文摘

客观的。这项研究的主要目的是评估水平的氧化应激标记,可溶性CD40配体(sCD40L),血清乳素血浆蛋白质a (PAPP-A)和胎盘生长因子(PlGF)以及颈动脉内膜中层厚度(IMT)在强直性脊柱炎(as)患者活跃阶段没有伴随传统心血管危险因素。材料和方法。观察研究涉及了96名男性受试者:48患者和48个健康的,关于年龄之间没有显著性差异,BMI,并存病,传统心血管危险因素的分布。在两组中,我们估计水平的氧化应激标记,血脂,和炎症参数以及sCD40L血清PAPP-A, PlGF。此外,我们估计颈动脉IMT在每个主题。结果。研究表明,氧化应激的标记,血脂,和炎症,以及sCD40L PlGF,和IMT明显高于组与健康组。结论。我们的结果表明,强直性脊柱炎可能与动脉粥样硬化的风险增加有关。

1。介绍

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性炎症性关节炎影响主要是中轴骨和骶髂关节1,2]。

一些流行病学研究证实的高风险患者心血管发病率和死亡率,这是与增加动脉粥样硬化的风险独立相关的传统危险因素可能与疾病活动,功能和移动性限制,结构损伤和炎症3,4]。

炎症,一方面,在动脉粥样化形成的不同阶段有着重要的作用,,另一方面,减弱了心血管疾病的风险因素(5,6]。

在炎症和吞噬反应,活性氧(ROS)可能释放到细胞外空间和损伤周围组织,从而导致急性期蛋白的生产(7]。

此外,根据氧化应激理论,动脉粥样硬化的结果的氧化修饰低密度脂蛋白(LDL)在动脉壁ROS (8]。修改ox-LDL被公认是一个重要的诱导子promitotic,促炎,血管细胞和硬化的影响9]。更重要的是,ox-LDL proatherogenic复合物可能与不同的分子和形式(例如,ox-LDL / c反应蛋白和ox-LDL /β2-glycoprotein 1)可能不仅使血管炎症,也引发自身免疫反应,加速动脉粥样硬化的发展(10,11]。

此外,高滴度的抗体ox-LDL在心肌梗死患者(已报告12],atheroslerosis [13),和风湿性疾病(9]。

已经证明了CD40L浓度增加颈动脉闭塞患者的疾病也可能是预测心血管事件(14,15]。

另一方面,它也被报道,胎盘生长因子(PlGF)在动脉粥样硬化中起着重要的作用通过刺激血管生成和患单核细胞/巨噬细胞迁移到动脉壁(16]。似乎更有效的动脉粥样化形成的早期阶段,因为anti-PlGF抗体治疗显著抑制早期病变,但在斑块发展的更高级的阶段是无效的(17]。

动脉粥样化形成的其他标记是乳素血清血浆蛋白质a (PAPP-A)。它已经表明,它的循环浓度急性冠脉综合征患者高于慢性稳定性心绞痛患者和健康者。此外,增加血清PAPP-A浓度与冠心病稳定的存在和程度以及预测未来的缺血性心脏事件,和经皮冠状动脉介入的必要性或冠状动脉搭桥手术18,19]。

另一方面,一些论文假定涉及氧化应激可能在疾病发病和进展20.- - - - - -24]。

考虑到这些数据,这项研究的主要目的是评估水平的氧化应激标记,sCD40L, PAPP-A, PlGF以及患者颈动脉IMT的活跃阶段没有伴随传统心血管危险因素。

2。材料和方法

2.1。参与者

研究协议已经被生命伦理委员会审查和批准的西里西亚医科大学卡托维兹(许可数量知道/ 022 / KB / 103/16),和所有的科目我们分析了他们的通知,书面同意列入观察研究。它是符合赫尔辛基宣言(1964年)。这项研究涉及了96名男性受试者:强直性脊柱炎患者48(组,平均年龄为46.06±1.44岁)和48名健康受试者(对照组,平均年龄为46.63±1.50年),关于年龄之间没有显著性差异,BMI,共病障碍和传统心血管危险因素的分布。所有的病人包括观察性研究完成修改后的纽约明确的诊断标准,作为研究的基础/欧拉建议(25]。登记在研究中执行组男性患者,与那些没有明确的诊断患有其他疾病,没有相关的病理,,他的主治医生不适用疾病修饰治疗风湿病的药物(DMARDs),生物制剂,或类固醇。剂量的病人服用非甾体类抗炎药,并没有改变在前一个月的开始学习。所有的患者都HLAB27积极,他们表现出III和IV骶髂关节疾病的放射线等级。BASDAI为5.35±1.64和BASFI为5.13±2.17。当病人没有遭受任何其他疾病。同样,健康受试者没有急性或慢性疾病,他们也没有使用任何药物。受试者的人口数据表所示1。

表1
研究对象的人口数据。

从两组受试者被要求放弃酒精,药物,和任何免疫调制剂,immunostimulators、激素、维生素、矿物质,或其他物质具有抗氧化特性的生化研究前4周。所有的受试者也要求避免咖啡因的消费实验室分析前12小时。

2.2。血液样本集合

所有受试者的血液样本采集前的早晨的第一餐。全血样品(5毫升)来自每个主题,然后收集到的贵要静脉管含乙二胺四乙酸(Sarstedt, S-monovette EDTA-K 1.6毫克/毫升3;目录编号04.1931)和成管状血栓活化剂(Sarstedt S-monovette,目录编号04.1934)。血液样本离心机(10分钟。,900年 4°C),然后立即血浆和血清分离和储存在−70°C的温度,直到生化分析。反过来,红细胞保留从删除EDTA-plasma和等渗盐溶液冲洗,然后10%的hemolysates准备进一步分析。血红蛋白浓度在标准cyanmethemoglobin hemolysates决心的方法。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为1.1%和2.4%。

2.3。生化分析
2.3.1。氧化应激指标分析

(1)测定抗氧化酶的活性。血浆和红细胞超氧化物歧化酶(SOD-E.C.1.15.1.1)活动是由Oyanagui方法(26]。酶活性表达的是亚硝酸盐单元(ν)每毫克的血红蛋白(Hb)或毫升血浆。一个亚硝酸盐单元(1ν)意味着50%的抑制亚硝酸盐离子生产SOD在这个方法中。SOD同功酶(SOD-Mn和SOD-ZnCu)测量使用氰化钾的抑制剂SOD-ZnCu同工酶。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.8%和5.4%。

红细胞过氧化氢酶(CAT-E.C.1.11.1.6)活动是衡量Aebi [27]在IU / mgHb动力学方法和表达。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.6%和6.1%。

红细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GPx-E.C.1.11.1.9)活动由屋化验,情人节动力学方法(28),与叔丁基过氧化作为衬底,并表示微摩尔每分钟NADPH氧化和规范化一克血红蛋白(IU /奸)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为3.4%和7.5%。

谷胱甘肽还原酶的活性在erytrocytes (GR-E.C.1.6.4.2)被Richterich化验的动力学方法(29日),表示为微摩尔NADPH利用每分钟和规范化一克血红蛋白(IU /奸)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.1%和5.8%。

(2)非酶的测定抗氧化状态。等离子体的总抗氧化能力测定等离子体的铁还原能力(收紧)根据Benzie和应变30.)和校准使用Trolox和表达μmol / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为1.1%和3.8%。

血清浓度的蛋白质巯基(PSH)是由美洲等人的方法31日)使用dithionitrobenzoic酸(DTNB)和表达μmol / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.6%和5.4%。

血清尿酸(UA)的浓度取决于uricase-peroxidase方法(32)Cobas Integra 400 +分析仪和表达为mg / dl。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为1.4%和4.4%。

(3)测定脂质过氧化作用的产品和服务条款。脂质过氧化反应的强度在血浆和红细胞测定spectrofluorimetrically作为硫代巴比土acid-reactive物质(TBARS)根据Ohkawa et al。33]。TBARS浓度被表示为丙二醛(MDA)的等价物μmol / l在等离子体或红细胞nmol /迷奸。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.1%和8.3%。

血清浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和抗体ox-LDL (ab-ox-LDL)测量使用ELISA试剂盒(目录编号bi - 20022和bi - 20032,基于,波兰)根据制造商的指示。表达的ox-LDL和ab-ox-LDL浓度ng / ml和μ/ ml,分别。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV) ox-LDL分别为5.8%和9.4%,分别和ab -牛- ldl - 4.1%和8.7%,分别。

血清总氧化剂状态(TOS)决心Erel[描述的方法34),表示μmol / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.2%和6.4%。

2.3.2。测定炎性状态参数

红细胞沉降率(ESR)决定立即在全血与EDTA的古典魏氏法。

高敏c反应蛋白(hs-CRP)(4584年目录编号EIA)血清中浓度是由乳胶immunoturbidimetric方法(生物系统公司、西班牙),表示在mg / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为2.3%和5.5%。

血清血浆铜蓝蛋白(CER)氧化酶活性测定使用Richterich [p-phenylenediamine动力学方法的29日]和mg / dl表达与纯校准后血浆铜蓝蛋白与健康的捐赠者血清池。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为3.1%和6.1%。

2.3.3。测定血脂

总、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇(T-Chol, HDL-Chol, LDL-Chol resp)和triglicerydes (TG)血清中浓度估计使用常规技术(Cobas Integra 400 +分析仪,罗氏诊断,曼海姆,德国)。mg / dl的浓度表示。的国米,intra-assay系数变化(CV),分别T-Chol 2.8%和5.4%,3.2%和5.4%,HDL-Chol LDL-Chol 2.6%和6.5%,TG的2.5%和7.6%。

甘油三酯/脂蛋白胆固醇(TG / HDL)和低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白胆固醇(LDL / HDL)比率计算。

2.3.4。测定PAPP-A、可溶性CD40配体和PlGF

乳素血清血浆蛋白质a (PAPP-A)(目录编号eia - 4512),可溶性CD40配体(sCD40L)(目录EIA4851),和胎盘生长因子(PlGF)(目录编号eia - 4529)浓度被ELISA方法按化验仪器GmbH(德国)包。所有化验根据制造商的说明进行。PAPP-A和sCD40L浓度ng / ml,表达的PlGF浓度pg / ml。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV),分别为6.8%和10.2% PAPPA-A, sCD40L 5.1%和9.4%,6.2%和12.1% PlGF。

2.4。内中膜厚度的测定

高分辨率多普勒超声表现与Logic-5设备是高频线性探针(11 MHz 15 MHz)。超声波检验师是一个angiologist谁不知道主题的临床状态。测量内膜中层厚度(IMT)进行左、右颈总动脉,和2测量的平均值计算。IMT用毫米表示。

2.5。分析强直性脊柱炎的活动

强直性脊柱炎的活动是衡量浴强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)和浴强直性脊柱炎函数索引(BASFI)。

BASDAI有六个问题相关的疲劳,背痛,周围疼痛,肿胀,外围当地温柔,早上刚度(程度和长度)。除了早上刚度有关的项目,所有问题都得分从0(没有)到10(非常严重)使用视觉模拟量表(血管)。和计算两个早上刚度项的均值和剩下的四个项目(35]。

BASFI是十个问题解决的平均评分功能限制和身体活动水平在家里工作,评估血管尺度(0 =容易,10 =不可能)(36]。

2.6。统计分析

统计分析的统计软件包进行使用Statistica 10 Pl软件。对于每个参数,确定指标的描述性统计(平均值和标准偏差(SD))。数据分布的正常使用Shapiro-Wilk测试检查,而方差的同质性是通过应用列文测试检查。为了比较对照组和集团之间的差异,一个独立样本学生的t以及Mann-Whitney或者使用U测试。特定的参数之间的相关性统计验证通过枪兵的非参数相关测试。差异的显著水平 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。氧化应激

作为病人,有更高的抗氧化酶的活性:血浆SOD,随着红细胞SOD,红细胞猫,红细胞GPx,观察红细胞GR,健康受试者相比。但SOD-Mn的等离子体活动和SOD-CuZn同功酶在两组没有显著差异。更重要的是,作为病人,显著降低浓度参数的非酶的抗氧化剂,收紧,PSH、观察和UA与健康受试者相比(表吗2)。

表2
酶促抗氧化状态的参数(超氧化物歧化酶(SOD)、同功酶:锰超氧化物歧化酶(SOD-Mn)和铜-锌超氧化物歧化酶(SOD-CuZn)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及谷胱甘肽还原酶(GR)活性)和非酶的抗氧化状态(铁减少等离子体的能力(收紧),蛋白质巯基(PSH)和尿酸(UA)浓度,以及血浆铜蓝蛋白的活性(CER))在强直性脊柱炎(as)患者和健康者。

此外,血浆MDA显著更高浓度的脂质过氧化反应产品,以及红细胞MDA和ab-ox-LDL ox-LDL指出,在患者与对照组相比健康受试者。此外,作为病人,TOS的浓度明显高于对照组相比(表3)。

表3
氧化应激参数:丙二醛(MDA),氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),氧化低密度脂蛋白抗体(ab-ox-LDL)和总氧化剂状态(TOS)浓度在强直性脊柱炎(AS)患者和健康者。
3.2。血脂、炎症参数和颈动脉内膜中层厚度

作为病人,明显高于血脂浓度参数:T-Chol, LDL-Chol、TG以及TG / HDL比和LDL / HDL比被发现与对照组相比。但只有HDL-Chol的浓度两组没有显著差异。更重要的是,同样的浓度sCD40L PlGF以及颈动脉IMT明显更高的患者相比,健康组。PAPP-A的浓度两组没有显著差异。此外,作为病人,所有检测参数的浓度明显高于炎症状态,ESR, hs-CRP, CER、观察与健康受试者相比(表4)。

表4
参数的血脂(总胆固醇(T-Chol)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Chol)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Chol) triglicerydes (TG)浓度、TG / HDL和LDL / HDL比率),PAPP-A浓度、可溶性CD40配体(sCD40L) PlGF,和价值的颈动脉内膜中层厚度(IMT),以及炎症状态参数(红细胞沉降率(ESR)值,灵敏度高c反应蛋白(hs-CRP)和血浆铜蓝蛋白(CER)浓度)在强直性脊柱炎(as)患者和健康者。
3.3。因为患者的重要估计参数之间的关系

作为组、高之间的显著相关性观察急性期蛋白(hs-CRP与CER; , ),总SOD活性在红细胞和血浆铜蓝蛋白( , )和红细胞谷胱甘肽循环酶活动(痘和GR; , )以及血浆尿酸浓度和收紧活动( , )。温和,但仍显著相关性显示CRP浓度和SOD-CuZn之间SOD-Mn等离子体活动( , )、红细胞MDA含量和SOD红细胞活动( , ),sCD40L PlGF浓度( , )、血浆MDA和T-Chol ( , )和服务条款和TG / HDL比( , )。同时,BASFI之间有高度的相关性和观察BASDAI ( , )的患者。

不幸的是,作为活动参数之间没有显著相关性(BASFI和BASDAI)和氧化压力参数以及颈动脉IMT和氧化压力参数。

4所示。讨论

短暂,在这种观察研究,我们认为明显高于氧化压力参数,水平的炎症状态,和血脂参数,sCD40L, PlGF以及价值观的TG / HDL, LDL / HDL比率,和患者颈动脉IMT的活跃阶段(BASDAI和BASFI),健康受试者相比。

可用的文学,只有少数,明确报告关于prooxidant-antioxidant强直性脊柱炎患者的地位已经出版。

在这项研究中(20.),强直性脊柱炎患者,显著降低血浆总抗氧化状态(助教),以及更高的价值总额的氧化剂(TOS)和氧化应激状态指数(OSI)相比,对照组的健康志愿者。这项研究没有揭示任何重要的上述参数的值之间的相关性和疾病的活动过程。

在另一项研究[22),无显著差异被证明发生在SOD的活性,一氧化氮(no)代谢物,MDA的浓度,在患者组之间的活动形式和组患者的活动过程。SOD的活性,没有代谢物,MDA也未能证明的浓度与对照组相比显著差异的健康受试者,而猫的活性和MDA的浓度积极形式的疾病患者明显更高,相对于其他群体的主题研究。

在这项研究中(37),所有的抗氧化剂酶活性较低,但MDA水平更高的患者作为对照组相比。

下一个文献[38)报道,ESR、CRP和脂质过氧化反应产品更高的患者比健康的主题,但维生素A, C, E,β胡萝卜素在血浆浓度,减少谷胱甘肽,谷胱甘肽过氧化物酶活性在红细胞值较低的患者比健康的主题。但是作者估计只有一些prooxidant-antioxidant状态的选择参数。此外,氧化应激水平是与炎症患者的强度(21]。

与之相反,有许多报纸报道增加心血管风险的患者(39- - - - - -43]。

在最近的研究中,在急性期蛋白浓度显著增加(hs-CRP和CER)被观察到病人的健康受试者相比。hs-CRP之间显著正相关,CER显示以及hs-CRP和等离子SOD-CuZn之间显著负相关。

一些研究人员发现,随着疾病活动增加与减少血脂水平和减少HDL-Chol水平,这往往是几乎两倍的总胆固醇水平下降,导致更多的患血脂(43,44]。

然而,在这项研究[45)的患者中,作者没有观察到在T-Chol显著差异,LDL-Chol, HDL-Chol, TG浓度与健康受试者相比。但在病人,高密度脂蛋白/低密度脂蛋白比的值,复杂的内中膜,TOS浓度以及炎症状态参数均明显高于控制。在这项研究中,一个显著增加T-Chol, LDL-Chol、TG以及TG / HDL和LDL / HDL比观察健康受试者相比。但HDL-Chol浓度作为患者和健康者没有差异。此外,作为患者颈动脉IMT也明显高于健康受试者相比。

高水平的胆固醇,尤其是低密度脂蛋白,激活thrombocytes和可能导致物质激活磷脂酶的释放2。然后,积累的花生四烯酸代谢,脂氧合酶途径和血栓素、白三烯的前列腺素,由环氧酶通路和MDA。在这个新陈代谢、可能产生活性氧和抗氧化能力不足,他们也可能引发脂质过氧化反应(44]。更重要的是,结果表明,TG / HDL比率估计动脉小,密集的低密度脂蛋白胆固醇和预测动脉硬化和心血管事件在成人(46,47]。在我们的研究中,我们观察到显著正相关服务条款和TG / HDL比率之间的关系。

此外,它也表明,血清低密度脂蛋白水平的升高会导致增加循环单核细胞的依从性动脉内皮细胞,同时增加低密度脂蛋白进入内膜(率48]。也有可能TG浓缩可能改变低密度脂蛋白的物理化学性质,这是更容易氧化49]。

在这项研究中,我们还观察到浓度的增加在血浆和红细胞脂质过氧化作用的产品。

MDA是一个最丰富的醛,导致花生四烯酸的过氧化反应,二十碳五烯,二十二碳六烯酸(50,51]。MDA与赖氨酸残基的反应形成希夫碱(52)和修改过程中起着重要作用的低密度脂蛋白及其偏差对巨噬细胞(48]。

在最近的研究中,MDA浓度显著升高的血浆和红细胞在观察病人与健康受试者相比。之间的正相关血浆MDA和T-Chol以及红细胞MDA和SOD的病人也显示。我们没有观察到任何MDA与其他估计参数之间的相关性。这一事实的解释可能是,TBARS化验不专门测量MDA,因为它对MDA以外的化合物(51]。

然而,到目前为止,还没有报道估计ox-LDL和ab-ox-LDL浓度在强直性脊柱炎。在目前的研究中,更高浓度的ox-LDL以及ab ox-LDL作为观察患者与健康受试者相比。

在这项研究中(53),结果表明:抗体ox-LDL与ESR、CRP显著相关早期类风湿性关节炎患者和建议,这些抗体的出现必须与炎症有关。然而,在当前的研究中,没有观察到的相关性之间ox-LDL ab-ox-LDL和其他估计参数。

在我们的研究中,我们观察到一个更高水平的sCD40L PlGF以及他们之间的正相关关系。此外,在这项研究中,PAPP-A水平没有差异,患者和健康者。可能与这一事实有关PAPP-A表达不稳定但不稳定动脉粥样硬化斑块(18]。

研究证明增加氧化应激水平的sCD40L PlGF,脂质障碍,炎症过程可能提高为患者的血管硬化。

然而,这项研究有一些局限性。首先,它涉及只有48个患者,因此更多的病人应该检查。第二,患者在不同的阶段应该参与这项研究。

5。一般的结论

我们的研究结果表明,氧化应激增加,高血清浓度的PlGF sCD40L, IMT增加可能反映了动脉粥样硬化的加速度在男性患者在活跃的阶段,没有伴随传统心血管危险因素。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由医科大学的资助支持的西里西亚(认识- 1 - 045 / K / 7 / K)。