中风、神经系统疾病、肾脏疾病,肝脏疾病,高血压,和风湿性关节炎等相关的氧化应激( 2- - - - - - 5]。

植物产生化合物的混合物称为次生代谢物,具有不同的生物和药理性质。这些次生代谢物是已知的抗氧化潜力,维持这种氧化平衡是很重要的。这些分子可能从不同的植物组织如树叶、树皮、根,和水果 6]。因此,识别和隔离的化合物是重要的在这个领域的研究主题( 7]。

蓼科(石竹目)约51属1100种分布在全球不同的生物群落。一些物种作为观赏植物,种植药用用途,和一些经济重要的木材生产家居用品的供应( 8]。属<我talic> Coccoloba由大约46种。其中,21日巴西和特有分布在几个生物群落:亚马逊森林,大西洋森林,Caatinga,巴西稀树大草原(塞拉多),和潘塔纳。<我talic> Coccoloba植物的茎,互生和全简单的叶子,与concresced乔木,和动脉。草本,灌木的、树栖或藤本植物( 9]。

的化学成分<我talic> Coccoloba被描述;它含有三萜、二萜醌类化合物、phytosteroids生物碱苯环型的,皂甙、黄酮类、单宁酸、没食子酸、儿茶素、没食子酸盐,myristin-3-O-8-rhamnoside,<我talic> β谷甾醇,<我talic> β羽扇豆醇、乌索和betulic酸、羧酸酯类、醛类、鞣花酸,苯甲酸,<我talic> o香豆酸、芦丁、杨梅酮、槲皮素( 10- - - - - - 12]。这个物种<我talic> c . uvifera,<我talic> c . cereifera,<我talic> c . mollis被评估为杀灭幼虫代理商对吗<我talic> 埃及伊蚊蚊子( 13),以及抗真菌( 14),细胞毒性 15),抗菌 10)、wood-biofungicidal phytopatogenic细菌( 12]。

Coccoloba alnifolia,俗称“pau-de estalo”或“cabucu,”是一个流行的巴西物种属。尽管所有这些用在传统的民间医学中,没有科学的次生代谢物成分的信息<我talic> c . alnifolia也对自己可能的生物活性。本研究的目的是描述化学成分和抗氧化活动<我talic> c . alnifolia提取使用<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内模型。五叶提取物通过一个串行提取(使用非极性溶剂极性溶剂),和第六提取只有水(基于民间使用)。一般来说,这些提取并不影响六个不同的哺乳动物细胞系的可行性。此外,<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内化验显示四极性提取物,情感表达,我,喂,和我们的抗氧化分子来源。此外,情感表达,我们提取不影响生育能力<我talic> 秀丽隐杆线虫线虫作为一个测试模型。因此,<我talic> Coccoloba alnifolia叶子有优秀的草药和抗氧化剂的发展潜力的产品。

 2。材料和方法 2.1。试剂

铁氰化钾,硫酸亚铁II,三氯乙酸、硫酸从默克公司购买(达姆施塔特,德国)。硝基蓝四唑(电视台)、单糖、diaminoethanetetraacetic酸(EDTA),葡萄糖,没食子酸,抗坏血酸,牛血清白蛋白蛋白质、抗坏血酸,蛋氨酸,3 - (4 5-dimethylthiazolyl-2) 2、5 -溴化diphenyltetrazolium (MTT),邻苯二酚紫、核黄素、钼酸铵、叔丁基过氧化氢(t-BOOH)从Sigma-Aldrich有限公司购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。碳酸氢钠、不必要的氨基酸和磷酸盐(PBS)从英杰公司购买公司(Burlington,加拿大)。杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)和胎牛血清(的边后卫)获得CULTILAB(巴西坎皮纳斯,SP)。青霉素和链霉素获得Gibco(美国TX沃思堡)。所有其他的溶剂和化学试剂均为分析纯Synth (Diadema、SP、巴西)。

 2.2。植物材料

Coccoloba alnifolia成熟叶收获在2015年5月从标本坐落在帕克das Dunas Natal, RN,巴西(UTM区250257315 m E 9357108 m N-GPS Garmin Etrex)。这个区域对应于大西洋森林生态区。识别后,代金券存入UFRN标本数量:UFRN 17133。这项研究是在SISBIO没有注册。54064 - 1,SISGEN不。A39FD4C。

 2.3。准备的提取

收获后,新鲜的叶子被分成小块,转移到一个烧瓶的比例1:10 (<我nline-formula> w / v )(100克新鲜树叶1000毫升溶剂)为每个溶剂浸渍在24小时使用。连续萃取的方法是使用不同的溶剂后的顺序从无极的极性溶剂,如正己烷(他),氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),和水提取物(凌晨)结束。准备使用的方法提取是一个串行使用不同的溶剂提取树叶浸软,这是添加每个溶剂(无极的极性溶剂),24 h。然后,叶子都过滤了,搬回瓶,和下一个溶剂是补充道。以这种方式,水提取物(凌晨)对应于最后溶剂用于此连续萃取。连续萃取分离的想法基于溶剂的化合物。此外,提取了只使用water-WE-was基于民间使用。

为了防止光降解,满瓶是铝箔。然后,它被放在一个瓶表在150 rpm 24小时24°C (Tecnal小屋)。提取是透过绘画纸1号。树叶转回烧瓶与第二溶剂后在相同条件下齿轮的提取。提取物在rotaevaporator干(Tecnal-TE 210)在40°C。提取被恢复到1% DMSO(默克公司),然后冻干(Labconco FreeZone 4.5)。所有提取resuspended成水最终浓度为100毫克/毫升(股票提取)和保持在-18°C到使用。

 2.4。总糖含量、酚类化合物和蛋白质 2.4.1。总糖

为了验证糖的提取量,phenol-H2所以4法和葡萄糖(Sigma-Aldrich)作为标准。总糖测定在490 nm(日本东京日立u - 2000) [ 16]。

 2.4.2。总酚类化合物

总酚类化合物的含量是衡量使用Folin Ciocalteu方法,和没食子酸(Sigma-Aldrich)作为标准。它为765 nm(美国加州BioTek时代微型板块,CA) ( 17]。

 2.4.3。总可溶性蛋白

总蛋白质含量测定使用布拉德福德方法,和牛血清白蛋白蛋白质(Sigma-Aldrich)作为标准。反应为595 nm(美国加州BioTek时代微型板块,CA) ( 18]。

 2.5。体外抗氧化活性

每一个抗氧化试验是在一式三份,重复做3次。所有数据都通过使用分光光度计BioTek时代微型板块(美国加州,CA)。的提取<我talic> c . alnifolia使用250<我talic> μ克/毫升。

2.5.1。总抗氧化能力(TAC)

抗氧化活性测定考虑减少+ 6在密苏里州+ 5一个绿色的植物提取物和随后形成磷酸/ Mo+ 5复杂在酸博士所用的提取浓度是250年<我talic> μg / mL,混合硫钼酸acidammonium 600毫米),并为90分钟(在100°C的环境 19]。这一次后,混合物在室温下保持冷静,和吸光度测量在695海里。负控制的结果进行了比较(蒸馏水)。表达的总抗氧化能力的抗坏血酸(EAA / g)。

 2.5.2。DPPH

抗氧化活性测定的抗氧化剂的能力存在于样本来清除自由基DPPH ( 20.]。提取了250年的浓度<我talic> μ克/毫升和100年<我talic> μL (DPPH(0.1毫米)。混合物混合大力,它被允许站在室温下在30分钟。然后,吸光度测量517海里。空白控制乙醇99.5% (Synth,巴西),和消极的控制是蒸馏水。DPPH清除活动计算如下:<我nline-formula> 扫气 活动 % = 1 − 样本 − 空白 / 负 控制 × One hundred. % 。

 2.5.3。还原能力测定

样本的还原能力评估铁氰化钾还原成亚铁氰化钾( 21]。250年的植物提取物<我talic> μg / mL被添加到解决方案包含0.2磷酸盐缓冲剂(pH值6.6)和铁氰化钾(1%<我nline-formula> w / v )在最后一卷4毫升。50°C的反应是孵化20分钟;这段时间之后,它通过添加柠檬酸溶液(10%停止了<我nline-formula> w / v )。当时的解决方案与蒸馏水混合和氯化铁(0.1%<我nline-formula> w / v )。吸光度测量700海里。磷酸缓冲作为空白控制。结果被表示为一个百分比的活动0.1毫克/毫升抗坏血酸(standard-Sigma-Aldrich)。

 2.5.4。过氧化物清除活动

分析是基于从提取抑制能力的光化学还原氮蓝四唑(电视台)riboflavin-light-NBT系统[ 21, 22]。要做到这一点,250年浓度的提取<我talic> μg / mL被添加到50毫米磷酸盐缓冲剂(pH值7.8),13毫米蛋氨酸,EDTA 100毫米,75毫米电视台,核黄素和2毫米。后,混合物,公开的解决方案是10分钟日光灯。颜色,蓝色的变化是由于甲瓒生产,吸光度监测的560海里。在分光光度计。EDTA被用作控制和蒸馏水为空白。结果表示为百分数清除: (1) 百分比 的 过氧化物 扫气 = 标准 控制 − 样本 / 标准 控制 − 空白 × One hundred. 。

2.6。细胞Viability-MTT化验

的影响<我talic> c . alnifolia提取物对细胞生存能力评估。nontumour细胞系之一是使用:NIH / 3 t3(写明ATCC crl - 1658小鼠成纤维细胞)以及五种肿瘤细胞系:海拉(写明ATCC CCL-2-an腺癌人类子宫的细胞),SiHa(写明ATCC HTB-35-a人类细胞鳞状细胞癌)、曲泽写明ATCC crl - 1435人类前列腺腺癌(细胞),B16-F10(写明ATCC crl - 6475小鼠皮肤黑色素瘤细胞),和PANC-1写明ATCC crl - 1469 a(胰腺癌细胞)。首先,细胞系生长在培养瓶使用修改后的杜尔贝科鹰介质(DMEM)补充的边后卫(10%<我nline-formula> v / v )和抗生素(青霉素100 U /毫升和100<我talic> μg / mL链霉素)。这些培养瓶中维护一个湿润有限公司5%2气氛在37°C。对细胞生存能力评估提取影响,这些细胞被转移到96孔板<我nline-formula> 5 × 10 3 细胞每口井,直到他们达到融合。提取(他、CE、情感表达、我,喂,和AE)被添加在0,100,250,500<我talic> μg / mL为24小时37°C公司5%2的气氛。潜伏期后,介质改为100<我talic> μL (MTT(1毫克/毫升溶解在DMEM)。然后,细胞培养4 h有限公司5%2气氛在37°C。接下来,井是吸气,甲瓒晶体可溶性的100<我talic> μ信用证以及乙醇( 23, 24]。板是在570 nm吸光度使用一个时代微型板块分光光度计(Winooski BioTek仪器公司,VT,美国)。细胞生存能力决定,而消极的控制(只有DMEM)使用以下公式:<我nline-formula> % 生存能力 = 一个 测试 / 一个 控制 × One hundred. ,在这<我nline-formula> 一个 测试 对应的吸光度实验组,<我nline-formula> 一个 控制 的吸光度-控制。

 2.7。体内抗氧化活性 2.7.1。<斜体>线虫< /斜体>维护和治疗

秀丽隐杆线虫N2(野生型线)获得的<我talic> 秀丽美国遗传学中心(明尼苏达大学),并保存在线虫生长培养基(NGM)播种<我talic> 大肠杆菌根据布兰诺OP50 20°C ( 25]。蠕虫是同步使用漂白溶液在妊娠雌雄同体(NaOCl 1%,氢氧化钠0.25米)有动物在L1阶段(Sulston何杰金氏病,1988)。治疗,EE和凌晨提取过滤使用0.22<我talic> μm过滤器(默克公司)和添加到NGM最终浓度1或10毫克/毫升。同步L1种植在NGM板块包含提取和播种<我talic> 大肠杆菌OP50 48 h在20°C,直到他们达到L4阶段。

 2.7.2。在<斜体>线虫毒性< /斜体>鸡蛋

化验,30个鸡蛋放入三NGM板块包含EE和凌晨0,1,10毫克/毫升,保持在20°C 48 h。在这之后,L4和鸡蛋的数量计算。这个试验是在三个独立做化验的总数90个鸡蛋/组。

 2.7.3。氧化压力分析

氧化应激试验了用叔丁基过氧化氢(t-BOOH)作为ROS生产商( 26, 27]。四十蠕虫在L4阶段接受EE和浓度在0,1,10毫克/毫升为48小时20°C。之后,虫子被转移到12-well板与8毫米t-BOOH M9缓冲区和评估每半个小时。那些虫子没有反应刺激被认为是死(无运动)。一些蠕虫被审查的,这意味着当蠕虫不存在或氧化应激死亡以外的原因。这些分析都是在五个独立的化验。

 2.8。薄层色谱法(TLC)

Chromatoplates硅胶的<我nline-formula> F 254年 被用于分析。移动阶段使用如下:(i)乙酸乙酯:甲酸:水(8:0.8:1,<我nline-formula> v / v / v ),(2)乙酸乙酯:甲酸:甲醇:水(10:0.5:0.6:0.2,<我nline-formula> v / v / v / v ),(iii)甲苯:乙酸乙酯:甲酸(5:5:0.5,<我nline-formula> v / v / v )。复合可视化被喷洒硫酸香兰素的解决方案及实现,0.5%天然试剂(difenilboriloxietilamina),甲醇,1%氯化铁和Dragendorff。在薄层色谱使用的标准如下:槲皮素,乌索酸、没食子酸,isoquercetin,绿原酸,鞣花酸,异槲皮苷,luteonin, canferol,芦丁,咖啡酸,儿茶素,orientin, isoorientin,牡荆素,isovitexin (Sigma-Aldrich<我nline-formula> 纯度 ≥ 95年 % )。然后,观察颜色,保留因子(Rf)的点测量并与文献[ 28]。我和EE, Co-TLC做是为了证实存在的糖苷类黄酮牡荆素,isovitexin。

 2.9。高效液相色谱法(HPLC-DAD)

我们的分析是HPLC-DAD(安捷伦1260)配备了C18柱(Zorbax -<我nline-formula> 150年 毫米 × 4所示。6 毫米 我 。 d 。 × 3所示。5 μ 米 )。的梯度洗脱是0.1%醋酸(a)和乙腈(B)如下:10% B(6分钟),10 - 15% B(6 - 7分钟),15%(7-22分钟),15 - 50%的B(22-32分钟),50 - 100% B(32-42分钟),和100%的B(42-50分钟),以恒定流量的1毫升/分钟。样品准备在1毫克/毫升使用甲醇(高效液相色谱级)和注射的体积是3<我talic> μl .列温度是45°C,和检测是在228年,254年,280年,290年,320年,340和352海里。酚类化合物的识别是通过比较保留时间和紫外可见吸收光谱与标准化合物。

中使用的标准HPLC-DAD如下:3-hydroxycinnamic酸(501-52-0),苯甲酸(65-85-0),咖啡酸(331-39-5),92年肉桂酸(621-82-9)、绿原酸(327-97-9),鞣花酸(476-66-4),阿魏酸(1135 - 93年24-6)、没食子酸(149-91-7)、龙胆酸(490-79-9),o-coumaric酸(583-17-5),p-coumaric酸(501-98-4),rosmarinic酸(20283-92-5)、芥子酸(530-59-6),芹黄素(520-36-5),apiin-apigenin-7——(2-O-apiosylglucoside)(26544-34-3),山柰酚(520-18-3)、山柰酚3-O-D-galactoside (23627-87-4), 3-O-methylkaempferol (1592-70-7), biorobin-kaempferol 3 -<我talic> β-robinobioside (17297-56-2), nicotiflorin-kaempferol 3 -<我talic> βrutinoside(17650-84-9),儿茶素(154-23-4),chrysin-5, 7-dihydroxyflavone (480-40-0), chrysoeriol-3<我nline-formula> ′ -O-methylluteolin (491-71-4)、daidzein-4 7-dihydroxyisoflavone(486-66-8)表儿茶素(490-46-0),genistein-4<我nline-formula> ′ 5 7-trihydroxyisoflavone (446-72-0), gossypetin-8-hydroxyquercetin(489-35-0),橘皮苷(520-26-3),hesperitin (520-33-2), hispidulin-6-methoxyapigenin (1447-88-7), homoorientin-luteolin 6 c -<我talic> β-葡萄糖苷(4261-42-1)、异鼠李亭3 -<我talic> β半乳糖苷(6743-92-6)、异鼠李亭3 -<我talic> β-D-glucoside (5041-82-7), keioside-isorhamnetin 3-O-robinobioside (107740-46-5), narcissin-isorhamnetin 3 -<我talic> βrutinoside(604-80-8),毛地黄黄酮(491-70-3),杨梅酮(529-44-2),柚苷配基(480-41-1),neohesperidin (13241-33-3), orientin-luteolin 8-C-glucoside (28608-75-5), quercetagetin-7-O-glucoside(548-75-4)、槲皮素(117-39-5),hyperin-quercetin 3 -<我talic> β半乳糖苷(482-36-0),isoquercetrin-quercetin 3 -<我talic> β葡萄糖苷(482-35-9)、槲皮素3 -<我talic> β-gentiobioside(7431-83-6)、槲皮素3-O-robinobioside (52525-35-6), quercitrin-quercetin 3-O-rhamnoside(522-12-3),鼠李亭(90-19-7),rutin-quercetin 3 -<我talic> βtaxifolin-dihydroquercetin -rutinoside (153-18-4) (480-18-2), tiliroside-kaempferol 3 - (6<我nline-formula> ” -O-p-coumaroyl)葡萄糖苷(20316-62-5),vitexin-apigenin 8-C114葡萄糖苷(3861-93-4)。其他标准对应于图书馆在植物化学实验室,植物学,圣保罗大学。

 2.10。生物信息学分析

通过薄层色谱分析,存在两种糖苷类黄酮牡荆素isovitexin<我talic> c . alnifolia叶提取物被观察到。这些化合物被用来搜索在中医系统药理学(TCMSP)数据库基因目标( 29日]。获得的数据在使用TCMSP京都基因和Gnome百科全书(KEGG)数据库( 30.]。中列出的路径识别在KEGG降序排列显示<我nline-formula> p 价值。这些数据被用来建立一个网络使用字符串10版本11 ( https://string-db.org/)。

 2.11。统计分析

所有结果都表示为<我nline-formula> 的意思是 ± 标准 。每一个试验是一式三份或五个一组,和每一个重复了至少3次。统计分析是使用GraphPad棱镜6.0 (GraphPad软件公司,圣地亚哥、钙、美国),使用变异分析(ANOVA)和图基检测后比较不同组。的差异,<我nline-formula> p 值≤0.05被认为是重要的。

 3所示。结果 3.1。总糖含量、酚类化合物和蛋白质

5从非极性提取得到一系列极:己烷(他)、氯仿(CE)、乙醇(EE),甲醇(我),和水提取(凌晨),和第六只与水水提取物(我们)。表 1总酚类化合物显示了从2.3不等<我talic> μ61.26 g / g<我talic> μg / g,他< CE <我们< < EE <我。糖含量范围从33.45<我talic> μ225.00 g / g<我talic> μg / g,订单was CE < <凌晨< EE <我们<我。蛋白质含量很低,从1.1到4.5<我talic> μg / g。

酚醛物质的总含量、蛋白质和糖从树叶中提取得到的<我talic> c . alnifolia。

提取 糖(<我talic> μg / g) 酚类化合物(<我talic> μg / g) 蛋白(<我talic> μg / g)
己烷(他) 34.35 2.30 1。4
氯仿(CE) 33.45 10.54 1。1
乙醇(EE) 183.81 44.95 3所示。9
甲醇(我) 225.00 61.26 4所示。5
水提取结束(小) 128.60 33.63 2。8
水提取物(我们) 198.56 17.67 2。0
3.2。< /斜体> <斜体>体外抗氧化活性

考虑到存在的酚类化合物和理解这些植物化学物质可能与抗氧化活性有关,每个六的抗氧化潜力<我talic> c . alnifolia提取使用四个化验分析:总抗氧化能力(TAC)、DPPH (2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl-hydrate)自由基方法,还原能力测试和过氧化物清除活动。

TAC试验评估样本捐赠电子的能力,从而中和活性物种。TAC的最高价值被发现对我来说(111.38 EEAq毫克)和EE (96 EEAq毫克)。凌晨(58.25 EEAq毫克),我们(59.89 EEAq毫克)等价的结果(图 1(一))。DPPH实验,抗氧化活性范围从49%到114%(图 1 (b))。此外,极性提取物显示最高的活动还原能力测定,值的范围从83.9%到105.4%(图 1 (c))。相似的结果也为超氧化物自由基清除实验观察,极性提取物的最高价值观观察,这些值的范围从76.4%到91%(图 1 (d))。

在体外抗氧化活动使用<我talic> Coccoloba alnifolia提取物。(一)总抗氧化能力(TAC)。的<我nline-formula> x 设在对应不同的提取,<我nline-formula> y 设在对应抗坏血酸在毫克当量(AAEq毫克)。(b)的清除DPPH自由基。的<我nline-formula> x 设在对应不同的提取使用,<我nline-formula> y 设在对应的百分比DPPH清除。(c)还原能力。的<我nline-formula> x 设在对应不同的提取,<我nline-formula> y 设在对应比例的抗氧化活性。(d)超氧化物自由基清除。的<我nline-formula> x 设在对应不同的提取,<我nline-formula> y 设在对应比例的抗氧化活性。为每个分析提取浓度是250<我talic> μ克/毫升。他:己烷提取;CE:氯仿提取;情感表达:乙醇提取;我:甲醇提取;凌晨:水提取;《我们》:水提取。每个试验做一式三份,三次和化验。使用方差分析的结果进行了分析和图基的测试。<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ ∗ 提取之间的显著差异<我nline-formula> p < 0.001 ;<我nline-formula> ∗ ∗ ∗ 提取的显著区别<我nline-formula> p < 0.01 。

皮尔森系数分析显示出积极的酚类化合物含量之间的相关性<我talic> c . alnifolia提取和抗氧化剂化验。TAC之间有很强的相关性和还原能力测定(吃晚饭。表 1),一个温和的相关性与超氧化物自由基清除。此外,糖含量呈现很强的相关性为还原能力测定和TAC和温和的相关性与超氧化物自由基清除(吃晚饭。表 1)。

 3.3。体内<斜体> < /斜体>分析

上述抗氧化剂化验数据促使我们进行抗氧化试验<我talic> 在活的有机体内。然而,在进行这些分析之前,有必要评估这些提取物的毒性潜在排除可能对动物使用的有害影响<我talic> 在活的有机体内实验。然后,他们影响nontumour细胞3 t3和五种肿瘤细胞系,海拉,SiHa、曲泽、B16-F10, PANC-1,进行了分析。在那之后,<我talic> 秀丽隐杆线虫被用来作为<我talic> 在活的有机体内模型。

3.3.1。细胞生存能力

细胞系,六个提取的影响在三个浓度(100<我talic> μg / mL, 250<我talic> μ克/毫升和500<我talic> μg / mL)进行评估(图 1)。这些提取物对细胞没有任何影响在任何浓度的三个分析可行性。然而,我和小,减少细胞生存能力观察nontumour细胞约25% - -35%(我在250年或500年<我talic> μg / mL,凌晨在500<我talic> μg / mL)(表 2)。此外,对于肿瘤细胞系,在一般情况下,细胞生存能力没有显著变化。减少细胞生存能力为他10 - 25%不等,CE,我们观察海拉和SiHa细胞系(表 2)。因此,在一般nontumour和肿瘤细胞系,<我talic> c . alnifolia提取没有细胞毒性的<我talic> 在活的有机体内细胞系模型。

的影响<我talic> c . alnifolia提取物对细胞生存能力使用不同浓度(100、250和500<我talic> μ在nontumour g / mL), 24小时孵化后肿瘤细胞系。

提取 浓缩的。 细胞系#
NIH / 3 t3 海拉 SiHa 曲泽 B16-F-10 PANC-1
他 One hundred. 120.68 ± 27.23 91.74 ± 19.92 75.59 ± 20.75 109.33 ± 23.12 139.64 ± 26.79 130.58 ± 40.12
250年 124.83 ± 44.05 112.44 ± 6.83 83.15 ± 12.66 113.08 ± 17.49 145.54 ± 23.01 162.30 ± 18.52
500年 188.97 ± 15.68 103.27 ± 1.77 95.68 ± 14.30 123.72 ± 27.13 104.56 ± 30.87 139.68 ± 28.42
CE One hundred. 132.61 ± 3.41 74.26 ± 1.91 83.43 ± 7.66 117.07 ± 5.83 135.60 ± 83.95 113.97 ± 10.64
250年 131.22 ± 20.44 101.68 ± 12.80 98.37 ± 1.24 116.21 ± 11.43 206.72 ± 11.41 145.28 ± 10.74
500年 172.54 ± 15.33 99.22 ± 17.64 106.30 ± 3.93 132.68 ± 31.85 264.33 ± 63.63 158.97 ± 0.17
EE One hundred. 130.19 ± 3.63 112.50 ± 37.64 105.33 ± 7.79 125.51 ± 1.86 84.69 ± 6.51 100.72 ± 6.31
250年 117.57 ± 28.21 119.26 ± 16.78 120.36 ± 20.10 125.12 ± 4.42 123.01 ± 18.46 118.93 ± 1.06
500年 100.45 ± 30.10 102.37 ± 30.54 122.24 ± 8.19 107.96 ± 10.68 120.18 ± 11.19 111.22 ± 14.92
我 One hundred. 74.69 ± 22.23 88.57 ± 2.58 106.01 ± 1.04 122.33 ± 6.68 287.14 ± 91.82 138.11 ± 28.11
250年 67.25 ± 29.26 100.40 ± 3.89 118.88 ± 3.95 114.25 ± 7.24 270.75 ± 68.13 124.17 ± 7.75
500年 66.74 ± 6.32 74.26 ± 14.01 111.19 ± 10.36 99.12 ± 3.92 257.63 ± 60.13 137.70 ± 72.86
凌晨 One hundred. 69.67 ± 76.06 95.81 ± 11.21 92.45 ± 31.21 125.24 ± 7.60 186.85 ± 76.03 126.62 ± 40.25
250年 67.08 ± 32.71 109.16 ± 30.89 106.87 ± 19.22 121.37 ± 2.20 214.59 ± 41.43 151.70 ± 55.60
500年 68.81 ± 28.83 83.49 ± 20.88 96.53 ± 22.22 100.87 ± 14.13 243.80 ± 139.33 145.63 ± 37.60
我们 One hundred. 109.96 ± 60.34 92.39 ± 30.05 103.31 ± 8.57 127.17 ± 32.17 133.90 ± 21.36 84.16 ± 4.91
250年 68.81 ± 34.60 91.78 ± 5.65 119.19 ± 12.50 109.21 ± 20.20 155.70 ± 50.79 89.09 ± 17.49
500年 70.37 ± 16.51 90.20 ± 0.13 99.35 ± 13.43 108.46 ± 7.45 170.46 ± 71.85 90.63 ± 17.25

他:己烷提取;CE:氯仿提取;情感表达:乙醇提取;我:甲醇提取;凌晨:水提取;《我们》:水提取。#NIH / 3 t3:写明ATCC crl - 1658小鼠成纤维细胞;希拉:写明ATCC CCL-2-adenocarcinoma人类子宫的细胞;写明ATCC HTB-35-human SiHa:鳞状细胞癌的细胞;曲泽:写明ATCC crl - 1435人类前列腺腺癌细胞;B16-F10:写明ATCC crl - 6475小鼠皮肤黑色素瘤细胞;写明ATCC crl - 1469 PANC-1:胰腺癌细胞。

 3.3.2。毒性的<斜体> C。线虫< /斜体>鸡蛋

秀丽隐杆线虫不渗透角质层,这是一种细胞外基质的胶原蛋白,形成一个多功能的外骨骼,使得通过物质困难( 31日]。因此,更高的提取浓度比细胞系化验使用。考虑获得的结果与抗氧化剂和细胞系,提取,EE和我们选择的评估。这个模型中,1和10毫克/毫升浓度提取被用来评估可能的毒性影响鸡蛋孵化(图 2)。控制相比,70%的蛋孵化,提取,我们和情感表达,也有类似的效果在1毫克/毫升和10毫克/毫升,从70%到91%不等(图 2)。因此,情感表达和我们没有任何毒性作用在蛋中孵化<我talic> 秀丽隐杆线虫模型。

孵化蛋的百分比<我talic> 秀丽隐杆线虫处理提取的<我talic> c . alnifolia。的<我nline-formula> x 设在对应于治疗与乙醇(EE)和水提取物(我们)在0毫克/毫升(控制),1毫克/毫升,10毫克/毫升。的<我nline-formula> y 设在对应百分比蛋孵化。数据获得一式五份,他们分析的方差分析和图基的测试意义<我nline-formula> p ≤ 0.05 。

 3.3.3。体内<斜体> < /斜体>使用C <斜体>抗氧化活性。线虫< /斜体>模型

因为我们提取的情感表达和没有对卵孵化的毒性和胚胎发展,这些提取追究他们<我talic> 在活的有机体内抗氧化效果<我talic> 秀丽隐杆线虫。对于这些化验,野生动物(N2)被使用和接受EE和我们在1和10毫克/毫升。随后,这些蠕虫分析氧化应激条件下为生存(治疗<我talic> 叔丁基氢过氧化物(t-BOOH))。增加公差对氧化应激条件下推行t-BOOH治疗观察EE和我们治疗(数据 3(一个)和 3 (b))。EE控制动物的治疗,平均生存时间为7.5 h,相比之下,平均生存时间为10.5 h和EE(1毫克/毫升和10毫克/毫升),表明增长了28.6%(表 3)。

在活的有机体内抗氧化活性的<我talic> c . alnifolia提取使用<我talic> 秀丽隐杆线虫模型。(一)生存分析<我talic> 秀丽隐杆线虫蠕虫治疗EE在氧化应激(t-BOOH)治疗。EE的治疗方法是用0毫克/毫升(控制),1毫克/毫升,10毫克/毫升(b)的生存分析<我talic> 秀丽隐杆线虫蚯蚓处理我们在氧化应激治疗(t-BOOH)。我们的治疗方法是用0 mg / mL(控制),1毫克/毫升,10毫克/毫升。生存对于治疗观察每3小时(3、6、9、12、15日,18日和21 h)。蠕虫被维持在20°C。提取治疗相比,生存率较对照组(<我nline-formula> p < 0.0001 )。数据是一式五份,并收集分析的方差分析和图基的测试(<我nline-formula> p ≤ 0.05 )。

生存分析使用<我talic> 秀丽隐杆线虫蠕虫来衡量EE提取的影响。

生存条件 平均生存时间(小时) 生存意味着变化(%) p value-Log-rank (Mantel-Cox)测试 死去的动物数量/审查
控制 7.5 80/0
EE 1毫克/毫升 10.5 28.6 < 0.0001 74/6
EE 10毫克/毫升 10.5 28.6 < 0.0001 80/0

控制动物的治疗,平均生存时间为4.8 h为7.9 h和8.2 h 1毫克/毫升,10毫克/毫升,我们分别(图 3 (b))。这种差异代表(1毫克/毫升)增长了39.2%和41.3%(10毫克/毫升)下t-BOOH治疗(表 4)。

使用体内模型——生存分析<我talic> 秀丽隐杆线虫模型来评估我们在一生中提取。

生存条件 平均生存时间(小时) 生存意味着变化(%) p value-Log-rank (Mantel-Cox)测试 死去的动物数量/审查
控制 4所示。8 80/0
我们1毫克/毫升 7.9 39.2 < 0.0001 80/0
我们10毫克/毫升 8.2 41.3 < 0.0001 80/0
3.4。植物化学的化合物被薄层色谱法(TLC)

薄层色谱分析显示,酚类化合物的存在,如类黄酮及其化合物可能与抗氧化活性有关中观察到<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内化验。当chromatoplates透露使用硫酸香草醛,五颜六色的斑点的皂甙(CE、情感表达、我,我们),和萜烯(CE、情感表达和我)被观察到。此外,chromatoplates接触氯化铁溶液发达点表明极性提取物中酚类化合物的存在(EE,我,小,和EE),并与自然试剂,观察极地提取黄酮类化合物的存在(EE,我,凌晨,我们)。为了确定一些化合物存在于极地活性提取物,标准被用于co-TLC分析和牡荆素(<我nline-formula> 射频 = 0.51 ,绿色荧光)和isovitexin (<我nline-formula> 射频 = 0.40 绿色荧光)被发现在EE和我。酚类和黄酮类化合物极性提取物,尤其是EE和我,观察。

 3.5。我们通过HPLC-DAD化学调剖

根据观察结果<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内化验EE和我们和传统民间浸渍的方法提取的水,我们选择我们的高效液相色谱进一步描述(HPLC-DAD),作为薄层色谱显示牡荆素,isovitexin的存在。

HPLC-DAD显示几个峰(图 4),评估在不同的紫外光谱(228 - 352海里)。与标准相比,峰值# 2与没食子酸(<我nline-formula> tr = 2.000 -280海里),峰值# 16对应<我talic> p香豆酸(<我nline-formula> tr = 10.257 -280海里),峰值# 19牡荆碱(<我nline-formula> tr = 13.576 280 - 352 nm)。牡荆素的存在是在协议与薄层色谱数据。

我们HPLC-DAD色谱。我们使用HPLC-DAD分析。306年检测波长被设定为360海里,<我nline-formula> x 设在对应于每个峰的保留时间(分钟),和<我nline-formula> y 设在对应在茂峰的强度。吸收光谱峰值# 2对应于没食子酸,# 16<我talic> p香豆素,牡荆素# 19。

 3.6。生物信息学分析

生物信息学是一个很好的工具,数据挖掘潜在目标考虑的两个生物活性分子中标识<我talic> c . alnifolia摘要:牡荆素,isovitexin。基因和基因组的京都百科全书(KEGG)数据库是用来识别可能的这些生物活性分子的目标。这些分子可能与路径相关的免疫系统,心血管疾病,信号通路,癌症,神经系统,和其他人。超过32个目标是观察(表 5)。重叠的目标分析时,一些基因目标如IKBKB PTGS2, RELA, TNF, MAPK7, AR, NF-B观察(表 5和图 5)。此外,生物信息学方法建议中标识的生物活性分子<我talic> c . alnifolia可能有抗氧化和抗炎活动。

KEGG通路和基因目标为牡荆素,isovitexin重叠后分析。

KEGG闪亮(<我talic> 智人) 调整<我nline-formula> p 价值 纠正<我nline-formula> p 价值 相关基因(目标)
免疫系统 1.80<我nline-formula> E -12年 2.36<我nline-formula> E -10年 IKBKB; PTGS2 RELA;肿瘤坏死因子;MAPK7
信号转导 1.37<我nline-formula> E -09年 6.97<我nline-formula> E -08年 IKBKB; PTGS2 RELA;肿瘤坏死因子;MAPK7
心血管疾病 4.96<我nline-formula> E -09年 1.30<我nline-formula> E -07年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子;MAPK7
耐药性:抗肿瘤药 1.68<我nline-formula> E -08年 3.67<我nline-formula> E -07年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
传染病病毒 3.30<我nline-formula> E -08年 6.17<我nline-formula> E -07年 IKBKB; PTGS2 RELA;肿瘤坏死因子
传染病:细菌 8.65<我nline-formula> E -07年 5.67<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
传染病寄生虫 2.05<我nline-formula> E -07年 2.24<我nline-formula> E -06年 PTGS2; RELA;肿瘤坏死因子;IKBKB
内分泌系统 1.67<我nline-formula> E -07年 2.08<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
信号通路 1.74<我nline-formula> E -07年 2.08<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
发展和再生 1.02<我nline-formula> E -06年 6.37<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
人类疾病:癌症 4.00<我nline-formula> E -07年 4.03<我nline-formula> E -06年 IKBKB; PTGS2 RELA;MAPK7
内分泌和代谢疾病 6.20<我nline-formula> E -07年 4.77<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子
神经系统 8.24<我nline-formula> E -07年 5.67<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA MAPK7
细胞生长和死亡 1.22<我nline-formula> E -06年 7.27<我nline-formula> E -06年 IKBKB; RELA;肿瘤坏死因子

示意图表示从一个使用字符串interactome 10版本11。这interactome显示可能的靶基因从牡荆素isovitexin,酚类化合物在<我talic> c . alnifolia提取物。从KEEG获得的数据被用来建立一个网络使用字符串10版本11。每个圆对应于一个基因;行表明这些基因是如何连接的。蓝线表示策划数据库,粉色线表示由实验决定的,从文本挖掘黄线表示数据,黑色线表示coexpression,绿线表示基因附近。

 4所示。讨论

Coccoloba alnifolia已经在巴西东北部民间医学中使用,但是没有科学的信息关于其化学成分或抗氧化活动。在这项研究中,六叶提取物的化学成分和生物活性的特征是通过一系列的溶剂(无极的极地串行方法) 32]。化学分析显示存在的糖,蛋白质和酚类化合物。这些成分之间的比例提取;EE,我,凌晨,我们提取含有大量的糖和温和的酚类化合物,而蛋白质是非常低的提取物。

阿拉姆et al。 5]表明,极性溶剂有利于提取酚类化合物,和本文提供的数据显示,这些更高浓度的酚类化合物和黄酮类提取物(EE,我们,我,凌晨,我们)。TLC还显示存在的萜烯(CE、情感表达、我,我们)和皂甙(CE、情感表达、我,凌晨)。co-TLC、牡荆素的存在和isovitexin被观察到,虽然HPLC-DAD显示没食子酸的存在,<我talic> p香豆酸和牡荆素我们。虽然这些化合物被确定,以前在其他<我talic> Coccoloba物种( 10, 33, 34),我们的研究是第一个报道他们的存在<我talic> c . alnifolia。在此基础上,重要的是要评估的抗氧化活性和其他生物的活动<我talic> c . alnifolia提取含有生物活性分子的混合物除了牡荆素和isovitexin,由co-TLC识别( 35)和HPLC-DAD我们。

这里获得的结果显示,优秀的抗氧化潜力EE,我,凌晨,我们,特别是减少权力和DPPH自由基清除。TAC显示更高的抗氧化活性EE和我。DPPH评估样本的能力清除DPHH自由基,还原能力和TAC化验分析样品捐赠电子的能力。Gusman et al。 34)使用的DPPH实验观察抗氧化活性<我talic> c . cereifera和抗氧化活性利用DPPH也一直在观察等其他物种从蓼科<我talic> Rumex对虾( 36),<我talic> 蓼属植物maritimum( 37]。这些物种已经被用于传统医学在亚洲,欧洲,非洲,加强在这里获得的数据<我talic> c . alnifolia。酚类化合物的抗氧化潜力可能以及糖中提取,如图所示皮尔森的相关性。可能与酚类化合物有关标识的糖与糖分子,如类黄酮苷、浓缩单宁,和糖苷三萜烯,这或许可以解释糖的存在<我talic> c . alnifolia提取( 38, 39]。这些提取物的抗氧化剂可能观察到可能与不同的生物活性分子,可能采取行动,清除自由基,减少活性氧对细胞的影响,因此维持之间的平衡生产和退化 35, 40, 41]。

在体外化验显示,<我talic> c . alnifolia有趣的抗氧化潜力,<我talic> 在活的有机体内化验使用细胞系表明,一般来说,六提取是3 t3 nontumour细胞株的细胞毒性和海拉,SiHa、曲泽、B16-F10, PANC肿瘤细胞系。另一方面,Tsuboy et al。 15观察到根提取物<我talic> c . mollis更比叶提取物对HTC肿瘤细胞株的细胞毒性。他等。 42)表明,牡荆素,isovitexin是优秀的抗氧化分子,有广泛的抗氧化剂,抗增殖、抗炎和其他属性。此外,它已被证实的摘录<我talic> c . uvifera和<我talic> c . cereifera促炎的活动和可能作用于肿瘤坏死因子-<我talic> α(肿瘤坏死因子-<我talic> α)[ 33, 34]。这里使用的生物信息学方法,考虑到存在的牡荆素isovitexin,建议<我talic> c . alnifolia提取可能作用于TNF -<我talic> α和prostaglandin-endoperoxide合成酶(发现或COX)。Habtemariam [ 35)提到,提取生物活性分子的混合物可能单独或协同作用着。此外,它已被观察到,自然产品可能采取行动的信号途径,例如,NF -<我talic> κB信号通路( 4, 35, 43- - - - - - 45]。使用牡荆素,isovitexin生物信息学数据显示,一些基因目标是抗炎基因如NF -<我talic> κB和cox - 2。

此外,<我talic> 秀丽隐杆线虫已被证明是一个优秀的模型确定化合物的毒性。一些分析可能显示毒性,如蛋孵化和线虫发展( 46, 47]。获得的结果表明,EE和我们没有有毒,因为他们并不影响蛋孵化,而这些提取物有抗氧化应激的作用当t-BOOH用作压力源代理。这些提取增加1毫克/毫升EE存活率28%,31%为1毫克/毫升,42% 10毫克/毫升的我们相比,控制动物。悦et al。 48观察到,<我talic> p香豆酸能够降低氧化应激<我talic> 秀丽隐杆线虫以及增加其寿命在氧化应激条件下,类似于情感表达,我们观察到的是什么。Choubey et al。 49)显示不同的活动没食子酸由于其抗氧化的潜力。因此,<我talic> p香豆酸、没食子酸和牡荆素可能有些生物活性分子存在于我们提取的抗氧化潜力,没有毒性,为本文提供的数据中观察到<我talic> Coccoloba alnifolia提取物。

其他研究显示,酚类化合物<我talic> Coccoloba属。科塔( 10)处理<我talic> c . acrostichoides确定了桦木醇,<我talic> β用TLC谷甾醇。Ashmawy et al。 12)处理<我talic> c . uvifera叶子发现鞣花酸,苯甲酸,<我talic> o香豆酸、芦丁、杨梅酮、槲皮素在水、丙酮和乙醇提取物。此外,为<我talic> c . mollisphytosteroids三萜、二萜醌类化合物,苯被确定在叶和芽 11]。

为<我talic> c . alnifolia,在目前的研究中,没食子酸等酚类化合物,<我talic> p香豆酸、牡荆素、isovitexin观察,HPLC-DAD显示,还有许多其他的化合物。这些提取物可能有其他生物活性分子,这可能与酚类化合物协同作用,导致氧化保护,从而降低ROS效果和有助于维持氧化还原平衡(ROS生产与ROS退化)在细胞和组织 35, 40]。本文提供的数据表明,EE和我们有很大的潜力作为天然抗氧化剂的产品。

 5。结论

五<我talic> Coccoloba alnifolia叶提取物是通过连续萃取(使用非极性溶剂极性溶剂),和第六提取只有水(基于传统民间使用)。获得的数据表明,这些提取物含有酚类化合物、萜烯、皂甙、黄酮类化合物(牡荆素,isovitexin)。在<我talic> 在体外和<我talic> 在活的有机体内化验,四极性提取物,情感表达,我,凌晨,我们证明抗氧化剂分子的来源。一般来说,这些提取并不影响六个不同的哺乳动物细胞系的可行性。此外,EE和我们没有繁殖能力的影响<我talic> 秀丽隐杆线虫线虫作为一个测试模型和保护他们对t-BOOH压力源,增加寿命。因此,<我talic> Coccoloba alnifolia叶子有优秀的草药和抗氧化剂的发展潜力的产品。其他生物的活动也可以探索,以确定潜在的抗氧化剂在细胞。

 数据可用性

在这项研究中获得的数据可从相应的作者。

 的利益冲突

作者没有利益冲突的声明。

 作者的贡献

S.M.Z.L.,R.P.O.,H。一个。O。R。,和K。C。年代。conceived and designed the experiments. L.F.M.M., D.L.G., L.F.S., L.M.P.S., M.L.M., C.O.M.C, S.M.Z.L., R.P.O., H.A.O.R., and K.C.S. performed the experiments, analyzed the data, and wrote the paper. All authors read and approved the manuscript.

 确认

作者要感谢Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(披肩),慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq)和Ministerio da Ciencia Tecnologia e Inovacao (MCTI)财政支持。作者要感谢艾琳Bertinatto克鲁斯从Laboratorio de Fitoquimica Departamento de神物铺子,圣保罗(USP)在HPLC-DAD帮助我们分析。H.A.O. r和R.P.O. CNPq奖学金荣誉研究员。L.F.M.M.,lM。P。年代。,和C。O。M。C。received a scholarship from CAPES.

 补充材料

补充表1显示了皮尔森系数分析的糖,蛋白质,酚类化合物的<我talic> Coccoloba alnifolia提取物。获得的值显示为红色,它被认为是一个非常强大的关联值高于0.9,强烈的相关性值从0.7到0.9。皮尔森系数分析表明积极的酚类化合物含量之间的相关性<我talic> Coccoloba alnifolia提取和抗氧化试验。TAC之间有很强的相关性和还原能力测定超氧化物自由基清除的中度相关。此外,糖含量呈现很强的相关性为还原能力测定和TAC和超氧化物自由基清除中度相关。

 洛沃 V。 帕蒂尔 一个。 Phatak 一个。 钱德拉 N。 自由基,抗氧化剂和功能食品:对人类健康的影响 生药学的评论 2010年 4 8 118年 126年 10.4103 / 0973 - 7847.70902 2 - s2.0 - 78651391894 22228951 Krishnaiah D。 Sarbatly R。 Nithyanandam R。 对药用植物的抗氧化潜力的物种 食品和Bioproducts处理 2011年 89年 3 217年 233年 10.1016 / j.fbp.2010.04.008 2 - s2.0 - 78149456264 Lopez-Alarcon C。 Denicola 一个。 天然产物的抗氧化能力评价:回顾化学和基于手机化验 分析Chimica学报 2013年 763年 1 10 10.1016 / j.aca.2012.11.051 2 - s2.0 - 84872605803 Carocho M。 费雷拉 i c·f·R。 回顾抗氧化剂,prooxidants和相关争议:天然和合成化合物、筛选和分析方法和未来的观点 食品和化学毒物学 2013年 51 15 25 10.1016 / j.fct.2012.09.021 2 - s2.0 - 84867029857 23017782 努尔阿拉姆 m D。 Bristi n . J。 Rafiquzzaman m D。 回顾在体内和体外抗氧化活性评价方法 沙特医药杂志 2013年 21 2 143年 152年 10.1016 / j.jsps.2012.05.002 2 - s2.0 - 84875814520 24936134 Armendariz-Barragan B。 征服者 N。 巴蒂尼 W。 Galindo-Rodriguez 美国一个。 Kabbaj D。 Fessi H。 Elaissari 一个。 植物提取物:从封装到应用程序 专家意见在药物输送 2016年 13 8 1165年 1175年 10.1080 / 17425247.2016.1182487 2 - s2.0 - 84978870866 Rajendran P。 Nandakumar N。 Rengarajan T。 Palaniswami R。 Gnanadhas e . N。 Lakshminarasaiah U。 戈帕 J。 Nishigaki 我。 抗氧化剂和人类疾病 我们共同Chimica学报 2014年 436年 332年 347年 10.1016 / j.cca.2014.06.004 2 - s2.0 - 84904052451 桑德拉 k . s . M。 安德森 l。l Naiane d。美国年代。 塔米尔 美国一个。 现 m·m·P。 乔治亚州 美国B。 弗 k . s . M。 维克多 h·a。一个。 穆 答:。美国F。 杰克逊 r·g。美国一个。 Xirley p . N。 酯化脂肪酸的gc - ms分析获得的叶子和种子Triplaris gardneriana Wedd 非洲药房和药理学杂志》上 2016年 10 30. 623年 630年 10.5897 / AJPP2016.4586 德梅洛 E。 especies de Coccoloba p·布朗(蓼科)da亚马逊brasileira Acta Amazonica 2004年 34 4 525年 551年 10.1590 / s0044 - 59672004000400006 巴罗斯科 B。 抗菌活性和选民Coccoloba acrostichoides Fitoterapia 2003年 74年 7 - 8 729年 731年 10.1016 / j.fitote.2003.08.003 2 - s2.0 - 0344420134 奥利维拉 p·e·S。 桑托斯 w·s。 形成闭路 l . M。 Lemos r·p。l Constituintes quimicos das folha e caule de<我talic> Coccoloba mollisCasaretto(蓼科) 航空杂志上Brasileira de Farmacognosia 2008年 18 713年 717年 10.1590 / s0102 - 695 x2008000500014 2 - s2.0 - 67749103800 Ashmawy n。 萨勒姆 M z . M。 Shanhorey n E。 Al-Huqail 答:一个。 阿里 h . M。 Behiry 我美国。 环保wood-biofungicidal和抗菌活动各种Coccoloba uvifera l .叶提取物:高效液相色谱法分析酚类和黄酮类化合物 生物资源 2020年 15 2 4165年 4187年 奥利维拉 p V。 费雷拉 j . C。 Jr。 莫拉 f·S。 秘鲁首都利马 g S。 de Oliveira f·M。 奥利维拉 p·e·S。 形成闭路 l . M。 Giulietti a . M。 Lemos r . p . L。 94提取物杀灭幼虫活动十巴西东北部的植物物种<我talic> 埃及伊蚊l .(双翅目蚊科): 寄生虫学研究 2010年 107年 2 403年 407年 10.1007 / s00436 - 010 - 1880 - 4 2 - s2.0 - 77955469029 20449754 de Barros i B。 de Souza丹尼尔 j·F。 平托 j . P。 Rezende m . I。 球场 r B。 费雷拉 d . T。 植物化学的和抗真菌活性的蒽醌类和根和叶中提取的<我talic> Coccoloba mollis在植物病原体 巴西生物学和技术档案 2011年 54 3 535年 541年 10.1590 / s1516 - 89132011000300015 Tsuboy m . S。 Marcarini j . C。 路易斯 r . C。 巴罗斯 i B。 费雷拉 d . T。 里贝罗 l R。 多亏尤文和 m . S。 在体外评估基因毒性活性和细胞凋亡诱导的提取从药用植物根和叶<我talic> Coccoloba mollis(蓼科) 杂志的药膳 2010年 13 3 503年 508年 10.1089 / jmf.2009.0119 2 - s2.0 - 77953793311 杜波依斯 M。 Gilles k。 汉密尔顿 j·K。 Rebers p。 史密斯 F。 比色法测定糖和相关物质 分析化学 1956年 28 3 350年 356年 10.1021 / ac60111a017 2 - s2.0 - 33749946901 Athukorala Y。 金 K.-N。 全 Y.-J。 抗增殖和抗氧化特性的生化酶水解的褐色海藻,Ecklonia静脉 食品和化学毒物学 2006年 44 7 1065年 1074年 10.1016 / j.fct.2006.01.011 2 - s2.0 - 33744929600 16516367 布拉德福德 M . M。 快速和敏感微克量的蛋白质的定量方法利用protein-dye绑定的原则 分析生物化学 1976年 72年 1 - 2 248年 254年 10.1016 / 0003 - 2697 (76)90527 - 3 2 - s2.0 - 0017184389 普列托 P。 皮内 M。 阿基拉 M。 光度法定量抗氧化能力的形成phosphomolybdenum复杂:具体应用维生素E的决心 分析生物化学 1999年 269年 2 337年 341年 10.1006 / abio.1999.4019 2 - s2.0 - 0344348886 10222007 什 K。 藤川 K。 Yahara K。 中村 T。 黄原胶的抗氧化特性的自氧化豆油在环糊精乳液 农业与食品化学杂志》上 1992年 40 6 945年 948年 10.1021 / jf00018a005 2 - s2.0 - 33751390842 王 J。 张 Q。 张 Z。 李 Z。 硫酸多糖抗氧化活性的分数从海带中提取粳稻 国际期刊的生物大分子 2008年 42 2 127年 132年 10.1016 / j.ijbiomac.2007.10.003 2 - s2.0 - 38349164399 达斯古普塔 N。 德 B。 Piper betle l .叶提取物体外抗氧化活性的 食品化学 2004年 88年 2 219年 224年 10.1016 / j.foodchem.2004.01.036 2 - s2.0 - 3042698412 Mosmann T。 快速比色测定细胞生长和存活的:应用程序来增殖和细胞毒性分析 《免疫学方法 1983年 65年 1 - 2 55 63年 10.1016 / 0022 - 1759 (83)90303 - 4 2 - s2.0 - 0021061819 Melo-Silveira r F。 忠诚 g . P。 科斯塔 m . s . s . P。 告诉 c·b·S。 Dantas-Santos N。 de Oliveira伊莱亚斯 年代。 里贝罗 诉B。 巴斯 a . L。 马赛 a·J。 雷特 e . L。 罗查 h·a·O。 体外抗氧化、抗凝和抗微生物活性和抑制肿瘤细胞增殖的玉米芯木聚糖提取 国际分子科学杂志》上 2012年 13 1 409年 426年 10.3390 / ijms13010409 2 - s2.0 - 84856300613 22312261 布伦纳 年代。 秀丽隐杆线虫的基因 遗传学 1974年 77年 1 71年 94年 4366476 Scheschonka 一个。 墨菲 m E。 sy H。 颞维生素E的损失之间的关系,蛋白质巯基和微粒体脂质过氧化prooxidants不同的挑战 Chemico-Biological交互 1990年 74年 3 233年 252年 10.1016 / 0009 - 2797 (90)90041 - k 2 - s2.0 - 0025230867 2347003 Aparecida Paiva F。 de Freitas Bonomo l 费雷拉Boasquivis P。 博尔赫斯Raposo德波拉 i T。 Guerra j·f·。C。 Leal门德斯 W。 席尔瓦 m E。 Pedrosa m . L。 奥利维拉 r。P。 Carqueja (<我talic> Baccharis trimera)防止氧化应激<我talic> β-amyloid-induced毒性的<我talic> 秀丽隐杆线虫 氧化医学和细胞寿命。 2015年 2015年 15 10.1155 / 2015/740162 2 - s2.0 - 85044697160 26236426 瓦格纳 H。 Bladt 年代。 植物药物分析:薄层色谱图谱 2009年 多德雷赫特;纽约,美国 施普林格 俄文 J。 李 P。 王 J。 周 W。 李 B。 黄 C。 李 P。 郭 Z。 道 W。 杨 Y。 徐 X。 李 Y。 王 Y。 杨 l TCMSP:数据库系统药理学从草药药物发现 Cheminformatics杂志 2014年 6 1 13 10.1186 / 1758-2946-6-13 2 - s2.0 - 84899981355 Kanehisa M。 Furumichi M。 田边 M。 佐藤 Y。 Morishima K。 KEGG:基因组的新视角,途径,疾病和药物 核酸的研究 2017年 45 D1 D353 D361 10.1093 / nar / gkw1092 2 - s2.0 - 85016149190 27899662 约翰斯通 i L。 线虫线虫的角质层:一个复杂的胶原蛋白结构 BioEssays 1994年 16 3 171年 178年 10.1002 / bies.950160307 2 - s2.0 - 0028386716 8166670 里贝罗 a . r . C。 Cordeiro m . l。年代。 席尔瓦 l . m . P。 Cadavid c . o . M。 Caland r·b。O。 Fernandes-Negreiros M . M。 奎罗斯 m F。 巴博萨 j。年代。 阿拉冈 c·f·S。 Zucolotto s M。 奥利维拉 r。P。 罗查 h·a·O。 Scortecci k . C。 Myrciaria tenella (DC)。o·伯格(桃金娘科)叶的抗氧化化合物 抗氧化剂 2019年 8 8 310年 10.3390 / antiox8080310 2 - s2.0 - 85073302513 31443307 贝利 C。 基督教 k·R。 普拉丹 年代。 奈尔 m·G。 基督教 o . E。 抗炎和抗氧化活动<我talic> Coccoloba uvifera(Seagrapes) 植物化学 2011年 10 Gusman g S。 坎帕纳 p . r . V。 卡斯特罗 l . C。 Castilho r . O。 特谢拉 M . M。 布拉加 f . C。 一些巴西的影响评价药用植物生产的TNF -<我talic> α和CCL2 THP-1细胞 以证据为基础的补充和替代医学 2015年 2015年 11 10.1155 / 2015/497123 2 - s2.0 - 84926685057 25878716 Habtemariam 年代。 回到过去的好时光:原油的价值植物药物混合物在21世纪 国际化的补充和替代医学杂志》上 2017年 6 2 Elzaawely 答:一个。 宣 t D。 Tawata 年代。 抗氧化和抗菌活性Rumex对虾HOUTT。天线部分 生物与制药公告 2005年 28 12 2225年 2230年 10.1248 / bpb.28.2225 2 - s2.0 - 28744435205 16327154 El-Haci 我一个。 Bekkara f。 Mazari W。 Hassani F。 迪迪 m·A。 蓼属植物的筛选生物活性maritimum l .从阿尔及利亚海岸 亚洲太平洋热带生物医学杂志》上 2013年 3 8 611年 616年 10.1016 / s2221 - 1691 (13) 60124 - 0 2 - s2.0 - 84884339743 23905017 马哈茂德 我我。 Marzouk m . s . A。 Moharram f。 El-Gindi m·R。 哈桑 a . m . K。 Acylated Eugenia jambolana叶黄酮醇苷 植物化学 2001年 58 8 1239年 1244年 10.1016 / s0031 - 9422 (01) 00365 - x 2 - s2.0 - 0035861325 11738415 Timbola 答:K。 Szpoganicz B。 布兰科 一个。 Monache f . D。 Pizzolatti m·G。 一个新的黄酮醇Eugenia jambolana的叶子 Fitoterapia 2002年 73年 2 174年 176年 10.1016 / s0367 - 326 x (02) 00009 - 6 2 - s2.0 - 0036228960 11978436 张 Y.-J。 氮化镓 R.-Y。 李 年代。 周 Y。 李 a n。 徐 D.-P。 李 H.-B。 抗氧化植物化学物质对慢性疾病的预防和治疗 分子 2015年 20. 12 21138年 21156年 10.3390 / molecules201219753 2 - s2.0 - 84954348978 26633317 穆罕默德Sairazi n S。 Sirajudeen k·n·S。 天然产物及其生物活性化合物:神经电位与神经退行性疾病 以证据为基础的补充和替代医学 2020年 2020年 30. 10.1155 / 2020/6565396 32148547 他 M。 最小值 J.-W。 香港 w l。 他 X.-H。 李 J.-X。 彭 B.-W。 回顾牡荆素,isovitexin的药理作用 Fitoterapia 2016年 115年 74年 85年 10.1016 / j.fitote.2016.09.011 2 - s2.0 - 84990019670 27693342 李 s Y。 月亮 E。 金 s Y。 李 k·R。 奎尼酸衍生品从Pimpinella brachycarpa施加在lipopolysaccharide-induced小胶质细胞能够具有抗神经炎性反应活动 生物有机和药物化学字母 2013年 23 7 2140年 2144年 10.1016 / j.bmcl.2013.01.115 2 - s2.0 - 84875225622 23462643 李 M。 李 B。 侯 Y。 田 Y。 陈 l 刘 年代。 张 N。 越南盾 J。 抗炎作用的化学成分<我talic> G inkgo biloba l .雄花在lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7巨噬细胞 植物疗法的研究 2019年 33 4 989年 997年 10.1002 / ptr.6292 2 - s2.0 - 85060776892 30693991 Soukhtanloo M。 Mohtashami E。 Maghrouni 一个。 Mollazadeh H。 穆萨维 s . H。 罗山 m·K。 Tabatabaeizadeh 美国的。 Hosseini 一个。 Vahedi M . M。 Jalili-Nik M。 Afshari a。R。 自然产品承诺目标多形性成胶质细胞瘤:关注NF -<我talic> κB信号通路 药理报告 2020年 72年 2 285年 295年 10.1007 / s43440 - 020 - 00081 - 7 32152926 亨特 p R。 秀丽隐杆线虫模型在毒性测试 应用毒理学杂志 2017年 37 1 50 59 10.1002 / jat.3357 2 - s2.0 - 84992700506 27443595 哈洛 p . H。 佩里 美国J。 Widdison 年代。 丹尼尔斯 年代。 Bondo E。 兰博斯 C。 柯里 r。 弗莱明 a·J。 的线虫<我talic> 秀丽隐杆线虫作为一种工具来预测化学活性对哺乳动物发展和识别机制影响毒理学结果 科学报告 2016年 6 1,第22965条 10.1038 / srep22965 2 - s2.0 - 84961827459 悦 Y。 沈 P。 徐 Y。 公园 Y。 p-Coumaric酸提高氧化和渗透压力反应<我talic> 秀丽隐杆线虫 粮食和农业的科学杂志》上 2019年 99年 3 1190年 1197年 10.1002 / jsfa.9288 2 - s2.0 - 85053552412 30047165 Choubey 年代。 Varughese l R。 库马尔 V。 Beniwal V。 药用没食子酸及其酯衍生品的重要性:专利审查 药品专利分析师 2015年 4 4 305年 315年 10.4155 / ppa.15.14 2 - s2.0 - 85050577190 26174568