神经保护作用的scm - 198通过稳定内皮细胞的功能

文摘

Leonurine也叫scm - 198,提取益母草,显示在各种心血管保护作用和大脑疾病,缺血性中风。缺血性中风发病率和死亡率的主要原因,最终造成不可逆的神经损伤。本研究旨在探索可能的治疗潜力的scm - 198保护缺血后神经元损伤和可能的潜在机制。短暂性大脑中动脉闭塞(tMCAO)大鼠模型是用来衡量scm - 198对神经元的保护作用。TEM是用来确定神经元超微结构的变化。大脑切片染色了尼斯尔尼氏小体的染色的解决方案。Fluoro-Jade B (FJB)是用于染色神经元退化。oxygen-glucose剥夺和re-oxygenation (OGD / R)模型的弯曲。3细胞治疗scm - 198 (0.1、1、10μ米)。然后,弯曲。3细胞were cocultured with SH-SY5Y cells. Cell viability, MDA level, CAT activity, and apoptosis were examined to evaluate the cytotoxicity of these treatments. Western blot and immunofluorescent assays were used to examine the expression of protein related to the p-STAT3/NOX4/Bcl-2 signaling pathway. Coimmunoprecipitation was performed to determine the interaction between p-STAT3 and NOX4. In the transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) rat model, we found that treatment with SCM-198 could ameliorate neuron morphology and reduce the degenerating cell and neuron loss. In the在体外弯曲的模型。3cell oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD/R), treatment with SCM-198 restored the activity of catalase (CAT), improved the expression of Cu-Zn superoxide dismutase (SOD1), and decreased the malondialdehyde (MDA) production. SCM-198 treatment prevented OGD/R-induced cell apoptosis as indicated by increased cell viability and decreased the number of TUNEL-positive cells, accompanied with upregulation of Bcl-2 and Bcl-xl protein and downregulation Bax protein. The results were consistent with SH-SY5Y cells which coculture with bEnd.3 cells. The forthcoming study revealed that SCM-198 activated the p-STAT3/NOX4/Bcl-2 signaling pathway. All the data indicated that SCM-198 protected against oxidative stress and neuronal damage in在活的有机体内和在体外损伤模型通过p-STAT3 / NOX4 / bcl - 2信号通路。我们的研究结果表明,scm - 198可能是潜在的神经保护药物通过稳定内皮细胞功能的影响。

1。介绍

中风是全球发病率和死亡率的主要原因之一(1),由于其难以置信的治疗时间短窗口和更少的有效应急药品、组织类型纤溶酶原激活物(tPA)作为优先在缺血性中风治疗药物,只有10%的病人适用于这种疗法(2]。中风临床来说,可以分为两种类型:大约85%的缺血性中风和出血性中风,包括颅内出血和subarachnoidal出血占10%和3%,分别为(3]。与此同时,在缺血性中风,连带损坏由再灌注会恶化预测包括血脑屏障(BBB)的崩溃,炎症,氧化应激,会引起,最后不可逆的神经损伤(4]。

NADPH氧化酶类(NOX)是一种活性氧的主要来源,只有这种酶只知道有活性氧的形成功能(5]。在哺乳动物中,氮氧化物家族包括7名成员:NOX1 NOX5,双重氧化酶- (Duox) 1, Duox-2 [6- - - - - -8]。氮氧化物、NOX4似乎主要是缺血再灌注(IR)治疗的目标9,10),因为它是诱导下各细胞和组织缺氧使它似乎红外损伤的最可能的关键(11]。此外,最近的研究表明,NOX4施加对血脑屏障保护作用分解,氧化应激和神经细胞凋亡在缺血性中风(12,13]。

研究表明,转录激活信号传感器和3 (STAT3)是参与保护脑缺血再灌注损伤(14- - - - - -16]。先前的研究调查,激活STAT3在中风模型可以促进许多基因发挥保护作用的神经损伤和修复(17,18]。进一步的实验表明STAT3信号通路的调节可以防止neuroapoptosis [19]。然而,下游监管机构的进一步的机制尚不清楚。相反,也有一些其他不同的结果显示,阻断STAT3通路可以改善脑复苏和神经的结果(20.]。因此,激活的刚性贡献STAT3卒中后仍不完全的探索。

Herbaleonuri也叫做中国益母草或益母草,发现在中国,中欧,斯堪的纳维亚半岛,与俄罗斯和记录治疗阴道出血,难产,保留了致命的膜,擦伤,子宫出血,漏下,hemuresis和其他一些疾病。Leonurine (C₁₄H₂₁N₃O₅),从树叶中提取的Herbaleonuri也叫scm - 198,据报道,在有氧运动保护脑血管疾病。我们之前的结果首先提供了证据表明,scm - 198可以防止心脏纤维化和心脏成纤维细胞激活的部分是通过调制NOX4-ROS通路(21]。和我们的调查发现,scm - 198可以通过调节维持BBB完整性HDAC4 / NOX4 MMP-9紧密连接通路(22- - - - - -25]。scm - 198可以直接抑制小胶质细胞产生应对,保持他们的分歧的形态,减少促炎细胞因子通过NF -κB和物在小胶质细胞和途径β1-40-injected SD大鼠(26]。因此,我们调查了scm - 198对神经元的保护作用和微血管内皮细胞tMCAO鼠模型和OGD / R在体外模型和提出新的保护作用的机制,有助于通过STAT3 scm - 198 / NOX4 / bcl - 2通路。

2。材料和方法

2.1。动物模型和治疗

所有的试验机构伦理委员会批准的协议是国际公认的道德标准。协议和动物处理进行按照美国国立卫生研究院的指导方针指导实验室动物保健和使用的。男性Sprague-Dawley (SD)提供的老鼠实验动物中心,复旦大学。大鼠体重180 - 220克被安置在日照明条件下有足够的食物和水。

简单地说,我们执行手术如前所述27]。上面提到的所有的动物被随机分为五组:控制操作组,tMCAO组用生理盐水治疗,药物不良反应——(3毫克/公斤/天)治疗组和scm - 198在生理盐水(15毫克/公斤/天)治疗组,posttreated (0.5 h和2 h后操作)。所有的药物都给通过尾静脉注射一次每日三次。

2.2。透射电子显微镜(TEM)

TEM是用来确定神经元超微结构的变化。所有的超薄部分检查与Jeol JEM 1200 EX (Jeol有限公司、东京、日本)透射电子显微镜。一名调查员盲法研究协议研究组织(28]。

2.3。组织准备

三天的治疗后,大鼠( )与戊巴比妥钠麻醉(50毫克/公斤),然后用4%多聚甲醛灌注0.9%生理盐水,随后在PBS。大脑被删除,而在12 h后缀相同的醛类固定剂的解决方案,然后沉浸在15%和30%蔗糖溶液在6天4°C。大脑在20个分段μm是用于下一个实验(29日]。

2.4。尼氏小染色

脑片上面描述的是沾尼氏小染色方案(Beyotime) 20分钟。片脱水在70%、95%、和100%乙醇、二甲苯清除,然后用中性树脂覆盖。选择五个部分从每个鼠皮层和纹状体和三张图片,分别。ImageJ的图像进行了分析。

2.5。Fluoro-Jade B (FJB)染色

FJB用于染色神经元退化。上面描述的大脑部分被染色根据刘et al。30.]。

2.6。Immunofluorescent染色

免疫荧光法是评估如前所述31日,32]。冠状切片上述被封锁和孵化兔子anti-NeuN多克隆抗体(Abcam, 1: 500)在4°C,其次是Alexa萤石488 -共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白g(1: 1000年,生命技术)与DAPI对比染色。荧光染色法被用激光扫描共焦显微镜(蔡司、从、德国)。

2.7。弯曲。3Cell Culture and Treatment

鼠标弯曲。3细胞were bought from the American Type Culture Collection (ATCC). Cells were cultured according to our previous method [25]。

模仿ischemic-like条件在体外,弯曲。3细胞were exposed to OGD and reperfusion as we described previously [33]。总之,这些细胞被洗和PBS glucose-free介质(表达载体)所取代。细胞被置于BioSpherix孵化室(ProOx C21,美国),这是刷新N为95%₂和5%的公司₂6 h空气然后转移到95%,5%的股份有限公司₂,继续培养的glucose-containing媒介每次4 h。这些细胞被分为五组:控制,OGD,细胞治疗scm - 198 (0.1μM, 1μ10 M,μ米)OGD前2 h。添加抑制剂1 h之前OGD直到实验结束。

2.8。SH-SY5Y细胞培养和Coculture弯曲。3细胞

SH-SY5Y细胞系都从美国购买类型文化收藏。SH-SY5Y与杜尔贝科的修改鹰的培养基培养细胞(美国HyClone DMEM)含10%胎牛血清(美国Gibco的边后卫)和100年μg / mL青霉素和链霉素(Gibco)和培养在37°C包含5%的股份有限公司₂和95%啊₂。

coculture体系建立与一些修改(根据先前的研究34]。coculture 24 h后,SH-SY5Y细胞被洗和PBS glucose-free介质(表达载体)所取代。细胞被置于BioSpherix孵化室(ProOx C21,美国),这是刷新N为95%₂和5%的公司₂9 h空气然后转移到95%,5%的股份有限公司₂,继续培养的glucose-containing媒介每次2 h。

2.9。MTT和乳酸脱氢酶(LDH)测定

细胞生存能力是由mitochondrial-dependent减少MTT (3 - 4 5-dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyl溴化四唑)通过添加10甲瓒μL MTT代理(5毫克/毫升;Sigma-Aldrich)细胞板(35]。

LDH活性检测使用LDH活力测定工具根据制造商的指示。

2.10。MDA水平的测量和猫的活动

脂质过氧化是量化通过测量水平的丙二醛(MDA)试验设备(Byotime)。过氧化氢酶活性(CAT)确定后,制造商的指令(Beyotime)。

2.11。TUNEL

测量后的细胞凋亡OGD / R侮辱,我们数了数TUNEL——(终端原位dUTP-biotin缺口末端标记)阳性细胞是由一个细胞死亡检测装备,根据制造商的协议(Biotool)。

2.12。Coimmunoprecipitation

Coimmunoprecipitation进行了如前所述[36]。简单地说,弯曲。3细胞were subjected to OGD treatment and reperfusion, then lysed on ice in RIPA buffer. After preclearing with normal IgG, cell lysates (0.5 mg of protein) were incubated overnight at 4°C with 2μ克anti-NOX4 (Proteintech, 1: 100)和anti-p-STAT3 (CST, 1: 100),紧随其后的是降水与20μ蛋白质的L / G Plus-Agarose(圣克鲁斯生物技术)1 h在4°C。沉淀复合物用于免疫印迹分析,如下所述。

2.13。免疫印迹

免疫印迹分析如前所述[36,37]。

每个膜孵化与特定的抗体如下:Bcl-xl(细胞信号技术,1:1000),bcl - 2(细胞信号技术,1:1000),伯灵顿(细胞信号技术,1:1000),SOD1(细胞信号技术,1:1000),NOX4 (Proteintech, 1: 1000), STAT3(细胞信号技术,1:1000),p-STAT3(细胞信号技术,1:1000),一种蛋白激酶(细胞信号技术,1:1000),和p-Akt(细胞信号技术,1:1000)。测量每个蛋白质的表达,相对强度计算通过比较使用微GAPDH强度。

3所示。结果

3.1。保护scm - 198在缺血性中风后神经元形态

正如我们所知,再灌注可引起继发性脑损伤,包括神经元不可逆损失,伤害和退化。根据先前的研究,我们假设scm - 198是否施加影响tMCAO神经元模型。首先,我们调查了脑组织超微结构的条件。三天后tMCAO操作,大空泡和溶酶体出现在细胞质中。在模型组显示几乎所有的线粒体超微结构的病理变化和他们中的大多数都肿了。我们很难找到正常的神经元在这组(图1(一))。scm - 198治疗组显示更少的细胞间水肿,更好的神经元超微结构,线粒体保护比tMCAO-insulted组。良好的保护神经元和轻微的树突肿胀在0.5 h post操作scm - 198治疗后治疗组展示了伟大的改良。在0.5 h post操作治疗与药物组,神经元肿胀细胞质和密度较低而正常的神经元。线粒体积累发生涉及氧化应激的侮辱。我们下一个测量了神经细胞丧失peri-ischemic地区tMCAO皮层的尼氏小染色。结果显示,scm - 198细胞收缩和减少空空间(图1 (b))。

3.2。scm - 198 I / R后神经元减少损失的侮辱

Fluoro-Jade B,一种细胞死亡标记用于染色神经元退化,被选为进一步示范的神经保护。没有发现FJB-positive细胞对照组。相反,巨大的神经元退化发现peri-ischemic tMCAO集团的区域。scm - 198,在0.5 h和2 h后手术治疗组,显著降低退化的神经元的数目。药物不良反应也减少了神经元退化;效果略逊于scm - 198 0.5 h组,但无显著差异(数字2(一个)和2 (b))。这个结果证实了NeuN免疫反应性(图2 (c));从结果我们发现有大量NeuN-positive细胞对照组。tMCAO导致更多的神经元丧失,scm - 198可以减少侧大脑皮层的神经元的损失。也没有显著区别scm - 198和药物不良反应。,这些结果表明,scm - 198能显著防止缺血性损伤和提高神经元存活率。

3.3。scm - 198改善弯曲。3细胞Antioxidative Capacity在体外

没有观察到明显的细胞毒性浓度从0.001到100μM scm - 198 (26]。可能的抗氧化机制主要使用弯曲的scm - 198进行了研究。3细胞在体外。阐明scm - 198 OGD / R-induced的参与细胞损伤、MDA的含量,测定活动的猫,SOD1表达式。如图3(一个)MTT测定、细胞生存能力评估,后显著降低接触OGD 6 h和再灌注2 h,而scm - 198浓度的方式可以增加细胞的可行性。OGD / R导致细胞生存能力降低 ;1到10μM scm - 198提高生存能力 和 ,分别。MDA水平的scm - 198(1到10μ米)组相比显著降低OGD / R组(图3 (b))。MDA水平OGD / R组2 -和3倍比scm - 198(1到10μ米),剂量1和10μM scm - 198主要可能增加细胞间抗氧化能力通过恢复活动的猫(图3 (c))和增加SOD1的表达(图3 (d))。scm - 198 1和10μ米,可以提高活动的猫 来 和 。OGD / R-induced细胞凋亡是由TUNEL染色;结果表明,OGD / R明显增加了细胞凋亡率 ,而治疗scm - 198(1到10μ米)抑制细胞凋亡 和 (图3 (e))。

3.4。SCM-1 98保护神经元通过调制BMECs BMEC /神经元Coculture系统

scm - 198能有效地对抗OGD / R侮辱BMEC细胞,然后利用coculture系统确定scm - 198通过保护BMECs对神经元有影响。再灌注后4小时时,弯曲。3细胞were cocultured with the SH-SY5Y cell line for 24 h before SH-SY5Y was subjected to OGD for 9 h and reperfusion for 2 h. bEnd.3 treatment with SCM-198 coculture with SH-SY5Y exhibited protection against OGD/R injury by improving the cell viability and antioxidant ability and reducing apoptosis. Figure4(一)与scm - 198显示条件培养基,特别是1μ米和10μ米,增加了细胞的生存能力 和 ,分别与OGD / R组相比没有scm - 198 ( )。scm - 198可以减少LDH泄漏和SH-SY5Y细胞MDA水平,增加猫(人物的活动4 (b)- - - - - -4 (d))。LDH泄漏和MDA水平OGD / R组比对照组三倍,而scm - 198 (1μ米和10μ米)是将近一半的OGD / R组。scm - 198, 1μ米和10μM,猫活动增加50%与模型组相比。scm - 198可以显著减少细胞凋亡,这被TUNEL染色证实。图4 (e)表明,OGD / R细胞凋亡率增加 ,而治疗scm - 198(1到10μ米)下降细胞凋亡 和 。符合这些观察,我们认为scm - 198可能通过调节BMECs发挥对神经元的保护作用。

3.5。scm - 198抑制细胞凋亡的机制引起OGD / R

缺血后细胞凋亡主要负责细胞死亡。正如我们上面提到的,scm - 198能减少神经元的损失在活的有机体内和细胞凋亡在体外。我们检查了scm - 198在bcl - 2家族的影响,包括antiapoptosis bcl - 2蛋白和Bcl-xl proapoptosis蛋白质伯灵顿。后我们的研究结果表明,OGD / R损伤bcl - 2和Bcl-xl显著减少,而他们改善与scm - 198治疗(1到10μ米)(图5(一个)- - - - - -5 (c))。与此同时,coculture结果与弯曲的结果一致。3细胞。BMEC治疗与scm - 198 cocultured SH-SY5Y施加保护引起的细胞凋亡OGD / R通过增加bcl - 2的表达和Bcl-xl和减少伯灵顿级别(数字5 (d)- - - - - -5 (f))。

接下来,我们进一步探讨了机制的scm - 198在减少细胞凋亡引起的OGD / R在弯曲。3细胞。结果表明,scm - 198 1和10μM,通过改善p-STAT3和防止细胞凋亡抑制NOX4的表达,然后调制p-Akt,参与细胞凋亡的蛋白(数字5 (g)- - - - - -5(我))。

3.6。通过STAT3 scm - 198抑制细胞凋亡/ NOX4 / bcl - 2通路

正如我们所知,STAT3和NOX4都参与由调制PI3K / Akt通路调节细胞凋亡,但STAT3和NOX4之间的联系还不清楚。首先,我们使用il - 6在不同浓度或WP1066上调p-STAT3抑制STAT3 1 h之前OGD / R损伤;免疫印迹显示NOX4水平被过度抑制p-STAT3和增加了抑制STAT3的分别(补充1)。但当我们使用DPI或GKT137831抑制NOX4之前受到OGD / R, STAT3的水平持平(补充2)。我们认为,STAT3可能在缺血性中风规范表达,所以我们WP1066用于进一步的研究。结果显示,治疗10μM scm - 198仍然显著地减少NOX4诱导的超表达WP1066和改进p-Akt的表达。然后,scm - 198进一步减少了伯灵顿的水平和增加Bcl-xl和bcl - 2(图的表达6)。

3.7。scm - 198上调p-STAT3和NOX4之间的互动

我们之前的结果表明p-STAT3参与OGD / R-mediated NOX4表达式。我们推测,scm - 198可能影响p-STAT3和NOX4之间的交互。Coimmunoprecipitation分析表明p-STAT3之间的交互和NOX4增加了治疗scm - 198(数字7(一)和7 (b))。这些数据表明,scm - 198改善p-STAT3-NOX4交互,这可能会抑制NOX4激活和随后的细胞凋亡。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们表明,NOX4和细胞凋亡通路介导scm - 198对内皮细胞的保护作用和神经元在中风在活的有机体内和在体外。另外,我们新发现和阐明p-STAT3 / NOX4途径受到scm - 198在BBB崩溃。p-STAT3的表达作为消极的NOX4调节器,这也许是通过直接绑定在缺氧情况下受到scm - 198。这些结果提供新的见解的中风的保护角色scm - 198除了BBB维护我们最近报道25]。

缺血性中风,大脑首先遭受巨大损失的氧气和养分造成组织损伤主要发生在大脑皮层和纹状体38),再灌注加剧了侮辱由于新鲜的氧气3]。传统疗法对中风包括tPA,一种适合临床使用的酶促进血凝块后不到3小时急性缺血时,药物不良反应、自由基清除剂和唯一获准用于治疗急性缺血性中风临床神经保护代理在日本(39]。然而,有研究报道,tPA治疗通常是伴随着一种有害的并发症如脑水肿,因为再灌注追赶。药物不良反应可能抑制活性氧的生产和抑制线粒体渗透性转换孔开放的注射(MPTP药物)[39]。直到现在,药物不良反应是唯一在日本和批准临床治疗中风治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)在美国和日本。有限的可用性的有效临床医学导致一个大社会的未满足的需求,所以开发新方法急性中风管理迫在眉睫。

scm - 198据报道有心血管效应对缺血性心肌损伤通过清除细胞内ROS和增加antiapoptosis-associated蛋白质含量(40]。此外,一些研究报道,scm - 198能改善大脑皮层梗死面积,改善神经损伤(24,41]。在这项研究中,我们发现政府的scm - 198 0.5 h I / R后老鼠可以保护神经元形态学在药物治疗组神经元还肿胀细胞质和密度较低质量。同时,scm - 198可以防止神经细胞丧失peri-ischemic地区的大脑皮层(图1)。此外,这是反复证实了FJB染色和NeuN检测。scm - 198是一个小的效果比药物不良反应虽然没有意义。但我们知道,scm - 198有更少的副作用,更容易获得。在在体外研究中,我们感应弯曲。3细胞or coculture system with OGD/R model. The results reveal that SCM-198 significantly improved cell viability and inhibited cell apoptosis without obvious cytotoxicity in the OGD/R-induced cells. But the results displayed that the effect of SCM-198 with 1 and 10μM有时显示弯曲之间的剂量反应的效果。3细胞和SH-SY5Y细胞。在1到10 SH-SY5Y细胞μM有时相同的方式工作;我们推测,可能有两个原因:(1)的媒体影响结果,(2)不同的实验系统。综上所述,scm - 198可能发挥神经保护作用,I / R和OGR / R条件。

据报道,STAT3脑缺血再灌注损伤是一个有争议的贡献者。JAK2 / STAT3通路由木菠萝和STAT蛋白家族。STAT蛋白,STAT3被认为是最保守的,它可以通过各种因素刺激和刺激18),炎性细胞因子和趋化因子等。有相反的功能选项JAK2 / STAT3激活在脑缺血42]。许多以前的研究都同意JAK2 / STAT3通路的激活减弱脑缺血/再灌注损伤(43]。据报道,雌二醇或catalpol可以防止I / R损伤通过激活STAT3 (44),这与我们的结果是一致的。为了确保STAT3激活和scm的神经保护效应之间的关系- 198,WP1066, STAT3抑制剂,是利用。我们的研究结果显示,WP1066可能会部分抵消scm - 198(图的保护作用6),而p-STAT3的过度表达可以抑制NOX4的表达。Co-IP实验证实的直接绑定p-STAT3 NOX4,和绑定活动可以由SCM198监管。此外,抑制NOX4,表达p-STAT3,没有影响,这表明NOX4被p-STAT3监管。

NOX4,活性氧的主要来源,是许多组织中高度表达缺氧建议NOX4可以是一个重要的统一的缺血后损伤的治疗目标。此外,Kleinschnitz等人报道,NOX4主要定位在大脑中内皮细胞和神经元(啮齿动物和人类)12]。同时,BBB的崩溃,特殊结构,区分大脑从心脏和其他器官,可以归因于内皮产生的ROS NOX4在缺血性中风(13]。神经元NOX4也可能有助于神经细胞autotoxicity在缺血或缺氧13]。药物抑制NOX4可能是一个有前途的方法来开发中风保护药物。大型动物中风模型和准备临床试验正在进行中(欧洲研究概念Council-Proof项目737586 SAVEBRAIN)。在我们的研究中,scm - 198可以显著减少NOX4 upregulation的内皮细胞和神经细胞遭受缺血性病症,这是符合我们之前的研究(21,25]。

5。结论

总之,我们的结果表明,scm - 198可以起到神经保护作用,通过稳定内皮细胞功能调节p-STAT3 / NOX4 / bcl - 2通路(图8)。此外,NOX4的规定可能是由于直接绑定到p-STAT3蛋白质,这可能是受到scm - 198。scm - 198 I / R损伤可能是潜在的药物。

缩写

tPA:	组织类型纤溶酶原激活物
STAT3:	转录激活信号传感器和3
tMCAO:	短暂性大脑中动脉闭塞
FJB:	Fluoro-Jade B
透射电镜:	透射电子显微镜法
CBF:	脑血流量
DAPI:	4 ,6-Diamidino-2-phenylindole
写明ATCC:	美式文化收藏
的边后卫:	胎牛血清
DMEM:	杜尔贝科修改鹰的媒介
谷胱甘肽:	谷胱甘肽
麻省理工:	3 - 4,5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyl四唑溴离子
OGD / R:	Oxygen-glucose剥夺和再氧化
MDA:	丙二醛
LDH:	乳酸脱氢酶
猫:	过氧化氢酶
TUNEL:	终端原位dUTP-biotin缺口末端标记
肌萎缩性侧索硬化症:	肌萎缩性脊髓侧索硬化症
ECs:	内皮细胞
氮:	NADPH氧化酶类
BBB:	血脑屏障
MPTP:	线粒体通透性转换孔。

数据可用性

所有数据生成或分析这项工作包含在这发表论文。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Qiu-Yan张Zhi-Jun王,郭魏设计并进行了实验,分析数据,并写了这篇文章。Lei苗,应王,玲玲Chang进行动物实验。Yi-Zhun朱镕基审查和编辑文章。Qiu-Yan张、王Zhi-Jun和Lei苗族的贡献同样这项工作。

确认

这项工作一直支持中国的国家自然科学基金(81402956号,81573421,81330080,81872864,和81803516),上海市科学技术委员会中国(16431902000)、上海晨光计划(第十四cg03)和上海市卫生和计划生育委员会(20184 y0102)。

补充材料

Supplementary1:抑制NOX4的活性没有影响pSTAT3的表达。NOX4的抑制剂,GKT137831 DPI,使用前OGD / R损伤。但是他们不能影响p-STAT3的表达。Supplementary2: upregulation p-STAT3由白细胞介素6的表达可以抑制bEnd.3 NOX4水平。答:不同浓度的白细胞介素6被用来改善p-STAT3 12 h孵化后的表达;B:白细胞介素6刺激弯曲。3for 12 h could not inhibit the expression of NOX4 after OGD/R injury; C: 17.5 ng/mL of IL6 significantly decreased the expression of NOX4 after incubation for 24, 48, and 72 h; D:WP1066 could exacerbate the activation of NOX4 induced by OGD/R injury.(补充材料)

引用

1. c·f·蔡、托马斯b和c·l·m·Sudlow“中风的流行病学及其亚型在中国vs白人群:系统回顾,“神经学,卷81,不。3、264 - 272年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. j·刘,y, y赤松et al .,“缺血性中风后血管重建:机制和治疗潜力,”神经生物学的进展卷,115年,第156 - 138页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. k . a . Radermacher k . Wingler f . Langhauser et al .,“卒中后神经保护通过瞄准NOX4氧化应激源,”抗氧化剂和氧化还原信号,18卷,不。12日,第1427 - 1418页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. w .应和振国熊”,氧化应激在缺血性脑损伤和NAD +:当前的进展和未来的视角,“当前药物化学,17卷,不。20日,第2158 - 2152页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. ai卡萨斯,v . t . v .刀,a Daiber et al .,“活性oxygen-related疾病:治疗靶点和新兴临床适应症,”抗氧化剂和氧化还原信号,23卷,不。14日,第1185 - 1171页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 问:m . w .妈,j . Wang Zhang et al .,“NADPH氧化酶在脑损伤和神经退行性疾病,”分子神经退化,12卷,不。1,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. b . Lassegue a·圣·马丁和k . k . Griendling”生物化学、生理学和病理生理学的NADPH氧化酶类在心血管系统中,“循环研究,卷110,不。10日,1364 - 1390年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. y Maejima, j .黑田s Matsushima t前,和j . Sadoshima”调节心肌生长和死亡的NADPH氧化酶,”分子和细胞心脏病学杂志》上,50卷,不。3、408 - 416年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. c . Doerries k·格罗特d Hilfiker-Kleiner et al .,“关键作用的NAD (P) H氧化酶亚基p47phox对心肌梗死后左室重构/功能障碍和生存,”循环研究,卷100,不。6,894 - 903年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. s . m . Craige k . Chen y裴et al .,“NADPH氧化酶4通过内皮一氧化氮合酶活化,促进内皮细胞血管生成”循环,卷124,不。6,731 - 740年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p . w . Kleikers c . Hooijmans大肠采空区et al .,“联合临床前荟萃分析和随机验证性试验方法来提高数据的有效性验证治疗目标,“科学报告,5卷,不。1,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. c . Kleinschnitz h .浅滩,k Wingler et al .,“中风后诱导NADPH氧化酶的抑制类型4防止氧化应激和神经退行性变的,”公共科学图书馆生物学,8卷,不。9日,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. ai卡萨斯,e . Geuss p w m . Kleikers et al .,“NOX4-dependent神经元autotoxicity和BBB破坏解释上脑缺血性损伤的敏感性,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷114,不。46岁,12315 - 12320年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 张x, x, j . Zhang et al .,“地奥司明预防脑缺血/再灌注损伤通过激活JAK2 / STAT3信号通路在老鼠身上,“神经科学卷,268年,第327 - 318页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. s . g . Chen, j .史j . Ai和c .挂“重组人红细胞生成素的影响(rhEPO) JAK2 / STAT3通路和内皮细胞凋亡在蛛网膜下腔出血后兔基底动脉,”细胞因子,45卷,不。3、162 - 168年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. h·朱l .邹j .田g . du和y高,“smnd - 309,一本小说的导数salvianolic酸B,保护大鼠大脑缺血和再灌注损伤通过瞄准JAK2 / STAT3通路,”欧洲药理学杂志,卷714,不。1 - 3,23-31,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. d . j . Raible l·c·弗雷,a . r . Brooks-Kayal JAK2-STAT3信号的影响脑的侮辱后,“JAK-STAT,3卷,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. z梁,c .风扇et al。g . Wu”新兴的转录信号传感器和催化剂的作用在脑缺血性中风和出血性中风,”神经生物学的进展卷。137年,硕士论文,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . Amantea c . Tassorelli r . Russo et al .,“瘦素在大鼠模型神经保护的永久性脑缺血:影响STAT3磷酸化在离散的大脑细胞,”细胞死亡和疾病,卷2,不。12日,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 即Satriotomo、k·k·鲍恩和r . Vemuganti”JAK2和STAT3激活导致神经元损伤瞬态局部脑缺血后,“神经化学杂志,卷98,不。5,1353 - 1368年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. l . l . x h . Liu,邓h . y . et al .,“Leonurine (scm - 198)通过抑制心肌纤维化反应变弱NADPH氧化酶4”自由基生物学和医学54卷,第104 - 93页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. c . x陈和c . y .关颖珊”Endothelium-independent leonurine血管舒张,植物从中国益母草生物碱纯化,”生命科学,卷68,不。8,953 - 960年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. x h·刘,p . f . Chen l . l .锅r·d·席尔瓦和y z朱,“4-Guanidino-n-butyl syringate(198年Leonurine, SCM)保护H9c2鼠心室细胞低氧诱导细胞凋亡,”心血管药理学杂志》上,54卷,不。5,437 - 444年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. k . p . Loh j .气b . k . h . Tan x h . Liu b·g·魏和y z朱,“Leonurine保护大脑中动脉闭塞的老鼠通过抗氧化作用和调节线粒体的功能,“中风第41卷。。11日,第2668 - 2661页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. 问:y, z . j . Wang d . m .太阳et al .,“小说leonurine在缺血性中风的治疗效果:新BBB完整性机制”氧化医学和细胞寿命ID 7150376条,卷。2017年,17页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. z y, x r·施朱k, t·t·吴和y z .朱”,scm - 198抑制小胶质overactivation和变弱β1-40-induced认知障碍大鼠通过物和NF-кB途径,”《神经炎症,11卷,不。1,p。147年,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. f·j·奥尔特加,j . Jolkkonen n . Mahy m·j·罗德里格斯,“格列本脲增强了神经,改善长期功能恢复瞬态局部脑缺血后,“脑血流量和新陈代谢杂志》上,33卷,不。3、356 - 364年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 周k .太阳,问:胡,c . m . et al .,“Cerebralcare颗粒^®中药复合制剂,提高脑microcirculatory障碍和在沙鼠缺血再灌注后海马CA1神经元损伤”民族药物学杂志,卷130,不。2、398 - 406年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. c·c·魏y y, x华et al .,“NAD补给与烟酰胺单核苷酸保护血脑屏障完整性和变弱延迟组织纤溶酶原激活物高诱导脑缺血后出血转化”英国药理学杂志》上的报告,卷174,不。21日,第3836 - 3823页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. f . Liu d·p·谢弗和l·d·麦卡洛,“TTC, fluoro-Jade B和NeuN染色证实梗塞的进化阶段大脑中动脉闭塞引起的,”神经科学杂志》上的方法,卷179,不。1,1 - 8,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. l·l·潘x h . Liu y .问:沈et al .,“抑制钠氢硫化物的NADPH氧化酶4个相关的信号变弱心肌纤维化反应,”国际心脏病学杂志,卷168,不。4、3770 - 3778年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. w .鑫,c .黄x Zhang et al .,“水杨酸甲酯lactoside抑制纤维母细胞的炎症反应类synoviocytes和关节破坏胶原诱导关节炎应承担的老鼠,”英国药理学杂志》上的报告,卷171,不。14日,第3538 - 3526页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. x j . Liu Jin, k . j . Liu和w·刘,“矩阵metalloproteinase-2-mediated occludin退化和caveolin-1-mediated claudin-5再分配导致血脑屏障损伤在缺血性中风早期阶段,“《神经科学杂志》上,32卷,不。9日,第3057 - 3044页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. y y . j . Wang Chen Yang et al .,“内皮祖细胞和神经祖细胞协同保护脑内皮细胞缺氧/ reoxygenation-induced通过激活PI3K / Akt通路损伤,”分子的大脑,9卷,不。1,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. g . Lv, d .太阳,j . Zhang et al .,“Lx2-32c,一种新的半合成紫杉烷,发挥抗肿瘤活性对前列腺癌细胞_in vitro_和_in vivo_,”Pharmaceutica学报B,7卷,不。1,52-58,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. l . x Liu, x,锣,y z .朱,“Leonurine预防肿瘤坏死因子-α人类脐静脉内皮细胞,介导炎症”动脉粥样硬化,卷222,不。1,34-42,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. g·杜·h·朱,p . Yu et al .,“smnd - 309促进血管生成在人类脐静脉内皮细胞通过激活红细胞生成素受体/ STAT3 / VEGF通路,”欧洲药理学杂志,卷700,不。1 - 3、173 - 180年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. y, e . y .埃斯特拉达j·f·汤普森,w . Liu和g·a·罗森博格“矩阵metalloproteinase-mediated破坏大脑血管是逆转的紧密连接蛋白合成基质金属蛋白酶抑制剂在大鼠局灶性缺血,”脑血流量和新陈代谢杂志》上,27卷,不。4、697 - 709年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. 松本,m . Murozono m .金泽t .奈良,t .小泽和y .渡边,“药物不良反应和环孢霉素作为急性缺血性中风的神经保护药物,”急性药物和手术,5卷,不。3、213 - 221年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. l . l . x h . Liu, p . f . Chen和y z朱,“Leonurine改善ischemia-induced心肌损伤通过抗氧化活动,“植物学期刊,17卷,不。10日,753 - 759年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. j .气、z . y .香港h .鑫和y z朱,“神经保护效应leonurine缺血/ reperfusion-induced线粒体功能紊乱在老鼠大脑皮层,“生物与制药公告,33卷,不。12日,第1964 - 1958页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. 周g, t·杨,j . et al .,“围岩破坏机理和裂缝演化规则支支柱复苏,”矿物质,7卷,不。6,96年,页2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. 林w·h . Chen, y . Zhang et al .,“il - 10促进神经突产物在培养皮层神经元和突触形成oxygen-glucose不足通过JAK1 / STAT3通路后,“科学报告》第六卷,没有。1,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. y Sehara, k . Sawicka j.y.黄,a . Latuszek-Barrantes a . m . Etgen和r . s .祖金评述“生存素是一个转录目标STAT3雌二醇在全球缺血神经保护至关重要,”《神经科学杂志》上,33卷,不。30日,第12374 - 12364页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2019 Qiu-Yan Zhang et al。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。