文摘

N-Hydroxycinnamoylphenalkylamides (36 h)表现出抗氧化作用和antityrosinase能力。研究了化合物的抗氧化性能,使用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazul——(DPPH)清除测试,一个铁ion-reducing抗氧化能力分析(收紧)评估,和金属络合能力测定。结果表明:36 h在DPPH-scavenging抗氧化能力和ferric-reducing能力考试但螯合能力试验没有表现出抗氧化能力。36 h还测量了酪氨酸酶抑制活性应用平台不同的物种,包括体外蘑菇,老鼠B16F10黑素瘤和人体黑素细胞细胞。体外蘑菇酪氨酸酶的抑制,36 h抑制黑素原生成过程。假设36 h封锁了酪氨酸酶活性位点作为蘑菇酪氨酸酶的竞争性抑制剂,因此不减少人类正常黑素细胞细胞的可行性。定量实时聚合酶链反应(存在)和免疫印迹发现36 h下调melanogenesis-related RNA和蛋白质,包括色素生产(TRP-1 MITF,酪氨酸酶,和TRP-2),黑素体成熟(Rab27a),和黑素体运输(Myo5a MLPH和Mreg)。总的来说,36 h显示biofunctions抗氧化和抑制黑色素,所以有可能作为食品添加剂或美白剂中的应用。

1。介绍

人类的皮肤是人体最大的器官;维持身体机能,防止损失的水、电解质和生物分子。皮肤由表皮、真皮和真皮。表皮是进一步分为五层:分离角质层、透明层、颗粒层、棘层、基底层(1]。表皮的基底层,它是连接到真皮,是包含的基底层黑色素细胞。黑色素细胞树突转移黑色素角质细胞,它确定的表面皮肤颜色由于这些角化细胞中的黑色素含量(2]。

自由基是由一个原子或一组有一个或多个未配对电子的原子。它们参与生理、代谢和免疫反应和信号传输功能。尽管他们是正常的健康的生化过程的一部分身体,他们还负责损害。活性氧(ROS)和各种刺激的一代超氧化物阴离子自由基和氢过氧化物。这可能会导致混淆消息,破坏细胞膜,破坏离子细胞通讯由于脂质过氧化作用。这个影响细胞内的分子特性SH组和蛋白质和DNA(代理3]。ROS的数量由自卫系统控制antioxidant-mediated正常状态,如抗氧化剂。这些包括维生素C、维生素E或谷胱甘肽(4),清除自由基,防止细胞损伤。然而,他们扰乱细胞氧化态的平衡导致过多的活性氧。之前的研究表明,许多退化性疾病,衰老和癌症等引起的自由基或活性氧物种。抗氧化性能表明,黑素细胞内脂质膜过氧化作用的增加细胞内谷胱甘肽的含量,这可能褪色(占5,6]。

暗淡的皮肤,眼睛,头发是由于黑色素的合成,这是一个有颜色的生物聚合物合成的黑色素细胞的黑素体。黑色素是一种保护机制对紫外线的影响(7]。先天的基因会影响皮肤的颜色,但紫外线辐射感应,炎症,和激素的变化导致黑色素细胞合成更多的黑色素。然而,黑色素的生产过剩会引起色素紊乱,如黑皮病、老年雀斑,雀斑和色素沉着过度8]。这些通常是使用化妆品或药物成分含有美白成分。即使这些元素从自然资源,只有一些代理用于化妆品或药物因为安全问题或美白效果的问题。杀菌作用涉及到的绑定α促黑激素肾上腺皮质,从而增加环腺苷酸(营)和激活microphthalmia-associated转录因子(MITF) [9]。MITF上调melanogenic的表达酶,酪氨酸酶,这是一个重要的功能的羟基化酪氨酸,苯丙氨酸(左旋多巴)和左旋多巴氧化dopaquinone (10]。医疗和美容治疗方法越来越多地使用酪氨酸酶抑制剂的活动。黑素原生成生产和黑素体从黑色素细胞角质化细胞的转移所必需的皮肤的颜色11]。黑素体是拴在外围的肌动蛋白细胞骨架的黑色素细胞通过三方形成的复杂Ras-related蛋白质Rab-27 (Rab27a) melanophilin (MLPH)和肌凝蛋白Va (Myo5a)。Rab27a是一种膜结合蛋白参与小GTPase-mediated蛋白质运输和信号转导。与Rab27a Melanophilin形成三元复杂GTP-bound网站Myo5a马达蛋白。可见的哺乳动物毛发和皮肤色素沉着是根据这个tri-protein复杂的范围产生色素的细胞器。如果有一个复杂的蛋白质缺乏,f -肌动蛋白和黑素体分解之间的连接(12]。

在积极治疗潜在的化合物,N-hydroxycinnamoylphenalkylamides (36 h)据报道有抑制作用的表达基质金属蛋白酶- 9 (MMP) THP-1,人类白血病单核细胞的细胞系,刺激肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)[7]。一项研究表明,诱导肿瘤坏死因子-α表达MMP-9蛋白质和mRNA水平是完全抑制浓度的方式(1 - 20μ米)。人们已经发现,36 h明显抑制核转录因子-κ光在B细胞(NF -多肽基因增强剂κNF - B)信号检测κ报告基因分析但没有影响(核转录因子的退化κ光多肽基因增强剂B细胞抑制剂α(我κBα)或NF -的易位κb .染色质免疫沉淀反应数据说明MMP-9和NF -之间的关系κB p65亚基(p65)基因启动子是完全否定的磷酸化36 h和p65没有影响。一般来说,以前的报告表明,36 h抑制NF -差别nuclear-targeted对这些MMP-9分泌κ在THP-1 B通路机制。36 h是一个模拟的咖啡酸苯乙基酯(角),这是一个已知的抑制癌症的转移和入侵14]。的抗氧化活动和免费自由基清除一些类似物研究了角,和这些研究的结果促使本研究确定36 h降低酪氨酸酶活性和表达下调melanogenesis-related RNA和蛋白质。本研究发现,36 h是一个潜在的和积极的抗氧化和美白剂。

2。材料和方法

2.1。试剂和材料

二甲亚砜(DMSO)和酪氨酸取自Sigma-Aldrich化学有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)和胎牛血清(的边后卫)从Gibco-BRL购买(盖瑟斯堡,医学博士,美国)。所有试剂和替代缓冲区都获得最高商业纯度。

2.2。化学合成的36 h

36 h Yueh-Hsiung郭教授提供的是曾经随后从amide-binding耦合方法获得的化合物。Benzotriazol-1-yloxytris磷酯基方法(BOP)结合R2-NH2的混合物,R1-COOH,三乙胺(Et3N)二甲基甲酰胺(DMF)。反应的解决方案是混合在0°C为30分钟,然后在25°C混合2小时。当化学液体蒸发,H之间的残渣被划分₂O和乙酸乙酯(AcOEt)。残留物被过滤和净化用柱层析洗脱溶液(AcOEt-CH₂Cl₂1:1v/v)在硅胶(70 - 230和230 - 400目,7734年默克公司)。产品AcOEt重结晶获得最理想的晶体。一个Finnigan TSQ-46C质谱仪是用于电子轰击质谱(eim)。1 h和13 c NMR光谱得到使用力量皇冠500光谱仪。那些时光Magna-IR一Nicolet 550分光光度计记录了红外光谱。36 h最初在DMSO溶液溶解在以下研究。对于每一个化验,DMSO常数和最终浓度为0.2% (v/v)使用。这种化合物没有被称为抗氧化剂或皮肤增白剂(7,13),结构如图1。样品溶解在DMSO和各种浓度与最后一个准备DMSO浓度小于0.5%。

2.3。测定的DPPH自由基清除能力

DPPH是2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl时便成了暗紫色的自由基。当抗氧化剂进行激进的DPPH˙,它减少了DPPH˙DPPH稳定,有淡黄色的颜色(14]。不同剂量的36 h (2μL在总量)在98年合并μL (DPPH (60μ米)混合物,和板检查使用517纳米酶联免疫吸附试验(ELISA)光谱读者。L-ascorbic酸作为阳性对照。剩余DPPH的比率是映射在样本以确定抗氧化剂的数量,降低了前DPPH浓度。清除属性(%)决定

2.4。还原能力的测定

铁ion-reducing抗氧化能力分析(收紧)常用于评估的抗氧化功能饮料,食物,水果,和营养补充剂,包括类黄酮和多酚。不同剂量的36 h引入一个67毫米混合磷酸盐缓冲剂(0.085毫升,pH值6.8)和20%铁氰化钾(K₃铁(CN)₆,2.5μL)。解决反应20分钟50°C,然后三氯乙酸(10%,0.16毫升)被添加到解决方案,离心机之前在3000年10分钟(14]。解决上层清液(75μL) FeCl加上2%₃(25μL),然后一个读者ELISA光谱测量结果吸光度在700海里,96孔板。叔丁基羟基茴香醚(BHA)采用积极的控制。还原资格越大,吸光度越强。

2.5。化验金属络合的活动

叶绿素亚铁ion-chelating潜在的测量使用Chen等人的技术。14]。总之,特定剂量的样品溶解在DMSO溶液,并引入FeCl的混合物₂h·4₂O(2.0毫米,0.05毫升)。添加ferrozine(5毫米,0.2毫升)启动解决方案时的反应是有力的震动,然后离开10分钟25°C。当反应达到平衡时,溶液的吸光度值测定使用一个空白的车辆在560海里。EDTA作为积极的控制。螯合活性的计算公式是相同的(1)。

2.6。测定蘑菇酪氨酸酶的活动

蘑菇酪氨酸酶活性抑制和细胞酪氨酸酶抑制spectrophotometrically决定使用前面的方法,与少量修改2]。曲酸是用作积极控制酪氨酸酶活性测定。第一材料溶解在水DMSO和培养酪氨酸(2.5毫克/毫升)和磷酸盐缓冲剂(50毫米,pH值6.8)。DMSO使用的所有模型,这是无关紧要的酪氨酸酶活性在DMSO溶液构成<总量的0.5%。随后,25 U /毫升的蘑菇酪氨酸酶具有相同的缓冲随后补充说,解决方案是在37°C孵化了30分钟。ELISA光谱读者是用来进行化验的吸光度测量在475 nm,使用96孔酶标(分子器件、钙、美国)。

2.7。人类细胞黑素细胞(HMC)文化

主要从级联获得的人类新生儿包皮的表皮黑色素细胞生物制剂。这也适用于王等。2]。这是254年在培养基培养(m - 254 - 500;级联生物制剂,波特兰,或美国)与人类的黑素细胞增长和增强补充(hmg,猫。s - 002 - 5)。中254是一个基础培养基和一些不必要的和必要的维生素、有机化合物、氨基酸、无机盐和微量元素。人类的黑素细胞增长补充包括胎牛血清,牛胰岛素,牛脑垂体提取物、牛转铁蛋白,氢化可的松,基本成纤维细胞生长因子、佛波醇12-myristate 13-acetate,和肝素。所有的细胞都在37°C湿润孵化器孵化有限公司为5%₂的气氛。

2.8。测定细胞的可行性HMC

细胞生存能力是决定使用MTT试验(3]。当黄四唑结合线粒体脱氢酶(辅酶q)在活细胞,MTT裂开的四唑环和减少紫色甲瓒。细胞被播种密度9×10³在96孔板细胞/好。细胞培养了一天时,介质的改变,不同浓度的36 h被添加到最终介质体积为100μl .这些孵化后48小时,媒介与新鲜培养基(100代替μL),包括麻省理工(0.5毫克/毫升)。盘子被培养在孵化器37°C 2小时5%的股份有限公司₂。DMSO (100μL)被添加到每个紫甲瓒晶体溶解。确保菜肴实现最大的解散,菜是在黑暗中轻轻摇动和混合10分钟,以595海里。细胞生长进行了计算

2.9。从HMC酪氨酸酶活动的测量

来确定人体黑素细胞细胞酪氨酸酶活动(HMC) (5×10⁴细胞每),1000年他们在12-well定位板μL介质不同剂量的36 h和培养48小时(2]。PBS缓冲被用来洗处理细胞,然后这些细胞溶解Triton x - 100 / PBS为1%。酶提取当时从产生的细胞溶解产物收集并结合50μ2毫米的L酪氨酸。提取是培养3小时37°C在黑暗中。然后使用分光光度计来确定其吸光度490海里。

2.10。在HMC黑色素含量测定

与一些小修改,以前的技术也被用于实验(2]。细胞颗粒溶解在2.0 N氢氧化钠10% DMSO和1小时加热到90°C。悬浮液的分离,使离心10分钟在10000 。使用分光光度计,黑色素含量产生决心通过数据在一个吸光度475海里。

2.11。定量实时聚合酶链反应

的存在,一个20μL反应包含0.4毫升的混合两种反转录酶:10μL 2×QuantiTect SYBR绿色主混合(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)与热态启动Taq 0.8毫升的引物和0.5毫升(10 ng / mL)的模板。引物序列表中列出1。的StepOnePlus™系统是用于所有实时PCR检测。反应完成后通过执行RT反应在42°C 20分钟,然后激活由于“快速上手”项目Taq DNA聚合酶在95°C 5分钟。这是然后放大40或50周期在95°C为变性5秒,退火,收购60°C,持续5秒。最终在72°C细长的15秒。荧光也可以测量伸长后阶段,但对于这个实验,测量后退火阶段。96孔板,9μL的溶解产物添加到11μL反应的混合,由10.6μL MasterMix从Eurogentec qPCR核心装备SYBR绿色我(1.4μL MgCl 50毫米₂,2μL 10 x反应缓冲区,0.8μL 5毫米的核苷酸,0.6μ5.7 L SYBR绿色的我,μL nuclease-free水,和0.1μ0.1 L热金星Taq)μL一RNA, 0.1μL 10倍稀释核糖核酸酶抑制剂,和0.1μL牧师底漆(100μ米),以及一份FWD SG-PERT化验的ABI 7300 qPCR系统。中存在的反应,激活热金星Taq酶,40-cycle放大,退火和收购,变性在95°C, 72°C伸长ABI 7300仪器使用。准备试验,所有的试剂都维持在一个冷却块或冰。复制SG-PERT反应进行每个样品溶解产物。使用qPCR软件和仪器,ABI 7300手动阈值确定和LightCycler®480最大的二阶导数的方法,生成量化的循环(Cq)值。使用相同的软件为工具,融化的山峰也自动计算。

2.12。西方墨点法

总共1×10⁵细胞治疗与样本团体或空白的车辆控制了两天。细胞收获和细胞溶解裂解缓冲(50 mM Tris-HCl, pH值7.5,137毫米氯化钠,50 mM氟化钠、焦磷酸钠10毫米,20毫米β甘油磷酸酯1毫米phenylmethylsulfonyl氟1毫米EDTA, 10%甘油、1%诺乃清洁剂p 40, 2μ米亮抑酶肽、0.1毫米原钒酸钠和2μg /毫升抑肽酶)[14]。溶菌产物离心机在20000 g×30分钟,和上层清液中的蛋白质浓度的解决方案与bicinchoninic酸(BCA)测定蛋白质化验工具包(美国皮尔斯,罗克福德,IL)。等量的蛋白质是由钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)然后electrotransferred硝化纤维素膜(笼罩在生命科学,安阿伯市,美国)。1小时的膜被5%的脱脂牛奶PBS-T缓冲区(PBS含有0.1%渐变20)。转移膜小心地从湿平衡水舱和半干转移槽和放置在一个盒子里5%的脱脂牛奶1 x TBST室温1小时。然后轻轻洗1 x TBST去除痕迹的脱脂牛奶。膜被孵化与各自的主要抗体。在每种情况下,膜与辣根孵化peroxidase-conjugated antirabbit或鼠标抗体,然后处理发射极耦合逻辑检测试剂(PerkinElmer ECL1: ECL2 = 1: 1)。从生命科学一个小规模的化学发光成像系统是用于测量检测乐队(14]。

2.13。统计分析

每个浓度三个标准和所使用的样本。使用学生的t以及,结果在统计学上相比,使用的平均值表示平均值±标准差(SD)。

3所示。结果

3.1。免费DPPH自由基清除活性

ROS产生脂质过氧化物、DNA损伤、蛋白质表达、组织衰老和癌症创世纪时固有的自由基和抗氧化剂之间的平衡是打扰。自由基链式反应被中和电子捐赠或承兑汇票和螯合自由。减少氧化应激从内在和外在的方面是增加健康的一种方法。本研究检测了抗氧化性能,通过确定ferric-reducing权力,免费DPPH自由基清除能力,和金属络合能力。增加活性氧的生成和积累产生脂质氧化食品和化妆品和天然的抗氧化活性。特别是,免费自由基清除特性是至关重要的功能性营养添加剂和皮肤护理产品。

第一个氧化抑制试验是免费DPPH自由基清除测试。这是一个简单和经济的实验平台,中抗氧化剂阻止氧化产品。抗氧化剂改变的颜色稳定自由基DPPH diphenyl-picrylhydrazine试剂从紫色到淡黄色。确定36 h的抗氧化性质,100μM剂量应用于确定清除能力。表2显示,36 h表现出良好的自由基清除能力和进行清除DPPH自由基和维生素C的60%在同一浓度(100μ米)进行85.3%。

3.2。铁降低抗氧化能力

第二个氧化抑制试验是ferric-reducing功率测试,这是一种常见的和可靠的方法来测量铁(III)的合成铁氰化物复杂。功能剂降低了铁^{3 +}/铁氰化物复合物亚铁形式。这个组合有700海里的蓝色,因为K₄铁(CN)₆与铁发生反应^{3 +}形成铁(Fe (CN)₆]₃。在实验中,溶液的颜色由淡黄色改为不同深浅的蓝色和绿色,根据目标化合物的还原能力。表2提出了底部钻具组合在100年μ米的还原能力值0.95和36 h 100μ米的还原能力值0.85相比,底部钻具组合。因此,36 h被证明有很好的ferric-reducing抗氧化能力。

3.3。亚铁Ion-Chelating能力

亚铁离子的螯合活动36 h表所示2。EDTA (100μ米)作为一个积极的控制。菲^{2 +}定量和ferrozine形成复合物。试剂复合物的形成往往是中断,因为螯合剂,导致减少复杂的红色。36小时的用量10μ米菲没有显著影响^{2 +}清除能力,在100年的浓度μM,它抑制了43.2%。积极的控制、EDTA、ion-chelating容量在100约80%μM。

3.4。36 h对蘑菇酪氨酸酶活性的影响

许多报道中描述的抑制酪氨酸酶活性,其中大部分使用蘑菇酪氨酸酶的模型。优势被科学家、发达的简单程序,低成本、快速的色素沉淀的过程,作为哺乳动物相似的结构和功能特点,方便观察黑色素发展。36 h蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用进行了研究,和抑制能力与36 h的浓度正相关(图2(一个))。在十五分钟,发现36 h在不同浓度(1、5、10毫米)控制相比减少了OD值。酶活性减少约10%在1毫米,30%在5毫米,和40%在10毫米,而车辆控制(图2 (b))。酪氨酸酶活性之间的关系及其在36 h浓度进行了研究。不同浓度的抑制剂给一组线,所有经过原点。酪氨酸酶活性的抑制36 h对酶的数量没有影响,这说明36 h是一个可逆的抑制剂(图2 (c))。对酪氨酸酶的抑制类型36 h确认使用Lineweaver-Burk双重相反阴谋。1 /的情节v和1 / (年代)给一个家庭通过原点的直线,这提出了36 h是一个复杂的竞争。酶的动力学呈现在图2 (d)。

3.5。细胞生存能力的影响,细胞酪氨酸酶,黑色素含量在HMC 36 h

作为一个有效的美白复合,组件应该是无害的,没有不良的细胞毒性副作用。有一些著名的黑色素合成抑制剂,包括曲酸、熊果苷、PTU,或对苯二酚,正利用全球化妆品成分。我们还发现,这些melanogenic抑制剂可能会引起人体皮肤肿瘤发生学高浓度剂量或频繁使用2]。HMC在36 h培养48小时在不同浓度的1、5、10、25μM,细胞生存能力决心在图显示较低的细胞毒性3(一个)。当考虑代理治疗或美容使用的人类,我们发现人类皮肤细胞的异常细胞毒性影响是微不足道的。理解36 h在黑素原生成的抑制作用,我们在HMC评估细胞内酪氨酸酶活性。在HMC酪氨酸酶活动的结果表明,有一个明显的变化随着浓度的增加,而酪氨酸酶活性降低了低细胞毒性。治疗后,酪氨酸酶的活动减少到39±2.2%,25岁μ剂量依赖性的方式(图3 (b))。这些结果显示,36 h抑制细胞内酪氨酸酶活性。黑色素化验结果清楚地显示,36 h减少黑色素HMC在剂量依赖性的方式(图中的内容3 (c))。控制代表了黑色素含量的百分比。治疗后,黑色素含量77%,25岁μ在10米,84%μ在5米,88%μ在1 M, 90%μm .这些结果显示,36 h对黑色素的合成有明显的抑制作用在HMC 25μM。

3.6。黑色素Biosynthesis-Related信使rna和蛋白质在HMC受到36 h

黑色素生物合成发生在黑素体,初始底物是酪氨酸的氨基酸。酪氨酸是首先通过酪氨酸酶催化对左旋多巴,使用相同的酶,酪氨酸酶,多巴是dopaquinone催化。催化了Dopaquinone dopachrome tautomerase (tyrosinase-related protein-2, TRP-2), TRP-1,酪氨酸酶形成真黑素。在HMC, 36 h下调细胞melanogenesis-related rna和蛋白质作为显示在图4。

3.7。36 h在黑素体成熟的影响

黑色体是一种细胞器,依赖于黑色素细胞内黑色素的合成。黑素体的成熟越多,更多的黑色素形成。因此,黑素体成熟皮肤美白的机理是很重要的。Premelanosome 17 (Pmel17)是针对蛋白质前体的色素细胞器,黑素体,proteolytically处理几个小片段。其中的一些片段,组装成表和形式形成非病理性的淀粉有条纹的模式背后melanosomal超微结构。本研究表明,36 h下调Pmel17 RNA和蛋白表达在HMC(图5)。

3.8。36 h对黑素体运输的影响

Rab27a、MLPH Myo5a形成tri-protein复杂绑定在黑素细胞外围黑素体。黑素体的过程中运输、三元复杂的肌动蛋白细胞骨架之间的连接和黑素体。这些蛋白质的缺乏影响了交通,melanoregulin (Mreg)驱动器黑素体从黑色素细胞通过调节角质细胞脱落机制。本研究表明36 h减少黑素体运输影响这些相关的RNA和蛋白质(图6)。

4所示。讨论

这项研究表明,抗氧化剂抑制杀菌作用在两个方面。黑色素生物合成过程中(15),酪氨酸酶首先将氢氧化酪氨酸二羟基苯丙氨酸,然后氧化多巴dopaquinone (2]。黑色素进行清除自由基,抑制脂质过氧化,保护皮肤免受紫外线伤害,但也可以还原黑色素的抗氧化剂。因此,黑色素称为激进水槽(2,16,17]。缺乏黑色素减少了对皮肤的保护,所以ROS刺激黑素细胞产生更多的黑色素18]。因此,一个好的抗氧化剂可以降低酪氨酸酶活性和抑制黑色素的合成。36 h在免费DPPH自由基清除能力和抗氧化特性的生化ferric-reducing权力。

注入样品的蛋白质sds - page之前,我们都归一化蛋白质含量。蛋白质标准化是一个重要的过程应用于去除实验生物错误和人工(意想不到的可变性2]。基因编码的DNA转录成RNA (mRNA) pre-messenger RNA聚合酶,然后大多数生物开发使用各种转录后的修改形式生成matured-mRNA,这是作为模板申请通过核糖体蛋白质合成。转录单元是一个延伸DNA转录成RNA和成绩单信使RNA作为模板合成的蛋白质翻译(3,6]。在人类,信使rna在细胞细胞核转移在核膜到细胞质中,蛋白合成发生的位置。信使rna和蛋白质之间的关系是一个复杂的网络。NDA转录和翻译的规定可能不同的改变。在细胞中,蛋白酶降解成小的蛋白质的氨基酸或多肽的功能。由于细胞内分解,氨基酸可以回收再次对蛋白质合成。这种机制清洁异常或受损的蛋白质和那些不再需要防止不必要的蛋白质积累。虽然我们会考虑,蛋白质的数量减少的编码基因的转录减少时,还有其他蛋白质丰度的调节机制。例如,蛋白的半衰期可能增加由于减少的生物降解速率。另一种可能性是,信使rna更优先翻译过程中。 The human skin color is also affected by the melanosome regulative degradation autophagy in keratinocytes [19]。

当角质化细胞暴露在紫外线(20.),它们会释放出α促黑激素(α-MSH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和前列腺素E₂(铂族元素₂)[21]。这些信号分子的下游信号通路激活腺苷酸环化酶通过肾上腺皮质黑素细胞的细胞膜上受体(受体)诱导增强MITF杀菌作用,酪氨酸酶,TRP-1, TRP-2 [22),通过IP3 / DAG机制激活酪氨酸酶活性状态到活动形式。我们的工作表明,36 h改变MITFRNA表达,但有无关紧要的改变蛋白质的生产。酪氨酸酶影响黑色素生物合成和TRP-2 TRP-1 [23]。Dopachrome催化5,由TRP-2 6-dihydroxyindole-2carboxylic酸和5,转移到indole-5 6-dihydroxyindole-2carboxylic酸,通过TRP-1 6-quinone羧酸(24),然后合成为真黑素(16]。在蘑菇酪氨酸酶和细胞酪氨酸酶化验,36 h下调酪氨酸酶活性。TRP-2和TRP-1 RNA水平下降,但有微不足道的差异蛋白质的水平,与对照组相比。黑素体的成熟,Pmel17黑素体的前兆。是proteolyzed碎片形成的有条纹的图案melanosomal超微结构(25]。用免疫印迹,Pmel17 RNA和蛋白表达减少,而打断了黑素体的成熟。

人类皮肤黑色素是由melanin-containing黑素体的胞间运动四肢的HMC相邻的角化细胞树突。当它是由肌动蛋白丝,黑素体树突尾部移动,通过胞外分泌,运送到角质细胞(26]。越大的黑色素量转移到角质细胞,深色皮肤的颜色是(27]。微管的运动取决于dynein-dynactin电动机复杂。Mreg形式复杂与Rab-interacting溶酶体蛋白和p150 dynactin(粘)这是一个亚基(28]。Mreg调整脱落系统传输黑素体从HMC角质细胞。从HMC melanosome-rich包的脱落过程经历了角质细胞的吞噬作用。脱落不仅主要发生在树突四肢还围绕中心地区,在角化细胞粘附,收紧形成背后的包,和明显self-abscissions [29日]。肌动蛋白丝的运动需要Myo5a Rab27a, MLPH连接桥(30.]。36 h表达下调的蛋白表达Myo5a并可能防止皮肤颜色变暗。总的来说,数据显示,36 h是一种有效的美白剂,化妆品的应用程序(图的可能性7)。

的利益冲突

作者没有利益冲突有关这项研究的出版物。

作者的贡献

Li-Ching Lin Byeong黄,Yueh-Hsiung郭,以及Hui-Min王宁国的构思和设计实验;Li-Ching林、陈Chung-Yi Chia-Hung郭,Yun-Sheng林进行了实验和分析数据;Yueh-Hsiung郭贡献的试剂、材料和分析工具;Li-Ching林、陈Chung-Yi蒂娜kait王,王Hui-Min大卫写的论文。Li-Ching林和Chung-Yi陈了同样的工作。

确认

作者要感谢Pei-Lun廖实验的援助。这项工作是支持由科技部、台湾(大多数104 - 2622 - e - 037 - 001, most104 - 2622 - e - 037 - 003 - cc2 most104 - 2221 - e - 037 - 005 - my2和most104 - 2628 - e - 037 - 001 - my3)。作者也感谢项目中心的干细胞研究,高雄医学大学、高雄,台湾(KMU-TP104G00, KMU-TP104G01, KMU-TP104G02-05)。