文摘gydF4y2Ba

Sarcopenia的与年龄相关的损失是骨骼肌肉,力量,和功能。它通过卫星细胞与再生困难,成人干细胞,肌肉和氧化的变更管理,主要是增加超氧化物阴离子(OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba})。我们旨在调查之间的关系在老年人和再生赤字增加OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产与线粒体的改变。骨骼肌成肌细胞和肌管的年轻人和老年人健康受试者(27.8±6和72.4±6.5岁)测量:(1)超氧化物歧化酶活性和蛋白质含量,(2)线粒体OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产水平,(3)OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产变化,(4)线粒体生物能量学概要文件。年轻的成肌细胞相比,老年成肌细胞显示SOD2蛋白表达减少,线粒体O升高gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}基线水平,减少氧化磷酸化和糖酵解。另外,老年人和年轻肌管显示升高线粒体OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}当强调与n -乙酰半胱氨酸水平或高葡萄糖和高糖酵解尽管显示类似的氧化磷酸化水平。少,老年人可能代谢可塑性由于线粒体功能受损引起的gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}。然而,增加的能源需求与分化过程似乎激活补偿部分线粒体功能障碍的机制。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

Sarcopenia被定义为与年龄相关的肌肉损失,力量,和功能(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。特别是,衰老与一致的肌肉组织的再生能力下降后受伤或过度使用由于干预卫星细胞的损伤gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。为了应对肌肉损伤,肌肉卫星细胞,未分化的静止细胞等单核的细胞存在于(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),具有干细胞的特性,被激活增殖作为人类主要的成肌细胞增殖成肌细胞迁移到受损区域的纤维,在那里他们分化和融合形成肌管通过一个类似的过程,肌细胞生成(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。然而,这种能力是减少老年人,卫星细胞无法执行完整的修复过程或他们表现出缓慢复苏gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。卫星细胞的激活和增殖阶段的特点是肌原性的监管因素的表达(mrf),以及这个过程的阶段通常涉及的顺序表达蛋白质,包括Pax3(静止卫星细胞),myoD(增殖主成肌细胞),myogenin(分化成肌细胞)。我们之前证明受损的再生潜力老人主要成肌细胞与失调myogenin miR-1和133 b基因表达与生产过剩的活性氧(ROS) (gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。的确,背后的机制受损肌原性的分化过程中老年人是多因素疾病,他们似乎涉及ROS生产和抗氧化酶活性之间的不平衡。因此,氧化应激可以导致细胞生成一个或多个的三个因素:(i)增加氧化剂,(2)减少抗氧化保护,和(3)未能修复氧化损伤。活性氧破坏脂质、核酸和蛋白质(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。线粒体通常被认为是在许多细胞ROS的源和目标模型包括骨骼肌细胞。显著地,成肌细胞分化伴随着密集的线粒体生物起源、细胞内ROS的生成也增加在肌细胞生成(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba),衰老中起着基础性作用。老化与线粒体功能的下降和异常的线粒体的积累gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。事实上,一些研究表明,增加线粒体功能障碍之间存在联系sarcopenic骨骼肌和ROS增加产量(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。完整的电子转移减少线粒体复合体I和iii iv的氧气可以活性氧的主要来源,特别是OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。酶的主要类抗氧化剂是超氧化物歧化酶(SOD)家族催化O的歧化作用gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}过氧化氢(HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。随后,HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaOgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba迅速水减少了其他两个酶,过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶。SOD是不同的亚型细胞位置:SOD1位于胞质和线粒体膜间隙,在线粒体基质SOD2, SOD3在细胞外空间。线粒体也“强国”的细胞产生能量的形式三磷酸腺苷(ATP) [gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。在真核生物中,ATP主要是由两个不同的过程:通过葡萄糖的分解或胞质(无氧糖酵解)或其他糖类的代谢脂肪酸,糖(有氧糖酵解),线粒体和蛋白质,只在氧气的存在(氧化磷酸化(OXPHOS))。糖酵解途径的葡萄糖转化为丙酮酸在oxygen-independent生化反应导致ATP生产。丙酮酸的命运是减少乳酸的胞质与净质子生产、酸化的媒介。质子泵出细胞的各种机制来维持细胞内的pH值(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),质子的流出到细胞周围的细胞外空间或介质引起细胞外酸化(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。主要的营养底物葡萄糖、谷氨酰胺和脂肪酸可以被完全氧化成有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba和HgydF4y2Ba_2gydF4y2BaO通过线粒体三羧酸循环(TCA)和相关OXPHOS。OXPHOS需要地方通过呼吸链,即复合物电流-电压,电子转移从柠檬酸NADH或FADHgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在线粒体内膜和终端电子受体、氧气(OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba)。更详细的电子传递链通过高能电子在泵内线粒体膜氢矩阵的空间,创造一个质子动力(Δp)与电气(Δ内膜gydF4y2BaΨgydF4y2Ba米)和化学(ΔpH)组件gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。创建的梯度驱动氢气通过细胞膜,通过ATP合酶夫妇OXPHOS ATP生产。的有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba生产可以转化成碳酸氢和质子所催化的碳酸酐酶(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),另一个质子引起介质的酸化。的OXPHOS过程ADP磷酸化在ATP的能源来自营养在有氧条件下的氧化。需要通过呼吸链的地方,名叫复合物在线粒体内膜电流-电压进行电子转移。gydF4y2Ba

虽然氧气的主要部分用于ATP合成(耦合呼吸),线粒体膜渗漏,通过膜质子可能泄漏,增加耗氧量(非耦合呼吸)。有三个泄漏事件:复杂我泄漏OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}第三对线粒体基质,而复杂的泄漏OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}对膜间隙和线粒体基质(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

我们假设再生的赤字老年人可能与增加OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产和线粒体的改变。为了验证这一点,主要成肌细胞分离出人类骨骼肌的年轻和老年健康受试者和测量未分化和分化细胞:(1)SOD活性和蛋白质含量,(2)线粒体OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产,在O(3)可变性gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产,(4)线粒体生物能学概要文件。本研究的数据表明,在老年人主要的成肌细胞,代谢机制可能无法正常工作。老年成肌细胞的生物能量学概要的分析似乎表明缺陷线粒体功能和代谢可塑性对年轻人不同。虽然老年人和年轻肌管显示类似的氧化代谢,令人惊讶的是老年肌管,我们发现增加水平的线粒体超氧化物阴离子更加依赖糖酵解过程。总的来说,这些发现表明糖酵解补偿针对线粒体氧化损伤。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。肌肉样品gydF4y2Ba

从股外侧肌肌肉活检获得来自13个男性健康未经训练的受试者自愿参加这项研究。基于年龄、受试者分为两组:gydF4y2Ba(1)gydF4y2Ba年轻的学科,27.8±6岁(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(2)gydF4y2Ba老年人,72.4±6.5岁(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba

活检是以下描述的过程在彼得兰杰洛et al。gydF4y2Ba23gydF4y2Ba)和治疗收集卫星细胞数量如前所述Fulle et al。gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。之前所有受试者提供书面知情同意参与这项研究。研究根据赫尔辛基宣言》(2000年修订),并经伦理委员会批准的“G。邓南遮“Chieti-Pescara大学意大利(PROT 1233/06, 1634/08, 1884/09 COET)。入选标准是正常心电图和血压,没有新陈代谢,心血管疾病,慢性骨或关节,肌肉疾病。排除标准是存在的代谢和/或心血管疾病、遗传性或获得肌肉疾病的证据,或呼吸道或精神疾病的诊断。无标题下用睾酮或其他药理干预或治疗培训协议影响骨骼肌。所有受试者白人和非吸烟者。他们提出BMI(身体质量指数)和%调频(脂肪)值,并没有统计上的不同(BMI: 24.2±1.5, 27.6±1.7,年轻人和老年人,分别地;%调频23.0±2.1,26.3±2.1年轻和老年人,职责)。gydF4y2Ba

2.2。卫星细胞群gydF4y2Ba

获得的卫星细胞,扩大成肌细胞在生长介质,和分化如前所述gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。短暂,百分比的肌原性细胞培养使用免疫细胞化学测定,获得与标记肌间线蛋白和生物素化的streptavidin-AP工具包(Dako真正™探测系统过氧化物酶/轻拍+,兔子/鼠标;猫。K5001数量;DAKO、DakoCytomation斯特鲁普)[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。肌间线蛋白是一种细胞骨架中间丝蛋白表达早期肌原性的人群(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。分化细胞的数量取决于计算核的数量在肌管分化,7天后的总数百分比对核,与这两个值之间的比例(gydF4y2Ba )给融合指数。我们只考虑积极的肌管主要抗体肌球蛋白重链(MHC),使用MF20 anti-MHC单克隆抗体(稀释1:50;杂种细胞发育研究银行,爱荷华大学爱荷华市,IA,美国),包含三个或更多核(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.3。Fluorescence-Activated细胞分类gydF4y2Ba

肌原性的前体表达CD56和5.1 h11被fluorescence-activated孤立的细胞分类(流式细胞仪)FACSAria III (BD)中描述迪菲利波等。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。主要的抗体用于这项技术特定人类肌母细胞靶向细胞表面蛋白,h11 CD56和5.1。这些人类CD56gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba/ 5.1 h11gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba取代在培养皿、培养细胞生长或分化中进行进一步分析。gydF4y2Ba

2.4。CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}成像和Videomicroscopy实验gydF4y2Ba

镀Videomicroscopy实验是进行细胞特殊的96孔板的底部在10000细胞的融合/厘米gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba。加载过程之前所描述的迪菲利波等。gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。注册后的基线,40毫米氯化钾是添加到细胞和注册继续(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。活细胞,含有Fura-2、顺序兴奋在340或380海里高速波长切换器多彩的II(直到光子学,德国)。使用40 x荧光图像采集石油物镜,获得使用一个加剧CCD相机(滨松光子学、滨松、日本),存储在一个电脑,离线分析。每个荧光发射的收集时间是0.5秒。已经考虑比率荧光(340/380 nm)信号选择代表减法后的细胞区域背景荧光。gydF4y2Ba

2.5。蛋白质的分离和定量gydF4y2Ba

抗氧化剂酶化验和西方墨点法进行使用成肌细胞和肌小管细胞溶解在缓冲区里帕(R0278数量,Sigma-Aldrich),补充1:100蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(P8340数量,Sigma-Aldrich),孵化1小时在4°C,在10000转离心10分钟4°C。胞质蛋白浓度测定得到的上层清液根据布拉德福德的方法(布拉德福德试剂、数字B6916 Sigma-Aldrich)。gydF4y2Ba

2.6。过氧化物酶活性gydF4y2Ba

超氧化物歧化酶(SOD)活性测定使用便和费舍尔的修改方法gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。最后分析卷(1毫升)包含20毫米NagydF4y2Ba_2gydF4y2Ba有限公司gydF4y2Ba_3gydF4y2BapH值10 10 mM细胞色素c (C7752数量,西格玛奥德里奇),和1毫米黄嘌呤(X0626数量,Sigma-Aldrich)和黄嘌呤氧化酶(X4500集成,Sigma-Aldrich)。随着黄嘌呤氧化酶活性的变化,用于测定量足以刺激细胞色素c还原在550海里的速度每分钟0.025没有草皮。SOD单位计算的基础上,定义一个单位代表抑制细胞色素c的活动减少了50%。gydF4y2Ba

2.7。西方墨点法gydF4y2Ba

西方墨点法(WB)分析进行40gydF4y2BaμgydF4y2Bag溶解产物从老少成肌细胞和肌管,使用SOD1(71年八国集团)鼠标马伯(4266号、细胞信号技术,丹弗斯,妈,美国)在1:1000年,SOD2 (D9V9C)兔马伯(13194号、细胞信号技术)1:1000,gydF4y2BaβgydF4y2Ba肌动蛋白(8 h10d10)鼠标马伯(3700号、细胞信号技术)1:1000年,作为主要抗体,抗体和二级HRP-conjugated(细胞信号技术)1:5000。乐队被检测到,照片Bio-Rad GelDoc由LiteAblot +增强chemiluminiscent衬底(EuroClone);与ImageJ微密度分析软件。gydF4y2Ba

2.8。测量线粒体超氧化物阴离子的生产gydF4y2Ba

过氧化物生产测量使用指示器MitoSOX红(美国热费希尔科学M36008数量)根据制造商的指示。卫星细胞被培养成肌细胞和肌管。在实验之前,一些文化与200年接受治疗gydF4y2BaμgydF4y2BaM n -乙酰半胱氨酸(NAC) 24小时或NES包含10毫米葡萄糖+ 5毫米丙酮酸钠(破裂)的解决方案,如急性刺激和15分钟和2小时。这些细胞被装满5gydF4y2BaμgydF4y2BaM MitoSOX孵化10分钟37°C在文化媒体和洗两次正常外部解决方案(NES,包含在mM: 140氯化钠,氯化钾的2.8,2 CaClgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba2 MgClgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba10葡萄糖10 N-2-hydroxyethylpiperazine-NgydF4y2Ba2-ethanesulfonic酸-(玫瑰)氢氧化钠,pH值7.3)。在测量时,样品收到南京或破裂预处理在NES + 200gydF4y2BaμgydF4y2Ba米南汽或破裂的解决方案。在512×512像素图像获得使用LSM 510元系统(蔡司,耶拿,德国)配备一个Axiovert 200倒置显微镜和一个计划Neofluar油浸物镜(40 x / 1.3 NA),他们用绿色伪彩色。在一个典型的时间序列记录,收集14帧的帧率0.1赫兹。MitoSOX荧光被兴奋的收购在543 nm和收集排放使用560 nm LP滤波器组。图像分析是由LSM 3.0软件(蔡司)。对于每一个样本,荧光图像获得从五个随机选择的字段和离线ROI-representing细胞区域的强度进行了分析,在时间流逝实验选择roi内明显的线粒体。所有实验在室温下进行(22日至26日进行的°C)。gydF4y2Ba

2.9。海马XF细胞水压力测试gydF4y2Ba

XF细胞水压力测试是用来测量耗氧速率(OCR)的成肌细胞和肌管使用海马XFp细胞外流量分析仪(编号102745 - 100,海马生物科学、圣克拉拉,加利福尼亚州)。这种技术使用特定的线粒体抑制剂使六个参数的确定描述关键的方面的线粒体功能:基底OCR, ATP-linked OCR,呼吸产能闲置(SRC),最大呼吸能力,质子漏,nonmitochondrial呼吸。细胞外通量技术使快速、实时检测细胞呼吸的代谢变化和糖酵解速率。细胞被播种在XFp 8-well细胞培养miniplate(海马生物科学)在三个复制25×10gydF4y2Ba^4gydF4y2Ba/ 100年密度gydF4y2BaμgydF4y2Bal生长介质和孵化24小时37°C, 5%的公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba。细胞水的性能压力测试之前,一些文化收到了200年gydF4y2BaμgydF4y2BaM NAC治疗24小时。简而言之,成肌细胞和肌管孵化45分钟37°C的环境有限公司gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在free-buffered DMEM(编号102353 - 100,海马生物科学、圣克拉拉,加利福尼亚州)(gydF4y2Ba 包含1.0毫米)丙酮酸钠(S8636数量,Sigma-Aldrich),葡萄糖10毫米,2毫米谷氨酰胺(G8540数量,Sigma-Aldrich)。基线的耗氧量(基底OCR)率和参数计算后的每种药物测定3次3分钟相互间隔3分钟(18分钟总)。基线后,1.6gydF4y2BaμgydF4y2BaM寡霉素(O4876数量,Sigma-Aldrich)、ATP合酶抑制剂,是注入每个好,其次是3周期3分钟和3分钟测量混合。然后,0.5gydF4y2BaμgydF4y2BaM的羰基氰化物gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba(4)- trifluoromethoxy苯腙(FCCP C2920数量,Sigma-Aldrich)注入解开了线粒体内膜和测量最大呼吸(最大OCR =最大电子通量通过电子传递链)。最后,1gydF4y2BaμgydF4y2BaM抗霉素A (A8674数量,Sigma-Aldrich)注入抑制电子通量通过复杂的三世和测量nonmitochondrial OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba消费。在每个实验,细胞细胞溶解定总蛋白质含量(BCA试验)。线粒体OCR被称为gydF4y2BaμgydF4y2Bag细胞总蛋白质和报告为pmol·分钟gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}·gydF4y2BaμgydF4y2BaggydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}。gydF4y2Ba

2.10。海马XF糖酵解压力测试gydF4y2Ba

为了量化糖酵解作用的变化,糖酵解进行压力测试。它测量细胞外酸化率(ECAR,定义为质子的速度变化从细胞排泄),它反映了糖酵解。这是在相似的条件下进行线粒体压力测试有一些差异。分析媒体中不含葡萄糖或丙酮酸但补充谷氨酰胺和2毫米。测量后的基底ECAR,细胞进入糖酵解与10毫米的注射葡萄糖。然后,1gydF4y2BaμgydF4y2BaM寡霉素注射抑制OXPHOS,进一步转变能源生产糖酵解;随之而来的增加ECAR将揭示细胞糖酵解能力最大。最后,50 mM 2-deoxy-glucose (2 dg D6134数量,Sigma-Aldrich)添加;这种化合物是一种葡萄糖模拟,通过竞争结合葡萄糖己糖激酶抑制糖酵解。ECAR确认ECAR下降是由于糖酵解产生的实验。ECAR被称为gydF4y2BaμgydF4y2Bag细胞总蛋白质和报告为英里·分钟gydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}·gydF4y2BaμgydF4y2BaggydF4y2Ba^{−1gydF4y2Ba}。gydF4y2Ba

2.11。统计分析gydF4y2Ba

海马的海马XF仪器控制软件生成的数据文件。数据处理,海马波软件(版本tripwire)使用。OCR和ECAR数据的分析也进行了使用XF压力测试报告生成器(3.0.6版)。图和统计分析生成的帮助下GraphPad Prism 5.0版(美国拉霍亚GraphPad软件)。结果给出了gydF4y2Ba 错误(SEM)或代表的痕迹。进行了统计分析使用gydF4y2Ba测试(gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。分析线粒体碎片一直是使用Bonferroni执行多重比较的测试。意义已被纳入gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。人类成肌细胞和肌管的特性和功能gydF4y2Ba

人类从肌肉活检被孤立成肌细胞,扩大在文化、和特点是肌原性的纯洁,计算细胞的数量表达肌间线蛋白(肌间线蛋白/ %gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞);融合的能力,计算融合指数(FI)百分比,%的未溶化的肌间线蛋白/gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞;文化和人口翻倍水平的25天。在表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba总结的肌原性的纯洁和FI百分比结果年轻和年老的细胞培养。有趣的是,即使(肌间线蛋白/肌原性的细胞的数量gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞%)与供体的年龄没有显著变化,融合指数显著降低主要人类老年成肌细胞分化为7天(分别地。,在老年人年轻的48.2%和24.3%)。此外,正如我们之前报道gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba),我们观察到叛逃再生过程,因为从老人样本肌管在数量和薄小,只包含几个myonuclei(数据没有显示)。此外,的比例未溶化的肌间线蛋白/gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}的分化细胞计算后7天随着年龄的增加(在老年人从年轻的32.6%和66.8%),而成肌细胞的增殖率(PDL) 25天的文化明显减少。gydF4y2Ba

此外,我们的实验中,我们使用肌原性的两个特定表面标记前体排序:h11 CD56和5.1。CD56人类卫星细胞表达的是一个表面标记原位或在离解(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。5.1 h11特定人类成肌细胞和肌管标记(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。可以看到,年轻和年老的样本,肌间线蛋白的百分比/gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞(67.5±4.6,70.3±8.7,resp)和CD56 /gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}/ 5.1 h11 /gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞70.1±5.6,68.4±4.3,resp)没有明显不同,确认一个好的肌原性的文化和特征的选择标记的有效性。gydF4y2Ba

表总结了特征参数获得年轻和年长的样本。的百分比(肌间线蛋白/肌原性的细胞gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞%)显示为年轻人和老年人文化和分析肌间线蛋白的表达。验证肌间线蛋白的表达是否足够的和充分的肌原性的纯度指数,我们进一步按流式细胞仪两个表面的主要成肌细胞肌原性的标记(CD56和5.1 h11)。融合指数由计数的细胞核分化肌管(MyHC积极)7天后文化在分化培养基和报告细胞核总数的比例;此外,未溶化的desmin-positive细胞数经过7天的分化。人口翻番水平计算在25天的文化是用来评估细胞增殖的能力。疣状和FI数据来自至少1000个细胞数至少在10个不同的随机选择光学领域的每种文化。所有数据(gydF4y2Ba 年轻的时候;gydF4y2Ba 老)了gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

验证功能的主要成肌细胞和肌管用于我们的实验中,我们评估了在去极化反应能力由于添加氯化钾Ca通过生成特征gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}瞬变。在这里,我们评估了KCl-induced CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}海拔在Fura-2-loaded年轻和老人使用单个细胞成肌细胞和肌管(gydF4y2Ba 年轻,gydF4y2Ba 上了年纪的成肌细胞;gydF4y2Ba 年轻,gydF4y2Ba 上了年纪的肌管经过6天的分化;和gydF4y2Ba 年轻,gydF4y2Ba 老年人肌管9天后的区别)。在图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba报告代表胞质Ca的痕迹gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}瞬变的和6 -之一已分化细胞的未分化细胞。氯化钾40毫米胞质钙瞬变上升引起的gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}水平肌管但并不像预期的那样在成肌细胞(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。此外,6天的分化还不够老肌小管功能齐全的因为没有胞质CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}观察上升后氯化钾(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。最后,这个CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}上升在老年后肌管不太突出的区别(图9天gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba)和一个未完成的响应延迟回到基线,相反在年轻肌管。gydF4y2Ba

3.2。SOD抗氧化剂酶活性gydF4y2Ba

我们测量抗氧化酶的活性的胞质同种型SOD1在细胞溶解产物获得成肌细胞和肌管从年轻的和年长的捐助者。没有发现差异比较年轻和老肌母细胞或年轻和老肌管。SOD1活动显著增加观察比较成肌细胞和肌管年轻和年老的条件(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

3.3。SOD1和SOD2的蛋白表达gydF4y2Ba

我们杰出的两种不同形式的细胞内SOD, SOD1 SOD2,分别胞质和线粒体蛋白质。蛋白表达是决定年轻和年老的样品用免疫印迹(图成肌细胞和肌管gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。我们观察到显著降低老年SOD2的成肌细胞对年轻人(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。代表SOD1和SOD2乐队获得的成肌细胞和肌管如图gydF4y2Ba2 (e)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2 (f)gydF4y2Ba,分别。gydF4y2Ba

3.4。线粒体超氧化物阴离子量化与MitoSOX红色gydF4y2Ba

我们研究了O的生产gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}活细胞的线粒体使用MitoSOX红色指示器。我们首先确定图像的平均荧光强度(MFI)在未经处理的控制条件的基础条件在时间为零的时间序列记录(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),我们发现,在老年成肌细胞的荧光相比明显高于其他样品(gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

此外,肌母细胞(图gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba)或肌管(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)的年轻人和老年人比较啊gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}与200年生产的时候治疗24小时gydF4y2BaμgydF4y2BaM的抗氧化剂NAC或2小时高葡萄糖、丙酮酸钠溶液破裂的增加线粒体超氧化物。gydF4y2Ba

老年成肌细胞在控制条件下表现出显著降低小额信贷机构相比,年轻的(图样本gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba;年轻的gydF4y2Ba 、老人gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。200年的预处理gydF4y2BaμgydF4y2BaNAC(年轻gydF4y2Ba 、老人gydF4y2Ba )和破裂(年轻gydF4y2Ba 、老人gydF4y2Ba )统计增加了啊gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产在老年人对年轻人(gydF4y2Ba 在南汽条件和gydF4y2Ba 在破裂条件)。在肌管(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba),有统计上显著的增加意味着荧光强度在老年人对年轻人样本为所有实验条件(CTRL的年轻人gydF4y2Ba ,老年人CTRLgydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ;年轻的南汽gydF4y2Ba 老南汽gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ;和年轻的破裂gydF4y2Ba ,老年破裂gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba )。MFI的成肌细胞(c)和肌管(d)相比,控制和南汽样本条件。年轻的成肌细胞和肌管在南汽条件显示显著降低小额信贷机构相比,控制条件(gydF4y2Ba )。老年肌管的NAC暴露导致显著增加MFI与控制条件(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

3.5。超氧化物阴离子变异系数gydF4y2Ba

在执行我们的MitoSOX分析的同时,我们也获得短视频录制14帧的每3.5秒(约50秒)MitoSOX信号。我们年轻和老人的MFI画出主要成肌细胞和时间(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)观察样品跟踪的形象大相径庭。量化这一观察,我们使用变异系数(CV),因为它是一个测量频率分布的分散。这个分析myoblast-nontreated样本显示,在老年人中,OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}简历在统计学上显著增加与年轻(面板b,gydF4y2Ba )。相反,老年人肌管显示显著减少这个参数对年轻(面板d,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

3.6。线粒体生物能学gydF4y2Ba

年轻人和老人样本(肌母细胞或肌管)在未经处理的控制条件和化验NAC治疗后24小时(数字gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)。(图在控制条件gydF4y2Ba6gydF4y2Ba),OCR参数在老年人和年轻呈下降趋势。然而,只有nonmitochondrial呼吸显著低于老年人(gydF4y2Ba )。关于ECAR概要,细胞外的糖酵解参数是衡量酸化后达成的细胞的饱和量的葡萄糖。我们发现糖酵解显著低于老年人相比,年轻的(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

南汽后曝光(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),老年人和年轻人之间的差异成为最显著的OCR参数,如基底呼吸,呼吸产能,最大呼吸能力(gydF4y2Ba ),这表明NAC更有效地清除ROS年轻的老人。糖酵解参数,获得由ECAR概要,被发现显著降低与年轻人相比,老年人肌母细胞(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

其他糖酵解参数(糖酵解能力、糖酵解储备和nonglycolytic酸化,图中未显示)并没有统计上的不同比较年轻和年长的成肌细胞。gydF4y2Ba

经过7天的分化(图gydF4y2Ba8gydF4y2Ba),我们没有观察到在统计上有显著差异的OCR样本参数的控制条件。令人惊讶的是,糖酵解显著高于老年肌管相比,年轻的(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

NAC治疗后(图gydF4y2Ba9gydF4y2Ba),备用呼吸能力和nonmitochondrial呼吸明显下降(gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 、职责)在老年人和年轻人,表明抗氧化剂的清除活动可能更可观的年轻人比老年人。NAC曝光后,糖酵解的价值并没有改变比较年轻和年长的肌管。gydF4y2Ba

同样为成肌细胞获得的价值观,也在肌管其他糖酵解参数(糖酵解能力、糖酵解储备和nonglycolytic酸化,图中未显示)并没有统计上的不同比较年轻和老人。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

老化是特点是增加氧化应激与ROS生产之间的不平衡,特别是OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}和食腐动物活动的抗氧化酶(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。这改变了氧化管理也反映在骨骼肌的再生能力的老年人,这显示了一个障碍主要myoblast-differentiating过程中负责再生(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。的表征主要成肌细胞的数量显示在老年人中再生能力对年轻人少,证明了较慢的增殖分化率和困难(FI和增加% %降低未溶化的肌间线蛋白/gydF4y2Ba^{ve +gydF4y2Ba}细胞)。困难的功能分化,以前我们已经证明(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba),证实了在去极化刺激响应(40毫米氯化钾)老年人的肌管,它还没有完成和延迟回到基线(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}激进的,我们已经证明是高老年人的整体成肌细胞(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba),可能因此表示,如果没有充分的对比,一个潜在的有害的代理。另一方面,瞬态增加OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba},容易降低清道夫酶,似乎新陈代谢持续的正相关,在正常有丝分裂过程中发生或在早期阶段的再生(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba),而随后的停电可能会加速肌肉分化(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。相反,其长期存在,由于贫穷或抗氧化活性不足,可能导致伤害和损害分化过程。gydF4y2Ba

在这项研究中,我们分析了SOD1的活动,指出分化过程本身SOD1活动独立于供体年龄的增加(图gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)。另一方面,我们有强调的基础水平更高gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}在老年成肌细胞的线粒体(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),与SOD2的低表达。这些数据让我们假设最高OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平在整个成肌细胞可能是由于线粒体生产不够SOD2对比(数据gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba与gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba对分化),从而防止其关闸有用。与此一致的是,其他研究显示,一个完整的分化过程只发生在年轻的样品,虽然受损在老年的gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。意想不到的高线粒体OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平发现可以解释年轻的成肌细胞的考虑,他们的特点是增加扩散率(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)一起高耗氧率对老年人的(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba),正如我们在本研究通过生物能学分析(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。相反,较低的OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平发现年轻肌管相比,可以合理的成肌细胞SOD活性的增加以及缺乏增殖率的影响,我们正在考虑分化表型。gydF4y2Ba

作为抗氧化剂,氧化剂代理可以影响OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产,从而激活了SOD酶的清除,我们刺激肌母细胞和肌管与南汽和破裂的解决方案,分别。gydF4y2Ba

老年成肌细胞和肌管(数字gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)没有显示低OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平NAC治疗后,而年轻的成肌细胞和肌管妥善回应NAC暴露显著降低生产OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}(gydF4y2Ba )。这些结果表明,首先,增加OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产可能与比例增加SOD无关,第二,仅仅在样本年轻捐赠者也许NAC能促进细胞健康和生存能力,因为老年细胞甚至显示明显高于OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平的NAC比控制条件(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

在岁的肌肉gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)以及主要肌母细胞(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)、抗氧化损伤的机械已经证明。因此,当老年人主要成肌细胞是治疗高葡萄糖溶液(破裂),提高细胞新陈代谢,他们会控制不住地达到最高水平的OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产持续、治疗与抗氧化剂代理像南京一样,它充当谷胱甘肽前体(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba,gydF4y2Ba42gydF4y2Ba),可能不会明显影响老年人主要成肌细胞由于受损glutathione-dependent酶的活性和过氧化氢的累积gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。此外,短视频期间获得MitoSOX实验允许我们在O响应的变化进行调查gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产表示为变异系数(CV)的年轻人和老年人在控制条件下样品。简历被发现高老年成肌细胞对年轻的成肌细胞,而肌管观察一个相反的结果。我们可以认为增加O的变异性gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}生产老年成肌细胞可能是由于大量分散的频率分布OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}闪烁的,或者换句话说,我们可以想象,老年人线粒体产生OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}在一个缓慢而持续的方案对年轻的线粒体。在老年肌管,OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}闪烁的频率分布窄,显著降低对年轻人,可能因为这些比线粒体OXPHOS更加依赖糖酵解。gydF4y2Ba

ROS对生物分子不仅有不利影响,如DNA、蛋白质和脂质(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba),由于其积累也影响肌原性的再生几个阶段。具体来说,ROS增强NF -gydF4y2BaκgydF4y2Ba我转录factor-activatinggydF4y2BaκgydF4y2BaB激酶(IKK)磷酸化gydF4y2BaκgydF4y2Ba反过来上调NF - B抑制剂gydF4y2BaκgydF4y2BaB (gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。骨骼肌,转录因子的作用与激活的蛋白质降解途径(gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]。因此,我们可以认为高水平的OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}发现在我们年迈的肌管对年轻的(gydF4y2Ba )可能导致NF -的激活gydF4y2BaκgydF4y2BaB这反过来又可以促进细胞分解代谢。与此一致的是,我们之前和其他团体证明老人样本的upregulation FOXO1A,肌肉生长抑制素基因,和NF -gydF4y2BaκgydF4y2BaB蛋白表达,AKT1 / PIK3CA / MTOR差别一起对这些基因和phospho-Akt蛋白表达,可能导致萎缩性/分解代谢的通路的激活的合成代谢的最后抑制肌肉分化(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。总体而言,我们的数据与之前的研究结果,表明未能区分gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba和再生肌肉gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)可能与氧化损伤积累,受损的抗氧化活性,观察修复能力不足。所有上述事件发生在线粒体,短暂的视频MitoSOX实验进行主要来自年轻还是年迈的捐助者的成肌细胞是插在手稿(链接到电影gydF4y2Ba在这里gydF4y2Ba作为补充材料;年轻和年老的成肌细胞)来显示他们的相对线粒体动态的。gydF4y2Ba

此外,线粒体的功能进行深入研究,我们还分析了在我们的样品通过海马线粒体生物能学通量分析仪。这个乐器实时监测OXPHOS通过测量通过测量实时ECAR OCR和糖酵解。修改文献老化肌肉生物能疗法,许多研究表明显著减少活动的几个呼吸链复合物和活性氧产量大幅度增加,从而确认衰老的线粒体理论(gydF4y2Ba44gydF4y2Ba,gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]。测量的线粒体呼吸强劲的线粒体的功能生物能量学能力指标和整体细胞的健康。海马水压力测试使用的细胞呼吸调节器组件专门针对电子传递链的揭示代谢功能的关键参数。第一复合注入寡霉素抑制ATP合酶。第二个化合物是FCCP,解偶联剂permeabilizes内线粒体膜质子,部队线粒体增加电子的流动(因此耗氧量)保持膜电位。因此,电子流过等是常数和氧气是最大限度地使用复杂的IV。过去的药物注射抗霉素a,一个复杂的三世关闭线粒体呼吸抑制剂。参数从细胞线粒体功能试验给洞察线粒体功能的不同方面。gydF4y2Ba

在成肌细胞,我们观察到一个下降的趋势对于许多OCR参数当老年人和年轻的样本相比,尤其是考虑到nonmitochondrial呼吸(数字gydF4y2Ba6gydF4y2Ba(一)和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba(b))。备用呼吸和值得注意的是,较低的值最大呼吸能力,被认为是代谢塑性指标,表明受损线粒体质量或完整性gydF4y2Ba46gydF4y2Ba和老年人中有缺陷的线粒体样本。此外,我们发现,糖酵解速率显著低于老年人相比,年轻的样本(数据gydF4y2Ba6gydF4y2Ba(c)和gydF4y2Ba6gydF4y2Ba(d))。gydF4y2Ba

NAC曝光后,我们观察到基底呼吸,呼吸产能,最大呼吸能力,nonmitochondrial呼吸变得显著降低老年成肌细胞和年轻人(数字gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(一)和gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(b)),连同更明显降低糖酵解(数字gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(c)和gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(d))。强调过,NAC是完全有效的清除OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}由年轻肌母细胞(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba);因此,南京的独家活动年轻肌母细胞可能导致增加他们的生存能力的发生将会证明他们的改善线粒体的性能。相反,我们观察到没有未经处理的差异和NAC-treated老年成肌细胞的OCR参数,在协议可比OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平检测的条件(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba),可能由于部分受损抗氧化机制。这可能会导致我们看到的假设下OXPHOS肌母细胞糖酵解关联到一个整体减少可能导致更少的有氧glycolitic组件,离开也许是能源生产的作用几乎完全厌氧组件。gydF4y2Ba

这个假设将在最近的协议研究Paasuke et al。gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]从年轻人和老年人证明主要成肌细胞成肌细胞的增殖gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba(从段落2到6,模拟一个gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba衰老)的差别与对这些OXPHOS,老化gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(年轻和老年人)引起的代谢轮廓的改变有利于糖酵解途径。我们的结果与另一项最新研究表明协议还衰老成肌细胞显示出代谢转变,导致糖酵解酶在糖酵解(差别明显对这些gydF4y2Ba47gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

在肌管,我们发现了一个类似的趋势对于老年人的OCR参数与年轻献血者。肌原性的分化过程通常伴随着氧化代谢的增加从糖酵解转向OXPHOS,作为主要的能源需求发生(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba]。在我们的样品没有观察到这一现象,老年肌管有一个OXPHOS代谢趋势类似于年轻人,但显著增加糖酵解速率。这些发现可能意味着不同的老年人充满活力的可塑性肌小管对年轻人和能源需求的增加不能只有OXPHOS新陈代谢但需要增加糖酵解过程也许因为他们的线粒体机是亚临界受损。因此,Korolchuk衰老细胞和合作者表明,ATP的分数由OXPHOS减少,而相对更ATP是无氧糖酵解产生的代偿反应线粒体功能障碍。此外,线粒体功能障碍的早期发生在诱导细胞衰老会引发许多不同的细胞反应和信号通路以及还原能力应对高峰能源需求(gydF4y2Ba49gydF4y2Ba]。同样,成肌细胞,NAC治疗透露真正的差异的一些衡量线粒体参数(如备用呼吸能力和nonmitochondrial呼吸)之间的老年人和年轻肌管,证实了假设的抗氧化行为通过改善整个生理健康年轻的细胞。gydF4y2Ba

5。结论gydF4y2Ba

衰老过程产生增加线粒体OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}水平,对比SOD2的适量和回收由南汽或破裂压力。增殖状态显示较慢的代谢特点是少OXPHOS和糖酵解,可能损害的有氧糖酵解组件。gydF4y2Ba

代谢破裂由于分化导致的发病明显增加糖酵解不发生在年轻的肌管。这个结果表明,老年人OXPHOS肌管可能不是一样有效地生产ATP在年轻肌管。增加糖酵解率观察老年肌管可能会因此认为作为代偿机制的一部分安装的老化细胞的突然增加的能源需求和缺乏额外OXPHOS支持。gydF4y2Ba

在本研究收集的数据使我们得出这样的结论:老年人代谢可塑性可能减少由于氧化应激引起的线粒体功能受损。进一步研究线粒体复合物的表达和活动对成肌细胞肌管可以为未来奠定基础调查的详细原因在老化受损的肌肉再生。gydF4y2Ba

缩写gydF4y2Ba

ROS:gydF4y2Ba	活性氧gydF4y2Ba
氧气:gydF4y2Ba	超氧化物阴离子gydF4y2Ba
SOD:gydF4y2Ba	超氧化物歧化酶gydF4y2Ba
OXPHOS:gydF4y2Ba	氧化磷酸化。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

相关的数据“老年样本肌管在数量和薄小,只包含几个myonuclei(数据未显示)”用于支持本研究的发现可以从相应的作者。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者宣称没有利益冲突有关的出版。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

这项工作是支持FIRB(批准号RBFR12BUMH, 2012),主要(批准号2010 r8jk2x_007, 2010 - 2011年),和(批准号从MIUR 2012 n8yjc3_003, 2012);“G。邓南遮“大学2016(批准)。作者感谢博士Vittore Verratti肌肉针活检。gydF4y2Ba

补充材料gydF4y2Ba

视频:在第一部分的视频中,A组包括年轻的成肌细胞控制样本显示线粒体动力学在一个简短的记录;在第二个,我们可以欣赏B组包括老年人的成肌细胞控制样本显示线粒体动力学在一个简短的记录。视频显示不同的线粒体动力学,减少活动老年人对年轻人样本,确认减少老年人的可塑性和新陈代谢。视频记录获得14帧每3.5秒(约50秒)。录音被压缩1:10 3.0蔡司LSM SP3软件。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba)gydF4y2Ba