槲皮素的固体分散显示增强Nrf2激活和对氧化损伤保护作用干年龄相关性黄斑变性的小鼠模型

文摘

年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年人失明的主要原因。氧化应激是AMD的病理学的主要因素。我们之前评估的影响磷脂的槲皮素(Q-PC)在ARPE-19细胞氧化损伤,但潜在的机制尚未完全了解。,固体分散quercetin-PC (Q-SD)准备的溶解度是235.54μ在水和2.3×10 g / mL⁴μ在氯仿g / mL,明显高于槲皮素(QT)和Q-PC。Q-SD也表现出相当高的溶解率比QT和Q-PC。此外,Q-SD Cmax 4.143μg / mL, AUC为12.015μg·h /毫升的老鼠,比QT和Q-PC更好的生物利用度。然后,干AMD小鼠模型(Nrf2野生型(WT)和Nrf2淘汰赛(KO))建立了评估Q-SD体内的影响。Q-SD更有说服力地减少视网膜色素上皮沉积物和布鲁赫膜厚度比QT和Q-PC在200毫克/公斤Nrf2 WT老鼠和没有工作Nrf2 KO小鼠在同一剂量。此外,Q-SD显著降低ROS和MDA含量和SOD恢复,氧化酶,和猫的血清和视网膜组织活动Nrf2 WT老鼠,但不是Nrf2 KO小鼠。此外,Q-SD更有说服力地增加Nrf2 mRNA表达和刺激其核易位的视网膜组织Nrf2 WT老鼠。Q-SD HO-1 Nrf2目标基因的表达明显增加,HQO-1,视网膜组织的GCL Nrf2 WT老鼠,Nrf2 KO小鼠。,Q-SD QT相比改善了物理化学和药代动力学性质和Q-PC表现出更多的对视网膜体内氧化损伤的保护作用。这些影响与激活有关Nrf2信号和upregulation抗氧化酶。

1。介绍

年龄相关性黄斑变性(AMD)是老年人致盲的重要不可逆转的世界各地。这种疾病通常可以分为两类,即干AMD和湿性AMD。前者的特点是脉络膜毛细血管萎缩,脉络膜小疣,和视网膜色素上皮(RPE)萎缩,和地理萎缩黄斑区常发生在其先进的阶段,导致视力减退甚至湿性AMD。湿性AMD主要是脉络膜新生血管(CNV)、最终导致视网膜渗出和出血和严重的视力障碍(1,2]。最近,已经取得了许多进步在湿性AMD的管理由于抗vegf(血管内皮生长因子)的应用代理在临床实践3,4]。然而,干AMD病理学的基本机制基本上仍未知,因此,没有有效的治疗选择干AMD。

大量的研究强调了氧化应激的重要作用的病理干AMD (5]。氧化应激反映了不平衡的系统性体现活性氧(ROS)和生物系统的能力容易解毒活性中间体或修复产生的损伤(6]。长期曝光可以刺激lipofuscin-mediated黄斑氧化应激并产生大量超氧化物阴离子,单线态氧和过氧化氢,导致RPE细胞损伤和加重干AMD的发病机制7]。核因子红细胞两个相关因子2 (Nrf2)是一个基本的亮氨酸拉链蛋白质调节抗氧化蛋白的表达,防止氧化损伤引发的损伤和炎症,因此作为氧化还原系统的关键调节器在哺乳动物细胞(8]。在正常或无应力的条件下,Nrf2由一群蛋白质在细胞质中,很快地把它降低。在氧化应激,然而,Nrf2不是退化,而是前往细胞核,结合抗氧化反应元素(战神)抗氧化基因及其蛋白质的转录9]。激活Nrf2可以诱导的表达很多antioxidases和二期代谢酶、血红素oxygenase-1 (HO-1),醌oxidoreductase-1 (NQO-1) glutathione-S-transferase,谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(氧化酶)10]。这些酶能迅速清除ROS和保护身体免受伤害造成的活性物质或有毒物质。此外,他们还可以调节细胞增殖和死亡,提高清除活性氧的能力,从而保持细胞内的氧化还原平衡,减少氧化损伤。

槲皮素(QT)是一种自然产生的类黄酮化合物。增加调查已经表明,QT氧化剂,ROS-scavenging、抗炎和抗肿瘤效果11]。然而,QT的缺点是水和脂肪溶解性差、生物利用度低(12]。我们先前的研究显示,磷脂复合物的槲皮素(Q-PC)水溶性增加三倍和734倍增加脂肪溶解,表现出更强的保护作用对氧化损伤比QT ARPE-19细胞,增加细胞活力,减少细胞凋亡(13]。此外,Q-PC还发现对肝脏氧化损伤具有较强的保护作用比槲皮素在大鼠(14]。尽管磷脂形成复杂的溶解度显著增加QT,磷脂的疏水性复杂导致QT分散性差(15]。因此,磷脂复合物增加生物利用度有限。研究表明,制备的固体分散可以显著增加药物的溶解度和溶解速率,可进一步提高药物的生物利用度16,17]。在当前的研究中,我们成功地准备的固体分散槲皮素磷脂复合物(Q-SD),老鼠决定其生物利用度,评价其对视网膜损伤保护作用引起的氧化应激在Nrf2野生型和Nrf2基因敲除小鼠。

2。材料和方法

2.1。化学物质、试剂和抗体

槲皮素是来自σ化学(圣路易斯,密苏里州,美国)。试剂级大豆卵磷脂( %)是购自上海Guyan工业有限公司有限公司(上海,中国)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP K30)从J&K购买化工有限公司(上海,中国)。对苯二酚是来自阿尔法蛇丘(希舍姆,兰开夏郡,英国)。主要针对Nrf2抗体用于免疫印迹分析,HO-1, NQO-1, GCL, GAPDH,核纤层蛋白B,二级抗体山羊Anti-Rabbit免疫球蛋白/合都来自Abcam(英国剑桥)。

2.2。做坏事的Q-SD

我们使用了溶剂法Q-SD做准备。短暂、槲皮素和大豆卵磷脂(质量比1:1)溶解在乙醇体积足够的搅拌1 h。进行减压蒸馏除去乙醇。12 h后真空干燥,得到的沉淀物被磨100目筛,筛分,收益率Q-PC存储在干燥器为后续实验。接下来,准备Q-PC和PVP K30的质量比1:3是溶解在乙醇绝对足够的体积完全混合。这个比例是由正交测试通过初步实验。混合物在真空蒸发后50°C, Q-SD获得实验。

然后我们决定Q-SD的标准曲线。色谱条件是水域600 C_{经历了18个}柱,甲醇0.4% H₃阿宝₄解决方案( 50:50)为流动相,370 nm波长,1.0 mL / min流速,30°C柱温度和20μL样本大小。控制解决方案是按照以下程序准备的。QT 10毫克的溶解在乙醇和成团的50毫升容量瓶,从而QT控制溶液的浓度200 mg / L。无水乙醇被用于稀释控制解决方案产生的一系列解决方案10、20、40、60、80和100 mg / L。每个解决方案的20μL是注入高效液相色谱仪(HPLC,水域600年,美国)的测量峰面积。浓度的QT ([C])是明显的横纵坐标和峰面积(A)的纵向协调标准曲线方程 ( ),线性范围μ克/毫升。

2.3。Q-SD溶解度测定

QT, Q-PC Q-SD(包含20毫克纯槲皮素)都是精确称重和添加到锥形瓶100毫升,然后20毫升蒸馏水/氯仿是补充道。解决方案被孵化25°C 6 h恒温振荡器。0.45每个样本5毫升的过滤μ米微孔膜。10的连续的滤液μ我受到了高效液相色谱分析。控制解决方案的10μL 40 mg / L是自发通过高效液相色谱分析。三种样品的平衡溶解度在水和氯仿测量,分别基于峰面积。

2.4。决心Q-SD的溶解速度

QT, Q-PC质量比为1:1,和Q-SD质量比为1:1:3(所有包含20毫克纯槲皮素)均匀地分散在200毫升蒸馏水37°C和离心机在100 r / min。每个样品2毫升当时收集点10,20、30、40、50、60分钟,受到过滤。1毫升的连续的滤液是成团的10毫升容量瓶蒸馏水。高效液相色谱分析,并通过引入质量浓度计算峰面积入标准曲线方程计算累积溶解比例紧随其后。

2.5。Q-SD血清浓度测定

十八岁的雄性sd大鼠中获得南京大学模式动物研究中心(南京、中国)被随机分为三组,即QT治疗组,Q-PC治疗组和Q-SD治疗组( )。在三组老鼠都是胃内的管理与相应的药物含有纯QT 100毫克/公斤。收集血液样本轨道的时间点为0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,4,8 h在每个老鼠。添加肝素之后,血样离心机在3000 r / min 15分钟,和收集上层的考试。接下来,每个0.2毫升样本添加到一个10毫升离心管和孵化0.2毫升25%盐酸水浴在80°C的1 h。乙酸乙酯1毫升被添加到每个样本随后涡在3000 r / min 3分钟和离心10分钟。上层有机相收集添加1毫升乙酸乙酯,并重复上述过程。两个上层有机相结合,进行氮气干燥在50°C水浴溶解200紧随其后μL在12000 r / min甲醇和离心10分钟。分析了上层的HPLC测定药物浓度。

2.6。动物实验过程

八十四名女性C57BL / 6小鼠(6个月大,体重的男性g, Nrf2野生基因型)是购自南京大学模式动物研究中心(中国南京)。36 Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2 KO)(背景C57BL / 6)请彭博士提供的曹(江苏省中医药研究院、南京、中国),和鼠标应变来自约翰霍普金斯大学医学院(美国)。所有老鼠都维持在12 h光/暗周期控制温度(25°C)与自由获取食物和自来水。Nrf2野生型(Nrf2 WT)小鼠分为7组,即衰老对照组,模型对照组,QT组(200毫克/公斤),Q-PC组(200毫克/公斤),和Q-SD组(50,100,和200毫克/公斤)。Nrf2 KO小鼠分为3组,即衰老对照组,模型对照组,Q-SD组(200毫克/公斤)。这些剂量的内容被定义为纯QT的磷脂复杂或固体分散和测定初步实验。

动物治疗根据以下程序:(1)老化控制老鼠的Nrf2 WT Nrf2 KO,他们喂1 - 9个月期间正常饮食。(2)为模型控制老鼠的Nrf2 WT Nrf2 KO,他们在1 - 3个月美联储与正常饮食,高脂肪饮食,收到的摄入苯二酚溶解在饮用水(0.8%)个月4 - 6,,胃内的管理CMC-Na悬挂期间每天个月7 - 9日的0.5%。(3)治疗的小鼠Nrf2 WT Nrf2 KO,美联储在1 - 3个月正常饮食,高脂肪饮食,收到的摄入苯二酚溶解在饮用水(0.8%)个月4 - 6,,胃内的管理与相应的药物(CMC-Na悬浮在0.5%)期间每天个月7 - 9日。所有实验程序批准的机构和当地动物保健和使用委员会和所有的动物收到人道关怀根据美国国立卫生研究院(美国)的指导方针。

2.7。透射电子显微镜法

眼球的每组三只老鼠被立即隔离和固定在4%多聚甲醛了20分钟。角膜、晶状体和玻璃体被移除的眼组织。壁组织( 毫米)从视神经盘的双边区域切除和glutaral /锇酸固定,涂上环氧树脂和分段。后双染色法与醋酸双氧铀及柠檬酸铅,用透射电子显微镜检查的部分(Tecnai G2精神生物双;范、Hillsboro或美国),和图片。下的半定量的评价沉积物的宽度RPE和布鲁赫膜的厚度是决定根据Espinosa-Heidmann报道的方法等。18]。

2.8。测量ROS、MDA和抗氧化酶

血液收集的轨道腔三老鼠的每组,血清是孤立的。同时,眼球是提取和视网膜孤立,和组织匀浆通过离心准备在4°C, 3000 r / min 10分钟。ROS水平的血清测定使用芬顿的反应和格里斯试剂显色方法,和ROS水平在视网膜组织使用DCFH-DA方法决定的。血清和视网膜组织的MDA水平测定采用硫代巴比土酸法。此外,活动的SOD、氧化酶和猫在血清和视网膜组织中使用相应的酶联免疫吸附试验测定波长的包450,412,和405海里。上面的包都是购自南京建成生物工程研究所(中国南京)和实验根据提供的指令进行生产。

2.9。实时聚合酶链反应

总RNA分离三个老鼠的视网膜和脉络膜的每组使用试剂盒试剂(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)协议后,由制造商提供。逆转录进行了使用热科学所提供的工具根据指令费舍尔(美国)。磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为不变量控制。褶皱的变化相关靶基因的mRNA水平GAPDH计算。实验进行了一式三份。基因的引物(GenScript,南京,中国)如下:Nrf2: 5(向前) - - - - - -AGTGACTCGGAAATGGATGAG-3 ,(反向)5 - - - - - -TGTGCTGGCTGTGCGTTAGG-3 ;HO-1(向前)5 - - - - - -GCTGGTGATGGCTGCCTTGT-3 ,(反向)5 - - - - - -ACTGGGTGCTGCTTGTTGCG-3 ;HQO-1(向前)5 - - - - - -ATGTATGACAATGGACCCTTCC-3 ,(反向)5 - - - - - -TCCCTTGCAGAGTGTCATGG-3 ;GCL(向前)5 - - - - - -GAAGTGGATGTGGACACTAGATG-3 ,(反向)5 - - - - - -TTGTAGTCAGGATGGTCTGCGATAA-3 ;和GAPDH(向前)5 - - - - - -ATGACATCAAGACGGTGGTG-3 ,(反向)5 - - - - - -CATACCAGGTATGAGCTTG-3 。

2.10。免疫印迹分析

蛋白质提取三个老鼠的视网膜和脉络膜的每组使用radio-immunoprecipitation分析缓冲区包含150毫米氯化钠,50毫米三,0.1%钠十二烷基硫酸盐,1%诺乃清洁剂p 40,和0.5%脱氧胆酸盐补充了蛋白酶抑制剂phenylmethylsulfonyl氟化物。检查Nrf2表达式,核蛋白质和细胞质蛋白质分离使用Bioepitope核和胞质提取工具包(Bioworld技术,圣路易斯公园,锰、美国)根据协议。蛋白质(50μg /)被SDS-polyacrylamide凝胶分离,转移到PVDF膜(美国微孔,伯灵顿,MA),阻止Tris-buffered盐水中5%脱脂牛奶含有0.1%渐变20。目标蛋白质检测到相应的主要抗体,随后通过辣根peroxidase-conjugated二级抗体。蛋白质的乐队是可视化使用化学发光试剂(美国微孔,伯灵顿,MA)。等效加载被确认使用抗体GAPDH总蛋白和核纤层蛋白B核蛋白质。代表墨迹来自三个独立的实验。靶蛋白的水平乐队是densitometrically 4.4.1使用数量决定的。乐队的密度的变化表示为褶皱变化比控制在归一化后的污点GAPDH或核纤层蛋白B。

2.11。统计分析

数据了 ,使用GraphPad棱镜5软件和结果进行了分析。由学生的差异显著性 - - - - - -测试比较两组和单向方差分析与事后Dunnett对比多个组的测试。的值 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。Q-SD已经比QT和Q-PC更好的物理化学和药代动力学性质

我们最初的几个关键特征Q-SD的物理化学性质。结果表明,平衡溶解度的Q-SD水和氯仿是明显高于QT和Q-PC(表1)。溶解率的测定表明,Q-SD累积溶解率要明显高于QT和Q-PC在每个时间点(图1(一))。接下来,我们决定一些重要的药代动力学参数Q-SD老鼠和获得的血清浓度时间曲线(图1 (b))。的最大Q-SD血清浓度显著增加到4.143μ从1.517 g / mLμQT或2.523 g / mLμQ-PC g / mL。此外,Q-SD曲线下的面积显著增加到12.015μ从5.461 g·h /毫升μg·h /毫升的QT和8.074μg·h /毫升Q-SD。这些结果共同表明Q-SD最好比QT和Q-PC物理化学和药代动力学性质。

3.2。Q-SD更强有力地提高视网膜病变Nrf2 WT干AMD小鼠模型

我们建立了疾病模型在两种Nrf2 WT, Nrf2 KO小鼠评估药物的影响,它反映了人类干AMD的典型病理变化和调查人员已广泛应用18,19]。使用透射电子显微镜组织病理学检查显示,有少发现沉积物和相对正常的布鲁赫膜(BrM)厚度Nrf2 WT衰老对照组的小鼠,明显的沉积物,并增厚BrM Nrf2 KO小鼠;大规模连续平沉积物和增厚BrM观察Nrf2 WT小鼠模型的对照组,但在Nrf2 KO小鼠(图更严重2(一个))。Q-SD 200毫克/公斤相比明显降低RPE沉积物模型控制Nrf2 WT老鼠,不是Nrf2 KO小鼠(图2(一个))。一致,沉积物严重程度的评分证明Q-SD 200毫克/公斤相比显著降低存款严重程度评分QT和Nrf2 Q-PC组在同一剂量WT Q-SD的老鼠,比在100毫克/公斤(图2 (b))。此外,BrM厚度显著降低在200毫克/公斤Q-SD Nrf2 WT老鼠,不是在Nrf2 KO小鼠和强于Q-SD在100毫克/公斤(图2 (c))。总的来说,这些数据表明Q-SD更有说服力地改善视网膜病变Nrf2 WT,干AMD Nrf2 KO小鼠模型。

3.3。Q-SD发挥更强的抗氧化效果Nrf2 WT干AMD小鼠模型

我们推测氧化还原系统的监管可能参与Q-SD因此随后检查了ROS的影响,MDA,和几个老鼠体内的抗氧化酶。我们发现的ROS、MDA水平血清和视网膜组织显著调节Nrf2 WT, Nrf2 KO小鼠模型的对照组,但在Nrf2 KO小鼠更明显。Q-SD 200毫克/公斤显著降低ROS、MDA水平,Nrf2 KO小鼠。Q-SD 200毫克/公斤对MDA水平产生最强的影响比在100毫克/公斤Q-SD Nrf2 WT老鼠(数字3(一个)和3 (b))。此外,考试的三个关键抗氧化酶SOD,氧化酶,猫和显示他们的活动在血清和视网膜组织的模型组明显降低Nrf2 WT, Nrf2 KO小鼠更引人注目。治疗Q-SD 200毫克/公斤显著增加他们的活动在血清和视网膜组织Nrf2 WT老鼠,Nrf2 KO小鼠。Q-PC在200毫克/公斤,Q-SD 100毫克/公斤也增加了他们的活动在Nrf2 WT老鼠;正如所料,Q-SD 200毫克/公斤取得最显著的影响(数据3 (c)- - - - - -3 (e))。综上所述,这些研究结果表明Q-SD施加更强的抗氧化效果的Nrf2 WT干AMD小鼠模型。

3.4。激活Nrf2与Q-SD对视网膜损伤的保护作用的模型老鼠干AMD

我们进一步探讨底层机制Q-SD关注Nrf2信号通路的影响。我们观察到,Nrf2 mRNA在视网膜和脉络膜组织显著增加Nrf2 WT Nrf2 KO小鼠;Nrf2信使rna是显著增加Nrf2 WT小鼠模型组和Nrf2 KO小鼠几乎检测不到。Q-SD 200毫克/公斤显著增加Nrf2 mRNA水平较模型组Nrf2 WT老鼠,不是Nrf2 KO小鼠(图4(一))(Nrf2 KO小鼠数据不是图中给出)。此外,核Nrf2丰富的模型组显著增加Nrf2 WT老鼠,和Q-SD 200毫克/公斤显著刺激核易位Nrf2相比,模型组(图4 (b))。然而,Nrf2细胞质丰富的模型组和治疗组Q-SD在Nrf2 WT小鼠没有明显改变(图4 (b))。Nrf2蛋白表达在细胞核和细胞质Nrf2 KO小鼠(图中检测不到4 (b))。此外,我们研究的主要目标基因的表达Nrf2,严格参与抗氧化系统。实时PCR分析表明,转录水平的HO-1, NQO-1, GCL显著调节Nrf2 WT小鼠模型组,Q-SD 100毫克/公斤和200毫克/公斤mRNA水平较模型组明显增加。模型组Nrf2 KO小鼠,HO-1的mRNA表达,NQO-1, GCL相比没有明显增强的衰老对照组(图5)。与此同时,在模型组Nrf2 WT老鼠,HO-1的蛋白表达,NQO-1, GCL是显著增加老化控制相比,和Q-SD 100毫克/公斤和200毫克/公斤显著调节HO-1的蛋白表达,NQO-1, GCL。Nrf2 KO小鼠,蛋白质丰富的HO-1 NQO-1, GCL是显著低于Nrf2 WT老鼠,和没有显著区别Nrf2 KO小鼠衰老的控制和模型控制(图6)。总之,这些数据显示激活的Nrf2与Q-SD对视网膜损伤的保护作用的模型老鼠干AMD。

4所示。讨论

目前,没有前途的治疗选择干AMD在临床实践中。越来越多的证据表明,代理能够保护视网膜免受氧化应激损伤可以干AMD公司管理的一个重要方向。早期临床研究称为(火鸟)年龄相关性眼病研究表明,药物使用的抗氧化剂,如β胡萝卜素、维生素C、维生素E、锌、铜,可以防止AMD进展和风险减少25%先进AMD进展和19%的风险中度视力丧失在5年内(20.]。枸杞子是一个著名的滋补药常用治疗体内眼疾的中医系统,已被证实具有抗氧化和抗衰老的效果(21]。我们以前的研究表明,枸杞子乙醇提取有效减少RPE沉积物和布鲁赫膜厚度与实验AMD小鼠,叶黄素和玉米黄质和它的主要组件可以保护对氢peroxide-induced ARPE-19细胞氧化损伤(19]。

它已被公认,许多黄酮类化合物有自由自由基清除和抗氧化功能,包括柚苷配基、槲皮素和芹菜甙元。然而,黄酮类化合物有可怜的水的缺点,fat-solubility低吸收和生物利用度(22]。医药研究表明,磷脂复合物的形成可以明显提高药物的理化性质,提高他们的体内吸收和疗效23]。我们以前报道,Q-PC溶解度较高,尤其是fat-solubility比QT, Q-PC从而表现出更强的保护作用对oxidative-induced赔偿ARPE-19细胞(13]。然而,我们意识到Q-PC分散性差,由于磷脂复合物的疏水性。相反,进一步制备磷脂复合物为固体分散可以提高药物的溶解度和溶解速率,从而提高生物利用度。例如,欧米伽- 3 phospholipid-based固体分散的非诺贝特有效增加口服药物在老鼠曝光,表明该配方应该承诺改善非诺贝特的口服生物利用度24]。许多研究表明,亲水药物赋形剂添加PVP能转换一种无定形形式而不是结晶状态,大大提高药物的溶解度和溶解24,25]。因此,我们使用了PVP K30 Q-SD在当下研究做准备。一致,我们目前的数据表明,形成固体分散极大增加了水——和Q-PC fat-solubility和溶解率。更重要的是,Q-SD有相当高的血药浓度比Q-PC老鼠,确认Q-SD有较高的生物利用度。鉴于黄酮类药物有相似的老鼠和老鼠药代动力学行为,因此我们建立了一个干AMD小鼠动物模型研究QT的潜在影响,Q-PC, Q-SD视网膜损伤引起的氧化应激。我们观察到,QT和Q-PC没有减少RPE沉积物和BrM厚度、Q-SD显著并在同一剂量,有剂量依赖性反应Q-SD的影响。这些数据显然支持声称形成固体分散大大增强QT在视网膜氧化损伤的保护作用对小鼠由于增加生物利用度。

Nrf2信号特征一直是一个关键的抗氧化机制在哺乳动物细胞。最近的证据表明,Nrf2基因的干扰增加的脆弱性外层视网膜退化。Nrf2-deficient老鼠发达眼部病变类似人类AMD的基本特征与氧化损伤和炎症有关,这表明Nrf2信号及其下游靶基因在AMD的发病机制中发挥了重要作用[26]。监管Nrf2信号可能是一个潜在的战略干预干AMD。符合这个认识,我们以前的研究表明,芹黄素展出ARPE-19细胞对氧化损伤的保护作用,是依赖激活Nrf2信号(27]。此外,Hanneken和同事报道,QT可能诱发Nrf2及相关二期代谢酶,从而保护ARPE-19细胞免受peroxide-induced氢损伤(28]。一致的结果也夺回我们的先前的研究。我们目前的研究使用了氧化损伤模型小鼠的验证在活的有机体内效果。然而,由于Nrf2 KO小鼠数量有限,我们只评估Q-SD在这些动物的200毫克/公斤,因为我们推断Q-SD剂量可以产生显著的效果。我们观察到mRNA表达增加,核蛋白质丰富的Nrf2 Nrf2 WT模型组小鼠,在Nrf2 KO小鼠极低。HO-1转录、NQO-1和GCL是增加Nrf2 WT老鼠,不是Nrf2 KO小鼠;,这三个分子的蛋白表达没有明显增加的Nrf2 KO小鼠模型组。这些结果也表明,氧化应激刺激Nrf2核易位和启动二期代谢酶的转录。

我们进一步发现治疗Q-SD 100毫克/公斤和200毫克/公斤造成的转录和表达显著增加Nrf2和二期代谢酶与模型组相比,而在同一剂量QT没有显示显著的效果和Q-PC 200毫克/公斤只显示某些对GCL的信使rna和蛋白质表达的影响和蛋白质表达的HO-1 Nrf2 WT老鼠。这些数据表明,QT发挥其保护作用通过激活Nrf2信号也证实,形成固体分散大大增加了QT的生物利用度在活的有机体内。此外,QT发现调节抗氧化酶SOD的表达,通过Nrf2氧化酶,猫HepG2细胞通路(29日]。我们当前的研究表明类似的结果显示,QT的不同剂型可以恢复血清SOD和组织活动,氧化酶,和猫和减少ROS和MDA水平不同区段Nrf2 WT干AMD小鼠模型,还有effect-concentration反应Q-SD效果。在这些条件下,Q-SD高剂量产生最强的效果。这些观察结果进一步证实,Q-SD又有很高的生物利用度。目前的研究验证在活的有机体内保护作用的QT在小鼠视网膜由氧化应激造成的损害。接下来,我们将检查在活的有机体内的药代动力学性质Q-PC Q-SD进一步验证和发展。

总之,制备的固体分散显著提高QT的溶解度和溶解速率,从而增加了其生物活性。Q-SD表现出更强的保护作用在视网膜干AMD小鼠氧化损伤模型,并与激活Nrf2信号和相关的抗氧化酶。我们的研究强调,Q-SD AMD可能是一种安全有效的治疗选择。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

确认

支持的工作是江苏省重要的研究和发展计划(批准号BE2018757)。

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