文摘

早产的定义是交付在怀孕37周完成之前,这是新生儿发病率和死亡率的主要原因。氧化应激被认为是早产的发病机制的一个重要因素。我们进行了分析调查的安全管理相关药物Atosiban-a可逆的,竞争的催产素受体拮抗剂治疗早产及其对氧化应激水平的影响在48小时后孕妇的相关治疗。这项前瞻性研究是2016年3月和2017年8月之间进行的产科诊所波兰母亲的纪念医院研究所。总氧化剂状态(TOS)、总抗氧化状态(助教)和氧化应激指标(OSI)值以及3-nitrotyrosine羰基,硫醇基水平测量使用的ELISA检测血清和血浆56个孕妇前后48小时的连续Atosiban管理局。我们发现助教水平下降两倍48小时后药物管理局(0.936±0.360更易/ L和0.582±0.305更易/ L, )虽然TOS增加从18.217±16.093μ30.442±30.578 mol / Lμmol / L ( )。我们还发现显著增加OSI指数几乎三倍增加从0.022±0.022,0.075±0.085, 。此外,在统计上有显著差异的羰基化合物被发现的水平。它增加从65.358±31.332μ97.982±38.047 mol / Lμmol / L ( ),这表明增加血浆蛋白的氧化。此外,患者早产有更高水平的服务条款后48小时比第二组与药物管理局劳动后怀孕37周(42.803±34.683μmol / L和25.792±27.821μmol / L, )。结果清楚地表明,孕妇在相关治疗Atosiban增加氧化应激状态,发生早产可以关联到这一现象。这个试验是注册NCT03570294。

1。介绍

氧化应激被定义为一个不平衡的生产活性氧和抗氧化防御系统的能力。温和的氧化应激水平被发现在怀孕正常(1- - - - - -3]。然而,当活性氮和氧物种的增加产量(分别RNS和ROS)超过了母亲的抗氧化潜力,它可以影响母亲和胎儿的健康,导致怀孕并发症,以及不良妊娠结局,如自发早产和早产胎膜早破(4- - - - - -9]。RNS和活性氧引起的修改导致新的官能团如羟基或羰基化合物,导致分裂的蛋白质,蛋白质的形成cross-linkages,三级结构的破坏,和失去功能活动(1,3]。

早产的定义是37周的妊娠和完成前交货会影响5 - 13%的怀孕在高收入国家。这是新生儿发病率和死亡率的重要原因,因为它甚至可以负责50%的新生儿发病率和50 - 75%的新生儿死亡率在全球范围内(10]。最常见的表现型早产是病因不明的自发早产;然而,无报酬的增加氧化应激是早产的一个重要原因(2,11]。目前的证据表明,政府相关药物可以延缓早产的48小时内,从而使政府的糖皮质激素刺激胎儿肺表面活性剂的生产可以改善新生儿结局(12,13]。

Atosiban (1 - (3-mercaptopropanoic酸)2 - (O-ethyl-D-tyrosine) 4-l-threonine-8-l-ornithine-oxytocin)是一个可逆的,竞争对手的催产素受体(OTR)和可以减少收缩和改善子宫接受由于其能力降低胞浆内钙释放和表达下调前列腺素合成(14- - - - - -16]。Atosiban许可即将早产和临床使用的是常用的在临床实践中在欧洲由于其低副作用(17- - - - - -21]。虽然角色Atosiban调制的子宫肌层的收缩性很好,其效果在许多其他功能并不广为人知。最近的出版物提出新的数据对其角色在新生大鼠的心肌氧化应激升高从母亲对待Atosiban和激活的炎症通路羊膜这可能减少其效力相关药物(22- - - - - -24]。

我们进行了分析调查的安全管理Atosiban治疗早产及其对氧化应激水平的影响经过48小时的相关治疗。我们所知,这是第一个分析关于Atosiban治疗协会的总氧化剂和抗氧化剂在早产孕妇遭受威胁。

2。材料和方法

2.1。病人

这项研究是2016年3月和2017年8月之间进行产科诊所波兰母亲的纪念医院研究所是一个三级转诊医院。研究协议符合赫尔辛基宣言的原则和当地的研究伦理委员会批准的(34/2014)。知情同意是获得包含之前所有女性。本研究回顾与2018年6月26日ClinicalTrials.gov注册。六十四名孕妇接受产前护理由于早产的风险满足入选标准是谁参与了这项研究。这项研究还涉及8双胞胎妊娠患者。测试组中的生化参数的平均结果与双胎妊娠非常相似的一组结果与一个怀孕;然而,它是决定把它们排除在分析消除混杂因素。最后分析由56个女性。入选标准如下:患者24和35周的妊娠之间完整的膜,早产的迹象。 The last menstrual date or ultrasonographic measurements from the first trimester were used to determine the gestational age. The preterm labor was diagnosed as painful, regular, and persistent uterine contractions (no less than a 30-second duration and at least four in an hour) before the 37th week of gestation associated with cervical changes (a cervical dilation of 1 to 3 cm) and/or effacement (≥50%). Exclusion criteria included acute fetal distress and other conditions requiring immediate delivery (eclampsia and severe preeclampsia, abruptio placenta, and placenta previa) as well as chorioamnionitis, vaginal bleeding, intrauterine growth restriction, and fetal congenital malformations. The use of any tocolytic drugs during pregnancy before admission to the hospital also met the exclusion criteria. The patients with circulatory system diseases (e.g., heart defects and hypertension), symptoms of infection and other diseases that may increase oxidative stress, and any other specific maternal contraindication for Atosiban treatment were also excluded. According to our data, none of the subjects in the study were smokers or were using specific antioxidant supplementation.

2.2。相关治疗

Atosiban药物在一个特定的病人管理评估,根据药物特点医疗协议。Atosiban的初始剂量(Tractocile,显示出医药/ S,哥本哈根,丹麦)被作为一个单一静脉丸剂量在0.9毫升等渗氯化钠溶液(6.75毫克)。这是300年跟随静脉输液μg /分钟的Atosiban葡萄糖三小时后,100年的5%μ克/分钟48小时。孕产妇类固醇治疗开始后进入医院。根据最近的建议从美国妇产科医生大学的校长,病人有四个6毫克剂量的地塞米松(Dexaven、Jelfa、波兰)管理肌内每12个小时(25]。

2.3。血液采样

从前臂静脉血样肘前的静脉被连续48小时之前和之后与Atosiban相关管理。血液样本被收集到serum-separating管和管包含EDTA(等离子体),马上储存在4°C。等离子体是由离心分离细胞在1500 g×20分钟,在4°C。为了获得血清,血液在2500×g离心,在4°C 10分钟。血清和血浆采集标本的测量总氧化剂状态(TOS)、总抗氧化状态(助教),3-nitrotyrosine水平(3 nt),和羰基和硫醇组存储在整除−70°C在两个月内对后续生化分析和处理。他们在室温下解冻的时候只有一次分析。所有的测量都是在重复执行。

2.4。总氧化剂和抗氧化状态的测量血清(TOS和助教)

总氧化剂状态和总抗氧化状态值被显示比色测定法测量由Erel [26,27]。TOS Rel化验诊断工具包(Rel试验、加齐安泰普、土耳其)是用来确定总氧化剂的水平状态根据制造商的指示。这种方法是基于iron-mediated反应明显稳定的产品(氢过氧化物)脂质过氧化过程。氧化亚铁离子铁离子的存在各种氧化剂物种的血清用二甲酚橙测量。与过氧化氢测定是校准,结果表达的微摩尔的过氧化氢相当于每升(μ摩尔H₂O₂equiv. / L)。变异系数值被发现不到10%。助教是衡量总非酶的测定血浆抗氧化能力使用助教Rel化验诊断工具包(Rel试验、加齐安泰普、土耳其)。在这种方法中,2,2 - - - - - -azino-di - (3-ethylbenzthiazoline磺酸盐)激进的阳离子(abt⁺,是一个未配对电子)产生的氢氧自由基被用作抗氧化活性的指标。的反应是校准Trolox(以水溶性的维生素E,模拟6-hydroxy-2.5.7.8-tetramethylchroman-2-carboxylic酸),结果被表示为更易Trolox equiv. / L。变异系数值被发现不到10%。

2.5。氧化应激指数(OSI)的决心

OSI决心作为助教的TOS比率(由此产生的单位助教了μmol / L)和计算如下:OSI(任意单位)=服务条款,μ摩尔H₂O₂equiv. / L /助教,μ摩尔Trolox equiv. / L (23]。

2.6。估计3-Nitrotyrosine

竞争3-nitrotyrosine (3 nt)酶联免疫试剂盒用于确定蛋白在等离子过氧化(OxiSelect™硝基酪氨酸酶联免疫试剂盒、细胞生物学实验室Inc .,圣地亚哥,美国)。3 nt是翻译后修饰的蛋白质酪氨酸的产品由过氧硝酸盐引起的,这种修改会导致蛋白质结构的变化,功能,和催化活性28]。吸光度是阅读在450 nm 620海里作为参考与ELISA读者iMark™(Bio-Rad美国)。蛋白质硝基酪氨酸含量确定标准曲线进行比较,从预定的硝化制备BSA标准(2.7摩尔每1摩尔的BSA硝基酪氨酸)。检出限是20海里。

2.7。估计蛋白质羰基化合物

测量蛋白质羰基含量被认为是一个可靠的标志蛋白质氧化损伤由于其长期稳定(28]。蛋白质羰基作为参数测量等离子体的氧化应激与2衍生化后,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH)羰基蛋白酶联免疫试剂盒(Bensheim Immundiagnostik AG),德国)根据制造商提供的说明。吸光度是阅读在450 nm的波长620 nm作为参考与ELISA读者iMark™(Bio-Rad)。发现内部和interassay系数变化小于6.5%和6.2%,分别。

2.8。估计硫醇组

硫醇蛋白(含巯基的)状态(谷胱甘肽、蛋白结合的和免费的SH组)测量等离子体的酶联免疫吸附试验根据手动指令(Bensheim Immundiagnostik AG),德国)Ellman使用修改的方法。血清蛋白硫醇与含氧自由基反应形成二硫;因此,他们是一个很好的和直接测量的在活的有机体内氧化还原状态在人类。在412海里对试剂空白吸光度测量使用ELISA读者协同H1(美国佛蒙特州BioTek)。

2.9。统计分析

统计分析使用MedCalc窗户,版本15.1 (MedCalc软件,奥斯坦德,比利时)。测试数据的正常使用D 'Agostino-Pearson测试。结果作为手段与标准差(SD)或中位数和四分位范围(25 th - 75百分位数)为非正态的分布变量(胎龄在基线,平价、妊娠和妊娠年龄交付)。根据假设使用基线特征比较学生的搭配 - - - - - -检验正态分布数据或Wilcoxon为非正态的分布变量配对样本的测试。方差分析(方差分析)测试用于检查劳动和时间之间的关系水平的氧化应激的标记。值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

社会人口、产科和新生儿56岁女性的特征包括在这项研究展示在表中1。检查女性的平均年龄为30.9±5.4岁,50%的病人(28/56)nulligravida,和64%的女性(36/56)是未生育过的。Atosiban管理平均在30±2.9周的妊娠。看着我们的研究结果,96%的女性对待Atosiban仍然怀孕后一周治疗56(54)和最长的药物管理交付是14周(平均6.5±3.5周)。患者生平均36.6±3.1周的孕期,和60.3%的孕妇剖腹产交付,而39.7%自然生。尽管患者怀孕生了平均36.6周可以建议早产,大多数孕妇在我们的研究中(35/53,66%)后的怀孕37周的完成,确认相关Atosiban的有效性。新生儿平均出生体重是2884.8±748.8 g,他们收到了平均8.7±2点阿普加规模。大多数孩子(82.3%,42/51)离开医院在第一周的生活状况良好;两个孩子出生之前怀孕27周死于极度早产和低出生体重(分别为600和720 g)。只有三个孩子出生28和怀孕31周之间,由于早产并发症相关,不得不花费超过4周的新生儿病房。 Three children were lost to follow-up because their mothers gave birth in another hospital.

根据生化标记,TOS和蛋白质羰基和OSI指数增加血清收集48 h后治疗前相比,血清Atosiban管理局(表2)。也表明,血清总抗氧化潜能下降两倍48小时后药物管理局从平均0.936±0.360更易与0.582±0.305更易与L / L ( )。另一方面,总氧化潜力增加的平均值18.217±16.093μmol / L的样本在药品管理局的价值30.442±30.578μmol / L ( )经过2天的连续样本中Atosiban管理工作。结果以及OSI指数大幅上升这是一个累积的氧化和抗氧化能力的标志(超过三倍增加从0.022±0.022,0.075±0.085, )标明一个更高水平的氧化应激与Atosiban治疗后,显著降低血清抗氧化能力的调查。总氧化状态的分析,总抗氧化状态和OSI指数提出了治疗前后数据1(一)- - - - - -1 (c)。此外,在统计上有显著差异的羰基化合物水平测试等离子体(图中被发现1 (d))。它增加从65.358±31.322μ97.982±38.047 mol / Lμmol / L ( ),这表明增加血清蛋白的氧化和破坏。另一方面,我们没有观察到显著差异水平的硫醇组。3 nt含量,蛋白质过氧化反应和氧化应激的指标,也没有显著不同组( );然而,更高浓度的这个标志是观察治疗后的血清收集(40.7±44.2和51.4±44.1 nM,分别)。

额外的分析水平的氧化应激标志物进行了女性早产组( )和劳动在怀孕37周( )。Atosiban管理在一个非常相似的两组妊娠期,平均为30.1±3.7周的妊娠组与早产和30.2±2.5周的孕期在另一组怀孕37周后劳动。早产的患者有更高水平的服务条款后48小时比第二组药物管理局(42.803±34.683μmol / L和25.792±27.821μmol / L, )(表3)。尽管缺乏统计学意义差异对于其他标记,我们也观察到氧化应激增加参数(TOS和羰基化合物)和降低抗氧化能力(助教)组相比之前和之后48小时的治疗与Atosiban(表3)。

4所示。讨论

在本研究中,我们证明,第一次,一个更高的氧化状态(反映在增加水平的服务条款,OSI指数和羰基层)和较低的抗氧化能力引起的氧化应激相关治疗后血清的孕妇。此外,患者早产有更高水平的服务条款后48小时管理Atosiban比第二组怀孕37周后劳动,这可能表明氧化应激增加早产的影响。

本研究调查的安全管理进行Atosiban治疗早产。Atosiban已经证明是一种非常有效的短期相关药物符合波兰推荐其作为一线药物治疗早产(29日]。同时,我们现在观察没有证实报道的负面影响Atosiban在新生儿30.]。西姆西可et al。23]表明,堵塞的催产素受体可能与胎儿的死亡率和发病率增加,因为升高氧化应激中观察到新生大鼠的心脏。然而,我们没有发现这样的负面影响和绝大多数新生儿出生在我们的研究状况良好。胎盘和胎儿血液循环的详细评估的评估心脏血流动力学函数在48小时Atosiban管理局孕妇在我们以前的研究表明,进行相关治疗后血流动力学在胎儿心脏活动仍不受影响(31日,32]。它可以用这一事实来解释Atosiban穿过胎盘胎儿和产妇比平均为0.124,其浓度没有出现积累在胎儿33]。

然而,我们观察到,对待女性的增加氧化应激后48小时Atosiban管理工作。不幸的是,很少有人了解可能的相关参与氧化应激损伤。我们表明,血清和血浆样本显示更高级别的服务条款和羰基化合物以及在OSI指数显著增加相关治疗。在统计上有显著差异的助教水平也可以表明,系统性抗氧化防御机制被耗尽治疗期间由于氧化应激增加。一个非常类似的模式所做的研究中可观察到Aycicek et al。34在主动和被动母亲吸烟。吸烟是一个著名的不良妊娠结局的风险因素,和接触这个外部压力源代理可以导致重要的氧化剂和抗氧化剂改变平衡和增加有效的氧化应激(3,35]。服务条款和OSI指数级的增加以及降低抗氧化能力与Atosiban与这些相关治疗后观察从主动吸烟者组孕产妇血清34]。同样,Arguelles et al。36)发现吸烟的母亲和新生儿有更高浓度的羰基和脂质过氧化物,降低血清中总抗氧化能力,比不吸烟的母亲和新生儿脐血的对照组。

Atosiban管理之间的关系和氧化应激增加参数也观察到在动物研究由西姆西可et al。23]。他们发现高水平的氧化应激标志物(TOS和OSI指数)以及助教水平减少新生大鼠的血浆Atosiban-treated组与对照组相比。这个观察可以间接的证据Atosiban参与氧化应激水平增加的过程,因为在本研究模型中,怀孕的雌性老鼠只与这相关的药物治疗(23]。据马丁et al。37)、高氧化应激水平的母亲可以负责高氧化应激水平观察新生儿胎盘血液通过直接交换。此外,还Arguelles et al。36)发现了一个相关性的氧化状态的母亲和新生儿,而重要的是,他们观察到更高层次的孕产妇氧化应激对应于一个更高的氧化应激在新生儿脐带血。

几项研究已经涉及氧化应激在早产的作用2,3,5,8,38- - - - - -40]。高水平的系统性母亲的氧化应激可以导致胎盘障碍或其他损害导致早产(3,8,9,37,38,41]。大多数孕妇在我们的研究中(66%)后的怀孕37周的完成;然而,我们发现了一个统计上的显著水平的服务条款和早产之间的联系。早产的患者有更高水平的服务条款后48小时管理Atosiban比第二组怀孕37周后劳动,这可能表明氧化应激增加早产的影响。这是符合许多研究测量RNS和活性氧或生物标记物的氧化应激水平较高的产品和低水平的抗氧化剂相比,早产标本足月分娩标本(5,9,39,42,43]。

本研究的局限性是相对比较小的样本大小和使用非随机研究设计。此外,所有患者接受治疗皮质类固醇可能会影响氧化应激标志物的变化。然而,使用tocololytics的主要目的是延迟交货,允许一个完整的管理过程中产前糖皮质激素不能排除这个因素相互独立地检查他们的影响。我们也不能排除对女性疼痛等因素影响,子宫收缩、压力造成早产的威胁。然而,氧化应激生物标记对应的水平的不平衡与一些先前的研究关于怀孕的并发症和动物研究的结果在Atosiban和氧化应激。另一个限制是缺乏评价膳食摄入抗氧化剂;然而,根据我们的数据,没有一个学科的研究吸烟者或使用特定的抗氧化剂补充。

5。结论

总之,我们的结果可以表明,相关治疗Atosiban与高度相关的氧化应激标记后48 h。Atosiban这种效应可能减少其效力相关代理,因此应考虑对其临床使用,特别是因为它的连接与早产的发生。进一步的研究涉及大样本大小应该检查的力量进行观察和可以清楚地提供证据Atosiban效应除了类固醇这一现象。值得考虑是否添加抗氧化治疗可以应用在女性接受催产素拮抗剂和是否能增加其有效性。

缩写

3 nt:	3-Nitrotyrosine
OSI:	氧化应激指标
工程:	催产素受体
ROS:	活性氧
RNS:	活性氮物种
助教:	总抗氧化状态
服务条款:	总氧化剂状态。

数据可用性

研究数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者要求((电子邮件保护),(电子邮件保护))。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有作者在本研究的设计和实现共享。所有作者阅读和批准最终的手稿。科学家们Grzesiak和Zuzanna Gaj为研究同样做出了贡献。

确认

波兰科技部支持的研究是为波兰母亲的纪念医院和高等教育研究所的罗兹(批准号2015 /我/ 17-GW)。