文摘

的果汁猕猴桃对木板。对病人有抗氧化和抗炎特性与2型糖尿病(T2DM)病人体内,但分子机制还不清楚。病人把果汁和血清水平的抗氧化剂mir - 424, Kelch-like ECH-associated蛋白1 (Keap1) erythroid-derived 2 2 (Nrf2),和生化指标测定。汁增加血清microrna - 424的水平,Keap1, Nrf2和减少β(il - 1)及il - 6的水平在2型糖尿病患者。SOD和谷胱甘肽的水平高而ALT和AST水平低的患者食用果汁相比,病人没有果汁。斯皮尔曼等级相关分析表明,血清mir - 424水平呈正相关Keap1和Nrf2水平而Keap1和Nrf2水平呈正相关的SOD水平,谷胱甘肽和负相关βil - 1和il - 6。因此,FJACP提高抗氧化和抗炎状态通过激活Keap1的指标,并通过upregulation Nrf2 mir - 424的2型糖尿病患者。这个试验是注册chictr onc - 1701108704/07/2017。

1。介绍

2型糖尿病(T2DM)病人体内在老年人日益普遍,已成为一个重大的公共卫生问题。不同食物的营养会影响生理活动及其不平衡的发展可能导致2型糖尿病。因此,不同的饮食会影响2型糖尿病的风险。食物丰富的水果,蔬菜,谷物,鱼类和低级肉和脂肪可能有利于降低2型糖尿病(的发展1]。大多数糖尿病患者不能满足要求的食品和营养健康的人。例如,一些水果对健康很重要,但他们不能使用,大多数2型糖尿病患者,因为大多数水果有高级糖。发现了一些蔬菜和水果的摄入与糖尿病的发病率低。然而,果汁消费可以增加女性患糖尿病的风险是有害的(2]。

奇异果(猕猴桃对地板)。作为一个食品对人类健康有重大影响,包括抗氧化和抗炎活动,可以抑制发展和恶化的疾病引起的氧化应激(3]。缺乏维生素C是一种重要的患糖尿病的发展(4]。维生素C的猕猴桃对木板。可以达到380毫克/ 100克(5]。每日摄入的维生素C在高级别上被发现增加antisenescence和antiatherosclerotic活动通过提高生化指标通过抗氧化剂和antiglycation活动(6]。2型糖尿病(T2DM)病人体内的风险往往伴有肌肉萎缩,而炎症状态会加重症状。临床试验表明,维生素C消费对炎症症状患者有预防和治疗功能(7]。FJACP(果汁猕猴桃对木板)被发现改善神经病变患者的生理功能障碍(8]。更重要的是,FJACP的主要人物是含糖量低(9]。因此,它可能是有用的预防2型糖尿病的进展。然而,相关分子机制的功能FJACP T2DM病人保持广泛的未知。

肥胖患者慢性低度炎症有更多的机会得到心脏疾病和2型糖尿病。这与肥胖相关的促炎的病因是更关注脂肪组织障碍和/或在骨骼肌胰岛素抵抗10]。此外,炎症也被发现是相关的2型糖尿病患者胰岛素抵抗的发展(11]。另一方面,氧化压力也是一个重要因素在2型糖尿病并发症的发病机制。Alloxan-induced糖尿病可以导致不平衡在一个动物的骨骼肌抗氧化系统模型。控制氧化压力造成的损失也是一个潜在的治疗方法预防2型糖尿病发展(12]。这些结果表明,炎症和氧化压力是两个主要原因导致T2DM病人的损伤。小分子核糖核酸(microrna),小,非编码RNA,调节蛋白的表达和发现了多种细胞生理活动,包括抗氧化活动(13,14]。研究表明,mir - 424中起关键作用的抗氧化活性抑制氧化压力。mir - 424治疗防止梗死体积和神经元细胞凋亡,减少活性氧的水平(ROS)和丙二醛(疯狂),和增强抗氧化酶SOD的活动。所有的结果表明,mir - 424对氧化应激的保护作用[15]。另一方面,核因子,erythroid-derived 2 2 (Nrf2),是一个redox-sensitive转录因子与炎症性疾病和相关16,17]。Nrf2可以结合Kelch-like ECH-associated蛋白1 (Keap1)形式增加抗氧化剂的水平的一个重要复杂的分子(18]。然而,血清mir - 424水平之间的关系和抗氧化剂Keap1 Nrf2仍不清楚。因此,我们想要探索的影响FJACP Keap1和Nrf2 T2DM病人血清mir - 424水平进行调查。

2。材料和方法

2.1。参与者

伦理委员会批准的协议都是中国医科大学第一附属医院(沈阳、中国),并根据这些原则进行了研究中所描述的世界医学协会赫尔辛基宣言》(19]。共有122名患者,50 - 70岁,是从我们的招募医院,被诊断为2型糖尿病。

2.2。包括标准

以下包括使用标准:(1)病人很少食用水果日报;(2)患者的正常工作和配偶;(3)他们想加入我们的研究,如接受FJACP治疗;(4)患者诊断为2型糖尿病;(5)患者身体质量指数(BMI)超过25不到39公斤/米2;和三个月内(6)体重稳定在目前的实验。

2.3。排除标准

以下扣除标准进行:(1)患者老年性痴呆,如帕金森病(PD)、阿尔茨海默病(AD)和脑损伤;(2)病人患有心脏疾病,高血压,头晕,和相关疾病;(3)患者肢体运动障碍;和(4)患者有明显异常的临床结果。

2.4。研究设计

选择后通过使用包括标准及排除标准,均匀122名患者随机分配到FJACP集团(FJACPG,收到10毫升FJACP日报)和对照组(CG,获得10毫升液体安慰剂日报)(图1)。整个周期是9个月。锻炼(每个人每天步行约1.5到2英里)被认为是两组在同一水平。从FJACPG 15例(6例,9例从CG)结束时退出实验。患者中,6个病人退出FJACPG和9名患者退出CG。因此,55岁和52名患者从FJACPG和CG完成整个实验。


图1
本研究的流程图。FJACPG: FJACP组;CG:安慰剂组。整个时期的随访9个月。
2.5。生物化学分析

所有患者随机毛细血管血糖水平超过6.1毫米,视为糖尿病的风险更高(20.),需要进一步检查。葡萄糖的浓度和HbAlc测试两小时后75克口服葡萄糖摄入量。葡萄糖浓度测定采用YSI 2700选择生化分析仪(美国YSI,黄色的弹簧,哦)。糖化血红蛋白水平衡量BIO-RAD十佳高效液相色谱(美国大力神,CA)。高和低密度脂蛋白胆固醇测定,通过使用高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇/ VLDL分析工具包(猫。发射数字ab65390 Abcam上海办事处,上海,中国。甘油三酸酯水平测量通过甘油三酯量化分析工具(ab65336)。基底血糖(BG)、空腹血糖(FBG)水平是衡量ABL800 FLEX血液气体分析仪(米德兰,加拿大)。血清基础胰岛素(箱)、空腹胰岛素(鳍)测试等(Linco、锡德,美国)。胰岛素抵抗( )和胰岛素分泌功能( 计算。

2.6。酶活性分析

糖尿病是增加氧化应激(21,22]。SOD (23,24],AST [25,26],ALT [27,28)、谷胱甘肽与氧化应激(29日- - - - - -34]。这里,SOD水平,AST、ALT、谷胱甘肽测定。AST和ALT测定自动化临床化学分析仪(美国印第安纳波利斯,)。SOD的活性测定超氧化物歧化酶活性测定工具包(猫。从Abcam ab65354数量)。谷胱甘肽测定谷胱甘肽的检测化验设备(猫。从Abcam ab65322数量)。

2.7。脂质测量模式索引

血清脂质模式,包括总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(高密度脂蛋白胆固醇)和低密度脂蛋白胆固醇(低密度脂蛋白),是衡量faca - 401全自动生化分析仪(Labomed Inc .)、洛杉矶、钙、美国)。丙二醛(MDA)水平测定通过脂质过氧化(MDA)试验设备(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。脂质指标测量之前和之后的3个月的实验。

2.8。炎性细胞因子的测定

糖尿病的病理密切相关(il - 1)β及il - 6。5毫升血液样本从所有参与者在实验之前,获得3 -之后,6 -和九个月的练习。因此,这些细胞因子的水平用人力ELISA试剂盒测定il - 1β(猫。ab100562数量)和il - 6(猫。ab46042数量)和Nrf2转录因子分析工具包(ab207223) Abcam(上海)有限公司(上海,中国)。

血清炎性细胞因子测量之前和之后的3、6和9个月的实验。

2.9。实时定量rt - pcr(存在)

RNA被RNA从血液样本分离净化设备(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。互补脱氧核糖核酸合成热费希尔科学的互补脱氧核糖核酸合成工具。SYBR绿色实时PCR大师混合(热费希尔科学)是用于中存在。以下引物合成:mir - 424 F: 5′-cgaggggatacagcagcaat-3′, R: 5′- ccccaccttctaccttcc(98个基点);Keap1 F: 5′-gaggtgacgccctcccagca-3′, R: 5′-catggccttgaagacagggc-3′(210个基点);Nrf2 F: 5′- agtggatctgccaactactc-3′, R: 5′-agtgactgaaacgtagccga-A3′(140个基点);和GAPDH, F: 5′-GGAAAGCFJACPGFJACPGGCGFJACPGAT-3′, R: 5′-AAGGFJACPGGAAGAAFJACPGGGAGTT-3′。周期时间的价值利益与GAPDH基因规范化。

2.10。免疫印迹分析

总蛋白提取通过总蛋白隔离设备(美国ITSI-Biosciences,约翰斯敦,PA)。总蛋白质是由sds - page分离和转移到聚乙二烯二氟化物(PVDF) (RTP公司,薇诺娜,MN,美国)。PVDF孵化了兔多克隆抗体Keap1 (ab139729 Abcam),兔多克隆抗体anti-Nrf2 (ab137550 Abcam)和兔多克隆抗体(ab37168 Abcam) GAPDH一夜之间在4°C。随后,样本是孵化与过氧化物酶和peroxidase-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(ab97051 Abcam)。免疫反应性的乐队与民建联可视化(Sigma-Aldrich化学品,圣路易斯,密苏里州,美国)和微被ImageJ量化软件(美国国家卫生研究院,马里兰州贝塞斯达)。

2.11。统计分析

SPSS20.0被用来处理数据。采用t检测当比较测量数据。斯皮尔曼等级相关是用来比较两个变量。结果平均数±标准差。在的情况下 ,有显著的统计学差异。

3所示。结果

3.1。基线特征

表1显示两组之间的临床特征相似。所有的患者的年龄在FJACPG 56.1±14.4, 57.5±12.3在CG。男性和女性的比例是37/24和39/22 FJACPG CG,分别。无显著统计学差异为基线人口统计学和代谢特征的病人之间的两组( )。

表1
2型糖尿病受试者的基线人口统计学和代谢特征。
3.2。两组之间的生化指标的变化

表2显示FJACPG和CG不能改善胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能。FJACP增加高密度脂蛋白的水平和减少的水平TG, TC,低密度脂蛋白胆固醇( )。这些参数有显著的统计差异之间的两组( )。

表2
两组参数变化。
3.3。生化酶活动的参数

水平的草皮,AST、ALT和谷胱甘肽测定。是显示在表3,FJACP和对照组增加SOD和3个月后谷胱甘肽水平相比,本研究之前的水平( )。没有明显统计学差异之间的这些参数两组治疗3个月后( )。SOD与谷胱甘肽的水平在CG在FJACPG高于6个月治疗后( )。同样,SOD和谷胱甘肽的水平在FJACPG高于CG的九个月后治疗( )。相比之下,在FJACPG的ALT水平都低于CG 9月后治疗( )。结果表明,长期FJACP消费显示抗氧化活动与CG相比更好的结果。

表3
生化酶活动的参数。
3.4。脂质模式的比较

表4表明血清TG、TC、低密度和MDA降低,而高密度脂蛋白胆固醇水平增加FJACPG后3个月的治疗,但两组之间的差异没有统计学意义( )。脂质模式进一步提高FJACPG 6个月治疗后,和两组之间的差异有统计学意义( )。同样,脂质模式在FJACPG 9个月后,明显改善,两组之间的差异有统计学意义( )。所有结果表明,FJACP显著提高脂质T2DM病人中的模式。

表4
脂质在T2DM病人中模式的比较之前和之后的治疗。
3.5。长期FJACP显著减少βil - 1和il - 6的水平

如图2显示,在这项研究之前,血药浓度无显著统计学差异两组之间的βil - 1和il - 6 ( )。相比之下,βil - 1和il - 6的水平在两组减少( ),但仍然没有明显统计学差异之间的血βil - 1和il - 6的浓度两组治疗3个月后( )。βil - 1和il - 6的水平在两组进一步降低( ),有显著统计学差异之间的il - 1β在血药浓度两组(图6 -和九个月后治疗2(一个), )。有显著的统计差异的血药浓度il - 6和九个月治疗后两组之间(图2 (b), )。结果表明,长期FJACP显著减少βil - 1和il - 6的水平。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
测量βil - 1和il - 6的浓度的ELISA在血液样本。(一)il - 1β的浓度。(b) il - 6的浓度。FJACPG: FJACP组;CG:安慰剂组。所有数据被当作平均值±SD。
3.6。长期FJACP消费增加了血清mir - 424水平,Keap1, Nrf2

如图3显示,在这项研究之前,没有明显统计学差异的mRNA的血清mir - 424水平,两组之间Keap1, Nrf2 ( )。相比之下,信使rna的血清mir - 424水平,Keap1, Nrf2增加两组( ),但有显著的统计差异之间的Nrf2 mRNA水平两组3个月后( )。信使rna的血清mir - 424水平,Keap1, Nrf2进一步增加两组( ),并在mRNA水平有显著的统计差异Keap1和Nrf2(图6个月后两组之间3, )。多大差别的mRNA的血清mir - 424水平,Keap1, Nrf2和9个月后观察两组之间(数字3(一个),3 (b),3 (c), )。结果表明,长期FJACP消费显著增加Keap1和Nrf2 mRNA水平。

(一)
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(b)
(b)
(c)
(c)
图3
存在相对mRNA水平的分析。(一)相对mRNA的血清mir - 424水平。(b) Keap1的相对mRNA水平。(c)相对的Nrf2 mRNA水平。FJACPG: FJACP组;CG:安慰剂组。所有数据被当作平均值±SD。
3.7。长期FJACP消费Keap1的蛋白质含量增加,Nrf2

如图4显示,在这项研究之前,对蛋白质含量无显著统计学差异Keap1和Nrf2两组( )。相比之下,Keap1的蛋白质含量和Nrf2增加两组( ),但只有显著统计学差异的蛋白质含量之间的Nrf2两组治疗3个月后( )。Keap1的蛋白质含量和Nrf2进一步增加两组( ),有显著统计学差异Keap1的蛋白质含量和Nrf2以来两组之间(图6个月治疗4, )。区别Keap1的蛋白质含量和Nrf2和九个月治疗后观察两组之间(数字4(一)和4 (b), )。结果表明,长期FJACP Keap1和Nrf2蛋白质含量显著增加。

(一)
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(b)
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图4
免疫印迹分析Keap1的相对蛋白质含量和Nrf2。(一)Keap1的相对蛋白质含量。(b) Nrf2的相对蛋白质含量。FJACPG: FJACP组;CG:安慰剂组。所有数据被当作平均值±SD。
3.8。协会mir - 424和炎性细胞因子之间的水平

斯皮尔曼等级相关分析表明,il - 1β(图的水平5(一个))和il - 6(图5 (b))减少时,mir - 424水平增加。之间存在着负相关关系mir - 424水平和水平的il - 1β或il - 6 ( )。研究结果表明,更高层次的Nrf2将导致较低的βil - 1和il - 6水平。

(一)
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(b)
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图5
mir - 424水平之间的关系,促炎细胞因子的水平。(a)水平之间的关系mir - 424和il - 1的水平测试。(b)之间的关系,mir - 424水平和il - 6的水平。斯皮尔曼等级相关的测试进行了比较两个变量。有一个强烈的负面协会如果ρ的值介于1和−−0.5。
3.9。协会mir - 424和生物标志物之间的抗氧化水平的因素

斯皮尔曼等级相关分析表明,SOD(图的水平6(一))、谷胱甘肽(图6 (b))增加时,mir - 424水平增加。有一个积极的关系mir - 424的水平和水平的il - 1β或il - 6 ( )。相比之下,ALT(图的水平6 (c))和AST(图6 (d))减少时,mir - 424水平增加。结果表明,更高层次的mir - 424将促进抗氧化活动的2型糖尿病患者。

(一)
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(c)
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(d)
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图6
mir - 424水平之间的关系和生物标志物的水平的抗氧化的因素。(a)水平之间的关系mir - 424和SOD水平。(b)之间的关系,mir - 424水平,谷胱甘肽的水平。(c)水平之间的关系mir - 424和ALT水平。(d)之间的关系,mir - 424水平和AST水平。斯皮尔曼等级相关的测试进行了比较两个变量。有一个强烈的负面协会如果ρ的值介于1和−−0.5。有一种强烈的正相关,如果ρ值介于0.5和1。
3.10。协会之间的蛋白质含量Nrf2和炎性细胞因子

斯皮尔曼等级相关分析表明,il - 1β(图的水平7(一))和il - 6(图7 (b))减少Nrf2水平增加时。之间有负相关关系的水平Nrf2和il - 1β水平或il - 6 ( )。研究结果表明,更高层次的Nrf2将导致较低的βil - 1和il - 6水平。

(一)
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图7
Nrf2水平之间的关系,促炎细胞因子的水平。(a)水平之间的关系Nrf2β和il - 1的水平。(b) Nrf2水平之间的关系和il - 6的水平。斯皮尔曼等级相关的测试进行了比较两个变量。有一个强烈的负面协会如果ρ的值介于1和−−0.5。
3.11。协会Nrf-2之间的蛋白质含量和生物标记物的抗氧化因素

斯皮尔曼等级相关分析表明,SOD(图的水平8(一个))、谷胱甘肽(图8 (b))增加Nrf2水平增加时。Nrf2水平之间有积极的关系和il - 1β水平或il - 6 ( )。相比之下,ALT(图的水平8 (c))和AST(图8 (d))减少Nrf2水平增加时。结果表明,更高层次的Nrf2将促进抗氧化活动的2型糖尿病患者。

(一)
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(d)
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图8
Nrf2水平之间的关系和生物标志物的水平的抗氧化的因素。(a)水平之间的关系Nrf2和SOD水平。(b) Nrf2水平之间的关系,谷胱甘肽的水平。(c)水平之间的关系Nrf2和ALT水平。(d)之间的关系Nrf2和AST水平。斯皮尔曼等级相关的测试进行了比较两个变量。有一个强烈的负面协会如果ρ的值介于1和−−0.5。有一种强烈的正相关,如果ρ值介于0.5和1。
3.12。协会mir - 424和Nrf2之间的水平

斯皮尔曼等级相关分析表明,Keap1的水平(图9(一个))和Nrf2(图9 (b))增加时,mir - 424水平增加。有一个积极的关系的水平mir - 424和Keap1的水平或Nrf2 ( )。研究结果表明,更高层次的mir - 424将增加Keap1的水平和Nrf2。

(一)
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(b)
(b)
图9
mir - 424水平之间的关系和Keap1的水平或Nrf2。(a)水平之间的关系mir - 424和Keap1的水平。(b)之间的关系,mir - 424水平,Nrf2水平。斯皮尔曼等级相关的测试进行了比较两个变量。有一个强烈的负面协会如果ρ的值介于1和−−0.5。有一种强烈的正相关,如果ρ值介于0.5和1。

4所示。讨论

物理指标的变化表明,对照组和FJACP集团提高了抗氧化活动2型糖尿病。值得注意的是,3个月治疗后长期FJACP显示一个更好的结果。大多数老年人,运动的能力开始下降,下肢骨骼肌的力量发挥了至关重要的作用的活动。人口群体中艰难的行走,糖尿病并发症的风险将被开发35]。相比之下,长期食用FJACP显著改善糖尿病,包括提高幸福指数和糖化血红蛋白水平的降低,光纤光栅,BMI (36]。同样,FJACP也一直报道的功能降低BMI的水平(37)和血糖(38]。

现在比较研究表明身体状况改善了3个月后两组。此外,膝盖在FJACPG扩展力量和平衡功能明显改善(数据没有显示)。结果可能是由于正常的运动(散步日报)可维护。锻炼是保持在相同的水平(每个人每天步行约1.5到2英里)之间的两组。运动功能没有详细探讨。一般改善患者FJACPG从CG比。6个月后,有显著的统计差异FJACPG和CG。结果表明,FJACP可能有一些好处一般福祉。工作不是本研究的重点,但它是非常重要的,将在未来进行确认的结论。

FJACP提高抗氧化和抗炎状态的指标影响Keap1和Nrf2患者2型糖尿病。Keap1和Nrf2发挥重要作用在预防和发展2型糖尿病的风险。它可以减少促炎细胞因子的水平,增加抗氧化分子水平。2型糖尿病的特点是炎症(39,40)和氧化剂状态(41,42]。疾病与肾功能障碍密切相关(43,44和周围神经病变45,46]。2型糖尿病是心血管疾病的主要原因(47,48]。Nrf2和Keap1的水平显著降低2型糖尿病患者。确保Nrf2 Keap1,之间的互动,这些分子存在,很多工作在未来的工作需要做。

FJACP功能的原因是复杂的(图10)。FJACP功能的原因是复杂的(图10)。FJACP含有大量的抗氧化剂茶多酚和维生素等(49]。多酚显示强大的抗氧化活动ROS拾荒者(50]。茶多酚作为一种重要的生物活性化合物已经被移植报道有抗癌作用的水平miR-1 [51]。其他报告还表明,多酚具有生物功能的影响miRNA-mediated监管(52]。因此,FJACP也可能影响血清mir - 424水平。


图10
FJACP在T2DM病人的多种功能。

维生素C是富含FJACP可能影响血清microrna的水平。维生素C被认为是诱导胚泡的重组增强剂在胚胎细胞。维生素C影响表观遗传修饰符,脱甲基基因启动子的激活多能性基因和microrna的胚胎细胞(53]。然后,分化和发育基因受到ESC-enriched microrna的压抑,维持干细胞的状态。MicroRNA-expressing概要报告受到维生素C的影响(54]。目前研究结果表明FJACP微rna - 424的水平增加,表达下调Nrf2和Keap1的活动。结果提高了指标的抗氧化和抗炎T2DM病人的情况。

根据中国理论,FJACP可以转移之间的强度不足和过度从人体的不同部位,包括上部和下部的四肢、内脏,和环境。全身与合作在不同器官FJACP的主要思想。FJACP的局限性是它必须很好地理解和执行完全作为其核心观点。过度消费的FJACP将导致对人体健康的危害,因为它含有维生素c。更多的麻烦,不正确的FJACP消费可能导致胃疼。

目前的研究也有一些局限性。FJACP应该执行的功能在一个更大的人口,因为它显示了更少的副作用。的详细分子机制促炎细胞因子之间的关系和Keap1and Nrf2仍不清楚。尽管FJACP富含茶多酚和维生素C, mir - 424之间的关系和多酚或维生素C仍然未知。确保FJACP的功能作用在2型糖尿病存在,仍然需要很多工作要做。

5。结论

有益的FJACP证明,长期FJACP将有利于改善2型糖尿病的症状。FJACP的康复中的病残者功能可能与活动的增加和SOD和谷胱甘肽水平降低的ALT和AST水平,进而增加高密度脂蛋白胆固醇水平,减少FJACPG, TC,低密度。所有的结果减少氧化应激在2型糖尿病。此外,FJACP激活Keap1并通过upregulation Nrf2 mir - 424中扮演着很重要的角色在T2DM病人的抗氧化和抗炎活动。FJACP作为药物干预应该开发潜力为防止二型糖尿病的风险或发展。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。