C₆₀富勒烯防止克制压力诱导氧化障碍大鼠组织中:Nrf2 / ARE-Antioxidant通路参与的可能性

文摘

C的影响₆₀FAS(50和500μ克/公斤)的补充,在正常的生理状态和约束压力接触后,在老鼠prooxidant /抗氧化平衡组织进行了探讨并与已知的外源性抗氧化剂防治作用的影响。氧化应激生物标志物(ROS, O₂⋅⁻H₂O₂和脂质过氧化和抗氧化状态指数(MnSOD,过氧化氢酶GPx销售税,γgcl, GR活动,谷胱甘肽水平)测量大脑和心脏。此外,Nrf2蛋白表达的核和胞质分数以及蛋白质水平的反激进主义的酶MnSOD和GSH-related酶γ-GCLC、GPx GSTP下游Nrf2的目标是评估通过免疫印迹分析。在压力条件下,C₆₀FAS减弱活性氧生成和O₂⋅⁻和H₂O₂释放,从而降低脂质过氧化以及增加大鼠组织抗氧化能力。我们已经表明,C₆₀FAS补充剂量依赖性和修复效果。C₆₀FAS加强反激进主义的防御通过upregulation MnSOD脑细胞和维护MnSOD心肌蛋白质含量的控制水平。此外,C₆₀FAS增强谷胱甘肽水平和活动/ GSH-related酶的蛋白表达。这些变化与Nrf2蛋白质含量的相关性表明,暴露在压力下,随着其他机制,Nrf2 / ARE-antioxidant途径可能参与谷胱甘肽调节体内平衡。在我们的研究中,在一个在活的有机体内模型中,当C₆₀FAS(50和500μ克/公斤)单独应用,无显著变化Nrf2蛋白表达以及活动/ MnSOD蛋白质含量和GSH-related观察酶在两种组织类型。这些事实让我们假设的在活的有机体内模型中,C₆₀FAS影响大脑和心脏内源性抗氧化状态只在氧化应激状态。

1。介绍

生物体的今天,每个人都暴露在压力不同的起源。众多研究表明,生物体最有害影响的结果从社会和心理因素1,2]。情绪过度紧张和压力的一种状态不断遇到不仅在日常生活中,也作为一个必要的组件等人类活动的体育,军事,航空航天。急性应激足够的力量威胁的身体内稳态,从而导致生化和生理障碍导致严重的健康风险2- - - - - -4]。暴露在有压力的情况是众所周知的刺激各种损害途径,导致生产过剩,如超氧化物阴离子自由基(O₂⋅⁻)、羟基自由基(OH⋅)和nonradical过氧化氢(H₂O₂),导致脂质过氧化反应、蛋白质氧化、DNA损伤和细胞死亡5]。已经开发出一种针对氧化攻击,细胞抗氧化防御系统来维持细胞氧化还原体内平衡和保护细胞免受损伤(6,7]。经典抗氧化酶包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)以及小thiol-containing复合谷胱甘肽(GSH)可以直接灭活ROS和防止ROS-initiated反应(8]。细胞内谷胱甘肽是最丰富的非蛋白巯基等几个重要函数直接清除自由基,亲电子物质的解毒,和调节细胞氧化还原状态和thiol-disulphide状态的蛋白质,以及调节细胞信号和修复途径9]。谷胱甘肽体内平衡是由自我调节平衡调制中谷胱甘肽合成、利用、回收,这些过程的干扰可能导致氧化/抗氧化失衡。间接作用的抗氧化剂包括所谓的第二阶段解毒酶,有助于生物合成/回收氧化硫醇和促进排泄,活性次生代谢产物(如醌类、环氧化合物、醛和过氧化物)通过减少/共轭反应。他们是由glutathione-S-transferase(销售税)同功酶、NADPH:醌氧化还原酶(NQO1),重(催化)和光(改性剂)的子单元γ-glutamate-cysteine连接酶(γgcl)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)和压力反应蛋白质如血红素加氧酶- 1 (HO)和重型(FTH),光(FTL)链铁蛋白(10]。

克制是一个特定的和经典方法同时诱发情感和生理上的压力。因此,克制是广泛用于调制的氧化应激病理状态(11]。一些实验室的研究表明,急性克制压力显著升高氧化状态的差别和脂质过氧化反应对这些抗氧化的酶,谷胱甘肽耗竭,扰乱细胞氧化还原状态(12- - - - - -15]。约束应力可以影响中枢神经系统功能产生不平衡相关的神经化学和荷尔蒙失调prooxidant /抗氧化系统[16,17]。

许多报告表明,负面影响的压力由外源性抗氧化剂代理适合改善通过各种途径来增强抗压力接触(10,12,18]。事实上,药理干预目标细胞内源性抗氧化剂可能是一个有前途的压力管理策略,防止细胞氧化应激损伤。富勒烯(C₆₀)被称为一个球形碳分子与一个独特的笼形结构和特点是强烈的激进的海绵(19]。C的抗氧化水平₆₀据报道是几倍高于其他抗氧化剂的水平(20.,21]。大量的信息积累了有益的富勒烯及其水溶性衍生物,包括神经保护、辐射防护、抗增殖、抗肿瘤和抗炎活动(22- - - - - -25),但所知甚少的C₆₀保护作用和机制约束应力条件下大鼠组织的行动。

富勒烯预处理已经知道防止氧化应激通过直接ROS清除有害的影响和/或增加抗氧化酶活动(20.,26,27]。然而,C的机制参与细胞保护措施₆₀仍然是开放的讨论。最近,polyhydroxylated展示出了富勒烯的衍生物诱导内源性二期抗氧化酶通过Nrf2 /依赖机制和减弱氧化stress-mediated细胞死亡,从而提供新的见解的富勒烯的抗氧化特性的生化机制(28,29日]。NF-E2-related因子2 (Nrf2)属于头儿'collar bZIP家族转录因子结合抗氧化反应的元素(是),从而调节基因编码的抗氧化蛋白的诱导和二期解毒酶。Nrf2激活反应氧化损伤已被证明保护细胞和组织免受氧化应激(30.]。在正常情况下,Nrf2本地化在它结合Keap1的细胞质中,哪些功能作为Cul3-based E3的适配器连接酶调节Nrf2的蛋白酶体降解。然而,在直接攻击由活性氧或产生的间接行为如磷酸化、Nrf2 Keap1分离,从而把原子核和transactivates目标基因通过(31日]。协调转录的激活Nrf2-mediated抗氧化剂和prosurvival酶是一个潜在的机制来维护氧化还原内稳态和废除有害的氧化应激的影响32]。

因此,我们的目的是检查C的影响₆₀FAS的行为相比,已知的外源性抗氧化剂防治作用[33]prooxidant /抗氧化剂在老鼠体内平衡后正常的生理状态和约束压力接触。许多研究表明约束应力产生深刻影响的器官具有高代谢水平和最高mass-specific耗氧率等身体的大脑和心脏。协会自约束应力和几个神经退行性和心血管疾病是证据确凿的1- - - - - -3),我们调查了克制压力诱导氧化损伤大脑和心脏的重要物周边器官。

Nrf2已知控制基底和诱导表达的基因编码的重型和轻型链γgcl的谷胱甘肽的生物合成的重要酶,从而参与谷胱甘肽循环的规定(10,34]。然而,是否以及如何Nrf2调节谷胱甘肽C后在大鼠体内平衡组织₆₀FAS和补充以下约束压力接触知之甚少。

进一步调查的潜在机制₆₀FAS-mediated防止氧化应激引起的克制,我们研究蛋白质的表达Nrf2核和胞质分数。此外,反激进主义的酶的蛋白质水平MnSOD GSH-related酶和下游的目标Nrf2被免疫印迹分析评估。

2。材料和方法

2.1。材料制备和表征

一个高度稳定的原始C₆₀富勒烯水胶体溶液(C₆₀FAS)纯度超过99.96%的已经准备和特征27,35]。这种方法是基于富勒烯从有机溶液转移到水相超声波治疗。准备C的纯洁性₆₀FAS(即。,the presence/absence of any residual impurities such as carbon black, toluene phase) was determined by HPLC analysis. The state of C₆₀富勒烯在水溶液监控使用原子力显微镜。小角中子散射测量进行了在YuMO小角度衍射仪IBR-2脉冲反应堆与two-detector飞行时间模式设置。C的最大浓度₆₀富勒烯在水通过这种方法为0.15毫克/毫升。集中C₆₀FAS既包含单C₆₀及其与尺寸的不稳定nanoassociates 3 - 70海里。

2.2。实验设计和样本收集

雄性Wistar鼠体重220 - 260克被用于这项研究。老鼠们被安置在树脂玻璃笼子里每笼老鼠(4)和维护air-filtered和温控(20 - 22°C)的房间。老鼠收到一个标准颗粒随意饮食和水。使用动物伦理委员会批准的研究所,研究了依欧洲共同体1986年11月24日理事会指令(86/609 / EEC)。所有化学品都购自σ,丙烯酰胺,默克和最高的纯度。

这项研究是在两个阶段。第一阶段,旨在调查C的影响₆₀FAS在不同剂量(NAC)作为一个积极的控制和防治prooxidant /抗氧化平衡的标志在整个大脑和心脏组织。老鼠被分为四组( /组)根据治疗:控制/车辆(C)、fullerene-treated 50的剂量μ克/公斤(F1), fullerene-treated 500剂量μ克/公斤(F2), NAC-treated剂量100毫克/公斤的生理盐水(NAC)。动物对待F1、F2或NAC腹腔内(i.p)一周每天1次。控制/车辆管理ip与同等体积的生理盐水在同一时期。使用NAC根据先前的研究[36],描述了有效剂量在类似的实验动物。C₆₀FAS剂量是基于以前的研究的安全性检查,发现是不致命的。没有固定的毒性作用或死亡的作用下C₆₀FAS口服后大鼠在2毫克/公斤的总剂量为5天(21)和ip注入剂量的0.15毫克/公斤(27]。

第二阶段是一个急性仅约束应力模型和用上述药物预处理后。实验小组如下:组1收到车辆(生理盐水),作为控制(1);组2被暴露在克制6 h,代表一种急性压力源(如);3被暴露和接收C组₆₀FAS (50μ克/公斤)F1 (+);C组4受到和接收₆₀FAS (500μ克/公斤)(+ F2);组5受到和接收NAC(100毫克/公斤)(+ NAC)。药物管理ip每天上午9点到10点之间一次克制暴露前1周。适应大鼠腹腔注射,老鼠在组1和2都是注射生理盐水(1毫升/公斤)前一周每天1的影响。执行限制使用塑料啮齿动物抑制剂,使老鼠的紧密配合。实验和急性应激上午8点到10点之间进行,以减少可能的激素昼夜节律的干涉。在约束应力,动物没有身体上的压缩,但是食物和水被剥夺了。动物被斩首后立即克制会话。牺牲的时候,动物们轻轻用乙醚麻醉。

大脑和心脏被迅速删除,在冰冷的无菌生理盐水洗(0.9%),和10%的匀浆(50毫米磷酸钠缓冲2毫米EDTA, pH值7.4)。细胞碎片被离心15000 g (4°C, 15分钟),和上层清液储存在−70°C。使用布拉德福德的蛋白质浓度估计方法与牛血清白蛋白标准。

2.3。评价氧化应激标记

2.3.1。皮质甾酮的分析

全血,在乙醚麻醉,收集到heparin-coated试管,离心机在1500 g 10分钟在4°C分离血浆和红细胞和保持在-70°C到化验。等离子体皮质甾酮是量化使用商业Demeditec皮质甾酮大鼠/鼠标酶联免疫试剂盒(DEV9922,版本7-06/17 Demeditec诊断,德国)根据制造商的指示。结果血浆皮质酮浓度表示为ng / ml使用皮质甾酮标准曲线。

2.3.2。测量活性氧(ROS)的形成

ROS的数据形成了从二氯荧光素(DCF)荧光37]。组织匀浆加载了20分钟在37°C nonfluorescent探针(2 ,7 - - - - - -二乙酸dichlorodihydrofluorescein DCFH-DA),这是在给二氯荧光素在细胞氧化分解ROS,主要是氢过氧化物和超氧化物阴离子。的最终浓度DCFH-DA 5毫米。DCF形成之后在488 nm的激发波长和发射波长525 nm的30分钟通过使用日立f - 2000荧光光谱仪。DCF DCFH-DA转换的速度是线性至少60分钟,修正的自氧化速率DCFH-DA没有蛋白质。所有分析都在重复进行。荧光是表示为任意荧光单位。

2.3.3。测量超氧化物自由基的生产

组织过氧化物生产测量超氧化物dismutase-sensitive ferricytochromec减少化验,如前所述38]。简而言之,等分的组织匀浆(0.5毫克的蛋白质)和50孵化μM乙酰化ferricytochromec存在与否的超氧化物歧化酶(400 U /毫升)。为了进一步确保任何ferricytochrome减少c不是reoxidized,过氧化氢酶(125 U /毫升)添加到反应,删除任何H₂O₂形成的。孵化后15分钟37°C,通过添加1毫米N-ethylmaleimide反应被终止。减少ferricytochromec通过阅读吸光度测定分光光度计在550海里。O的数量₂⋅⁻释放计算除以样品的吸光度差,没有超氧化物歧化酶从ferricytochrome消光系数的变化c对ferrocytochromec( 毫米⁻¹厘米^{- l}),结果表示为nmol /分钟/毫克的蛋白质。

2.3.4。测量氢过氧化物

H₂O₂组织匀浆浓度是衡量使用狐狸方法,基于有限元的peroxide-mediated氧化^{2 +},其次是铁的反应^{3 +}二甲酚橙(o-cresolsulphonephthalein 3 ,3 - - - - - -bis (methylimino) diacetic酸、钠盐)。这个方法是极为敏感的部位,用于测量低水平的水溶性氢过氧化物在水相。确定H₂O₂浓度,500μl的孵化中添加到500年μ测定试剂(500 lμM硫酸亚铁铵,50 mM H₂所以₄,200年μM二甲酚橙,200毫米山梨糖醇)。铁的吸光度^{3 +}二甲酚橙复杂(A560) 45分钟后检测。H的标准曲线₂O₂得到每个独立实验通过添加变量数量的H₂O₂到500年μl与500年基础培养基混合μl分析试剂。对数据进行归一化,表示为μM H₂O₂每毫克的蛋白质(39]。

2.3.5。脂质过氧化作用分析

形成的脂质过氧化反应测定硫代巴比土acid-reactive物质(TBARS)使用的方法Buege和欧斯特40]。TBARS被沸腾的孤立的组织匀浆15分钟在100°C的硫代巴比土酸试剂(0.5% 2-thiobarbituric酸/ 10%三氯乙酸/ 0.63毫米盐酸)和测量吸光度在532海里。结果表示为纳米/毫克的蛋白质 毫米⁻¹厘米⁻¹。

2.4。生化参数的评价

2.4.1。酶活性测定

锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性测定的方法Misra和Fridovich41],基于自氧化的抑制肾上腺素肾上腺素红的SOD包含在检查样品。样本preincubated在0°C和6毫米KCN 60分钟,生产总抑制铜、Zn-SOD活动。结果表示为特定的酶的活动单位每毫克的蛋白质。一个单位的SOD活性被定义为蛋白质的数量造成50%的转化率的抑制肾上腺素肾上腺素红在指定的条件下。

过氧化氢酶活性测定过氧化氢的分解,由一个吸光度下降在240纳米42]。

γ-Glutamylcysteinyl连接酶(γgcl)活动是下面描述的方法取决于Seelig和迈斯特(43]。简单,酶活性是化验在37°C在反应混合物中含有0.1 Tris-HCl缓冲区(pH值8.2),0.15氯化钾,5毫米ATP, 2毫米磷酸烯醇丙酮酸,谷氨酸10毫米,10毫米γMgCl -aminobutyrate 20毫米₂NADH, EDTA 2毫米,0.2毫米,17毫克丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶和17毫克。反应是由添加示例,吸光度下降的速度在340 nm监控。Enzyme-specific活动测量μM的NADH氧化每分钟每毫克的蛋白质。

selenium-dependent谷胱甘肽过氧化物酶(GPx活性)确定根据Flohe方法和Gunzler [44]。简单地说,反应混合物由50 mM KPO₄(pH值7.0),南1毫米EDTA, 1毫米₃谷胱甘肽0.2毫米NADPH 1毫米,0.25毫米H₂O₂谷胱甘肽还原酶和226 U /毫升,NADPH氧化率在340海里。

谷胱甘肽还原酶(GR)反应混合物含有磷酸盐缓冲剂(0.2米)pH值7.0,EDTA(2毫米),NADPH(2毫米),GSSG(20毫米)。的反应是由添加样品,和吸光度下降340海里之后30°C (45]。

Glutathione-S-transferase(销售税)活动是由分析1-chloro-2, 4-dinitrobenzene (CDNB)与谷胱甘肽结合,所描述的Warholm et al。46]。工作解决方案包含20毫米CDNB,谷胱甘肽20毫米,1毫米EDTA在200毫米磷酸盐缓冲剂。共轭产品被记录在340 nm连续5分钟30°C ( 米⁻¹厘米⁻¹)。

2.4.2。测量的谷胱甘肽水平降低

减少谷胱甘肽(GSH)确定所述[47]。组织样本与sulphosalicylic混合酸(4%)和孵化为30分钟在4°C。此后,15分钟的混合物在1200 g离心机在4°C,和0.1毫升的上层清液加入磷酸盐缓冲剂(0.1 M, pH值7.4)包含DTNB abs.乙醇。发达的黄色读立即在412海里。谷胱甘肽含量计算纳米谷胱甘肽/毫克的蛋白质( 米⁻¹厘米⁻¹)。

2.5。免疫印迹分析

免疫印迹分析,胞质及核蛋白质提取的游离(原位灌注肝素注射,缓冲)心脏和大脑就像前面描述的那样(48]。简单地说,组织在冰冷的均质裂解缓冲包含10毫米玫瑰(pH值7.9),1.5毫米MgCl₂二硫苏糖醇10毫米氯化钾1毫米,0.1毫米EDTA, 0.2毫米phenylmethylsulphonyl氟化物(PMSF) + 1μg / ml停止™蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒(78440年,热科学公司,美国)。这种悬挂在冰上孵化15分钟。然后,12.5μ诺乃清洁剂10%的l p 40了,混合物是大力涡15 s。细胞质和核分数被离心分离的15000 g在4°C 2分钟。等量的蛋白质混合了Laemmli缓冲区(S3401σ),加热(99°C, 5分钟),然后加载到10 - 12% SDS聚丙烯酰胺凝胶。分离蛋白质被转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF),被封锁在5%脱脂牛奶Tris-buffered saline-Tween (TBS-T)在室温下1 h。一夜之间,主要的抗体被应用在4°C。洗后在TBS-T 1%脱脂牛奶,膜与二次孵化抗体结合辣根过氧化物酶(合)在室温下1 h。每一个抗原抗体复合物被amino-ethylcarbazole可视化反应。的相对表达蛋白质被ImageJ量化利用光密度扫描和分析,表示为百分之一的控制。所有样本分析至少两次,每个样本的平均值计算。β肌动蛋白和核纤层蛋白B1被用作加载控制。抗体和稀释一样:Nrf2 1: 1000 (Sigma-Aldrich有限公司),MnSOD 1: 500 (Sigma-Aldrich有限公司)、GPx 1/2 (b - 6) 1: 500(圣克鲁斯生物技术有限公司),GSTP 1: 500(圣克鲁斯生物技术有限公司),GCLC 1: 500 (Sigma-Aldrich有限公司),β肌动蛋白1:1000(圣克鲁斯生物技术有限公司),核纤层蛋白B1 1: 1000(圣克鲁斯生物技术有限公司),anti-mouse免疫球蛋白合1:1000 (Sigma-Aldrich有限公司),和anti-rabbit免疫球蛋白合1:1000 (Sigma-Aldrich有限公司)。

2.6。统计分析

数据表示为每组的均值±标准差。多个实验组之间的差异被发现单向方差分析(方差分析)其次是Bonferroni多重比较检验。一个值小于0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。血浆皮质酮水平

血浆肾上腺酮水平决定的结果控制和所有强调鼠组呈现在图1。监测肾上腺酮水平的变化可以作为一个指标的压力反应(4,16]。急性应激引起的血浆皮质酮水平显著增加(大约3-8-fold高于对照组水平, ),而预处理与C₆₀FAS(50和500μ克/公斤)显著降低血浆皮质酮的释放(分别为28和32%)相比,单独组织( )。南京政府显示减少皮质甾酮水平的19%相比,作为集团( )。没有明显差异在皮质甾酮浓度之间的控制和任何单独药物治疗组(数据未显示)。

3.2。脑组织的氧化状态后药物补充和急性应激曝光

暴露在急性克制压力显著升高的水平ROS生成和O₂⋅⁻和H₂O₂分别制作45,25岁,和60% ( )以及TBARS积累(71%),这是脂质过氧化反应的二级产品相比,控制大鼠( )(图2)。这些变化是伴随着MnSOD显著增加,过氧化氢酶活动~ 37 - 38% ( )。同时,活动水平GSH-related酶(GPx、GR、γgcl和销售税)低20 - 24% ( )比控制大鼠( )。因为上述事件,减少谷胱甘肽水平降低(19%, )(图3)。C的补充₆₀FAS和南汽在急性应激暴露显著降低自由基(ROS和O₂⋅⁻代),H₂O₂浓度,和脂质过氧化作用的强度以及增加谷胱甘肽内容相比单独组如图2和3。我们发现,C₆₀FAS,在这两种应用剂量,防止超氧化物阴离子生产在很大程度上,是更有效的纠正脂质过氧化的脑组织与南汽(相比 )。与C预处理₆₀FAS(两种浓度)以及南汽减少应激overactivation MnSOD。所有药物引起显著诱导GSH-related酶,谷胱甘肽含量和活动,这些效果是相同的。对于GR活动,C₆₀FAS (500μ克/公斤)和南京政府显著增加这种酶的活性与C相比₆₀FAS (50μ克/公斤)。NAC应用减少MnSOD活动比C控制水平和更有效₆₀FAS(两种剂量)预处理。

3.3。心脏组织的氧化状态后药物补充和急性应激曝光

急性克制压力刺激ROS和O₂⋅⁻产品(分别为55 - 53%),增加了H₂O₂和TBARS水平(分别为54岁和62%)与对照组大鼠( )(图4)。反过来,在心脏组织在应对这些变化,有显著减少内源性抗氧化剂的活动和内容,包括GPx (22%),γgcl(38%)、消费税(27%)、谷胱甘肽与随之而来的MnSOD活动(23%)(60%),而对照组( )。没有明显的GR的变化或过氧化氢酶活动观察(图5)。

与C预处理₆₀FAS(50和500μg / kg)和南汽压力接触诱导减少脂质过氧化的抑制ROS的生成和超氧化物阴离子和H₂O₂我们在心肌细胞注册版本。如图4C₆₀FAS(50和500μ克/公斤)减少活性氧的形成(22和32%),O₂⋅⁻生产(43和35%),H₂O₂浓度(15 - 27%)和TBARS内容(23和32%),分别与单独组( )。类似的动态显示在上述参数的变化在NAC治疗组。然而,他们的抑制程度低于C组中₆₀FAS政府,特别是在C₆₀FAS (500μ克/公斤)注入。C的应用₆₀FAS(剂量)和南汽谷胱甘肽含量升高( )和活动的GPx、销售税和γgcl ( )与的老鼠相比,扭转了MnSOD overactivation ( ),和维护GR和过氧化氢酶活动(图最优控制水平5)。

有趣的是,C₆₀FAS (500μ克/公斤)更成功地防止氧化应激在心脏组织管理C₆₀FAS较低浓度和南汽。这个应用剂量的C₆₀FAS TBARS减少,O₂⋅⁻,和H₂O₂水平以及增强谷胱甘肽含量和降低MnSOD overactivation在更大程度上比C₆₀FAS (50μ克/公斤)和南京汽车( )。

3.4。C的影响₆₀FAS补充和急性应激曝光Nrf2蛋白表达,MnSOD, GSH-Related酶在大脑和心脏组织

Nrf2是一个关键的转录因子,严格控制细胞防御氧化应激(34]。因此,我们首先试图检查C的影响₆₀FAS单独补充后急性克制压力Nrf2蛋白质含量在核和胞质分数不同的鼠组织。因为核Nrf2级别,具体地说,是直接反映所介导的转录活动(32),我们检查了胞质蛋白至关重要的下游基因的表达,如MnSOD GPx, GSTP, GCLC由Nrf2监管。

限制暴露导致减少(22%)Nrf2核蛋白质含量在大脑中,顺便还能增加胞质Nrf2蛋白质水平( )。相比之下,在心脏,这些指标无显著变化(图6)。如图7在大脑中,急性应激引起的蛋白质含量减少GCLC GSTP 30 - 20%,分别为( )。GPx蛋白质含量只有减少的趋势,但MnSOD蛋白质水平显著提高(26%, )与对照组相比。这些发现与谷胱甘肽含量减少(图3),这表明Nrf2通路参与谷胱甘肽合成的大脑组织的条件下。同时,心脏的蛋白质表达MnSOD GSH-related酶并没有显示与对照组相比显著变化。我们发现C₆₀FAS (50μ克/公斤和500μ克/公斤)政府之前引起显著提升Nrf2蛋白质水平的大脑和心脏核提取相比,单独的控制和组( ),这是伴随着减少Nrf2胞质蛋白表达( )指示易位Nrf2从胞质细胞核。一起增加核Nrf2水平,我们注册一个MnSOD蛋白表达显著增加,GPx, GSTP, GCLC大脑和心脏胞质分数相对于单独和对照组( )。上述指标表达更大程度后补充的C₆₀FAS高剂量。

3.5。药品监督管理局对Prooxidant /抗氧化平衡的影响和蛋白表达在大鼠组织正常的生理状态

研究药物单独应用时的大脑和心脏组织,没有氧化应激标志物的变化或指标的抗氧化防御系统除了GPx活性,在南京政府大幅提高后的脑组织相比,控制和C₆₀FAS-treated老鼠( )(数据2- - - - - -5)。C的影响₆₀FAS政府独自Nrf2蛋白表达在图中进行了描述8。在这两种组织,蛋白质水平的Nrf2核水平接近控制水平( )以及细胞溶质(数据没有显示)。蛋白质含量MnSOD和GSH-related酶的组织倾向于增加,但这种效果没有统计学意义(图9)。

4所示。讨论

尽管一些先前的研究表明,C₆₀可以保护细胞不受氧化应激激活Nrf2 /细胞死亡的途径在体外细胞培养(28,29日),目前尚不清楚是否C₆₀可能会有相同的效果在动物模型体内氧化应激。在这项研究中,作为第一步理解Nrf2激活的保护作用,我们研究了C的影响₆₀FAS两剂NAC作为阳性对照,prooxidant /抗氧化剂在老鼠体内平衡受到严重约束压力。

在目前的研究中,6 h约束应力显著增加活性氧,O₂⋅⁻,和H₂O₂作品和随之而来的法律流程外包增强,诱发疾病的抗氧化状态的大脑和心脏组织,根据许多研究表明约束应力显著提高氧化状态和增加或减少抗氧化剂酶活性在不同大鼠组织,根据严重程度和持续时间的约束应力协议(12,13,15]。的确,以前的研究已经表明压力固定目标大脑对脂质过氧化作用,作为这个组织的最高水平被发现(14,49]。

我们发现显著改变SOD、GPx活性的两个关键酶,是一种抗氧化剂的第一道防线和功能一致防止活性氧反应对氧化应激的反应。Overactivation GPx MnSOD没有相应增加的活动,我们展示了在我们的研究中,结果在H的积累₂O₂不仅改变了细胞的氧化还原状态也参与芬顿反应,导致生产有毒的羟基自由基(5]。显著减少谷胱甘肽含量和GSH-related酶表示障碍的谷胱甘肽的生物合成,因为缺乏足够的抗氧化防御克制曝光后大鼠组织(8,9]。在我们的研究中,氧化过程的强化,我们注册一个水平的显著升高血浆皮质应力状态的一个重要指标。压力是已知激活肾上腺轴,从而导致糖皮质激素分泌增加,不仅影响大脑还周边器官(16]。高水平的糖皮质激素可能会影响组织的氧化还原状态通过不同的机制,包括超氧化物的增加细胞生产和组织抗氧化能力的障碍49]。先前的报道表明,高水平的皮质甾酮减少关键抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶的活性,直接减少了总谷胱甘肽池以及NADPH的水平,需要再生的谷胱甘肽氧化谷胱甘肽(17,50]。增加急性后循环皮质甾酮的水平固定被证明是直接成正比的增加氧化介质以及神经受伤,cardiosystems [51]。所有这些研究结果允许我们建议增加皮质甾酮水平应力模型中除了可能影响大鼠的抗氧化能力研究的组织。

在这种情况下,使用不同的抗氧化剂和自由基清除和代理属性,以抵消有害事件引发的急性应激是一种有效的治疗策略主要是用来处理氧化损伤(52]。在这些策略,碳纳米粒子与内在ROS清除和抗氧化性能表现出优越的药理特性由于增强吸收和生物利用度53]。

我们已经表明,1周的治疗C₆₀FAS(50和500μ克/公斤)之前克制压力接触引发的脂质过氧化作用强度的降低,因为抑制活性氧的生产,也就是说,超氧化物阴离子释放和H₂O₂代,我们注册在心肌细胞和脑细胞。线粒体呼吸链和NADPH氧化酶酶反应,黄嘌呤氧化酶,环氧酶和脂氧合酶是一个重要的内源性活性氧的来源在压力条件下(7]。超氧化物阴离子是一种常见的前体的ROS迅速参与两个代谢途径:快速转换成由超氧化物歧化酶和过氧化氢和氧代剧毒通过反应与一氧化氮(过氧亚硝基5]。我们观察到,C₆₀FAS应用程序(在两个剂量调查)下降的多动症MnSOD因此生产超氧化物阴离子,作为这个酶的底物和MnSOD活动的指定。这个活动的结果是减少过氧化水平大脑细胞和心肌细胞。尽管MnSOD线粒体酶,我们发现MnSOD蛋白在胞质分数。由于MnSOD编码在细胞核,作为前体合成在细胞质中,并通过线粒体靶向运送到线粒体序列,胞质MnSOD测量水平可能说明其交通核合成后的线粒体(54]。因此,增加胞质MnSOD蛋白质水平可能来源于线粒体MnSOD和/或不适当的运输新合成MnSOD到线粒体。在任何情况下,出现胞质中的MnSOD分数明显表明大脑和心脏的损失在压力条件下线粒体膜的完整性。我们的发现C₆₀FAS影响MnSOD活动表明,C₆₀FAS有无限能力穿透生物障碍与后续亚细胞车厢,就像早些时候报道(55]。

富勒烯及其衍生物是一种强大的抗氧化剂的移位ð电子在碳笼,容易与活性氧反应,特别是超氧化物阴离子,羟基和脂质自由基。大量研究证明了自由基清除能力这样一个程度,富勒烯被描述为“自由基海绵”[19,26,28]。富勒烯是假设作为一种特殊的抗氧化剂,不仅直接与自由基反应,而且启动和催化的反应ROS重组(歧化作用)发生在命令界面水壳附近的富勒烯的表面。这种假设可以解释为什么富勒烯展品长期生物活性的影响,包括抗氧化能力,即使在小和supersmall浓度(20.]。

谷胱甘肽体内平衡是由以下三个方面:(一)谷胱甘肽合成谷氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽合成酶和半胱氨酸γ-glutamylcysteine连接酶;(b)谷胱甘肽氧化是GSSG GPx活性,从而调节和维持细胞氧化还原状态;(c) GSSG减少谷胱甘肽与GR的中介,这是一个巨大的一部分细胞内谷胱甘肽循环(9]。GSH-related酶GPx、GR、销售税和γgcl关键酶在细胞内氧化还原状态的规定通过调制的谷胱甘肽体内平衡和upregulation Nrf2-Keap1-ARE通路(8,52]。

我们发现6 h克制导致谷胱甘肽水平降低和GCL在大脑细胞活动,表明在GSH-biosynthetic周期的紊乱。活动的减少谷胱甘肽还原酶诱导氧化谷胱甘肽的积累在大脑中,这是表明氧化应激的严重程度(8]。除了peroxide-mediated GPx失活,超氧化物阴离子和过氧亚硝基生产过剩可以抑制GPx活性(56)就像在我们的研究中获得的。爱迪的先前研究et al。15]表明GR和酶GPx活性的降低后的海马相似的压力持续时间。心,我们证明了在减少γgcl和GPx活动GR活性没有变化。在这两种组织,我们注册GST活性下降,这与GST蛋白质含量。同时,猫的活动,主要的清道夫H₂O₂大脑中的神经元,增加,倾向于增加心脏同意早期的报告(57]。消费税是无处不在的,多功能酶解毒内生和外生亲电试剂,包括环氧化合物、醛、过氧化物(58]。因此,减少销售税,观察急性应激后大鼠组织可能引起额外的中毒的有害的法律流程外包的副产品。

众所周知,各种组织有不同的敏感性取决于几个因素,如氧化应激挑战耗氧量,代谢率,对氧化剂和抗氧化剂的水平。在目前的研究中,氧化应激标志物的分析后,我们建立了大脑,心脏相比,更容易受到氧化应激在我们的实验模型。

C₆₀FAS补充表明谷胱甘肽含量的增加以及GPx销售税和GR活动在两个组织调查相比,仅作为集团提升协调行动谷胱甘肽redox-cycle酶和参与谷胱甘肽的代谢有毒的醛和过氧化物减少细胞损伤。GCL活动的增加表明C的参与₆₀在调制下的谷胱甘肽的生物合成条件。C₆₀FAS政府诱导一些减少猫相比,这两个组织活动与作为单独组正常化GPx活性表明过氧化反应过程的强度下降。类似的其他几个报道强调阿霉素中毒和辐照等表明,富勒烯政府减少ROS生成和脂质过氧化作用,增加谷胱甘肽水平和活动GSH-related酶(23,24]。在我们的研究中,我们使用NAC作为一个积极的控制细胞prooxidant /抗氧化体内平衡的调查,因为这种药物是一种抗氧化剂,可能减少氧化应激的破坏性效应(36]。NAC施加其影响既是一种sulphhydryl组(防止谷胱甘肽耗竭)和作为自由基清除剂通过与高度氧化自由基直接反应如⋅哦,⋅没有₂、有限公司₃⋅⁻(33]。NAC治疗抑制脂质过氧化作用,增加谷胱甘肽过氧化物酶的催化活性,谷胱甘肽还原酶、超氧化物歧化酶、补充谷胱甘肽水平在不同病理条件下动物组织(59,60]。

我们观察到,C₆₀FAS预处理足够强大的抗氧化剂防御提供了一种像南汽的作用效果。C₆₀FAS (500μ克/公斤)比南京更有效的防止氧化应激障碍和C₆₀FAS 50浓度μ克/公斤。

神经和心血管的C₆₀FAS约束应力下也证实了皮质甾酮浓度显著下降,展示了在我们的研究中。减少氧化应激的标记和规范化抗氧化活性表明,C₆₀FAS可能诱发心脏和大脑组织保持足够的抗氧化能力与持续的氧化应激。

自由基代谢产物生成已知函数作为信号分子在极端影响激活转录因子和特定基因导致新创蛋白质合成,包括抗氧化酶。这些分子机制可能引发的大量适应性反应和形成保护机制与氧化应激(32]。

进一步调查的潜在机制₆₀FAS-mediated抵抗氧化应激,我们检查Nrf2的蛋白表达,这表明一个关键的角色在细胞保护的协调监管抗氧化基因的转录,包括GPx2,销售税,γ-GCLC、GR和SOD (52]。

在目前的研究中,接触诱导一些减少Nrf2核蛋白质含量在大脑中伴随细胞溶质增加分数。我们的结果同意先前的发现,表明显著减少Nrf2核内蛋白在整个大脑组织约束6 h后压力(12,18),大鼠海马、前额叶皮层没有变化在急性固定30分钟(61年]。施皮尔et al。14]报道是暂时性的减少核Nrf2恰逢增加11的表达式β-HSD1-corticosterone再生酶在大鼠海马受到4 h约束压力。

许多因素参与Nrf2调控在转录和转录后的水平和影响其分布在细胞隔间(30.]。一方面,Nrf2属于逆境应答的转录因子在很大程度上控制在蛋白质水平的稳定。Nrf2被发现是一个不稳定的蛋白质,由于通过ubiquitin-dependent通路蛋白水解降解。基础条件下,Keap1不断驱使Nrf2的规定保持蛋白质的细胞水平低。然而,在氧化应激,Nrf2变得复杂的规定,涉及Keap1-dependent和独立的机制(31日]。另一方面,有替代Nrf2监管机制,包括Nrf2通过各种蛋白激酶的磷酸化(PKC, PI3K / Akt、GSK-3b和物,与其他蛋白质伙伴(p21和caveolin-1),和表观遗传因素(微- rna - 144、-28和-200 a和启动子甲基化)(30.]。因此,Keum等人表明,p38磷酸化Nrf2并促进与Keap1的协会,从而防止其核易位。此外,长期炎症诱发特定激酶和表观遗传修饰的激活,哪些块Nrf2,导致神经系统损伤62年]。此外,Ki et al。63年)表明,激活糖皮质激素受体调节Nrf2信号和目标基因表达改变Nrf2通过绑定的糖皮质激素受体在大脑中糖皮质激素反应元素。在压力条件下,糖皮质激素可以抑制细胞抗氧化防御能力削弱Nrf2-dependent抗氧化反应(17]。此外,NF -κB是一个消极的调节器NRF2绑定到响应元素NRF2基因启动子(64年]。如上所示,p65亚基可以阻止NRF2绑定到蛋白质和分子招募组蛋白脱乙酰酶3,辅阻遏物的是(65年]。这些途径可以由急性压力和可能涉及,至少在某种程度上,在报道的影响。

与亏损Nrf2蛋白质含量在大脑中核分数,我们观察到一些死亡GCLC的蛋白质水平( ),GPx ( ),和GSTP ( )急性应激后曝光。尽管MnSOD Nrf2激活的目标,可怜Nrf2功能不对应MnSOD蛋白表达在我们的研究中,我们发现显著增强MnSOD蛋白质含量( )。这样的差别可能是由于其他信号通路在调节MnSOD的大脑。已知MnSOD NF -κB-related蛋白质,在压力条件下,NF -κB是积极参与的表达MnSOD [66年]。此外,高水平的H₂O₂代产品MnSOD催化活性,我们在研究中观察到的压力接触后,可能作为信号分子在NF -κB激活(67年]。

没有显著变化观察到核和胞质Nrf2蛋白质积累以及在MnSOD Nrf2-target基因蛋白表达,GPx, GCL除了销售税的大鼠心肌受到约束压力。

目前的研究表明,C₆₀FAS政府诱导显著增强核Nrf2蛋白质的老鼠的大脑和心肌受到约束应力6 h和伴随的胞质分数下降。GSH-related酶的蛋白表达水平与Nrf2呈正相关,表明GCLC upregulation,销售税,GPx可能取决于Nrf2 /通路。我们假设C₆₀FAS对谷胱甘肽循环通过诱导的影响γgcl GPx和销售税蛋白质表达,这是必要的,足以重建谷胱甘肽系统内稳态。

在大脑中,MnSOD继续增加相比,蛋白质水平。相比之下,在心脏,这个指数仍在控制和单独组织的水平。这些发现证实了C的影响₆₀FAS MnSOD申请特定组织。重要的调制抗氧化系统酶的蛋白水平在我们的研究表明一个复杂的转录和转译事件网络修改C₆₀FAS在细胞反应克制压力。

最近,你们et al。29日)显示在体外模型,polyhydroxylated衍生品的富勒烯后独自管理增强Nrf2核蛋白质易位和调节信使rna和蛋白质的二期抗氧化酶的表达,包括HO-1、NADPH:奎宁氧化还原酶1,γ在549个细胞谷氨酸半胱氨酸连接酶。以此类推,与C预处理₆₀(哦)₂₄1-methyl-4-phenylpyridinium显示显著的保护作用——(MPP +)诱导急性细胞帕金森病模型在人类神经母细胞瘤细胞的表达增加Nrf2和表达和活性γ谷酰基半胱氨酸连接酶,谷胱甘肽的水平28]。相反,在我们的研究中,在活的有机体内C模型时₆₀FAS(50和500μ克/公斤)是应用于一个正常的生理状态,免疫印迹分析显示只倾向于增加蛋白质含量没有显著变化的表达MnSOD和GSH-related酶的组织与Nrf2蛋白质含量在核和胞质分数。类似地,C₆₀FAS(50和500μ克/公斤)单独应用没有引起任何变化研究氧化应激标记和抗氧化酶的活动大脑和心脏组织。这些事实让我们假设在活的有机体内C₆₀FAS并不影响内源性抗氧化状态的大鼠组织在没有任何压力的条件下。

5。结论

总之,我们的研究结果表明,C的神经和心脏保护₆₀FAS介导,一方面,通过直接清除活性氧,即超氧化物阴离子和过氧化氢,从而降低脂质过氧化作用,另一方面,对大鼠组织抗氧化能力的影响。在压力条件下,C₆₀FAS政府促进Nrf2核积累和触发器的蛋白质表达的抗氧化和二期酶,至少部分,通过Nrf2 /信号通路。我们建议C₆₀FAS影响内源性谷胱甘肽体内平衡调制的谷胱甘肽的生物合成以及通过upregulation antiperoxide防御GSH-related酶的活性和蛋白表达γgcl、GPx和销售税。在压力下曝光,C₆₀FAS加强反激进主义的国防通过upregulation MnSOD脑细胞和维护MnSOD心肌蛋白质含量的控制水平。C₆₀FAS补充剂量依赖性和修复效果。这些结果表明,使用C₆₀FAS可能感兴趣的潜在的治疗策略修正的生意氧化压力条件。

缩写

C60FAS:	原始C60富勒烯水胶体溶液
ROS:	活性氧
O2⋅−:	超氧化物阴离子
H2O2:	过氧化氢
销售税:	Glutathione-S-transferase
GPx:	谷胱甘肽过氧化物酶
γgcl:	γ-Glutamate-cysteine连接酶
格:	谷胱甘肽还原酶
谷胱甘肽:	减少谷胱甘肽
MnSOD:	锰超氧化物歧化酶
Nrf2 /:	NF-E2-related因素2 /抗氧化反应的元素。

数据可用性

生化数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

OOG起源的研究理念和设计进行了分析。AVM, NVB协助本研究的设计。IVV和TT帮助准备的手稿和提供了资金支持。你和他是负责C₆₀FAS合成和表征。IMM提供监督和指导整个工作AIK队效力。所有作者修订后的手稿重要知识内容和批准的最终版本。

确认

这项工作是由法定的研究体育教育部门((DS_WF) 2017年1月16日),波兰格但斯克大学体育教育和体育。

引用

1. s . j . Lupien b·s·麦克尤恩·m·r·贡纳·c·海姆,“压力在整个寿命对大脑的影响,行为和认知,“神经系统科学自然评论,10卷,不。6,434 - 445年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. p h .黑人和l . d . Garbutt“压力、炎症和心血管疾病”身心研究杂志》,52卷,不。1,1,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. c·m·马祖尔“生活压力作为抑郁的风险因素,”临床心理学:科学和实践,5卷,不。3、291 - 313年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. h . Shoji k .沟口健二,“急性和反复应力差异调节行为、内分泌、神经参数相关的情感和压力反应在年轻和老年大鼠,”大脑研究行为,卷211,不。2、169 - 177年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. d·p·琼斯,“狂热的自由生物氧化应激,”美国Physiology-Cell生理学杂志》上,卷295,不。4,C849-C868, 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. h . sy,“氧化应激:氧化还原生物学和医学的概念,“生物氧化还原4卷,第183 - 180页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. b·哈利维尔“氧化应激和神经退行性变的:我们现在在哪里?”神经化学杂志,卷97,不。6,1634 - 1658年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. j·d·海耶斯和l . i McLellan谷胱甘肽和酶glutathione-dependent代表监管,配合防御氧化应激,”自由基的研究没有,卷。31日。4、273 - 300年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . c,“谷胱甘肽合成,调节”分子医学方面,30卷,不。1 - 2,42-59,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. l . e . Tebay h·罗伯逊,s·t·杜兰特et al .,”机制的激活转录因子Nrf 2通过氧化还原压力,营养的线索,和能源状况和它减弱退化性疾病的途径,”自由基生物学和医学B部分,卷。88年,第146 - 108页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. g . b . Glavin w . p .削减t . Sandbak H.-K。巴克,r . Murison“克制压力在生物医学研究:一个更新”,神经科学和生物行为的评论,18卷,不。2、223 - 249年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 崔h . i . h·w·李,t . m .加工et al .,”韩国传统多个草药公式(Yuk-Mi-Jihwang-Tang)变弱急性抑制应激脑组织氧化、”药物和化学毒物学,40卷,不。2、125 - 133年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a . e . Freitas l . e . b . Bettio v . b . nei et al .,“胍基丁胺废除限制应激则行为和海马小鼠抗氧化失衡,“Neuro-Psychopharmacology &生物精神病学的进展,50卷,第150 - 143页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j·g·施皮尔·h·j·c·陈,j·s·m·Cuffe c . Sernia和n . a . Lavidis“急性约束应力诱发快速变化在氧化还原中心地位和保护性的抗氧化基因的老鼠,”心理神经内分泌学卷,67年,第112 - 104页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. f .爱,美国优素福,s . k . Agrawal”克制压力诱导氧化损伤及其与硒、改进”欧洲药理学杂志,卷600,不。1 - 3,59 - 63年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. n . d . Goncharova Marenin威尼斯国际大学,t . e . Oganian et al .,“压力、衰老、肾上腺轴和可靠性的抗氧化酶防御,”老年医学的进步,21卷,不。4、548 - 554年,2008页。视图:谷歌学术搜索
17. j·d·诉Kratschmar d Calabrese沃尔什et al .,“Nrf2-dependent抗氧化反应的抑制糖皮质激素和11所示β在肝细胞-HSD1-mediated糖皮质激素激活”,《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。5篇文章e36774 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. k . s .麦道维尔,j·r·卡索d Martin-Hernandez et al .,“非典型抗精神病药物paliperidone调节内源性抗氧化/抗炎通路在老鼠模型的急性和慢性克制压力,”神经病治疗,13卷,不。4、833 - 843年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. z·马尔科维奇和诉Trajkovic生物医学潜在活性氧生成和淬火的富勒烯(C60)”生物材料卷,29号26日,第3573 - 3561页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. g . v . Andrievsky诉Bruskov, a . a . Tykhomyrov和美国诉大师哥,“抗氧化特性和辐射防护的影响水化C60富勒烯nanostuctures体外和体内,”自由基生物学和医学卷,47号6,786 - 793年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 诉Vereshchaka n . v . Bulgakova a诉Maznychenko et al .,”C₆₀富勒烯减少肌肉疲劳或老鼠与防治β丙氨酸,”前沿生理学,9卷,p。517年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. p . j . Grebowski Kazmierska, a . Krokosz“纳米Fullerenols作为一种新的治疗方法”,生物医学研究的国际ID 751913条,卷。2013年,9页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 诉m·托雷斯b . Srdjenovic诉Jacevic诉Dragojevic西米奇,a . Djordjevic和a . l .辛普利西欧“Fullerenol C60 (OH) 24防止doxorubicin-induced在大鼠急性毒性,”药理报告,卷62,不。4、707 - 718年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. k . Stankov Borisev,诉曲,l . Rutonjski g . Bogdanovic和a . Djordjevic”修改辐照K562细胞的抗氧化和抗凋亡基因表达在fullerenol C60 (OH) 624纳米颗粒治疗,”纳米科学和纳米技术杂志》上,13卷,不。1,第113 - 105页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. 瞿f .焦、刘y y . et al .,”研究的抗肿瘤和antimetastatic活动fullerenol在乳腺癌小鼠模型中,“碳,48卷,不。8,2231 - 2243年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. j j。傅阴,f .老挝,p . p . et al .,“活性氧的清除和潜在的细胞功能富勒烯涂层材料保护,”生物材料,30卷,不。4、611 - 621年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. y . i Prylutskyy诉Vereshchaka, a诉Maznychenko et al .,”C₆₀富勒烯作为有前途的治疗代理纠正和防止骨骼肌疲劳,”《纳米生物,15卷,不。1,p。8日,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. x Cai h·贾z,刘et al .,“Polyhydroxylated富勒烯衍生物C60 (OH) 24阻止线粒体功能障碍和氧化损伤MPP +全身的细胞模型,帕金森症,”神经科学研究杂志,卷86,不。16,3622 - 3634年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 江y s, m . Chen et al .,“Polyhydroxylated富勒烯变弱氧化应激通过强化Nrf2-regulated凋亡细胞抗氧化防御系统,”国际期刊的纳米9卷,第2087 - 2073页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. h·k·布莱恩,a . Olayanju c·e .·戈德林和b . k .公园,“Nrf2细胞防御通路:Keap1-dependent和独立机制的规定,“生化药理学,卷85,不。6,705 - 717年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. a .小林Kang h·大川et al .,“氧化压力传感器Keap1函数作为Cul3-based E3的适配器连接酶调节蛋白酶体降解Nrf2,”分子和细胞生物学,24卷,不。16,7130 - 7139年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. 问:妈,“转录对氧化应激的反应:病理毒理学意义,”药理学和治疗,卷125,不。3、376 - 393年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. y Samuni, s·戈尔茨坦,o·m·迪恩·m·伯克,“防治作用的化学和生物活性,Biochimica et Biophysica学报(BBA)——一般科目,卷1830,不。8,4117 - 4129年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. w .苗族,l·胡,p . j . Scrivens和g . Batist“转录调节NF-E2 p45-related因素(NRF2)芳基碳氢化合物receptor-xenobiotic响应表达式的元素信号通路,”生物化学杂志,卷280,不。21日,第20348 - 20340页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. Ritter, y Prylutskyy, m . p . Evstigneev et al .,”结构特点高度稳定的可再生的C60富勒烯水胶体溶液对通过各种技术,”富勒烯、碳纳米管和碳纳米结构,23卷,不。6,530 - 534年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. a . m . Sadowska b . Manuel-y-Keenoy和w·a·德支持者,“抗氧化和消炎功效,NAC治疗慢性阻塞性肺病:不和谐的体外和体内剂量:复习一下,”肺药理学和治疗,20卷,不。1,9-22,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. m . j . Reiniers r·f·范·Golen美国帽子et al .,”2的准备和实际应用7在氧化还原-dichlorodihydrofluorescein化验。”分析化学,卷89,不。7,3853 - 3857−2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. a .成为“测定线粒体超氧化物自由基和过氧化氢的生产,”方法酶学卷,105年,第435 - 429页,1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. s p·沃尔夫,“亚铁离子氧化的铁离子指示剂二甲酚橙测量氢过氧化物,”方法酶学卷,233年,第189 - 182页,1994年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. j . a . Buege和s·d·欧斯特”,微粒体脂质过氧化作用,”方法酶学52卷,第310 - 302页,1978年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. h . Misra i Fridovich,“超氧化物阴离子的作用在肾上腺素的自动氧化和超氧化物歧化酶的简单分析,“生物化学杂志,卷247,不。10日,3170 - 3175年,1972页。视图:谷歌学术搜索
42. h . Aebi“过氧化氢酶体外。”方法酶学卷,105年,第126 - 121页,1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. g . f . Seelig和a·迈斯特”Gamma-glutamylcysteine合成酶。交互必不可少的巯基,”生物化学杂志,卷259,不。6,3534 - 3538年,1984页。视图:谷歌学术搜索
44. l . Flohe和w·a·Gunzler谷胱甘肽过氧化物酶的测定方法酶学卷,105年,第120 - 114页,1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. 即他本人和b . Mannervik谷胱甘肽还原酶”,方法酶学卷,113年,第490 - 484页,1985年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. m . Warholm c . Guthenberg c·冯·巴尔和b . Mannervik”从人类肝脏谷胱甘肽转移酶。”方法酶学卷,113年,第504 - 499页,1985年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. j . Sedlak和r·h·林赛”总量的估计、蛋白结合的和非蛋白巯基团体组织与Ellman试剂,”分析生物化学,25卷,不。1,第205 - 192页,1968。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. o . Gonchar和i Mankovska缺氧/复氧调节肺线粒体氧化应激水平和抗氧化潜力:P 53和NF -可能参与κB目标蛋白质,”肺学档案和呼吸道护理,3卷,不。2,35-43,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. j . Liu x, m . k . Shigenaga h·c·杨,a森和b·n·艾姆斯“固定压力导致氧化损伤脂质、蛋白质、和DNA在老鼠的大脑,”美国实验生物学学会联合会杂志,10卷,不。13日,1532 - 1538年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. a . Zafir和n . Banu调制体内氧化状态的外源性皮质甾酮和克制压力的老鼠,”压力,12卷,不。2、167 - 177年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. b . g . Perez-Nievas b . Garcia-Bueno j·r·卡索l . Menchen和j·c . Leza“皮质甾酮的标志容易氧化/ nitrosative脑损伤在大鼠压力接触后,“心理神经内分泌学,32卷,不。6,703 - 711年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. a . t . Dinkova-Kostova和p . Talalay”,直接和间接诱导的抗氧化性能cytoprotective蛋白质,”分子营养与食品研究52卷,S28-38, 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. n . Gharbi m . Pressac m . Hadchouel h . Szwarc s r·威尔逊和f·穆萨,“富勒烯是一种强大的抗氧化剂体内无急性或亚急性毒性,”纳米快报,5卷,不。12日,第2585 - 2578页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. d》和j·j·李,“MnSOD氧化应激反应潜能监管通过线粒体蛋白质涌入,“抗氧化剂和氧化还原信号,20卷,不。10日,1599 - 1617年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 美国福利,c·克劳利m . Smaihi et al .,“细胞水溶性富勒烯衍生物的本地化,”生物化学和生物物理研究通信,卷294,不。1,第119 - 116页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. e·米歇尔,j . Loscalzo, d . e .方便,“谷胱甘肽在健康和疾病peroxidase-1:从分子机制来治疗机会,”抗氧化剂和氧化还原信号,15卷,不。7,1957 - 1997年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. j . Djordjevic a . Djordjevic m . Adzic和m . b . Radojcic“慢性社会隔离妥协谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶的活性在雄性Wistar鼠海马,”细胞和分子神经生物学,30卷,不。5,693 - 700年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. j·d·海耶斯,j·弗拉纳根,i r . Jowsey“谷胱甘肽转移酶”,药理学和毒理学的年度审查,45卷,不。1,51 - 88,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. Smaga, b . Pomierny w . Krzyżanowska et al .,“防治具有抗抑郁活性通过减少氧化应激:行为和生化分析的老鼠,”Neuro-Psychopharmacology &生物精神病学的进展,39卷,不。2、280 - 287年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. k .经营y Iwasaki,山田t . et al .,“过度锰超氧化物歧化酶的氧肺损伤的防治作用,”呼吸系统药物,卷101,不。4、800 - 807年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. j . Djordjevic a . Djordjevic m . Adzic m .米奇i Lukic,和m . b . Radojcic”改变Nrf 2-Keap 1信号通路及其下游靶基因在大鼠大脑在压力下,“大脑研究卷。1602年,20-31,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
62. Y.-S。Keum, s, p . P.-J。Chang et al .,“萝卜硫素的作用机制:抑制p38增殖蛋白激酶亚型导致诱导抗氧化反应element-mediated血红素在人类肝癌oxygenase-1 HepG2细胞,”癌症研究,卷66,不。17日,第8813 - 8804页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. s . h . Ki i . j .赵d . w . Choi和s . g . Kim“糖皮质激素受体(GR)相关SMRT绑定到C / EBPbeta泰德和联盟2 Neh 4/5: SMRT招募的角色在GSTA2 GR基因镇压,“分子和细胞生物学,25卷,不。10日,4150 - 4165年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. Nair, s . t .哎,a . n .香港j.y. Chan和l . Cai”监管潜力共同调制Nrf2 Nfkb1-mediated炎症和致癌基因的表达,”英国癌症杂志》,卷99,不。12日,第2082 - 2070页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. 瞿j·g·h . Liu, NF - x和沈。κB / p65对抗Nrf2-ARE通路通过剥夺CBP Nrf2和促进招聘HDAC3 MafK,”Biochimica et Biophysica学报(BBA)——分子细胞研究,卷1783,不。5,713 - 727年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. f . Yamakura和h·川崎转录后修饰超氧化物歧化酶。”Biochimica et Biophysica学报,卷1804,不。2、318 - 325年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. 诉Oliveira-Marques h·s·马里奥,l . Cyrne f·安图内斯,”在NF -过氧化氢的作用κB激活:从诱导物调制器。”抗氧化剂和氧化还原信号,11卷,不。9日,第2243 - 2223页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2018年奥尔加o . Gonchar等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。