文摘
脉管系统,NADPH氧化酶的主要贡献者是活性氧(ROS)在内皮细胞信号和功能发挥关键作用。我们证明ECV304细胞表达p47phox,p67phox,第22位phox子单元的NADPH氧化酶以及甲酰肽受体1和3 (FPR1/3), GPCR的家人。通过rt - pcr,我们也发现Flt-1 Flk-1 / KDR在这些细胞。刺激的FPR1 N-fMLP诱发p47phox磷酸化,关键事件NADPH oxidase-dependent过氧化物生产。转磷酸的rtk GPCRs是一个生物学的信息交换机制,通过放大整个细胞。ROS作为信号的中间体transactivation机制。我们表明,N-fMLP刺激诱导的胞质Y951的磷酸化,Y996, VEGFR2和Y1175残留物,构成信号分子的锚定地点。这些,反过来,PI3K / Akt激活和PLC -γ1 / PKC细胞内途径。FPR1-induced ROS生产起着至关重要的作用在这个相声机制。事实上,FPR1和/或NADPH氧化酶的抑制功能防止VEGFR2 transactivation和下游的触发信号级联。N-fMLP刺激也改善了细胞迁移和capillary-like网络形成的ECV304细胞能力。
1。介绍
血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2) / Flk-1 / KDR和VEGFR1 / Flt1受体酪氨酸激酶(RTK)的家人和绑定到血管内皮生长因子(VEGF)促进组织、迁移、增殖和血管内皮细胞结构的形成(ECs) [1]。在人类VEGFR2 Y951、Y1054 Y1059, Y1175,发现Y1214残留磷酸化网站(2,3)和Y801、Y996 Y1008残基参与了VEGFR2信号(4,5]。磷脂酶C的磷酸化Y1175残渣绑定γ(PLC -γ)[3),以及适配器分子Shb [6]和Sck [7),而磷酸化Y951残渣为VEGF介导绑定receptor-associated蛋白质(VRAP),也称为T特异性适配器(TSAd),这是电子商务的关键迁移体外和细胞肌动蛋白重组(2]。的磷酸化Y1214残渣VEGFR2代表一个适配器蛋白锚定网站Nck [8),而Y1224磷酸化的作用,Y1305, Y1309, Y1319残留在c端尾仍有待确定。
G protein-coupled受体(GPCRs)等离子体膜蛋白超家族,由几个配体激活。他们agonist-specific刺激诱发G蛋白分离,反过来,膜相关酶的激活,细胞内第二信使,或离子通道。人类甲酰肽受体1、2和3 (FPR1、FPR2 FPR3) GPCR家族的成员,都是与百日咳毒素- Gi (PTX)敏感蛋白(9- - - - - -11]。FPR1结合有效N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (N-fMLP),而FPR2实际上是由低浓度激活WKYMVm肽(12]。FPR1重要的生物功能和FPR2支持的高亲和性host-derived配体的发现。这两个受体表达在一些细胞类型(13,14],而FPR3不绑定到N-fMLP或WKYMVm,表示在单核细胞,树突状细胞(9- - - - - -11),和人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)主要文化15]。核细胞膜FPR2也表达了人类肺癌CaLu-6和人类胃腺癌AGS细胞系(16,17]。
最重要来源的活性氧ECs NADPH氧化酶,由胞质单元p47phox,p40phox,p67phox,小GTPase Rac1和膜相关蛋白的第22位phox和gp91phox。在一些细胞类型,玻璃钢刺激N-fMLP或WKYMVm诱发超氧化物生成由于MEK - PKC-dependent磷酸化调节亚基的p47phox,这在很大程度上阻止通过预孵化PTX [13,18- - - - - -20.]。NADPH oxidase-derived ROS作为细胞内第二信使通过激活几个氧化还原信号级联与VEGFR2自身磷酸化,EC迁移、血管生成,扩散21),而产后血管再生在活的有机体内(22]。然而,分子机制负责NADPH氧化酶激活和ROS在氧化还原信号与血管生成的功能尚不清楚。
尽管GPCRs缺乏内在的酪氨酸激酶活性,结合特定的配体可能诱发rtk的酪氨酸磷酸化。GPCRs agonist-dependent刺激可以提高rtk的信号活动,链接的充足的异质性GPCRs rtk的有效信号的能力。Transactivation GPCRs rtk的可能发生的不同的分子机制,其中包括激活metalloexopeptidases和metalloendopeptidases nonreceptor的参与与膜相关的酪氨酸激酶,或NADPH oxidase-dependent ROS生成(23]。在不同的细胞类型,FPR2刺激提示EGFR磷酸化的酪氨酸残基,提供锚定网站的招聘和激活细胞内信号通路(24),和HGF受体转磷酸,从而诱导分子反应的一部分由c-Met / HGF绑定(19]。ROS起到至关重要的作用在这些相声机制因为NADPH氧化酶的抑制函数阻止EGFR和c-Met transactivation [19,24]。
在这里,我们表明,ECV304细胞表达FPR1 Flk-1 / KDR, p47phox并通过N-fMLP FPR1刺激诱发NADPH oxidase-dependent ROS生成以及转磷酸胞质Y951, Y996, Y1175 VEGFR2的残留物。这些phosphotyrosines代表锚定网站的信号分子,反过来,PI3K / Akt激活和PLC -γ1 / PKC细胞内途径参与细胞连接和细胞迁移的ECs。此外,FPR1激活也改善了细胞迁移和capillary-like网络ECV304细胞的形成。
2。材料和方法
2.1。抗体和化学品
N-fMLP肽合成和HPLC-purified普里姆(意大利米兰)。sds - page试剂购自Bio-Rad(大力神、钙、美国)。蛋白质A / G +, anti-Flk1 anti-p-Flk1 (Tyr951) anti-p-Flk1 (Tyr996) anti-p-Flk1 (Tyr1175) anti-p-Flk1 (Tyr1214) anti-p-Tyr anti-p47phox,anti-p22phox,anti-p-PLCγ1 (Y783), anti-PLCγ1,anti-PKCα,anti-PKCβ二世,anti-PKCζ,anti-PKCδ、anti-tubulin anti-mouse, anti-rabbit圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯、钙、美国)。Anti-p-PI3K (p85)和anti-p-Akt (Ser473)从细胞信号技术(丹弗斯、马、美国)。Anti-p-Ser,第22位phox核(SI03078523),和小干扰rna (SI03650318)争夺控制试剂盒(希登,德国)。FPR1核(l - 005140 - 00)和争夺控制(d - 001810 - 10)从Dharmacon购买(美国拉斐特有限公司)。蛋白质A-horseradish过氧化物酶是从Amersham法玛西亚生物技术(小都,白金汉郡,英国)。百日咳毒素(PTX) apocynin,渥曼青霉素,LY294002σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。
2.2。RNA净化和rt - pcr分析
从ECV304细胞总RNA纯化试剂盒试剂(热费希尔科学)根据制造商的指示,和0.1μg的RNA逆转录实验被用作模板,如前所述[25]。引物序列旨在扩大人类编码区域和相对产品尺寸报告在表1。
2.3。细胞培养
ECV304细胞(写明ATCC®crl - 1998)得到从写明ATCC(罗克维尔市,医学博士,美国),生长在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)含10%胎牛血清的边后卫,100 U /毫升青霉素,100μ克/毫升链霉素。细胞被serum-starved 24小时,一旦他们达到了80%的融合,然后刺激0.1μ不同时期M N-fMLP肽,报告的数据。在其他的实验中,serum-starved细胞与100 ng / ml preincubated PTX 16小时,50μ0.5 M LY294002 1小时μ米渥曼青霉素1小时,或100年μ0.1 M apocynin 2小时,在刺激μM N-fMLP 5分钟。短RNA干扰实验进行酝酿4×105细胞为5 nM siRNAs 12小时,在DMEM包含10%的边后卫和20μl (HiPerFect(试剂盒,希登,德国)。细胞被serum-starved 24小时0.1和刺激μM N-fMLP 5分钟。ECV304细胞也孵化20 ng / ml VEGF,作为一个控制。
2.4。免疫印迹和免疫沉淀反应化验
ECV304细胞孵化与N-fMLP有或没有特定抑制剂如上所述。整个溶解产物纯化在缓冲区包含150更易/ l氯化钠,50更易与l Tris-HCl (pH值8.5),2更易与l EDTA, 1%v/vNP-40, 0.5%w/v脱氧胆酸盐、10 l更易与氟化钠、焦磷酸钠10毫米,2更易与l PMSF, 2μg / ml亮抑酶肽,2μg / ml抑肽酶(pH值7.4),如前所述[26]。溶菌产物在0°C孵化了15分钟,然后离心机在38000 g×15分钟在4°C。如前所述(执行净化膜蛋白19]。Bio-Rad蛋白质测定(美国Bio-Rad大力神,CA)是用于确定蛋白浓度。蛋白质是解决10% sds - page,如前所述的免疫印迹实验(24]。免疫沉淀反应实验由孵化等量的蛋白质与3μ克anti-p47phox或anti-Flk1抗体。蛋白表达或磷酸化检测到ECL化学发光试剂盒(Amersham法玛西亚生物技术)和可视化通过放射自显影法。微分析被用来量化蛋白质用发现法玛西亚扫描仪或磷酸化水平。
2.5。过氧化物生产试验
膜和胞质分数纯化从serum-starved ECV304细胞刺激为0.1μM N-fMLP时报》报道的数字。减少细胞色素c测量来确定NADPH-dependent过氧化物生成,如前所述[24]。简单地说,10μ克的膜蛋白和200年μg(胞质蛋白在PBS的孵化15μ米三磷酸鸟苷-γ- s, 100μM细胞色素c, 10μM时尚在最后一卷1毫升。过氧化物生产监控在550 nm,添加后的100年μM NADPH。细胞也孵化与200 U /毫升超氧化物歧化酶(SOD),控制特异性的细胞色素c还原。超氧化物阴离子生成测量的减少SOD-inhibitable ferricytochrome c。个人治疗而获得的值从growth-arrested ECV304细胞通过学生的t以及。
2.6。细胞迁移试验
ECV304细胞生长融合,如上所述,直到他们达到100%,伤口被抓在单层诱导不育80μ米直径的小费。细胞被孵化serum-deprived介质在37°C公司5%2,每12小时延时拍摄图片后36小时伤口一代使用徕卡AF6000模块化系统和加工使用徕卡LAS AF光软件。覆盖表面与ImageJ量化软件。
2.7。Capillary-Like网络形成
48-multiwell盘子被涂上一层150μL(基底膜基质(BD生物科学),然后允许聚合30分钟37°C,根据制造商的指示。1×105ECV304细胞,进行预处理或不是100 ng / ml PTX,镀在预镀井与血清DMEM 0.1的存在与否μM N-fMLP或20 ng / ml VEGF(美国Olivette黄金生物技术)16小时37°C。网络形成了徕卡AF6000模块化系统,和总使用ImageJ管长度测量软件。
2.8。统计分析
所有报道的数据表示为±SD和代表至少三个不相关的实验。统计分析被学生的评估t以及,他们被认为是最小值的意义 。所有与棱镜统计软件进行统计分析。
3所示。结果与讨论
3.1。ECV304细胞表达Flt-1 Flk-1 / KDR, NADPH氧化酶和功能性FPR1受体
ECV304细胞最初被描述为HUVEC-derived转化细胞系(27),但他们后来的特点,通过遗传关系,作为一个细胞系来源于人类膀胱癌T24细胞(28]。然而,尽管不是HUVEC的起源,ECs的ECV304细胞显示,许多特征(29日,30.)和现在的上皮和内皮功能(31日],许多只T24细胞(内皮标记,因此无法检测到30.]。因此,ECV304细胞似乎相关模型研究内皮细胞的分子机制,如信号转导、细胞迁移和capillary-like网络的形成。
在这些细胞中,我们发现,通过rt - pcr, Flt-1和Flk-1 / KDR的表达(图1(一)),但不是Flt-4,只在淋巴内皮细胞表达。两个VEGF受体也检测到免疫染色在ECV304细胞(32]。我们也分析了玻璃钢的表达,我们首次提供了证据表明FPR1和FPR3但不是FPR2(图1 (b)在ECV304细胞)表达。这也细胞系表达p47phox,p67phox,第22位phox子单元的NADPH氧化酶酶复杂(图1 (c))。人类成纤维细胞,刺激的玻璃钢N-fMLP诱发p47phox磷酸化,NADPH氧化酶激活所需的关键事件(13]。在ECV304细胞,FPR1功能受体;事实上,刺激为0.1μM N-fMLP触发时间p47磷酸化phox(图1 (d))由预培养完全抑制PTX(图1 (e))。此外,孵化与N-fMLP不同时期刺激NADPH oxidase-dependent过氧化物生产,最大的ROS代发生在6分钟(图1 (f))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
3.2。由N-fMLP FPR1刺激促进Flk-1 / KDR Transactivation
细胞VEGF-A对ECs的影响,如渗透率、迁移、生存、增殖,介导Flk-1 / KDR, VEGF-A绑定到第二个和第三个细胞外Ig-like域。这使得细胞内激酶域的正确位置,从而导致Flk-1 / KDR自身磷酸化(33]。
相声GPCRs和rtk之间调节下游信号通路参与哺乳动物细胞的许多生理功能(19,23,24,34]。因此,我们分析了Flk-1 / KDR transactivation FPR1在ECV304细胞,在免疫印迹实验,我们发现孵化为0.1μM N-fMLP增加Flk-1 / KDR酪氨酸磷酸化在时间的方式(图2(一个))。VEGFR2 ECs的主要信号传感器,在人类Flk-1 / KDR胞内域,多个发现酪氨酸残基磷酸化网站,包括Y801 Y951, Y996, Y1008, Y1054, Y1059, Y1175, Y1214 [2- - - - - -4]。FPR1受体激动剂触发Y951的磷酸化,Y996, Y1175残留Flk-1 / KDR在第一个5分钟(图2 (b)),这是完全由preincubating抑制ECV304细胞PTX N-fMLP之前曝光(图2 (c))。显著减少Y951的磷酸化水平,Y996, Y1175残留时观察到的细胞preincubated siRNAs反对FPR1 N-fMLP治疗前(图2 (d)),这表明VEGFR2转磷酸是由FPR1介导的。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.3。Flk-1 / KDR Transactivation取决于NADPH Oxidase-Dependent ROS生成
活性氧的主要来源在动脉壁和ECs NADPH氧化酶(35),可以由几个刺激包括GPCR激活受体激动剂(23,36]。在nonphagocytic细胞NADPH氧化酶表达取决于周围的细胞类型和条件和产生ROS在低水平(21,23],它可以作为信号分子的可逆氧化/还原半胱氨酸位于蛋白质酪氨酸磷酸酶的催化部位(中)19,21,37,38]。活性氧可以扮演一个角色在RTK转磷酸通过防止PTPase行动,进而改变了RTK从nonphosphorylated磷酸化状态。中,如LMW-PTP (HCPTPA) SHP-1,和SHP-2 Flk-1 / KDR在VEGF刺激[39,40]。我们preincubated ECV304细胞apocynin(图3(一个)),特别是抑制NADPH氧化酶,或者用siRNA第22位phox(图3 (b)膜相关NADPH氧化酶的),一个重要的组件,我们注意到FPR1-induced Y951转磷酸,Y996, Y1175残留Flk-1 / KDR阻止逮捕NADPH氧化酶的功能(数据3(一个)和3 (b))。这些结果说明FPR1-mediated过氧化物生成feed FPR1之间的串音和Flk-1 / KDR。
(一)
(b)
3.4。FPR1-Induced Flk-1 / KDR Transactivation触发PI3K / Akt通路
磷酸化酪氨酸残基Flk-1 / KDR代表锚定网站对于触发细胞内途径的信号分子,这反过来,激活生物反应,如细胞增殖和迁移41]。在人类VEGFR2,几个phospho-tyrosines已确定(1- - - - - -4)到目前为止Y951 Y996、Y1054 Y1059, Y1175, Y1214,激酶插入域,激酶结构域,在VEGFR2 c端尾的,被定义为主要的自身磷酸化网站(42]。Y1175磷酸化,在pYIVL序列,提供了一个对接网站几个信号分子,包括PLC -γ(3)和适配器蛋白质Sck (7]和Shb [6]。Shb含有SH2和PTB域四个假定酪氨酸磷酸化位点,脯氨酸n端主题(6]。的Shb结合phospho-tyrosine Y1175 VEGFR2,导致其Src-dependent磷酸化(6]。Shb-dependent绑定到Y1175残渣PI3K的反应是很重要的,但目前还不清楚如何追求这种效果。SH3 PI3K域(p85)可以在脯氨酸的水平与Shb主题;否则,效果可能是由粘着斑激酶(FAK),这是参与细胞吸附和迁移(43]。沉默的Shb小核RNA)导致逮捕PI3K的激活。
VEGFR2激酶的磷酸化Y951残渣插入域绑定到TSAd相当于Rlk Itk-binding蛋白质(RIBP), Lck适配器(小伙子),和VRAP44]。Y951-mediated绑定VEGFR2和TSAd之间起着至关重要的作用在细胞迁移的ECs和VEGF-induced肌动蛋白重组。事实上,定点诱变Y951 Flk1 / KDR F951,或沉默的siRNA VRAP / TSAd表达式,可以防止VEGFA-mediated迁移(2]。刺激rtk通常由诱导激活PI3K磷酸化的酪氨酸残基在一个YXXM图案,代表一个锚定站点的SH2域p85 PI3K的调节亚基。绑定的PI3K YXXM主题介导Akt激活。磷酸化的酪氨酸残基被TSAd介导,而激活Src的家人激酶(45,46]。Flk-1 / KDR没有pYXXM主题发现的SH2域p85亚基(47];然而,PI3K的p85亚基的结合位点是本地化的Gab1适配器蛋白质,也结合VEGFR2,虽然确切的受体结合位点是未知的(48,49]。
ECs, VEGFA-induced细胞生存取决于Flk-1 / KDR和随之而来的PI3K和Akt激活,导致A1和bcl - 2表达50]。我们分析了PI3K激活N-fMLP-stimulated ECV3014细胞,在免疫印迹实验中,我们发现,N-fMLP刺激PI3K (p85)磷酸化在时间的方式(图4(一))。这是预防初加工EVC304细胞PTX或apocynin(图4 (b)),这表明PI3K (p85)磷酸化取决于PTX-sensible GPCR和NADPH oxidase-dependent生成过氧化物。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
激活PI3K和生产的磷脂酰肌醇(3、4、5)联结(PIP3)导致随之而来的一种蛋白激酶的激活的基因和PDK2,这使磷酸化Akt T308 S473残留物,分别。我们分析了一种蛋白激酶磷酸化在FPR1-stimulated ECV304细胞,我们观察到N-fMLP诱发一种蛋白激酶(S473)磷酸化在相同时间间隔的PI3K (p85)磷酸化(图4 (c))。Akt (S473)磷酸化是防止预培养的ECV304细胞选择性PI3K抑制剂(图4 (d)与PTX),以及,块FPR1-bound G我蛋白质的活性形式,或与apocynin(图4 (e))。FPR1的关键作用和NADPH氧化酶Akt的支持(Ser473)磷酸化发现预孵化siRNAs反对FPR1(图4 (f)对第22位)或phox(图4 (g))N-fMLP治疗前导致一种蛋白激酶的磷酸化水平大幅度降低。
3.5。FPR1-Mediated磷酸化的Y1175残留提供了PLC -停靠点γ1激活
的磷酸化Y1175残渣Flk-1 / PLC - KDR代表一个结合位点γ1 (3)和其他适配器蛋白质(6,7]。PLC -γ1是磷酸化及其催化活性增强的结果绑定到pY1175。PLC -γ在血管生成中扮演着关键角色,通过PLC -的观察γ1-deficient小鼠胚胎死在近E9.0大大降低红细胞生成和血管生成51,52)的突变小鼠Y1173(人类Y1175)负责胚胎死亡率e8.5 - 9.5,由于异常造血和内皮细胞53]。此外,在斑马鱼、PLC -γ1是动脉发展所需,通过观察斑马鱼胚胎缺乏PLC -γ1不响应VEGF [54]。这些结果支持了这样的观点,即信号从pY1175 VEGFR2 PLC -γ/ PKC途径对血管发生在胚胎发生至关重要。
四个activation-induced酪氨酸磷酸化位点(Y472, Y771 Y783, Y1254)描述了在PLC -γ1 (55]。在时间进程的实验中,我们观察到N-fMLP诱发PLC -γ1激活Y783残留最高水平的磷酸化发生2分钟(图5(一个))。预培养的ECV304细胞与PTX或apocynin防止PLC -γ1 (Y783)磷酸化(图5 (b)),这表明PLC -γ1激活取决于FPR1刺激和NADPH oxidase-dependent ROS生成。
(一)
(b)
(c)
PLC -γ1催化的水解磷脂酰肌醇(4、5)酮糖(PIP2),导致生产甘油二酯(DAG)和肌醇1,4,5-trisphosphate (IP3)。IP3触发从内质网释放钙离子,因此,其细胞内的浓度的增加,而DAG激活蛋白激酶C (PKC)。PKC的同功酶PKCα,PKCβ,PKCζ是涉及VEGF-mediated信号(41,56]。在N-fMLP-stimulated ECV304细胞,我们调查了激活PKC同功酶分析膜易位。我们观察到在应对FPR1受体激动剂,PKCα,PKCβΙΙ,PKCζ把膜和大幅增加的数量在2分钟内被发现N-fMLP治疗。另一方面,我们没有观察PKCδ易位(图5 (c))。
3.6。由N-fMLP FPR1刺激促进伤口愈合和Capillary-Like网络的形成
内皮细胞迁移在血管生成过程中是一个非常重要的事件。在肿瘤血管生成,内皮细胞侵入周围的基底膜和迁移到基质。最后,他们组织在新血管的形成,这对肿瘤的生长至关重要。
几种信号级联与Flk-1 / KDR-mediated迁移。反过来,这些涉及Y1175残基磷酸化和PI3K的激活,以及磷酸化Y951残留,这是一个结合位点TSAd [41]。评估是否FPR1刺激N-fMLP诱发细胞迁移,从而促进伤口关闭,我们测试的ECV304细胞在体外伤口愈合试验。我们的结果表明,N-fMLP诱发更快速的细胞迁移对如果细胞,24和36小时后(图6(一))。PTX的预孵化,刺激之前,防止N-fMLP-induced伤口关闭(图6(一)),这表明它取决于FPR1激活。
(一)
(b)
我们也评估的影响N-fMLP capillary-like网络上形成基底膜基质试验,这被认为是在体外血管生成的关联。capillary-like网络形成的水平进行了分析通过测量管长度经过1天的文化。细胞孵化20 ng / ml VEGF是用作控制。如图6 (b)由N-fMLP FPR1刺激导致显著增加capillary-like网络形成,与PTX由预孵化了。管长度也大大增加了控制ECV304细胞暴露于VEGF,而未经处理的细胞(图6 (b))。
4所示。结论
我们证明,在ECV304细胞,由N-fMLP FPR1刺激导致NADPH oxidase-dependent ROS生产和VEGFR2转磷酸。此外,我们表明,ROS桥的信号FPR1 Flk-1 / KDR,结果证明了apocynin和第22位phox沉默在VEGFR2 transactivation和细胞内的信号级联引起受体。我们还表明,由于transactivation机制,phosphotyrosines Y951, Y996, Y1175 VEGFR2创建锚定网站的注册和激活PI3K / Akt和PLC -γ/ PKC途径,培养一些VEGFA分子反应引起的。最后,我们证明FPR1-induced信号促进细胞迁移和capillary-like网络ECV304细胞的形成。
GPCRs代表最大的药物靶点的家庭,可以绑定到受体高选择性和调节几个函数以可预测的方式。观察每个GPCR可以进行多个信号,驱动多个细胞反应,导致了概念,不同的配体可以有不同的功效对这些不同的通路。
GPCRs ligand-specific方式可以触发信号级联,可以用rtk相声放大细胞内信号通路。NADPH oxidase-derived ROS作为信号分子的可逆氧化失活半胱氨酸巯基组中,反过来,可以控制rtk的活动及其transactivation [19,20.,24]。胞质子单元p47磷酸化phox和p67phox需要NADPH氧化酶激活。我们的结果表明,活性氧生成NADPH氧化酶管制十分严格,取决于FPR1 N-fMLP刺激,即p47触发phox反过来,磷酸化和过氧化物的一代。发现ROS调解Flk-1 / KDR transactivation, VEGFR2信号与血管生成起着至关重要的作用,提供了新的见解NADPH氧化酶和/或FPR1尽可能对抗angiogenesis-dependent疾病治疗的目标。确定抗血管新生药物针对VEGFR2共享信号通路由几个rtk不唤起血管生成,和实际抗血管新生疗法,目标VEGFA行动或Flk-1 / KDR活动,可能诱发其他rtk的upregulation克服VEGFR封锁。相声FPR1之间和Flk-1 / KDR为药物研发提供了进一步的机会血管生成策略由VEGFR2活动的增加,争论实际思考药理指标的概念。说明的信号级联负责VEGFR2 transactivation可以促进新治疗靶点的识别能够干扰FPR1通路。此外,我们的研究结果表明,针对FPR1和VEGFR2可能提高治疗效果,而针对受体独特。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作是由运动坎帕尼亚工程师协会2007 - 2013(项目奶油)和意大利卫生部(rf - 2011 - 02349269)。