T2DM大鼠粪便微生物组和代谢组学的综合研究揭示了乙酸乙酯提取物的宿主-微生物代谢轴的抗糖尿病作用近年来

抽象的

2型糖尿病是一种慢性代谢性疾病。近年来（美国近年来)，又名苦参，是我国民间医学和医疗机构中用于防治2型糖尿病的著名中草药。但其作用机制尚不清楚。在本研究中，研究了中药的药理作用美国近年来研究高脂饮食和低剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠的EtOAc提取物（SFE）。粪便代谢组学分析和16S rRNA基因测序用于确定T2DM和SFE治疗对肠道微生物群和宿主代谢的影响。基于代谢组学分析中代谢途径的结果与通过16S rRNA基因测序的未观察状态重建（PICRUSt）分析进行的群落系统发育研究的一致性，将代谢产物水平与肠道细菌的操作分类单位相结合，斯皮尔曼的分析得以实施。我们的数据显示，SFE显著降低空腹血糖水平，改善血脂、糖化血清蛋白、糖化血红蛋白指数和胰腺损伤。代谢组学和16S rRNA基因测序分析表明，T2DM患者肠道细菌紊乱，脂质代谢、碳水化合物代谢紊乱，尤其是氨基酸代谢紊乱，SFE可通过对肠道细菌的影响调节这些代谢途径。Spearman的分析表明，氨基酸代谢包括色氨酸、支链氨基酸、芳香族氨基酸、β-丙氨酸和甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，脂质代谢包括溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰乙醇胺，初级胆汁酸和亚油酸代谢，糖代谢、核苷酸代谢与糖代谢呈正相关粪便杆菌那Flexispira那Phascolarctobacterium那普氏菌那Roseburia,[普雷沃]．此外，精氨酸和脯氨酸代谢、甾体激素、甾体生物合成、鞘脂代谢与精氨酸和脯氨酸代谢呈正相关乳酸杆菌那Oscillospira那Parabacteroides那瘤胃球菌属,链球菌．综上所述，我们推测SFE可能通过介导宿主 - 微生物代谢轴对2型糖尿病的效果。SFE用于治疗2型糖尿病的multiomics的探索有望为临床治疗提供参考。

1.介绍

2型糖尿病(T2DM)是一种严重的慢性代谢性疾病，以高血糖水平为特征，在全球范围内发病率较高[1］.氧化应激可通过破坏胰岛而导致糖尿病的发展β并降低外周组织对胰岛素的敏感性。持续高血糖和氧化应激可导致多器官损伤和并发症，T2DM成为继心血管疾病和癌症之后对人类生命和健康的主要威胁[2］.

人体肠道是一种用于多种和高度互动的微生物的天然生物反应器，并适应各种肠道微生物，这对于葡萄糖，氨基酸和脂质代谢很重要[3.那4.］.肠道细菌可以通过发酵过程和产生生物活性代谢物直接影响宿主代谢，调节代谢疾病的过程。因此，阐明宿主-微生物代谢轴的调控至关重要[5.］.有重要证据表明，2型糖尿病患者的微生物组成发生了改变[6.-9.］.肠道细菌已被用来作为2型糖尿病的预防和治疗的重要目标，并通过健康主机和益生菌肠道细菌的移植治疗2型糖尿病的研究已经早有报道[3.］.然而，肠道细菌代谢对宿主的贡献尚不清楚，也没有系统的描述。探索肠道细菌的作用对T2DM的治疗尤为重要。

“苦参”是一种著名的传统中药，由黄芪的干根制成近年来（美国近年来)，在我国闽南及岭南地区的民间医学和医疗机构中已被用于治疗2型糖尿病[10那11］.现代药理研究表明，从苦参衍生黄酮表现出抗糖尿病活性。然而，大多数研究都集中在黄酮苦参在细胞或目标蛋白质水平的作用，缺乏研究，专注于基于整体动物评价抗糖尿病作用的评价[12-15］.近年来，有报道称黄酮类化合物来源于美国近年来EtOAc萃取物（SFE）影响在KK-Ay的小鼠2型糖尿病的治疗[16];然而，在确定治疗机理研究的缺乏。而且，从一个自发糖尿病小鼠模型中获得的结果仍然是在动物模型中是更符合人体发病机制及病理过程线进行验证。

粪便样本可以反映intestine-related代谢物更好,更好地理解肠道菌群代谢的作用在2型糖尿病和医药治疗,16 s rRNA基因测序分析被用来探索肠道菌群结构的变化和区别的细菌在2型糖尿病和医药治疗;16S rRNA基因序列分析用于预测微生物群的代谢功能[17-20.］.通过粪便代谢组学鉴定与肠道菌群代谢相关的生物标志物。最后，通过Spearman分析代谢产物水平与肠道细菌操作分类单元(OTUs)之间的关系，阐明肠道细菌与代谢产物之间的调控关系。我们的研究策略如图所示1．本研究采用粪便微生物组学和代谢组学相结合的方法，阐明SFE治疗T2DM的机制，以及肠道细菌如何通过宿主-微生物代谢轴调控T2DM的发展。

2。材料和方法

2.1。仪器和试剂

美国近年来样品购自根种植基地摘要GAP在山西振东制药股份有限公司（山西，中国）中国药材。乙酸乙酯和乙醇是从广州华化学试剂有限公司（中国广州）获得。蒸馏水被中国屈臣氏食品饮料有限公司（中国香港）制作。色谱级的乙腈和甲酸自Fisher Scientific有限公司（剑桥，MA，USA）购得。从中国天津致远有限公司（天津，中国）获得的柠檬酸，柠檬酸钠和水合氯醛。菌素（STZ）是由美国西格玛有限公司（圣路易斯，MO，USA）制备。多聚甲醛烟台霜霜化工有限公司（中国山东）购买。胆固醇试剂盒由盛北控生物科技有限公司（北京，中国）。糖化血清蛋白套件，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测试剂盒，和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的测试试剂盒购自南京建设有限公司（中国江苏省）购买。MOBIOPowerSoil®DNA分离试剂盒从MOBIO实验室（卡尔斯巴德，CA，USA）购买。 NanoDrop One was obtained from Fisher Scientific Co., Ltd. (Cambridge, MA, USA). EZNA Gel Extraction Kit was brought from Omega Bio-Tek Co., Ltd. (Norcross, GA, USA).

血糖仪购自美国强生公司(Piscataway, NJ, USA)。AU400全自动生化分析仪由日本东京奥林巴斯株式会社生产。BioRad S1000由Bio-Rad实验室(Irvine, CA, USA)生产。Eclipse E100光学显微镜由尼康株式会社(日本东京)制造。

２.２.SFE的制备与测定

美国近年来样品由广东药科大学陈磊博士鉴定。参照我们之前研究确定的制备方法[21]，切片美国近年来通过使用90％乙醇回流萃取将3次萃取2小时。蒸发合并的萃取物，将残余物在温水中重构（1：8， )，和过滤。再用乙酸乙酯(1:1， )．用旋转蒸发器去除乙酸乙酯后，通过冻干得到SFE。

采用紫外分光光度法测定SFE中总黄酮的含量，如Zhu [22］.简而言之，对一批含3个样品的SFE进行加权，根据《补充材料》中的详细步骤确定其含量(补充材料:1.2．SFE中总黄酮含量的测定。此外，根据我们之前的研究[21]，采用UHPLC-MS对SFE中4种黄酮类化合物进行含量测定，并用ACQUITY BEH C对SFE中的黄酮类化合物进行梯度洗脱₁₈（ 那粒径1.7 μm;水域,美国马)。UHPLC-MS分析条件见补充材料(补充材料:1.3.．UHPLC-MS分析SFE中4种黄酮类化合物的条件。

2.3。动物实验

2.3.1。动物分组

所有涉及动物的程序均按照中国国家卫生研究院指南进行，并经广东药科大学(中国广州)动物伦理委员会批准。雄性SD大鼠，8 ~ 10周龄，体重180 ~ 220 g，由南方医科大学实验动物中心提供(中国广州，质量认证号:SYXK2012-0125，批号:44002100008034)。动物被关在笼子里 动物室 在光照和黑暗的12小时循环中保持湿度。在适应过程中，老鼠被喂食正常的食物和自由饮水。

除了对照组，给大鼠喂食高脂肪膳食（HFD，70％正常饮食，9％猪油，1％胆固醇，15％蔗糖，5％蛋黄粉;从广东省医学动物中心购买）为4个连续周，驯化一周后开始。After 4 weeks, rats that were fed a HFD were intraperitoneally injected with streptozotocin (STZ, 35 mg/kg body weight (BW)) after being fasted for 12 hours to induce T2DM. Control rats received an equivalent volume of sterile saline. Rats injected with STZ that had a fasted blood glucose (FBG) higher than 16.7 mmol/L were diagnosed with T2DM. Subsequently, 48 T2DM rats were randomly selected and divided into 4 groups. These groups include the model group, metformin (MF) group, and low-dose (SFE-L 37.5 mg/kg/day), and high-dose (SFE-H 75 mg/kg/day) SFE groups. The dose of美国近年来as recommended by the Chinese Pharmacopoeia is 4.5-9 g of raw herb per day. Using a conversion based on the body surface-area ratio of rats and humans and the extraction rate of SFE, the daily treatment dose for rats was calculated as 37.5 mg/kg and 75 mg/kg (SFE).

2.3.2。粪便样本采集

在第4周和第8周的最后一天给予SFE 2 h后，使用SPF级动物饲养平台收集12 h内的大鼠粪便。将大鼠置于无菌代谢笼中(每笼1只)，将粪便冷藏，均匀置于两根无菌微离心管中。样品保存在-80°C直到分析。药效学结果显示，高剂量SFE组治疗效果最佳;因此，将对照组、模型组和高剂量SFE组第4周和第8周的粪便样本进行粪便代谢组学分析，将第8周的粪便样本进行16S rRNA基因测序分析。

２.４.SFE对T2DM大鼠的作用评价

每3天测量大鼠体重，禁食8小时后，每周用尾静脉穿刺法自动测空腹血糖。采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖基化血清蛋白(GSP)、糖基化血红蛋白(GHb)。治疗8周后，对大鼠实施安乐死，每只大鼠胰腺分离，4%多聚甲醛固定48小时，脱水、渗透、蜡包埋、切片。切片用苏木精和伊红染色。胰腺病理观察在200倍光镜下进行。在20倍放大倍数下，测量每个视野内的胰岛数量，统计5个视野内的胰岛总数;每个切片随机选取5个胰岛，用千分尺测量每个胰岛的面积，并计算其总面积[23］.

2.5. 16srrna基因测序分析

用于16S rRNA基因测序分析的粪便处理流程如下:利用MOBIO PowerSoil®DNA Isolation Kit从粪便样品中提取微生物DNA。采用NanoDrop One检测纯度和浓度，采用12 bp条形码特异性引物扩增不同区域(16S: V4-V5)的16S rRNA基因。引物由Invitrogen公司(Carlsbad, CA, USA)合成。PCR反应，含25μL 2x Premix Taq (Takara Biotechnology, Dalian Co. Ltd, Dalian, China)， 1μl每个底漆（10 mm）和3 μL DNA (20ng /μL)模板共积50份μL, were amplified by thermocycling as follows: 5 min at 94°C for initialization; 30 cycles of 30 s denaturation at 94°C, 30 s annealing at 52°C, and 30 s extension at 72°C, followed by 10 min final elongation at 72°C. The PCR instrument was a BioRad S1000. The length and concentration of the PCR product were determined by 1% agarose gel electrophoresis. Samples with the bright main strip between 400 and 450 bp can be used for further experiments. PCR products were mixed in equidensity ratios according to GeneTools Analysis Software (version 4.03.05.0, SynGene). Then, mixed PCR products were purified with the EZNA Gel Extraction Kit. Each project selects the appropriate primers for amplification. Sequencing libraries were generated using NEBNext® Ultra™ DNA Library Prep Kit for Illumina® (New England Biolabs, MA, America) following the manufacturer’s recommendations, and index codes were added. The library quality was assessed on the Qubit@ 2.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) and Agilent Bioanalyzer 2100 system (Agilent Technologies, Waldbronn, Germany). At last, the library was sequenced on an IlluminaHiseq2500 platform and 250 bp paired-end reads were generated.

16S rRNA基因测序分析使用usearch软件(V8.0.1517，http://www.drive5.com/Usearch/)．OTUs是由至少97%相似的序列生成的。首先，OTU被认为可能代表一个物种。提取最常出现的序列作为每个OTU的代表序列，并进行筛选以进行进一步注释。根据otu_table中各分类层次物种的相对丰度，使用R软件绘制直方图和热图。其次，利用alpha多样性，通过观察物种、Chao1、Shannon、Simpson和优势度5个指标分析样本物种多样性的复杂性。在我们的样本中，这些指标是使用QIIME (http://qiime.org/， V1.9.1)，并使用R软件(V2.15.3)显示。群落丰富度指标包括观察物种和Chao1，群落多样性指标包括Shannon、Simpson和优势度。有关多样性指数的更多信息，请参见http://www.mothur.org/wiki/Calculators那http://scikit-bio.org/docs/latest/generated/skbio.diversity.alpha.html．第三，利用beta多样性分析评价物种复杂性样本间的差异。采用QIIME软件计算布雷-柯蒂斯加权和未加权的unifrac beta多样性指数。采用主坐标分析(PCoA)从复杂的多维数据中获取主坐标和可视化。将加权或未加权单裂缝样本间的距离矩阵转换为一组正交轴，其最大变异因子由第一个主坐标表示，第二个最大变异因子由第二个主坐标表示。PCoA通过R软件中的qiime2和ggplot2软件包显示。第四，采用线性判别分析(Linear discriminant analysis, LDA)效应量分析(Effect Size, LEfSe)进行组间差异的统计分析。在三组中可以筛选出明显不同的肠道细菌。最后，利用PICRUSt (http://picrust.github.io/picrust/），将其用于鉴定参与基于所述的16S rRNA的数据集的代谢途径的OTU。

2.6。粪便代谢组学分析

用于粪便代谢组学分析的粪便标本处理流程为:在-80℃下取出粪便标本，置于冷冻干燥机中干燥。每个样本取50 mg粪便置于2ml无菌管中。筛选优化后，300μL预冷乙腈和100μ在每个样品中加入预冷蒸馏水作为萃取溶剂。然后，将混合物剧烈旋转3分钟，超声5分钟。混合后4°C 15,000 rpm离心15 min，取上清液，10μ从每个样品的上清液的L为混合，得到的质量控制（QC）样品。样品经0.22μm介质过滤 μm微孔膜用于UHPLC-MS分析。

色谱分离系统由C₁₈柱子 （ 那1.7μm, Waters, MA, USA)和一枚警卫弹( 那1.7μ米，沃特斯，MA，USA）在30℃下。自动进样器设定为4℃。的代谢物的质谱分析信息检测偶联至一个四极杆 - Exactive轨道阱质谱有ESI源（赛默飞世尔科技，卡尔斯鲁厄，德国）终极3000 LC系统上实现。Mass Spectrometry conditions were as follows: electrospray voltage of 3.0 kV, capillary temperature of 320°C, sheath gas flow rate of 15 L/min, the auxiliary gas flow rate of 5 L/min, and collision energy of 15, 35, and 55%. The scanning range was 50-750 ( )．之前样品的分析，该QC样品运行6次，以平衡系统和运行期间每6个样品一次被运行来检查系统的稳定性。流动相由水（A）和乙腈（B），每片含0.1％甲酸。The gradient program was as follows: 5% B from 0 to 1.5 min, 50% B from 1.5 to 3 min, 55% B from 3 to 7.5 min, 95% B from 7.5 to 12 min, and 95% B from 12 to 15 min. The flow rate was 0.3 mL/min, and the injection volume was 3 μL

UHPLC-MS原始数据通过化合物发现者3.0软件（赛默飞世尔科技，MA，USA）进行分析。原始数据的峰被鉴定并匹配以获得由样本数，保留时间，分子量，和峰面积的数据。数据矩阵是通过使用SIMCA-P 14.0软件（主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）分析https://umetrics.com/products/simca)．为了评估这个模型 那 那和参数使用。在OPLS-DA分析生成的得分图中，投影变量重要性(VIP) 认为fold change (FC)值大于2且小于0.5对组间分离有影响，并选择这些候选者进行显著性检验。在进行显著性检验前，对数据进行正态分布和方差齐性检验。这些候选的峰面积进行了正态标准化程序，以准备以下分析:使用Shapiro-Wilk检验来调查正态分布，使用Levene检验来调查方差齐性。如果数据服从正态分布且方差相等，学生 -测试执行。如果数据符合正态分布但方差不相等，韦尔奇的 -试验使用。如果数据不符合正态分布，进行非参数检验。用的显著测试考生 被选择作为潜在的生物标志物。在组与组比较，潜在生物标志物的更大的值FC大于2被认为是上调的，而小于0.5 FC值被认为是下调的。生物标志物的鉴定主要是基于它们的准确分子量和二次质谱分析信息，并且这些生物标志物的信息与文献报道，数据库METLIN（被匹配http://metlin.scripps.edu），和人代谢物组数据库（HMDB）（http://www.hmdb.ca/)．鉴定的生物标记是由MetaboAnalyst 4.0（分析http://www.MetaboAnalyst.ca/)与京都基因及基因组百科全书(KEGG)数据库(http://www.genome.jp/kegg.)分析相关的代谢途径。

2.7。代谢产物和肠道细菌的相关性分析

肠道细菌代谢产物(潜在生物标志物)水平与OTUs的相关性分析采用omicsolution (https://www.omicsolution.org/wkomics/main）和R软件（R版本3.6.0https://www.r-project.org/)，将它们的相关系数可视化，并通过热图显示它们的关系。

2.8。统计分析

采用单因素方差分析对FBG、BW、生化指标、胰岛数量和面积进行分析，结果以表示 ．在16S rRNA分析中 -样本Fisher-Pitman置换试验用于对照组、T2DM组和SFE组之间α多样性的差异分析。在线性判别分析（LDA）效应大小（LEfSe）分析中，首先，使用非参数析因Kruskal-Wallis（KW）和秩检验检测组间丰度存在显著差异的物种；其次，采用Wilcoxon秩和检验分析两组之间的差异。宏基因组图谱的统计分析（STAMP，http://kiwi.cs.dal.ca/Software/STAMP)是用来表演韦尔奇的 -测试分析肠道细菌的预测功能。采用Spearman相关分析计算代谢物与肠道细菌的相关系数。

3.结果

3．1.SFE中黄酮类化合物的含量

制备了SFE，采用紫外分光光度法测定了总黄酮的含量。三次平行测定的总黄酮平均含量为61.32%，相对标准偏差(RSD)为2.18%。

通过比较保留时间和碎片离子，可以明确地鉴别出SFE中的黄酮类化合物²光谱与参考标准。基于在负离子模式下的总离子色谱图（TIC），被确定27黄酮类化合物（补充材料：图S1)，化合物的信息见补充材料(表)S1)．更多的over, four flavonoid compounds in SFE were quantitatively determined, and the contents of kurarinone, norkurarinone, kushenol N, and kushenol L in SFE were 63.2, 35.3, 23.7, and 1.9 mg/g, respectively [21］.

３．２．SFE对T2DM大鼠的治疗作用

3.2.1。SFE对FBG和BW的影响

如图所示2(一个)在治疗八周后，测量每只大鼠的FBG水平。模型大鼠FBG水平较高，且SFE高剂量组大鼠FBG水平较模型组显著降低( ）;但与对照组相比，FBG水平仍较高。与模型组大鼠相比，低剂量SFE处理大鼠FBG水平降低;然而，FBG水平的下降没有统计学意义。另一方面，在实验过程中，对照组大鼠体重持续增加，而模型大鼠在实验结束时逐渐消瘦( ）与对照大鼠相比，处理过的模型大鼠的BW显示趋势缓慢增加（图2 (b))．上述结果表明，SFE在模型大鼠高FBG水平的抑制作用和SFE提高模型大鼠的BW。

3.2.2。SFE对生化指标的影响

本实验研究SFE对模型大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C、GSP、GHb浓度的影响。如表所示1与对照组比较，模型组大鼠血浆TC、TG、LDL-C、GHb、GSP升高，HDL-C降低。高剂量SFE可显著降低TC、TG、LDL-C、GHb、GSP水平，治疗效果最佳。SFE处理后HDL-C升高;然而，效果并不显著。

3.2.3。SFE对胰腺组织形态学改变的影响

胰腺组织学检查(图3（a）-3 (e))显示对照组大鼠胰岛呈圆形，细胞团块呈卵圆形，胞浆丰富，形状规则，边界清晰。随着T2DM的发展，胰腺的胰岛受损严重，胰岛细胞萎缩，数量减少，细胞质完全萎缩，细胞边界不清。SFE治疗8周后，病理损伤明显减轻，胰腺结构异常改善，尤其是大剂量SFE治疗组。小剂量SFE对大鼠胰腺有轻微改善。模型组的胰岛数量和面积明显低于对照组，经高剂量SFE治疗后，胰岛数量和面积明显增加。虽然低剂量sfe处理后的大鼠胰岛细胞数量没有明显增加，但胰岛面积的减少有所改善(图)3 (e)和3 (f))．

３．３．16S rRNA基因测序分析结果

3.3.1。肠细菌结构对T2DM大鼠SFE的反应

稀疏分析表明，各组中的曲线达到平台，这表明所有样品的足够的测序深度（补充材料：图S2a b)．alpha多样性分析显示，与对照组相比，模型组大鼠的丰度较低，SFE大大增加了肠道细菌的丰度(补充材料:图)S2c d)．

图中显示了门和属水平上的肠道微生物组组成4(一)和4 (b)．在门的水平上，拟杆菌门那责任,变形菌门弥补一个很大的部分;拟杆菌门和变形菌门当与对照组相比，模型组大鼠均升高，而责任减少了。在属的水平，减少的丰度blautia.那梭状芽胞杆菌那大肠杆菌那粪便杆菌那乳酸杆菌那Parabacteroides那瘤胃球菌属那Oscillospira,链球菌以及日益丰富的伯曲面那Flexispira那Phascolarctobacterium那普氏菌那Roseburia那[普雷沃],Coprococcus在模型大鼠中观察。SFE处理后，模型大鼠的细菌结构趋于对照。

从社区热图图(图4 (c))，我们发现模型大鼠的优势属如下:Phascolarctobacterium那Flexispira那[普雷沃]那Paraprevotella那Roseburia那粪便杆菌那双歧杆菌那Butyricicoccus那普氏菌,伯曲面；丰富的Oscillospira那脱磷孤菌属那瘤胃球菌属那Shuttleworthia那(瘤胃球菌属)那Dorea那Collinsella那Adlercreutzia那Parabacteroides那乳酸杆菌,blautia.明显降低。以上SFE治疗组中提到的菌株的丰度趋向于对照组，表明SFE对肠道细菌有意义的调制。基于Unweighted_Unifrac-后交通动脉（图4 (d))肠道微生物组学分析显示，模型组和对照组大鼠之间存在明显的分离。SFE治疗后，模型大鼠的肠道微生物群显示可逆转T2DM诱导的结构变化。因此，我们假设在T2DM的发展过程中肠道微生物组的结构发生了显著变化，并且SFE在调节T2DM大鼠肠道细菌方面起着关键作用。

3.3.2。2型糖尿病和sfe处理大鼠肠道细菌的差异

使用了线性判别分析（LDA）的影响尺寸（LEfSe）方法来识别细菌类群，其中相对丰度的模型，SFE处理，和对照组大鼠中显著变化。

在模型大鼠和对照组大鼠之间，有19种细菌在模型大鼠中有区别(图)5(一个)和5 (c)），以及模型和SFE处理的大鼠之间，十四细菌SFE处理的大鼠（图是判别5 (b)和5 (d))．随着T2DM的发病，菌落包括门拟杆菌门那变形菌门,蓝杆菌,类Bacteroidia那ε-变形菌,4 c0d_2; 命令细菌性的和Campylobacterales；的家庭Lachnospiraceae那副革兰氏菌科那Helicobacteraceae那RF16那veillonellaceae.,YS2；的属普氏菌那Flexispira那Phascolarctobacterium,victivallis.；和物种vadensis在很大程度上导致了肠道微生物组的差异，提示这些细菌的改变可能促进了T2DM的恶化。经SFE处理后，门疣微菌门；课程Verruco_5和Gammaproteobacteria; 命令sWCHB1_41和entrobacteriales.；的家庭喇叭喇叭仪那RFP12那肠杆菌科,链球菌；的属瘤胃球菌属那大肠杆菌,链球菌和物种科利和球菌这表明这些细菌与sfe诱导的T2DM治疗效果有关。

3.3.3。肠道细菌功能的预测

为了理解不同的细菌群落的功能宏基因组谱，我们基于使用的16S rRNA数据KEGG途径进行PICRUSt分析（图6(一)和6 (b)). 所有功能基因均划分为III级。在模型组中，与氨基酸代谢、脂质代谢、能量、碳水化合物和聚糖生物合成和代谢相关的基因更丰富，表明这些代谢途径在T2DM中受到显著干扰。值得注意的是，SFE治疗后，参与能量代谢、脂质代谢、聚糖生物合成和代谢、某些氨基酸代谢和遗传信息处理的基因丰度发生了改变。综上所述，上述结果表明，肠道细菌参与了T2DM全身代谢途径的变化，SFE通过调节参与宿主代谢的肠道细菌的数量恢复了异常代谢途径。

3.4。粪便代谢组分析结果

3.4.1。UHPLC-MS代谢

在正离子和负离子模式的粪便样品的基峰色谱在补充材料（呈现图S3)．QC样品用于评估代谢组科分析的再现性，稳定性和敏感性;QC样品中的QC样品的QC样品在补充材料中呈现（图S4)．PCA得分图显示了QC样本的高度聚集(图)7(一)），证明了系统的稳定性。此外，QC样品中RSD分布的结果呈现在图中8.的化合物的百分比 大于70%;例如，在第八周，在正离子模式下，与 达到了49.32％和 达到73.56％，负极离子模式达到73.56％，化合物的百分比 达到65.18％和 达到了84.41%。结果表明，该方法分析结果重复性好，适用于粪便代谢组学分析。PCA通过无监督统计方法研究对照组、模型组和SFE组在粪便代谢组学中的差异。在PCA评分图(图7(一)），控制，模型，以及SFE组之间的间隔出现随着时间的推移，这三组之间的差。

一个OPLS-DA模型用于提取在第四和第八周来自控制，模型的电位变化，和SFE的基团。如图所示7.(b)在OPLS-DA评分图中，三组之间存在明显的分离，在OPLS-DA评分图中可以清楚地看出第4周和第8周的差异。根据OPLS-DA模型的参数， 那 那和表明这些模型具有良好的建模和预测能力。所建立的OPLS-DA模型由200响应置换测试（RPT）验证。观察和值和RPT图从所有组的第4周和第8周获得，和置换y变量产生的值小于原始变量变量，回归线的斜率较大，与垂直轴的截距小于零。这些结果表明，原始模型没有出现过拟合现象，建立的模型具有良好的预测能力。因此，可以进行后续分析。例如，第八周来自对照组和模型组的响应排列检验(RPT)图显示在补充材料中(图)S5)．

3.4.2。潜在生物标志物识别

筛选潜在的生物标志物 那 和<在0.5 OPLS-DA，和 基于不同组的变异峰面积的显着测试。根据精确的分子量和必要的MS / MS片段化，通过HMDB和Metil组数据库鉴定这些潜在的生物标志物。例如，潜在的生物标志物，其保留时间为0.94分钟，并测量质量为178.0475。基于此信息和MS / MS碎片（补充材料：图S6），这种潜在的生物标志物被认为是葡萄糖酸内酯。总共61种潜在生物标志物的粪便样品中的被确定（补充材料：表S2)．根据峰面积和FC值比较不同时期生物标志物的变化，各组潜在生物标志物的峰面积均表示为 在柱的图的形式9.．

3.4.3。代谢途径分析

在本研究中，我们使用MetaboAnalyst将获得的代谢组学数据与生化途径的潜在调节联系起来[24］.基于61鉴定的生物标志物，滤出了T2DM和SFE处理的代谢途径的变化，并进行了8种代谢途径（图9（a）)被选为最重要的代谢途径( 那 ）与代谢紊乱有关的25]. 包括亚油酸代谢；缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成；苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成；β-丙氨酸代谢；苯丙氨酸代谢；鞘脂代谢；色氨酸代谢；精氨酸和脯氨酸代谢。代谢途径分为三种主要代谢形式，包括氨基酸代谢、脂质代谢以及碳水化合物和核苷酸代谢（图9（b）那9（d）,9 (g)），潜在的生物标志物的水平以柱的形式表示（图9（c）那9 (e),9 (f))．

3.5。粪便代谢产物的肠道菌群的关系和

肠道细菌的个OTU和粪便代谢物的水平，收集建立一个相关网络（图10)．结果表明，精氨酸和脯氨酸代谢，鞘脂代谢，类固醇激素生物合成和类固醇生物合成呈正相关乳酸杆菌那Oscillospira那Parabacteroides那Coprococcus那瘤胃球菌属,链球菌与伯曲面那粪便杆菌那Flexispira那Phascolarctobacterium那普氏菌那Roseburia,(普氏菌)。与肠道细菌剩余代谢途径的关系是相反的，上面提到的4种代谢途径。

4.讨论

在这项研究中，我们成功建立2型糖尿病模型大鼠。模型大鼠表现出T2DM，他们显著失去了BW的严重症状，空腹血糖，GSP，以及糖化血红蛋白指标均大大提高。此外，血脂谱是改变和胰岛细胞严重受损。高剂量SFE有效地提高BW损失，降低了FBG水平，并回收血清脂质分布，GSP，糖化血红蛋白，和胰腺形态学损伤，从而指示其上减轻T2DM发展的效果。

肠道菌群在代谢过程中起着至关重要的作用。在本研究中，我们将多组学作为研究工具来确定T2DM如何改变肠道细菌，并阐明肠道细菌与代谢产物之间的相互作用。16S rRNA基因测序分析提示，肠道细菌的紊乱成分可能通过干扰氨基酸、脂类、能量、碳水化合物和糖的生物合成和代谢，直接加重或间接促进T2DM的发生。代谢组学结果显示，T2DM主要干扰氨基酸、脂类和糖代谢。SFE处理使肠道细菌结构和代谢途径正常化。此外，通过对肠道细菌与代谢产物的相关性分析，揭示了两者之间的关系，有助于解释T2DM的发病机制和SFE治疗的机制。在本研究中，我们总结了16S rRNA基因测序和代谢组学分析的结果，从代谢生物标志物与肠道细菌的关系来讨论T2DM和SFE对宿主-微生物代谢轴的影响。

氨基酸代谢是代谢网络的重要组成部分，不同的氨基酸代谢通路在T2DM的发生发展中发挥着不同的作用。长期以来，氨基酸代谢参与宿主-微生物相互作用的报道[6.］.因此，探讨T2DM中氨基酸的特征至关重要。

先前已报道了支链的氨基酸和芳族氨基酸增强的代谢增加T2DM和肥胖者的风险[26那27]，它是正与胰岛素抵抗（IR）和高血糖症[相关3.那28-30.］.在我们的研究中，缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的代谢;苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成;代谢组学和PICRUSt分析显示模型组苯丙氨酸代谢过表达。伯曲面和普氏菌16S rRNA测序分析显示，随着T2DM的发展，其变化显著。伯曲面和普氏菌主要属在哪里拟杆菌门， Tong等人进行了共丰网络分析，确定了两个共丰组(cag)，其中包含病原菌类属伯曲面，这些cag的消耗与葡萄糖稳态有关[31］.这些发现与我们的研究结果一致伯曲面和普氏菌均与AAA的发酵和生物合成和BCAA和这些细菌的减少刺激AAA的还原和BCAA和维持葡萄糖动态平衡。

通过16s rRNA测序分析，T2DM色氨酸代谢呈过表达，与代谢组学分析一致。色氨酸代谢有三个主要途径，并通过肠道菌群的转化代谢成几种化合物[32］.代谢途径包括芳基烃受体(AhR)途径、kynurenine途径和5-羟色胺(5-HT)产生途径。色氨酸代谢途径中的生物标志物通过这些途径进行代谢。大肠杆菌可以产生色氨酸,乳酸杆菌，是一种与胰岛素分泌相关的益生菌，可产生AhR配体，并具有较高的色氨酸代谢能力，从而影响SCFAs的改变，激活肠脑轴[33那34］.在T2DM中，微生物群产生受损的AhR配体是很重要的。吲哚和3-甲基二氧吲哚从AhR途径代谢，经肠道微生物转化，产生胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)，刺激胰岛素分泌[35］.的减少乳酸杆菌以及可辨别菌群的增加(大肠杆菌）模型组与这两个代谢物的减少是一致的。KP也起着色氨酸代谢中起重要作用，和KP的过度表达与胰岛素抵抗（IR），这可导致肥胖和2型糖尿病有关[25那35];4-(2-氨基苯基)-2,4-二氧丁酸和kynurenic酸是KP的代谢物，在T2DM时升高，在SFE治疗后降低。5-HT通路在代谢综合征中的作用比KP弱，而肠道衍生的5-HT是胃肠道信号分子，显著影响肠道稳定性并转化为5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)。5-HIAA的增加可能是由于过度转化[35］.因此，我们推测过度转化可能导致5-HT水平降低，导致糖脂代谢紊乱。SFE通过调节改善AhR、KP和5-HT通路的增强代谢伯曲面那粪便杆菌那Flexispira那Phascolarctobacterium那普氏菌那Roseburia,(普氏菌)。

此前已有报道称，β -丙氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢途径的改变参与了T2DM的发病机制[36］.喇叭喇叭仪是SFE组中的鉴别菌，被认为是通过水解纤维进行肠道发酵的细菌，在宿主能量利用中起着至关重要的作用[17那37］.模型大鼠肌酐下降表示能量代谢异常，提示肾脏损伤[38]，肌酐参与丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代谢。因此，我们推测SFE可以通过调节来纠正异常能量代谢喇叭喇叭仪和丙氨酸，天门冬氨酸和谷氨酸代谢。涉及代谢功能途径在T2DM斑马鱼微生物的分析表明，精氨酸和脯氨酸代谢（KO00330）被下调[39]和精氨酸及其代谢物促进肥胖人胰岛素分泌，改善IR。这些结果与我们的代谢组学分析一致，相关性分析表明SFE主要通过降低的丰度来上调精氨酸和脯氨酸的代谢Phascolarctobacterium那普氏菌那Roseburia那粪便杆菌,Flexispira．

脂质代谢特别是脂肪酸代谢受到宿主肠道细菌的影响。脂质在氧化应激下发生氧化，引起促炎作用，从而导致细胞损伤。氧化应激和炎症可加重IR [40］.因此，有必要对肠道细菌代谢下的脂质代谢进行综合分析。

亚油酸（LA），一个类型的多不饱和脂肪酸（PUFA），是部分Ω6家庭(Ω-6 PUFA）。Ω-6 PUFA通常与促炎效应相关，并且越来越多的证据证实ω-6 PUFA可以刺激T2DM [41.］.在LA代谢中，LA转化为花生四烯酸，花生四烯酸可产生11,12- dhet，促进胰高血糖素的释放，提高血糖水平。此外，它可被氧化为12,13- epome，因此在高浓度时产生细胞毒性[42.-44.］.它之前已被报告过Roseburia与LA和α亚麻酸（ALA），这与我们的研究结果是一致的[45.］.在模型大鼠中增加了参与甘油磷脂代谢的LPC和LPE，通过Picrust分析验证。SFE可以通过调节肠道细菌的参与来调节Fas和甘油磷脂代谢来发挥抗氧化和抗炎作用。

在一些研究中，据透露，鞘氨醇-1-磷酸增加（S1P）发生肥胖的动物和人类，这可能会导致IR和鞘脂（SL）的表达代谢[46.］.2型糖尿病患者鞘脂代谢改变并与细胞死亡有关[26]. 然而，我们从代谢组学分析中获得的结果与之前一些研究中发表的结果不同，这可能是由于以下原因：首先，据报道，环境会影响SL水平[47.]，之前的研究大多是基于生物流体和组织进行的，这与我们的研究不同。其次，在PICRUSt分析中，SL代谢明显上调，SL和脂多糖(LPS)是膜的主要成分拟杆菌门，它们的生物合成与T2DM炎症的发展有关[30.那48.］.我们推测，日益丰富的拟杆菌门可能导致SL缺乏，导致粪代谢组学中鞘脂代谢下调。第三，鞘氨醇可以通过神经酰胺合成酶(CerS)合成神经酰胺，鞘氨醇也可以通过酶反应生成神经酰胺。高糖环境下的氧化应激会促进炎症活化，增加神经酰胺的合成。细胞神经酰胺的积累与肥胖和糖尿病的发病机制有关。在本研究中，鞘氨醇和鞘氨氨酸的下调可能与氧化应激诱导的神经酰胺过度转化有关[49.］.基于上述原因，在不同的结果发生;然而，所涉及的潜在的机制应该进一步调查。

模型组初级和次级胆汁酸生物合成和胆汁分泌的过表达是，根据PICRUSt分析中，与代谢分析线。2型糖尿病会干扰肠肝循环（EHC）和妨碍胆汁酸（BAS）的重吸收。的BA可改变肠道菌群的组成，并且相反地，肠道细菌可以改变BA。不能再吸收和再循环的过度缀合的初级的BA是由肠道微生物可以表达胆盐水解酶[代谢成次级胆汁酸50.那51.］.如果结合楼宇自动化水平的提高，发生的紧密连接完整性的丧失，并导致肠道屏障的破坏。肠腔内的革兰氏阳性的肠道细菌已知表达胆盐水解酶[35那51.那52.),如瘤胃球菌属和链球菌，这是在我们的研究中发现的。已知这些细菌能够氧化和还原BAs的3、7和12个碳上的羟基[50.］.本研究发现原发性胆汁酸代谢过表达可能与EHC的中断和丰度的降低有关瘤胃球菌属和链球菌；SFE可以通过增加的丰度调节BA代谢瘤胃球菌属和链球菌恢复BAs的重吸收。

碳水化合物和能量代谢富集2型糖尿病是常见的。乳酸盐是中央物质，并且可以从碳水化合物获得并转变为葡萄糖;乳酸的异常水平可以暗示葡萄糖产生的紊乱[6.］.此外，乳酸被认为是微生物代谢的中间产物，可以被一些细菌转化为短链脂肪酸，包括veillonellaceae.，这是我们研究中T2DM大鼠的鉴别性细菌[29］.与模型大鼠相比，sfe处理后大鼠碳水化合物和能量代谢均有改善。值得注意的是，代谢组学分析显示，其碳水化合物和能量代谢水平显著提高，包括丙酮酸代谢、半乳糖代谢、淀粉和蔗糖代谢;而PICRUSt分析提示，模型大鼠碳水化合物代谢的富集并不显著。可能的原因可能包括以下几点:从微观角度来看，责任据报道，与能源相关的收获[53.]，和在门的物种责任， 如瘤胃球菌属和梭状芽胞杆菌，分别为碳水化合物降解细菌[45.］.在我们的研究中，门的减少责任可能导致模型组糖代谢无显著性上调。从宏观上看，当T2DM患者胰岛素分泌不足时，葡萄糖进入细胞的量减少，导致肝脏、肌肉等组织对葡萄糖的摄取减少。因此，摄入的葡萄糖不能被宿主利用，导致过度消耗。这种状态伴随着葡萄糖氧化受损;碳水化合物代谢的过度表达出现在我们的代谢组学分析中。

5.结论

SFE改善2型糖尿病相关的指标，抑制2型糖尿病的进展。已成功应用multiomics方法来揭示T2DM大鼠表现出肠道生态失调和代谢障碍和通过反转脂质，氨基酸和碳水化合物代谢的异常，并通过调节代谢物和肠道微生物之间的相互作用SFE处理T2DM。总之，在这项研究中，我们阐明的2型糖尿病和SFE处理机制的发病机理从系统主机微生物代谢轴的角度。

数据可用性

用于支持本研究结果的数据包括在补充信息文件中。用于支持本研究发现的原始实验数据可从通讯作者(Lei Chen)获得chenlei0080@163.com） 根据要求。

的利益冲突

作者宣称没有任何经济利益冲突。

作者的贡献

景邵和易刘同等为本文贡献。

致谢

研报本出版物中得到了中国国家自然科学基金委员会（NSFC 81673556，NSFC 81872980），广东省基础和应用基础研究专项基金（广东省自然科学基金，2017A030313753），和中国传统医学广东的政府资助省（2019205）。

补充材料

补充1。1.材料与方法仪器和试剂;1.2。SFE中总黄酮含量的测定1．3．UHPLC-MS分析SFE中4种黄酮类化合物的条件。补充2。图S1: SFE中黄酮类化合物的总离子电流(TIC)图谱。图S2: SFE给药改变了T2DM大鼠肠道菌群结构。 The rarefaction curve of samples from the control, T2DM, and SFE groups performed with (a) Observed species and (b) Shannon. The boxplot of alpha diversity of the control, T2DM, and SFE groups performed with (c) Observed species and (d) Shannon. Figure S3: base peak chromatograms of feces samples in (a) positive and (b) negative ion mode. Figure S4: total ion chromatograms of QC sample in (a) positive and (b) negative ion mode. Figure S5: the response permutation testing (RPT) plots from the model group and control groups in the eighth week. The RPT of OPLS-DA in (a) positive and (b) negative ion mode of feces samples. Figure S6: two-stage tandem mass spectrogram of gluconolactone. Supplementary 3. Table S1: identification of the flavonoid compounds from近年来层提取技术)。表S2:对照组、模型组和SFE治疗组在不同周内识别的潜在生物标志物。（补充材料）

参考文献

1. S. Chatterjee, K. Khunti, M. J. Davies，《2型糖尿病》刺胳针，第389卷，第2239-2251页，2017。视图:谷歌学术
2. K. Al-Rubeaan，“儿童和青少年中1型、2型糖尿病和前体糖尿病的国家监测:一项基于人群的研究(沙特dm)”流行病学与社区健康杂志，第69卷，第2期11, pp. 1045-1051, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术
3. L. Brunkwall和M. Orho-melander，“肠道微生物组作为预防和治疗2型糖尿病高血糖的靶点:从目前的人类证据到未来的可能性。”Diabetologia，第60卷，第2期6、第943-951页，2017。视图:出版商的网站|谷歌学术
4. K. Makki, E. C. Deehan, J. Walter和F. Bäckhed，《膳食纤维对宿主健康和疾病中肠道微生物群的影响》，细胞宿主和微生物，第23卷，第2期。6，第705-715，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
5. T. Clavel, C. Desmarchelier, D. Haller等，“代谢疾病中的肠道微生物群:从细菌群落结构和功能到病理生理相关性的物种”肠道微生物，卷。5，不。4，第544-551，2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
6. M. Derrien和J. E. T.面包车Hylckama Vlieg，“命运，活动，和人肠道菌群内摄入的细菌的影响，”微生物学的趋势，第23卷，第2期。6，第354-366，2015。视图:出版商的网站|谷歌学术
7. 问：聂，J.胡，高H.，L.范，陈H.和S.聂，“多糖车前草减弱高血糖，高脂血症，影响2型糖尿病大鼠结肠微生物”食品凝胶，第86卷，第34-42页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
8. P. D.卡尼，“菌群和代谢性疾病的代谢物，”自然评论内分泌学，第15卷，第5期。2，第69-70页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
9. Xu j, H. b Chen, and S. L. Li，“理解中药与肠道微生物相互作用的分子机制，”药用研究评论，第37卷，第2期5, pp. 1140-1185, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术
10. H. A. Jung, N. Y. Yoon, S. S. Kang, Y. S. Kim, J. S. Choi，“苦参中戊基化黄酮类化合物对醛糖还原酶和晚期糖基化终末产物的抑制活性”，杂志药剂及药理学，第60卷，第2期9，第1227-1236，2008。视图:出版商的网站|谷歌学术
11. 石慧春，黄秋英，“中药苦参防治糖尿病性白内障的研究”，海峡医药杂志。， 1999年第11卷，第15-17页。视图:谷歌学术
12. 荣春华，周松，丁国贤等，“中药提取物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的抗高血糖活性”，生物科学、生物技术和生物化学，第70卷，第2期10, pp. 2556-2559, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学术
13. S. J. Park, K. W. Nam, H. J. Lee, E. Y. Cho, U. Koo, and W. Mar，“苦参根中无生物碱乙酸乙酯提取物的神经保护作用。对大鼠局灶性脑缺血的作用植物学期刊，第16卷，第5期。11, pp. 1042-1051, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术
14. T.佐佐木，W.李，K. Higai，T. H.广，Y H. Kim和K.小池，“蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制苦参根薰衣草黄酮的活动，”足底》，卷。80，不。7，第557-560，2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
15. S. Sato, J. Takeo, C. Aoyama，和H. Kawahara，“Na+-葡萄糖共转运体(SGLT)抑制苦参根中的黄酮类化合物，”生物有机与药物化学，第15卷，第5期。10，第3445-3449，2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术
16. X. Yang，J. Yang，C.Xu等，“来自Sophora Flavescens EtOAc提取物在2型糖尿病KK-AY小鼠中的黄酮类化合物的抗糖尿病作用”民族科医生学杂志， vol. 171, pp. 161-170, 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术
17. W. Tang，X. Yao，F. xia等，“在治疗高脂饮食诱发的非酒精性脂肪肝病期间，Hugan Qingzhi片剂中的肠道微生物肿块的调节。氧化医学和细胞寿命文章编号7261619,14页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
18. C. Petersen, U. D. Wankhade, D. Bharat等，“膳食补充草莓诱导糖尿病小鼠肠道微生物组组成和功能潜力的显著变化，”营养生物化学杂志，第66卷，第63-69页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
19. Y.玉，刘问，H.李，闻C.和Z.他，“在雄性大鼠高尿酸血症的治疗相关的肠道微生物的改变，”微生物学中的前沿， 2018年9月。视图:出版商的网站|谷歌学术
20. J.巴特勒，I.麦卡勒姆，M.克莱伯等人，“ALLPATHS：从头装配全基因组鸟枪法microreads”。基因组研究，卷。18，不。5，第810-820，2008。视图:出版商的网站|谷歌学术
21. 陈丽，赵丽丽，蔡伟，邵俊杰，黄旭东，刘颖，“一种同时测定苦参乙酸乙酯提取物中四种黄酮类化合物含量的方法。基于UHPLC - q -萃取质谱法的大鼠血浆药代动力学研究生物色谱法第33卷第3期3, p. 4447, 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
22. l . j .朱苦参有效组分的化学研究苦参有效部位化学研究），北京中医药大学，2007。
23. j . z鑫DC治疗糖尿病模型大鼠的分子机制（石斛合剂治疗糖尿病模型大鼠的分子机制研究），福建中医药大学，2010。
24. P. Samczuk，H. Hady，E. Adamska-Patruno等人，“以和出链接到减肥手术后的2型糖尿病患者缓解分子变化：肠道微生物对线粒体代谢有影响，”国际分子科学杂志。第19卷第2期12，第3744页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
25. M. Chen, B. Lu, Y. Li et al.，“代谢组学对高脂饮食诱导的肥胖大鼠长期摄入复合多糖的调节作用的研究”，营养代谢，第15卷，第1期，2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术
26. Y.周，L.男性，Z.裨等人，“基于质谱技术2型糖尿病大鼠，并用栀子治疗的粪便代谢组学，”农业和食品化学杂志，卷。66，没有。6，第1591至1599年，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
27. “基于气相色谱/飞行时间质谱法(GC - TOF/MS)研究麦冬多糖MDG-1对糖尿病小鼠的粪便代谢组学研究”，分子生物系统，第10卷，第5期。2，pp。304-312,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
28. “膳食纤维对2型糖尿病患者肠道菌群的促进作用”，科学，第359卷，第2期6380页，1151-1156,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
29. C. H.金，“微生物群或短链脂肪酸：其调节糖尿病？”细胞与分子免疫学，第15卷，第5期。2，pp。88-91,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
30. Liu R.， Hong J.， Xu X. et al.，“肥胖和减肥干预后肠道微生物组和血清代谢组的变化”，自然医学，第23卷，第2期。7, pp. 859-868, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术
31. “二甲双胍和中药复方治疗2型糖尿病合并高脂血症的疗效观察:一项多中心、随机、开放标签的临床研究”，mBio，第9卷，第5期。2018年3月3日。视图:出版商的网站|谷歌学术
32. A.阿古斯，J. Planchais和H.索科尔，“在健康和疾病色氨酸代谢的肠道菌群调节，”细胞宿主与微生物，第23卷，第2期。6，第716-724页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
33. S. Montandon和F.Jornayvaz，“抗糖尿病药物对肠道微生物群组成的影响，”基因，第8卷，第2期10，页250,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术
34. B.刘，张B.，G.陈，杨H.和D唐，“邻位连接检定与三路交汇处诱导轧制刀豆球蛋白A的超灵敏的电子监控环扩增”分析化学，第86卷，第86期15, pp. 7773-7781, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术
35. J. M. Natividad, a . Agus, J. Planchais等，“肠道微生物产生的芳基烃受体配体受损是代谢综合征的关键因素。”细胞代谢第28卷第2期5,页737 - 749。e4, 2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术
36. K.高，R.羊，J. Zhang等人，“上型齐肩混合物的影响2型糖尿病由代谢，肠道菌群和网络药理学评估，”药理研究，第130卷，第93-109页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
37. R. CHEVRE，C. Silvestre的-Roig的，和O. Soehnlein，“先天性免疫营养调制：脂肪-胆汁肠连接，”内分泌学和代谢趋势，卷。29，不。10，pp。686-698,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
38. G迪保罗和P。De Camilli，“细胞调节和膜动力学中的磷脂酰肌醇，”自然，卷。443，没有。7112，第651-657，2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术
39. F. Okazaki, L. Zang, H. Nakayama等，“斑马鱼2型糖尿病模型中的微生物组改变”，科学报告，第9卷，第5期。1, p. 867, 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
40. 王磊，李鹏，唐志忠，闫晓燕，冯斌，“利拉鲁肽与沙格列汀治疗对肠道微生物结构的影响及其与体重的关系:利拉鲁肽与沙格列汀治疗的比较评价”，科学报告，卷。6，不。2016年1日。视图:出版商的网站|谷歌学术
41. “高亚油酸饮食加重糖尿病肥胖大鼠的代谢反应和肠道菌群失调，”食物与功能，第10卷，第5期。2，第786-798页，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
42. N. Salem Jr.， R. Pawlosky, B. Wegher, and J. Hibbeln，“在人体内亚油酸向花生四烯酸的转化”，前列腺素、白三烯和必需脂肪酸，第60卷，第2期5-6，第407-410页，1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术
43. V. yeong - yama -wah, A. K. Lee, F. W. Tse, A. Tse，“花生四烯酸通过激活非容量性花生四烯酸调节的Ca(2+)通道，刺激细胞外Ca(2+)进入大鼠胰腺β细胞”，细胞钙，第47卷，第47期。1，页77-83,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术
44. M. F. Moghaddam, D. F. Grant, J. M. Cheek, J. F. Greene, K. C. Williamson，和B. D. Hammock，“通过环氧化物水解酶使白质毒素对其毒性二醇的生物激活”，自然医学，第3卷，第2期。5，第562-566页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学术
45. A. Mardinoglu，H.Wu，E. Bjornson等，“综合了解碳水化合物限制性饮食的快速代谢益处对人类的肝脏脂肪变性”，“细胞代谢，卷。27，不。3，pp。559-571.e5,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
46. E.托雷塔，P. Barbacini，N. M. AL-Daghri，和C. Gelfi，“鞘脂在肥胖和相关的共病：性别，年龄和环境的贡献，”国际分子科学杂志，第20卷，第2期。23, p. 5901, 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
47. Y. A. Hannun和L. M. Obeid，《生理学和疾病中的鞘脂及其代谢》，自然评论：分子细胞生物学第19卷第2期3，第175-191，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
48. 聂强，陈华，胡建军，范思生，聂思生，“膳食化合物和中药通过调节肠道微生物群改善2型糖尿病”，《食品科学与营养评论》，卷。59，没有。6，第848-863，2019。视图:出版商的网站|谷歌学术
49. M. C.彼得森和G. I.舒尔曼，“胰岛素作用和胰岛素抵抗的机制，”生理上的评论，卷。98，没有。4，第2133至2223年，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
50. P. B. Hylemon, S. C. Harris, J. M. Ridlon，“肠道微生物群中氢气和胆汁酸的代谢”，费用字母，第592卷，第2期。第12页，2070-2082页，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
51. P. Hegyi, J. Maléth, J. R. Walters, A. F. Hofmann, and S. J. Keely，“肠道和胆汁:胆汁酸在健康和疾病中调节肠道上皮功能”，生理上的评论，卷。98，没有。4，第1983至2023年，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术
52. H. J.弗林特，K. P.斯科特，P.路易斯和S. H.邓肯，“营养与健康的肠道菌群的作用，”自然评论：胃肠病学和肝病，第9卷，第5期。10，第577-589，2012。视图:出版商的网站|谷歌学术
53. R. messnage, F. Grundler, A. Schwiertz, Y. le Maho, and F. Wilhelmi de Toledo，“在Buchinger禁食10天期间，人类肠道微生物组成的变化与能量代谢开关有关。”营养科学杂志， 2019年第8卷。视图:出版商的网站|谷歌学术

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