文摘

在当前的研究中,我们测试了非酶的糖化ketohexoses活动,如塔格糖和阿洛酮糖。尽管tagatose-treated apoA-I (t-A-I)和psicose-treated apoA-I (p-A-I)施加更多的抑制活动你ion-mediated铜低密度脂蛋白(LDL)氧化和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)吞噬作用成巨噬细胞比fructose-treated apoA-I (f-A-I)。lipid-free状态,t-A-I f-A-I显示更多的独处乐队没有交联。自t-A-I失去了磷脂结合能力,像f-A-I rHDL形成并不成功。然而,注入t-A-I显示更多的抗氧化活动在斑马鱼胚胎oxLDL的存在。三周的食用果糖(Tetrabit wt的50% / 4%胆固醇)海拔14%血清三酰甘油(TG),而tagatose-administered组显示血清TG减少30%相比,高胆固醇控制。那些吃了果糖组显示的最大区域油红O染色强度如HCD控制。然而,tagatose-consumed组显示较小石油红O-stained面积减少脂质积累。总之,虽然塔格糖治疗造成修改apoA-I,功能没有尽可能多的严重损失果糖治疗在巨噬细胞细胞模型中,斑马鱼胚胎,hypercholesterolemic斑马鱼模型。

1。介绍

已经被广泛接受,糖化是一个主要过程,退化蛋白质功能和结构,这是一个直接结果慢性代谢性疾病,如糖尿病(1),动脉粥样硬化(2),和老化3]。果糖治疗会导致糖化高达10倍的生产先进的糖化结束(年龄)产品比葡萄糖、果糖和更高的消费促进甘油三酯合成(4,5]。已经知道,主要的目标通过美拉德反应是血清糖化血红蛋白(Hgb),糖化血红蛋白水平被用来作为诊断糖尿病的标志(6]。先前的研究已经得出结论,糖化可能发生在血液中高密度脂蛋白(HDL)和载脂蛋白(7,8]。

高密度脂蛋白胆固醇(hdl - c)与心血管疾病的发病率呈负相关(9和寿命直接相关10]。潜在(高密度脂蛋白具有抗氧化和抗炎11]。载脂蛋白-ⅰ是高密度脂蛋白的主要蛋白,发挥抑制动脉粥样硬化(12]。我们研究小组报道,fructose-mediated apoA-I糖化导致严重损失的有益功能apoA-I antisenescence和高密度脂蛋白,抗氧化剂和antiatherosclerosis活动(8,13,14),可以建议由于寡聚化(的交联单体的apoA-I形成二聚体,三,四聚体,等等)。这multimerization过程有助于淀粉样蛋白生产和脂蛋白功能的障碍。功能和结构修改加上增加蛋白质降解导致严重疾病(2,3]。

果糖是ketohexose家庭,可能有一个可能性,其他ketohexose会导致类似的糖化过程和生理效应。ketohexoses D-tagatose之间的差向异构体D果糖不同只在定位上的羟基4碳。塔格糖引起了广泛关注作为一个强有力的候选人的抗糖尿病的药物(15),建立了安全的糖(GRAS)由世界卫生组织(世卫组织)用于食品和饮料。据报道,塔格糖的饮食补充2型糖尿病导致减肥和提高高密度脂蛋白胆固醇水平(16]。不幸的是,这项研究并没有安慰剂对照。

不仅D塔格糖,D阿洛酮糖,这是一个c - 3的差向异构体D果糖,较小的甜度比蔗糖没有卡路里,展品降糖,降血脂药和抗氧化活动(17- - - - - -20.]。的补充D阿洛酮糖饮食的雄性老鼠抑制肝脂肪酸合酶和葡萄糖6-phosphate脱氢酶酶,从而减少脂肪组织重量(19]。这些特性使它成为一个更有前途的代理对改善糖尿病及其相关疾病(21]。然而,塔格糖的有益作用的解释,阿洛酮糖还没有破译,特别是关于糖化血清蛋白及其生理机制。因为没有报告的潜在影响塔格糖和阿洛酮糖脂蛋白代谢和有可能他们会影响血清蛋白通过非酶的糖化过程,因此我们测试塔格糖治疗的假定的影响以及果糖和阿洛酮糖。

2。材料和方法

2.1。材料

胆固醇(# c - 3045)购买从σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。D塔格糖(180.16固件,猫# T1501),D果糖(FW180.16猫# F0060),D阿洛酮糖(180.16固件,猫# P1699)从东京购买化工(日本东京)。

2.2。净化apoA-I

人血浆用于净化ApoA-I使用一些技术如超速离心法、柱层析法、有机溶剂萃取法描述啤酒等。22]。纯化apoA-I冻干在−80°C到使用。

2.3。治疗Ketohexose apoA-I

Lipid-free apoA-I(10毫克/毫升)在其加工状态保存在200毫米磷酸钾/ 0.02%叠氮化钠缓冲(pH值7.4)补充每个ketohexose(最后的250毫米)长达90小时在一个孵化器有限公司为5%2在37°C。措施执行先进的糖化spectrophotometrically使用荧光440海里(排放)和370海里(激励),然而稍微修改过程(23]。

2.4。重组高密度脂蛋白的合成和分析

表1显示包含每个ketohexose rHDL的合成和表征。圆盘rHDL钠制备的胆盐透析方法(24)使用的初始摩尔比率棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC):胆固醇:apoA-I:胆盐的钠95:5:1:150。随着rHDL粒子受雇于过程足够纯净和表现出极端的均匀性,进一步处理被认为是不必要的。PAGGE或原生聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳进行为了确定rHDL粒子的大小,比较标准的球状蛋白质(猫# 17-0445-01 Amersham法玛西亚,乌普萨拉,瑞典)。法玛西亚的Phast系统从通用电气医疗集团,瑞典乌普萨拉。凝胶Doc®XR(美国Bio-Rad大力神,CA)补充数量一个软件,版本4.5.2采用比较粒子的相对运动,而其内容Lowry蛋白质测定的方法但临时修改Markwell et al。(25与标准组织)。

表1
合成和表征rHDL包含每个ketohexose(果糖、塔格糖和阿洛酮糖)。
2.5。圆二色性和Fluorospectroscopy

分析技术的圆二色性(CD)光谱学(j - 715分光偏振计Jasco,东京,日本)被用来解开阿尔法螺旋的数量普遍自由和束缚protein-lipid交互状态。圆形光吸收模式获得了从250 - 190 nm 25°C,路径长度是0.1厘米,1.0 nm带宽、速度50 nm /分钟,4秒的响应时间。纯化蛋白标本是由果糖免费透析对TBS, self-ligation被稀释的避免lipid-free载脂蛋白(260.07毫克/毫升,0.1毫克/毫升的lipid-bound载脂蛋白。四个扫描得到和平均。

摩尔椭圆率的分析在222 nm显示阿尔法螺旋的内容。圆二色性光谱与ketohexose-treated apoA-I lipid-free和lipid-bound补充图表示2。

熟读的波长的荧光(WMF)尤其是Trp残留的是由LS55荧光谱仪(美国优秀的,诺沃克,CT)使用WinLab软件包4.00(优秀)。激发波长被选为295 nm为了避开酪氨酸荧光的干扰。从305 - 400海里排放检查明确。

2.6。净化的低密度脂蛋白(LDL)氧化

低密度脂蛋白(1.019 < d < 1.063)从人血浆和纯化获得了超速离心法,密度调整通过添加氯化钠、离心100000紧随其后 22小时10°C温度(Himac cp - 90α日立、日本东京)。氧化低密度脂蛋白(oxLDL)采购与CuSO postincubation4(最终浓度,10μ米)4人力资源在37°C。随后,过滤(0.2μ米)和研究用硫代巴比土酸反应物质(TBARS)分析建立氧化度(27]。

2.7。细胞培养

人类单核细胞细胞系,THP-1,收购(写明ATCC #矿- 202™;美国弗吉尼亚州马纳萨斯)和持续的RPMI1640(犹他州洛根Hyclone)与10%胎牛血清(的边后卫)补充。下面的细胞系20段落使用和孵化佛波醇12-myristate 13-acetate (PMA;最后150海里)补充介质24-well盘子48小时37°C湿润孵化器(5%股份有限公司2)诱导巨噬细胞分化。

2.8。LDL-Phagocytosis化验

巨噬细胞分化和坚持coincubated 400μL新鲜的RPMI1640中补充1%的边后卫,50μL (oxLDL[1毫克的蛋白质/毫升磷酸盐(PBS)],和50μ每个rHDL L(1毫克/毫升)48小时在37°C湿润孵化器测试antiatherosclerotic活动(14]。随后,PBS的细胞被洗了三次,然后固定在4%多聚甲醛10分钟。然后固定标本进一步冲洗聚丙二醇100%,然后沾油红O染色溶液(0.67%),最后用蒸馏水洗净。THP-1 macrophage-derived泡沫细胞成像,然后拍照使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)600 x放大。

2.9。免疫印迹

48小时孵化后,收获细胞细胞溶解的治疗里帕缓冲区(Radioimmunoprecipitation分析缓冲区,150毫米氯化钠,NP-40 1%, 0.5%钠脱氧胆酸盐,0.1% SDS, 50毫米三羟甲基氨基甲烷(pH值8.0)液)。使用反人类的细胞溶解产物分析免疫印迹分析apoA-I抗体(Ab7613;Abcam,剑桥,英国)和GAPDH (Ab8229 Abcam),抗肿瘤坏死因子(TNF)α(美国SC52746,圣克鲁斯,CA)。从每个溶菌产物蛋白质含量测定用布拉德福德化验(美国Bio-Rad大力神,CA)在装货前等量的蛋白质(25μg / lane)到13% sds - page凝胶。

2.10。斑马鱼

野生型斑马鱼及其胚胎持续按照标准协议(28)允许的动物保健和使用委员会Yeungnam大学(Gyeongsan、韩国)。幼虫,斑马鱼和胚胎在系统维护笼和6-well板块在28°C暴露在14:10小时光:暗周期。

2.11。显微镜下注射的斑马鱼胚胎

的气动PicoPump PV820;世界精密仪器,萨拉索塔,佛罗里达州,美国用于microinjecting受精胚胎的第一天或1天postfertilization (dpf)。这PV280也有磁机械手(MM33;美国Kantec Bensenville, IL)配备了一个拉微细管pipette-using设备(PC-10;Narishige,日本东京)。oxLDL (13 ng的蛋白质)和ketohexose-treated apoA-I (50 ng的蛋白质)在100 nL总额coinjected我们以前的报告(14]。注射后,活胚胎立体显微镜下观察(Motic SMZ 168;香港)和拍摄使用Motic cam2300 CCD相机。

2.12。成像的活性氧(ROS)

治疗后与oxLDL apoA-I, ROS增加措施一般氧化应激的程度被认为使用dihydroethidium(她,猫# 37291;σ,圣路易斯,密苏里州)[29日]。胚胎期的形象是获得通过荧光观察(例如= 588 nm和Em = 605海里)使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)。测量荧光区域胚胎是由计算机辅助形态测量学使用图像Proplus软件(版本4.5.1.22;美国媒体控制论,马里兰州贝塞斯达)。

2.13。使用Hypercholesterolemic斑马鱼体内试验

斑马鱼的AB染色是在本地购买。斑马鱼和程序被允许的保护动物保健和使用委员会Yeungnam大学(Gyeongsan、韩国)。

Tetrabit粉(粗蛋白47.5%,粗脂肪6.5%,粗纤维2.0%,粗灰分10.5%,维生素A (29770 IU /公斤),维生素D3(1860 IU /公斤)、维生素E(200毫克/公斤),和维生素C(137毫克/公斤);Tetrabit Gmbh D49304 Melle、德国)与果糖混合或塔格糖(Tetrabit最终浓度50% (wt / wt))。混合冻干后其完全溶解在水中,其余进一步磨成细粉。隔离和tetrabit粉也与ketohexose与乙醚混合溶液混合胆固醇创造4%的胆固醇。我们描述了斑马鱼的制备食品的饮食在我们以前的报告含4%胆固醇(最终浓度)高胆固醇饮食(HCD) [30.]。同样的步骤被用来准备混合物的正常饮食(ND)去除溶剂引起的工件的可能性(乙醚)。

组( )分配饮食喂养(10毫克/天/鱼)没有任何异常;表中所示的细节2。斑马鱼是保持在28±1°C下14:10小时光:暗周期。

表2
血清后斑马鱼的食用高胆固醇饮食和ketohexose为3周。
2.14。血液分析

食用高胆固醇饮食和ketohexose后3周,血液从鱼的心吸气和混合5μL(1毫米PBS-ethylenediaminetetraacetic酸(EDTA),随后转移EDTA-treated管。等离子体(30 - 40μL)被离心分离从10斑马鱼样本。血浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)测量通过使用商业分析工具(Wako纯化学、日本大阪)。的浓度谷氨酸草酰乙酸的转氨酶(了)是决定使用商用试验设备(峨山制药、华城、韩国)。

2.15。血浆胆甾醇酯转运蛋白(CETP)活动

胆甾醇酯- (CE)捐赠组成的载脂蛋白-ⅰ(apoA-I)和胆甾醇油酸酯,重组高密度脂蛋白(rHDL),是(31日)的跟踪数量(3H]胆甾醇油酸酯(TRK886 3.5μCi /毫克apoA-I;通用电气医疗集团)。

CE-transfer反应发生在300年μL反应混合物组成的均匀稀释斑马鱼等离子(50μL)胆甾醇酯转运蛋白(CETP)来源。(3H] -CE-rHDL (50μL, 0.25毫克/毫升)和人类的低密度脂蛋白(50μL, 0.25毫克/毫升)被用作胆甾醇(CE)捐赠和CE-acceptor秩序。Postincubation在37°C,这个反应是通过离心停在10000 3分钟在4°C。上层清液包含CE-acceptor (150μL)被闪烁计数,百分比的转移(3H] ce rHDL计算低密度脂蛋白。

2.16。组织学分析

简而言之,斑马鱼是牺牲后,肝脏和4%多聚甲醛固定24小时。彩色肝脏样本随后盘踞在10月Tissue-Tek化合物(热、老总孔翰宁、德国)和冻结。此外,7μm的这些组织被安装在3-APS (3-aminopropyltriethoxysilane)涂布幻灯片和在徕卡microcryotome(模型CM1510s,海德堡,德国)。分段连续七个幻灯片的斑马鱼首先沾油红O然后用苏木精复染色这强调了脂肪条纹病变。比较在这些组织氧化应激的程度,整体的活性氧(ROS)被认为与dihydroethidium(她,猫# 37291;σ,圣路易斯,密苏里州)[14,26]postmicrotome切片通过使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)。部分荧光测量使用图像Proplus软件通过计算机辅助形态测量学(版本4.5.1.22;美国媒体控制论,马里兰州贝塞斯达)。

2.17。统计分析

合成输出统计分析为均值±SD从三个独立的实验重复获得。比较结果是由学生t以及和单向方差分析(Bonferronit以及)使用SPSS程序(版本12.0;美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。值是检测意义 , 。

3所示。结果

3.1。糖化Ketohexose治疗

在高剂量的ketohexose(最后的50毫米)治疗lipid-free状态,没有交联反应,所有ketohexose-treated apoA-I显示更多独处模式控制(H2O-treated apoA-I)如图1(一)。72小时孵化后,tagatose-treated apoA-I (t-A-I)显示最强的multimerization模式从sds - page(图1(一))最高的黄色荧光(图1 (b)从美拉德反应)。阿洛酮糖治疗显示第二最强multimerization和荧光。

(一)
(一)
(b)
(b)
图1
每个ketohexose apoA-I电泳表征的修改。(一)电泳模式的糖化apoA-I lipid-free国家本地凝胶(8 - 25%本地梯度凝胶电泳。巷1:本地-ⅰ,巷2:H2O-A-I,巷3:f-A-I,巷4:t-A-I巷5:p-A-I。(b)糖化程度由每个ketohexose apoA-I治疗(巷1:本地-ⅰ,巷2:H2O-A-I,巷3:f-A-I,巷4:t-A-I,和巷5:p-A-I)。

土生土长的聚丙烯酰胺凝胶电泳没有样本沸腾显示ketohexose-treated apoA-I lipid-free中显示不同的频带分布和流动状态,补充图所示1。他们有一个额外的乐队在88 - 89和更快的流动乐队58-60周围位置较低,而H2O-treated apoA-I或原生apoA-I显示不同的情况与主要乐队在71年左右。在lipid-bound状态,如补充图所示1 b,ketohexose-treated apoA-I显示降低粒径93 - 95左右,而H2O-treated apoA-I显示不同的两个乐队在95年和109年。t-A-I-rHDL显示强度最弱的乐队,乐队在底部,lipid-free apoA-I。

3.2。Phospholipid-Binding能力

120分钟孵化与DMPC (dimyristoyl磷脂酰胆碱),t-A-I显示几乎phospholipid-binding能力丧失,而f-A-I和p-A-I也显示损伤的绑定(图的能力2)。H2O-treated apoA-I显示phospholipid-binding能力最快的一半时间间隙(T1/2= 14分钟)。


图2
Phospholipid-binding能力ketohexose-treated apoA-I以325海里的吸光度。
3.3。Ion-Mediated铜抑制低密度脂蛋白氧化

120分钟孵化期间,铜ion-treated LDL显示的最高海拔在234 nm(吸光度234年)。没有显著的差异234年之间ketohexose-treated apoA-I lipid-bound状态。

尽管t-A-I-treated LDL显示比n-A-I-treated低密度脂蛋白的氧化产物,t-A-I表现出更好的抗氧化活性比f-A-I共轭二烯(监控234年)如图3。琼脂糖电泳还显示,f-A-I-treated LDL透露最快的情况,表明氧化的程度。t-A-I比f-A-I p-A-I-treated LDL显示较慢的情况,建议比f-A-I优越的抗氧化能力。

(一)
(一)
(b)
(b)
图3
apoA-I的抗氧化能力,是由每个ketohexose治疗,对低密度脂蛋白的氧化。(a)检测共轭二烯中间copper-mediated LDL氧化。持续监控的共轭二烯水平在234 nm(吸光度234年)在copper-mediated氧化的存在包含本地apoA-I rHDL或ketohexose apoA-I治疗。低密度脂蛋白(b)情况,由铜氧化2 +的存在下ketohexose apoA-I-rHDL治疗,0.5%琼脂糖凝胶。
3.4。吸收oxLDL为巨噬细胞

在ketohexose(最终5毫米)和oxLDL,果糖治疗造成了最严重的吸收程度oxLDL(绿色荧光)和增加活性氧的水平(红色荧光),如图4。实验通过果糖虽然oxLDL略低于oxLDL单独处理,生产的ROS果糖治疗。这些结果表明,基底的果糖水平,即使在最后5毫米,可以提高更多的基金会通过泡沫细胞的形成过程。然而,治疗塔格糖和阿洛酮糖吸收oxLDL小得多(绿色)和较小的活性氧产量(红色)。同样,治疗f-A-I oxLDL吸收的增加和ROS生产引起的,而t-A-I——p-A-I-treated THP-1细胞显示更少oxLDL吸收和ROS水平(图5)。综上所述,染色显示果糖或f-A-I治疗引起的活性氧产量最高的水平,在细胞内氧化应激的指标。


图4
细胞吸收oxLDL包含NBD-cholesterol在每个ketohexose(果糖、塔格糖和阿洛酮糖)。PMA-differentiated巨噬细胞与50孵化μL (oxLDL(1毫克/毫升)14μ仅ketohexose L(175毫米,在最后5毫米),和436年μL RPMI1640媒体。与oxLDL和每个ketohexose孵化后48小时,细胞被洗PBS(磷酸盐)和绿色荧光(= 488海里,Em = 535海里)强度检测。为了比较生产活性氧(ROS),红色荧光图像(= 588海里,Em = 605海里)后获得dihydroethidium(她)染色。细胞图像观察和拍摄使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)。照片中的栏显示100μm。

图5
存在的细胞吸收oxLDL rHDL-containing ketohexose-treated apoA-I NBD-cholesterol。PMA-differentiated巨噬细胞与50孵化μL (oxLDL(1毫克/毫升)50μ每个rHDL L(0.7毫克/毫升,在最后的2μ米),400μL RPMI1640媒体。与oxLDL和每个rHDL孵化后48小时,细胞被洗PBS(磷酸盐)和绿色荧光(= 488海里,Em = 535海里)强度检测。为了比较生产活性氧(ROS),红色荧光图像(= 588海里,Em = 605海里)后获得dihydroethidium(她)染色。细胞图像观察和拍摄使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)。照片中的栏显示100μm。
3.5。西方墨点法

的存在下与apoA-I immunodetection抗体,2μM的蛋白质,f-A-I-treated细胞表现出最强的多聚体群apoA-I巨噬细胞溶解产物,同时t-A-I-treated细胞表现出更少的multimeric群apoA-I像原生apoA-I(图类似6)。ApoA-I乐队没有发现仅在ketohexose(最后5毫米)治疗细胞控制(巷1 - 4,图6),这表明没有检测到apoA-I巨噬细胞。有趣的是,tnf乐队只出现在果糖单独治疗和f-A-I-treated模型。


图6
免疫印迹分析。等量的蛋白质(13μg每车道)加载到15% sds - page。ApoA-I (ab7613;Abcam)、肿瘤坏死因子(TNF)α(sc52746;圣克鲁斯生物技术)β肌动蛋白抗体(ab8229;Abcam)。
3.6。显微镜下注射Ketohexose斑马鱼

显微镜下注射oxLDL (13 ng的蛋白质)仅为斑马鱼胚胎导致胚胎死亡最高的63%左右的生存,如图7,这表明oxLDL可能导致急性炎症死亡。oxLDL的存在下,f-A-I-injected胚胎显示最低的生存能力,表明存在f-A-I更加恶化死亡的炎症。令人惊讶的是,t-A-I-injected胚胎生存能力高于oxLDL单独控制,虽然coinjection c导致最高的生存。在24小时接受,f-A-I-injected胚胎显示胚胎发展速度最慢,如图8以及oxLDL单独注射胚胎。oxLDL仅仅被当作一个参考类别执行统计分析。


图7
斑马鱼胚胎的存活曲线后熔池oxLDL (13 ng的蛋白质)+维生素C(最终浓度,1μ米)或每个ketohexoses apo-A-1在48小时孵化post-injection。 vs oxLDL; vs oxLDL。

图8
改变在胚胎期coinjection oxLDL和ketohexose-treated apoA-I在0和25小时接受。为了比较活性氧的生产,红色荧光图像(= 588海里,Em = 605海里)的斑马鱼胚胎获得使用Eclipse TE2000尼康显微镜(日本东京)dihydroethidium(她)染色中描述的文本。f-A-I: fructose-treated apoA-I;t-A-I: tagatose-treated apoA-I;p-A-I: psicose-treated apoA-I;H2O-A-I: H2O-treated apoA-I。
3.7。塔格糖的消耗导致斑马鱼Hypotriglyceridemia

经过3周喂养的HCD有或没有ketohexose wt / wt (50%), fructose-administered组(HCHF)和tagatose-administered组(HCHT)显示高于90%的生存与HCD对照组相似,表明过量喂养ketohexose wt / wt(50%)是耐受性良好。在血清中,HCD-alone-administered小组展示了增量的TC和TG HCD数据时被发现是重要的比正常。血清TC,那些吃了果糖组显示下降15%而tagatose-administered组显示类似的血清TC水平相比HCD组。然而,血清TG水平高出14%果糖组增加,而tagatose-fed组显示下降30%的血清TG与HCD控制。,那些吃了果糖组显示血清TG水平高于1.6倍tagatose-fed组。那些吃了果糖组还显示血清葡萄糖水平最高,比HCD集团更增加了43%。然而,tagatose-fed组血糖水平显示小于,那些吃了果糖组和这些结果具有统计学意义。血清也提升了HCD组(表2),这表明高脂血症急性肝脏炎症有关。,那些吃了果糖的小组展示了增量22%血清水平;尽管如此,tagatose-fed集团HCD集团的下降超过15%。

血清CETP活动更增强了HCD消费比ND组,48 CE-transfer±4%, 37±1%,分别。然而,HCHT组活动显著减少CETP CE-transfer高达42%,而HCHF组显示出类似的CETP活动HCD组。这些结果表明,HC消费会导致增强CETP活动作为我们以前的报告和塔格糖消费可以减少活动。

3.8。组织学分析

从H & E染色,HC消费造成更多炎症细胞的浸润肝薄切片,如图9。然而,HCHT-consumed组显示更少的渗透的细胞,而HCHF组表现出相似的水平渗透。油红O染色显示,HC组显示红色的强度与正常组相比显著增加,表明胆固醇消耗脂肪肝引起的变化。HCHF组显示红色的强度比HC组,表明果糖摄入加速脂肪肝发生变化。然而,令人惊讶的是,HCHT组显示几乎没有石油O-stained区域类似作为正常组水平。这些结果表明,塔格糖消费改善炎症加重和脂肪肝可以改变胆固醇引起的消费。


图9
代表肝组织学评估薄切片的显微图。照片中的栏显示100μm。(a)渗透炎症细胞被苏木精和伊红染色可视化。(b)脂肪肝程度变化是衡量油红O染色。(c)活性氧的生产是由她决定染色。

4所示。讨论

一般来说,糖化与结构修改和功能丧失相关血清蛋白质,尤其是血红蛋白和载脂蛋白。我们的研究小组和其他几个人报道,糖化的载脂蛋白参与糖尿病的关键流程,动脉粥样硬化,和衰老11,14]。ketohexoses之间以前的报告表明,塔格糖尝起来像蔗糖和是有用的作为一个低热量的甜味剂。塔格糖有较低的血糖指数相比其他甜味剂和ketohexoses。据报道,低升糖指数饮食多年来降低患2型糖尿病的风险,心血管疾病和其他代谢风险(32]。此外,塔格糖似乎降糖药效果和肥胖控制药物降低血糖在正常和前驱糖尿病的参与者可能通过抑制肠道双糖酶和葡萄糖运输。塔格糖水平的降低餐后血糖和调节肝脏的胰岛素反应通过抑制肝糖分解(33,34]。

有趣的是,t-A-I显示最高比f-A-I和p-A-I(图多聚体的形成1 (b)),这表明塔格糖可以修改更多的废话3交联的网站。然而,没有明显的差异之间的交联效率ketohexose-treated apoA-I rHDL状态,尽管所有ketohexose-treated apoA-I显示二聚多控制(H2O治疗)。

t-A-I的multimerization能力和phospholipid-binding能力可能表明,氨基酸是由塔格糖修改的治疗至关重要。然而,修改造成的伤害减少apoA-I和rHDL有益的功能。

多摄取的胆固醇从oxLDL巨噬细胞与活性氧的增加产量(图相关联4)。尤其是果糖,胆固醇吸收的程度相似而oxLDL孤独,然而,ROS的产生是强于oxLDL孤单。在ketohexose-treated apoA-I, f-A-I显示最高的NBD-oxLDL吸收和活性氧的生产,表明oxLDL吞噬作用和氧化应激(图的巧合5)。如图6,immunodetection TNF -α抗体显示fructose-treated(巷1)或f-A-I-treated(巷7)细胞溶解产物显示不同的乐队,在塔格糖或t-A-I-treated细胞没有。

果糖的促炎属性再次出现在最高的斑马鱼胚胎死亡率和发展速度最慢类似一个oxLDL单独注入。这些结果与以前的报告成为一个好协议仅胚胎注射oxLDL减毒发展速度超过本机LDL-injected胚胎(35]。此外,coinjection fructosylated apoA-I和oxLDL加剧了胚胎死亡发展速度最慢,而本地apoA-I显示保护作用。而p-A-I显示更多的巨噬细胞活性氧的生产和更少的保护作用对oxLDL介导胚胎死亡,然而,t-A-I显示更多的保护作用在巨噬细胞和胚胎。

3周后喂养,HCD消费造成炎症细胞浸润和脂肪肝变化基于我们之前的发现在小鼠模型和最近的报告关注HCD消费的有害影响,造成了严重的肝病与早期肝纤维化(36- - - - - -38]。如表所示2tagatose-fed组显示,轻微的减肥效果与HCD对照组相比。在人类研究中,唐纳等人表明,12个月口服的塔格糖导致减肥效果,从109±14.7公斤105.3±14.4公斤,以及减少glycohemoglobin [16]。虽然这项研究是基于少数科目( ),减肥的效果与当前结果吻合很好。类似研究hypercholesterolemic老鼠、警察等人透露,与蔗糖相比,等量的塔格糖没有提升高血糖症的风险,高脂血症,导致一定程度上的高胆固醇血症和动脉粥样硬化39]。

令人惊讶的是,fructose-treated集团(HCHF)显示,体重和降低血清TC水平相比HCD组。更有趣的是,HCHF组显示体重低于ND组,表明过度剂量的果糖可能导致严重的减肥。然而,集团在肝组织(图显示严重的炎症9)。这种急性减肥可能与脂肪肝变化和hepatosteatosis。HCHF组显示血清TG和炎症水平最高。类似的报道肝脂质积累、炎症和氧化应激被酸式焦磷酸钠等人所示,贾斯瓦尔等人果糖治疗后在斑马鱼和16种骨骼肌细胞(40,41]。我们的结果成为一个好协议,f-A-I-treated细胞显示海拔最高的TNF -α。

5。结论

最后,塔格糖可能修改几个函数等apoA-I phospholipid-binding能力和multimerization能力。然而,抗氧化和抗炎活动apoA-I没有受损的巨噬细胞和斑马鱼胚胎模型。在hypercholesterolemic斑马鱼模型中,tagatose-consumed集团降低血清TG、, CETP的活动。

信息披露

所有作者都表示,他们没有与本文相关的披露金融关系。

的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益。

作者的贡献

Dhananjay Yadav和Kim Suk Jeong进行实验;Suk宋金正日准备这个手稿的初稿;Myung Ae Bae和金Jae-Ryong分析数据;和Kyung-Hyun曹写的纸和监督研究项目。

确认

这项工作由教育部的资助支持贸易、工业和能源、韩国(批准号2016 - 10063396),和医学研究中心项目(2015 r1a5a2009124)通过国家研究基金会(NRF),由科技部、ICT和未来规划。

补充材料

补充图1:电泳模式的糖化apoA-I lipid-free (A)和lipid-bound国家本地凝胶电泳。补充图2:圆二色性光谱与ketohexose-treated apoA-I在lipid-free (A)和(B) lipid-bound状态。f-A-I: fructose-treated apoA-I;t-A-I: tagatose-treated apoA-I;p-A-I: psicose-treated apoA-I。(补充材料)