文摘

自然种在白藜芦醇,是由一些植物,尤其是葡萄藤蔓。其强大的力量对抗肥胖、代谢紊乱、血管疾病、炎症、和各种癌症已经被报道。需要消耗大量的葡萄酒或葡萄获得所需的白藜芦醇的生物活性。纯白藜芦醇在浓度低至10μM诱发正常细胞的细胞毒性。为了克服这些限制,我们准备好的转基因resveratrol-enriched大米(RR)。我们之前报道的强大的抗衰老的潜力对紫外线B / RR活性氧种群在正常的人类皮肤成纤维细胞毒性(NHDF)。随着老龄化的特点是神经炎症和神经退行性变的,我们进一步评估对LPS-induced RR神经炎症的作用。RR抑制一氧化氮产量和炎症蛋白质如伊诺和cox - 2的表达。RR显著调节增殖蛋白激酶信号,激活蛋白AP-1信号和核因子(NF -κBκB)介导的炎症蛋白通过转录抑制NF -κB易位,IkB磷酸化,促炎细胞因子白介素il - 6等作品,il - 1β肿瘤坏死因子-α(TNF -α)和前列腺素E2 (PGE2)。这些发现表明强烈的RR antineuroinflammatory效果可以有利于aging-mediated神经退行性条件以及疾病引起的中枢神经系统神经炎症。

1。介绍

炎症的主要原因和加重因素是各种急性或慢性病理条件,包括光老化,糖尿病和癌症1,2]。同样,存在二次脑损伤的关键中介在大多数神经系统疾病,如阿尔茨海默病(AD)朊病毒疾病,帕金森病(PD),多发性硬化症(MS)、缺血性中风,实验性自身免疫性脑脊髓炎(运算单元)和神经性疼痛3- - - - - -5]。神经炎症是引起aging-dependent条件和aging-independent病理活动,分享类似炎症级联(6- - - - - -8]。小神经胶质细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞是大脑的基本细胞。小胶质细胞和星形胶质细胞胶质细胞,防止脑损伤的作用要保持体内平衡和修复大脑损伤。在aging-dependent条件和aging-independent障碍,例如广告,PD,和中风、神经炎症可以由慢性小胶质激活。活化的小胶质细胞所需基本免疫防御的大脑;然而,慢性小胶质激活是有毒的中枢神经系统(CNS) [9]。转换正常的小胶质细胞有毒小胶质M1表型负责启动炎症在中枢神经系统的生产活性氧(ROS),一氧化氮(NO),蛋白酶,花生四烯酸,兴奋性氨基酸,细胞因子(10]。这些神经毒性物质的破坏负责架构和功能的神经元,突触变性,神经损失,最终神经退化11]。ROS的产生和其他炎症介质和氧化应激密切相关的增殖蛋白激酶(MAPK)信号,以及核转录因子(NF -κBκB)和激活蛋白-(美联社)1-mediated转录(12- - - - - -16]。因此,天然化合物或保健品可能调节这些步骤来控制小胶质激活将会很有前途的候选人为抑制神经炎症和神经退行性条件。虽然进步了治疗这种神经炎症条件下,缺乏有效的治疗策略来治疗这些疾病的条件。在过去的几十年里,已经被越来越多的兴趣替代药品,特别是植物化学物质,作为神经系统疾病的治疗药物(包括激活microglia-mediated神经炎症17- - - - - -20.]。

白藜芦醇已经研究了几十年的多功能效力与许多人类疾病(21),包括神经炎症条件(22,23]。白藜芦醇广泛存在于葡萄品种,浆果,花生,大豆,和红酒24];然而,我们必须消耗大量的这些食物得到所需的足够的白藜芦醇的生物活性(25]。此外,白藜芦醇对正常细胞的细胞毒性性质遮蔽其广泛的潜力与人类疾病(26]。为了克服这个限制,实现治疗潜力,resveratrol-enriched大米(RR)是利用基因工程技术开发(27]。

在这项研究中,我们开发了RR通过基因工程技术,如前所述[27]。大米是主要食品部分在亚洲人群中,因此,水稻消费比其他食物成分高。白藜芦醇生物合成基因转录成正常王东进水稻生产RR (NR)。我们之前报道,RR有更好的力量抑制紫外线B (UVB) / ROS-induced衰老通过维持基质金属蛋白酶(可以)/胶原我(PIP)平衡抑制炎症和细胞凋亡,没有任何细胞毒性(28]。

RR可以使用安全的情况下更有效地白藜芦醇显示疗效治疗或控制神经炎症条件。因此,在这项研究中,我们比较了NR的功效,RR,白藜芦醇在活化的小胶质细胞的细胞毒性和抗炎的潜力,阐明RR的antineuroinflammatory潜力的潜在可能的机制在脂多糖(LPS)刺激BV2鼠小胶质细胞。显然我们希望我们的研究揭示了添加剂的作用RR NR和白藜芦醇可以最好的替代治疗神经紊乱引起的神经炎症像广告一样,PD, MS病灶。

2。材料和方法

2.1。材料

杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM),胎牛血清(的边后卫)和penicillin-streptomycin从英杰公司购买(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)。有限合伙人,NG-mono-methyl-L-arginine (L-NMMA)和trans-resveratrol买来Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。正常大米(NR) (栽培稻var.)和resveratrol-enriched粳稻(RR)是由农村发展提供管理(RDA)在我们之前提到的韩国纸(28]。酶联免疫吸附试验(ELISA)发展为肿瘤坏死因子-α(TNF -套件α)、白细胞介素- 6 (il - 6)、前列腺素E2 (PGE2)和il - 1β从研发购买系统(明尼阿波利斯,美国)。初级和二级抗体诱导一氧化氮合酶(间接宾语),环氧合酶(cox - 2),细胞外signal-regulated激酶(ERK) C-Jun n端激酶(物),p38, NF -κB Histone-3β肌动蛋白,IkB, pIkB C-Fos、p-C-Fos C-Jun, p-C-Jun,微管蛋白从细胞购买信号(美国贝弗利,MA)。所有其他化学药品和试剂购自σ化学(圣路易斯,密苏里州)。

2.2。NR和RR提取

NR和RR收到RDA提取甲醇(甲醇)。米粒(10克)孵化了100毫升的甲醇为60分钟。在此期间,提取混合物置于超声波水浴声波降解法。60分钟后孵化与声波降解法提取的混合物,混合物是过滤(HYUNAI微N0.20滤纸、韩国),然后使用一个旋转蒸发器蒸发在40°C的甲醇。蒸发提取收益率进一步完整的提取冻干冻干。最后的产量提取粉末是存储和用于实验。股票的解决方案(100毫克/毫升)准备在二甲亚砜(DMSO)。这只股票的解决方案是稀释在DMEM和用于细胞治疗实验。

2.3。细胞培养

BV-2鼠小胶质细胞被用来研究NR的抗炎作用,RR和白藜芦醇。的BV-2小胶质细胞系得到礼物样本e . Choi博士,高丽大学(首尔,韩国)。BV2细胞在DMEM补充10% heat-inactivated的边后卫,青霉素(1×10⁵U / L),链霉素(100 mg / L)湿润孵化器有限公司为5%₂在37°C。

2.4。细胞治疗和细胞生存能力分析

NR的影响,RR,白藜芦醇BV2细胞的细胞毒性测定使用3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyl-tetrazolium溴化(MTT)测定。96 -孔板培养的细胞治疗与不同浓度的样品(NR、RR和白藜芦醇)或没有有限合伙人。在预处理条件、播种盘的样本进行预处理,有限合伙人(100 ng / mL)添加样品处理后30分钟。LPS激活的细胞培养24小时后,亚硝酸盐试验和细胞生存能力分析。孵化24 h后,媒体被移除和MTT的解决方案是添加到细胞最终浓度为0.5毫克/毫升。额外的1 h孵化后,媒体被小心地删除和200年μL的DMSO溶液添加到每个。光密度(OD)测定在盘子里读者在570海里。细胞生存能力评估通过观察能力的可行的细胞减少肝癌和黄色紫色甲瓒。结果表示为LPS-treated集团(LPS-treated细胞)的百分比。

2.5。一氧化氮测定

NR的抑制作用,RR,白藜芦醇在没有确定使用合成BV-2小胶质细胞激活100 ng / mL有限合伙人。BV2细胞被播种密度的4×10⁴细胞/在96孔板治疗前24小时。种子细胞治疗与NR、RR,第二天白藜芦醇。有限合伙人的细胞被激活后30分钟(9),进一步培养24小时。24小时孵化后,亚硝酸盐水平测定在文化媒体使用格里斯试剂N-1-napthylethylenediamine盐酸盐(1%磺胺和0.1% 5%磷酸)。条件培养基(50μL)被转移到一个新的96孔板,与同等容积的格里斯试剂混合。这种混合了粉红色,因为任何的存在。比色变化是量化的测量解决方案的OD在96 -孔板使用微型板块读者在540海里。NG-mono-methyl-L-arginine (L-NMMA),一个著名的NOS抑制剂(10),作为一个积极的控制。纳米₂作为的标准来比较条件培养液中的亚硝酸盐。急性小胶质激活是由有限合伙人治疗6 h,和慢性小胶质激活是由有限合伙人治疗24小时。

2.6。测量PGE2, TNF -α,il - 1β,il - 6生产

BV2小胶质细胞处理样品(NR、RR和R)与LPS激活测量TNF -α,il - 1β神经炎症条件下,PGE2和il - 6水平。BV2细胞被播种密度为1.5×10⁶细胞在DMEM /好和孵化24 h。种子细胞治疗与样本,其次是治疗小胶质激活,有限合伙人和孵化24 h。孵化24小时后,条件培养基从治疗板收集并用于测量PGE2的水平,TNF -α,il - 1β,il - 6。收集到的条件培养基可以存储在−20°C到以后使用。PGE2使用竞争性酶免疫分析法测定工具包(开曼化学,安阿伯市,美国)。肿瘤坏死因子-α,il - 1β,和il - 6水平测量使用ELISA开发工具包(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。

2.7。NF -κB化验

BV2细胞被播种密度为1.5×10⁶细胞/在6-well板与NR和治疗,RR,有限合伙人和白藜芦醇,紧随其后的是治疗小胶质激活和NF-kB易位和转录。细胞处理样品和有限合伙人孵化1 h,然后收获。核和胞质提取收获小胶质细胞准备使用核/胞质提取工具包(活动主题,卡尔斯巴德,CA)根据制造商的协议。NF -的蛋白质含量κB histone-3 IkB, p-IkB被免疫印迹分析评估。核仁的和胞质NF -的表达κB用histone-3和测量β肌动蛋白作为加载控制,分别。IkB的表达和观察p-IkB胞质分数。缺席的情况下β肌动蛋白表达在核分数表明核和胞质分数在分馏的明确分离,没有任何污染。微乐队进行了分析使用ImageMaster™2 d精英软件(版本3.1,Amersham法玛西亚生物技术,白金汉郡,英国)。

2.8。免疫印迹分析

BV-2细胞被播种密度的6×10⁵细胞/在6-well板和处理样品。有限合伙人是孵化所需的时间基于蛋白质激活模式根据目标蛋白质在细胞中的位置。细胞收获了冰冷的磷酸盐(PBS)和在7500转离心5分钟。PBS是移除,细胞颗粒细胞溶解了裂解缓冲(50毫米Tris-HCl (pH值8.0),0.1%十二烷基硫酸钠(SDS), 150毫米氯化钠,NP-40 1%, 0.02%的叠氮化钠,0.5%钠脱氧胆酸盐,100μg / mL phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF),和1 g / mL approtinin] [29日]。这混合物在冰孵化2 h。细胞溶解产物/蛋白质提取后获得了超速离心法的细胞裂解缓冲混合物在12000 rpm 30分钟在4°C。总蛋白(30μg)从每组10% SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离(页面),转移到硝化纤维膜,和孵化主要微管蛋白抗体,进气阀打开,cox - 2,兵,活跃,物,pJNK, p38 pP38, NF -κB histone-3β肌动蛋白,IkB, pIkB C-Fos、p-C-Fos C-Jun p-C-Jun,α微管蛋白。细胞膜与辣根peroxidase-conjugated二级抗体,孵化和蛋白质乐队可视化使用ECL免疫印迹检测试剂(Amersham法玛西亚生物技术)。微乐队进行了分析使用ImageMaster™2 d精英软件(版本3.1,Amersham法玛西亚生物技术)。

2.9。统计分析

使用统计分析的结果评估系统(La Jolla GraphPad棱镜5日,CA,美国)。结果的平均值±标准平均误差(SEM),和所有的结果意味着至少有三个独立的实验。统计比较不同治疗组是由单向方差分析(方差分析),其次是Newman-Keuls多重比较检验。的值 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。NR、RR和白藜芦醇显著抑制亚硝酸盐生产LPS-Activated小胶质细胞

生产是一个重要的生物标志物对于几乎所有类型的炎症,尤其是LPS-induced神经炎症。我们评估了亚硝酸盐氧化水平的NR, RR和白藜芦醇L-NMMA积极控制对LPS-activated BV2小胶质没有生产。NR和RR显示最高的力量抑制亚硝酸盐生产。同时,白藜芦醇显示优秀的效力在高浓度(100μg / mL)。然而,NR和RR显示力量比白藜芦醇在1到10的浓度μ克/毫升。虽然RR提取较小数量的纯比白藜芦醇白藜芦醇,它有更高的效能较低的集成电路₅₀值,这表明RR不会引起细胞毒性。RR(100的效果μg / mL)亚硝酸盐产量显著的NR仅表明RR具有更好的效力比NR。NR和RR治疗防止LPS-induced毒性,特别是100集中μg / mL,通过增加可行的细胞的数量。白藜芦醇的治疗,只有10μg / mL防止有限合伙人通过增加可行的细胞毒性,但不是100μ克/毫升。NR和RR治疗浓度为1μg / mL和10μg / mL证明比L-NMMA抑制亚硝酸盐生产效力更高,表明NR和RR更好的选择比L-NMMA亚硝酸盐生产抑制如(图所示1)。

3.2。RR治疗抑制伊诺和cox - 2的表达在急性和慢性LPS激活

伊诺和cox - 2蛋白前体的生产和炎症级联,我们进一步评估NR和RR的作用在调节伊诺和cox - 2的表达LPS-activated BV2小胶质细胞对急性以及慢性激活条件。有限合伙人治疗BV2细胞显著增加伊诺和cox - 2的表达。我们进行了急性小胶质激活,细胞的孵化和复合有限合伙人6 h,决定改变伊诺和cox - 2的表达LPS-activated BV2小胶质细胞。我们还执行孵化24 h,它被定义为慢性激活小胶质和评估伊诺和cox - 2的表达。我们发现NR和白藜芦醇显示高效能抑制cox - 2的表达在急性和慢性激活条件。与NR和R相比,RR证明贫穷但急性激活显著功效,但没有明显的活动在慢性激活。相比之下,RR表现出最高的力量抑制伊诺表达式在急性和慢性激活条件。NR和白藜芦醇没有证明显著抑制伊诺慢性激活条件,同时显著药效观察急性激活条件如(图所示2)。RR伊诺的抑制效果的表达式是NR相比显著。这一结果表明,添加剂NR和R对RR的影响比单独在NR和R的抑制伊诺表达式。我们假设RR的强有力的进气阀打开/不抑制能力可能会负责其抗炎作用。

3.3。Bioactive-Phytochemicals从NR,即α生育酚和γ生育酚、抑制亚硝酸盐生产和伊诺和cox - 2的表达LPS-Activated小胶质细胞

我们预期的安全性和兼容性正常大米和RR的白藜芦醇可以显示类似的力量一起对抗神经炎症。然而,有趣的是,正常大米独自还显示antineuroinflammatory效应对LPS-treated BV2细胞。进一步证实这种效果,找到负责任的NR活性的植物化学成分,我们选择α生育酚和γ生育酚来评估其作用对神经炎症LPS-treated BV2细胞。我们观察到治疗的α生育酚和γ生育酚显著地抑制亚硝酸盐的产生LPS-activated小胶质细胞。当我们把样品1、10、100和1000μ克/毫升浓度,效力的样本显示浓度的方式,没有表现出任何细胞毒性细胞可行性分析就是明证。虽然γ生育酚抑制LPS-induced巨噬细胞细胞毒性以前报道(30.),在这里,我们找到了类似的力量α生育酚和γ生育酚抑制炎症介质对LPS-activated小胶质细胞,如图3。

3.4。NR、RR和R可以调节MAPK信号在急性LPS-Activated BV2小胶质细胞

MAPKs激活酪氨酸的磷酸化和苏氨酸残基,进而导致信号级联上调炎症介质的产生以及促炎细胞因子活化的小胶质细胞或其他炎症条件下。因此,我们评估的角色NR和RR改变激活/ MAPK的磷酸化蛋白质(p38、物和ERK)。LPS-activated小胶质细胞显示显著增加物的磷酸化,兵,和P38可能负责的炎症介质诱导转录。治疗LPS-activated BV2细胞与NR和RR磷酸化物和P38的表达显著降低。ERK的磷酸化,只有RR显示疗效高,虽然NR没有证明显著的抑制作用。RR的效果是显著的治疗浓度抑制ERK的磷酸化与NR相比。这些数据表明,添加剂影响NR和白藜芦醇的RR比仅在NR和R。白藜芦醇显示略有不同模式在MAPK调制显示增加的物磷酸化虽然并不重要。此外,它没有任何的变化显著抑制p38磷酸化ERK的磷酸化而它。NR和RR表现出高效能抑制P38的磷酸化ERK和物如(图所示4)。在所有,RR显示最高效力磷酸化的抑制MAPK的专门为100μ克/毫升。这些发现表明,RR治疗抑制pJNK,活跃,pP38是非及其效力高于NR和白藜芦醇本身。

3.5。NR、RR和R调节AP-1信号LPS-Activated BV2小胶质细胞

接下来,我们评估AP-1蛋白质的表达。Toxicant-induced激活MAPK负责激活AP-1 (C-Fos和C-Jun)在炎症反应和其他条件(31日]。在这项研究中,我们观察到显著抑制活跃,pJNK, pP38 RR治疗进一步证实了的表达下调表达p-C-Fos和p-C-Jun NF -类似的待遇条件κb . NR和RR治疗浓度的100μg / mL抑制p-C-Fos NR和RR的表达显著抑制p-C-Jun的表达在治疗浓度(10 - 100μg / mL)。RR的效果是显著的治疗浓度相比,NR的NR仅表明添加剂效果和白藜芦醇RR比NR和R。P38、物和ERK激活C-Jun需要激活。RR治疗表达下调p-C-Jun表达式,表明其强大的抗炎作用与活化的小胶质细胞,如图5。白藜芦醇没有显著改变物和ERK的磷酸化,这个结果进一步支持了不变的磷酸化后C-Fos和C-Jun白藜芦醇治疗。这些数据支持这一事实C-Jun和C-Fos磷酸化与物和ERK的磷酸化。

3.6。NR、RR和白藜芦醇调节NF -κB易位LPS-Activated BV2小胶质细胞

转录因子发挥重要作用在增加炎症蛋白和促炎细胞因子的生产。NF -κB和AP-1扮演关键角色作为转录因子在炎症条件下。在这项研究中,我们评估了NR, RR,白藜芦醇对激活microglia-induced NF -κB易位和I-kB磷酸化。有限合伙人治疗BV2细胞显著增加NF -的易位κB从胞质核,以及I-kB的磷酸化。这些事件在一起可以增加转录。然而,NR、RR和白藜芦醇治疗逆转这些事件。LPS-activated BV2细胞治疗胞质NF - RR显示最高的表达式κ核仁的NF - B和最低的表达式κ显著增加胞质NF - b RR治疗κB和减少核一个显著的NR-treated组,如图6,这意味着更好的效力RR NR的孤独。易位的抑制是进一步支持的显著抑制磷酸化I-kB如(图所示6)。在所有这些情况下,RR证明效力在治疗浓度最高,表明其通过抑制NF -抗炎效应κ易位和NF - BκB / I-kB-mediated炎性蛋白的转录。

3.7。NR和RR可以调节MAPK信号在慢性LPS-Activated BV2小胶质细胞

我们评估的角色NR、RR和白藜芦醇在改变激活/ MAPK的磷酸化蛋白质(p38、物和ERK)长期(24小时)有限合伙人在BV2细胞激活条件。抑制pJNK NR和RR更重要比急性慢性激活激活。没有样品抑制ERK的磷酸化在慢性激活条件,而NR治疗显著增加活跃表达可能表明其抗击慢性激活小胶质细胞的细胞生存能力。RR治疗还显示在活跃表达略有增加,但它并没有显著与LPS-only-treated相比。P38磷酸化,尽管所有的样品处理抑制pP38表达式,只有RR治疗显示显著的抑制与LPS-only-treated组相比,如(图所示7)。

3.8。NR、RR和白藜芦醇治疗抑制促炎细胞因子的生产

RR-mediated抑制NF -κ易位和NF - BκB / I-kB转录透露的原因明显抑制亚硝酸盐和伊诺/ cox - 2的表达水平。这是进一步证实了通过测量促炎细胞因子水平LPS-activated BV2小胶质细胞。NR、RR和白藜芦醇证明几乎相似的力量抑制PGE2分泌,而白藜芦醇抑制肿瘤坏死因子-的最高效力α和il - 6生产如(图所示8)。RR的效果的抑制炎性细胞因子相比有显著提高NR如图8,这意味着更好的效力RR NR的孤独。白藜芦醇,纯化合物,和提取的NR和RR证明几乎均等的抑制促炎细胞因子的生产能力,它可以建议RR足够抑制能力的生产不仅炎症介质,也促炎细胞因子。

4所示。讨论

在这项研究中,我们首次报道RR的antineuroinflammatory性质。我们比较了细胞毒性的RR与NR和白藜芦醇LPS-stimulated BV2小胶质细胞。此外,我们决定RR的影响,NR,白藜芦醇存在的各种参数,包括COX2、进气阀打开,一氧化氮,MAPK信号活化的小胶质细胞在急性和慢性疾病,AP-1和NF -κB信号,在活化的小胶质细胞和炎性介质的生产。我们的研究结果显示,抗炎功效RR显示等于或高于白藜芦醇,没有任何细胞毒性。

神经炎症和大脑老化导致大脑功能不断退化(32]。大脑衰老过程具体目标、心血管系统和代谢系统,内在或外在老化(33]。衰老是关键中介以及神经炎症的神经退行性疾病如AD和PD (34]。RR治疗显著减毒UVB-induced皮肤老化,代谢紊乱,色素沉着过度在体外和在活的有机体内在我们之前的研究中,我们进一步设计了一个实验来确定他们对神经炎症的影响,这是一个几乎所有的神经障碍的主要原因28]。有效抑制炎症的RR在UVB治疗/ ROS-induced真皮成纤维细胞在我们以前的报告作为一个提示实验(28]。作为神经炎症引起的应对小胶质细胞可以在广告加重神经退化,PD,女士,和缺血性中风,35),控制小胶质激活可能是一个潜在的战略管理这些疾病。急性小胶质细胞的激活在缺血性中风,而慢性激活小胶质和神经炎症中观察到广告,PD,女士36),这表明抑制小胶质激活和炎症级联是治疗这样的中枢神经系统疾病的关键。多功能植物化学的白藜芦醇,证实有效预防糖尿病,心血管疾病、肥胖、哮喘通过改变肠道微生物组(37]。人类肠道微生物群发挥重要作用在治疗各种中枢神经系统疾病,包括老年痴呆的神经炎症调节(38]。也可能RR-mediated antineuroinflammatory效应可能是通过改变肠道微生物组。白藜芦醇在高浓度可能对肠道微生物有毒,但RR是完全安全的正常细胞如我们前面所示的研究。

没有生产应对小胶质细胞是中枢神经系统的神经炎症的关键生物标志物紊乱。在初步研究中,治疗NR, RR,白藜芦醇显示,显著抑制亚硝酸盐生产LPS-activated BV2小胶质细胞,无细胞毒性。因此,我们决定执行一个机械的研究。抑制亚硝酸盐生产集成电路₅₀价值较低的亚硝酸盐释放RR-treated组比NR -白藜芦醇和L-NMMA-treated组。伊诺是必要的增加表达增加产量和活化的小胶质细胞释放的,而COX2的表达需要的感应通过增加产生PGE2花生四烯酸途径。在不同的食用植物,植物化学物质如萝卜硫素、白藜芦醇,姜黄素通过Sirt1 antineuroinflammatory作用,NRF2激活或抑制NF -κB易位和炎性蛋白的转录17,39]。同样,NR还具有抗氧化、抗炎植物化学物质如酚酸、黄酮、花青素,原花青素,生育酚,γ谷维素,植酸(40]。NR包含α生育酚,γ生育酚和tocotrienol活性成分(40,41)可能对LPS抑制细胞毒性(42]。在特定的,γ生育酚及其代谢物抑制环氧酶活动随后PGE2的抑制巨噬细胞和上皮细胞30.]。这一发现也支持我们的NR包含数据处理α生育酚和γ生育酚显著抑制cox - 2的表达以及产生PGE2在急性和慢性小胶质激活。此外,我们评估的影响α生育酚和γ生育酚,发现治疗α生育酚和γ生育酚不仅抑制亚硝酸盐生产还减毒伊诺和cox - 2的表达没有细胞毒性1毫克/毫升的浓度。这些数据表明,植物化学物质等α生育酚和γ生育酚在NR负责抗炎的潜力。此外,他们的存在及其有效性/安全性白藜芦醇对存在毒性使RR成为一个更好的候选人。NR和植物化学物质抑制cox - 2的是更加突出和cox - 2参与疼痛的感应43,44),NR的适用性可能高度承诺在神经性疼痛模型。RR表现出抑制cox - 2表达的次要角色;然而,它的力量在急性和慢性神经炎症条件下抑制伊诺高于白藜芦醇和NR。这些结果共同支持,更高效能的RR抑制伊诺表达负责其抑制亚硝酸盐生产更高的效力。化合物或样品抑制炎症级联,他们必须控制炎症信号通路如MAPK信号。这反过来有助于调节NF -κB易位,其次是I-kB退化和AP-1信号,这些事件促进炎性蛋白的转录和促炎细胞因子(9,15]。治疗与RR显著抑制活化的小胶质细胞MAPK蛋白质的表达就是明证减毒的磷酸化物,ERK和P38急性激活条件下。白藜芦醇治疗显著增加物的表达,可能是因为其细胞毒性性质的正常细胞,而RR下调物的表达。这些结果共同象征RR的优越性在白藜芦醇调节MAPK信号。这种效应进一步证实慢性激活条件。有限合伙人接触小胶质细胞24 h导致慢性激活和诱发通过连续的级联神经炎症炎症信号和炎性蛋白的生产45,46]。RR治疗显著地抑制物和p38的激活,但它没有任何明显影响ERK的磷酸化。MAPK信号发生在很短的时间内toll样受体4 (TLR4)激活;然而,在慢性激活小胶质物和p38磷酸化发挥必要作用在炎症级联的维护和感应19,47,48]。在我们的研究中,RR治疗抑制物和p38磷酸化的效力高于白藜芦醇治疗。值得注意的是,NR抑制pJNK表达式的效力在急性和慢性激活条件下高于RR和白藜芦醇,这就可以解释pJNK表达的增加白藜芦醇和显著的抑制pJNK表达式的RR。ERK激活有双重角色:短期激活发生在炎症和长期激活发生在细胞生存(49]。活跃表达的增加/微不足道的抑制NR表明其作用对LPS-induced毒性增加小胶质细胞的生存。干预措施,可以控制物和ERK激活将改变AP-1信号的表达式(50,51]。白藜芦醇pJNK和p-C-Jun表达的表达增加,而RR治疗抑制了pJNK的磷酸化和p-C-Jun。NR和RR抑制p-C-Jun p-C-Fos表达式,但是白藜芦醇没有显示类似的效果。此外,我们评估的作用对NF - RRκB易位和I-kB退化。我们观察到显著大量的NF -κB在胞质和较低的金额在细胞核RR-treated组,表明RR抑制NF -的易位κB细胞溶质的细胞核。此外,显著低水平的磷酸化I-kB细胞溶质中证实,RR抑制I-kB在活化的小胶质细胞的退化,暗示强烈antineuroinflammatory RR与活化的小胶质细胞的影响。尽管白藜芦醇是一个纯化合物,我们这里使用比较的有效性RR(提取resveratrol-enriched大米)相比,NR(提取正常大米)和白藜芦醇。NR、RR和R治疗显示不同的效力在不同浓度的抑制炎症参数。最高浓度的白藜芦醇。,100年μg / mL,显示最高的力量,但它也具有细胞毒性。我们发现RR的潜在影响,似乎在NR和白藜芦醇的协同效应。NR同样也有不错的力量抑制炎症瀑布。因此,我们推测,植物化学物质的存在α生育酚和γ生育酚在NR可以提高RR的活动可以帮助保护细胞对抗resveratrol-mediated细胞死亡或形态变化。我们评估的潜在antineuroinflammatory效应α生育酚和γ生育酚在大米和发现治疗α生育酚和γ不仅生育酚抑制亚硝酸盐生产而且伊诺和cox - 2的表达没有细胞毒性1毫克/毫升的浓度。这些数据支持,活跃的植物化学物质包括α生育酚和γ生育酚在NR负责抗炎的潜在LPS-treated BV2细胞。同时,我们发现RR-treated组明显显示的RR效力高于resveratrol-treated组实验组。因此,本研究最显著的成就是白藜芦醇的改善功效后制备制药作物(水稻)含有白藜芦醇,显示对小胶质细胞的毒性可以忽略不计。

在这项研究中,我们不仅发现了RR的安全有效的作用但也确定了antineuroinflammatory潜在对抗衰老和神经炎症NR本身就是因为存在活跃的植物化学物质等α生育酚和γ在水稻生育酚。抗炎效应通过RR治疗似乎是介导的抑制亚硝酸盐生产、MAPK磷酸化,NF -κB介导促炎细胞因子的生产,和表达的炎症蛋白如图9作为一个总结图。因此,RR的消费作为一种功能性食品不仅作为营养食品部分也作为药用特别美味的食物各种人类疾病的预防和治疗。进一步的研究应该进行评估的antineuroinflammatory潜力RR在各种神经炎症疾病通过在体外和在活的有机体内研究。

数据可用性

所有的数据都包含在手稿。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由韩国国家研究基金会的资助(NRF)由韩国政府(MSIP)(没有。nrf - 2017 r1a4a 1015594),农业科技发展合作研究项目(项目号01118803)的农村发展管理和下一代BioGreen 21项目(项目号PJ01369101), RDA,韩国。