文摘

溶栓的组合,重组组织纤溶酶原激活物,药物不良反应,一种抗氧化剂,据报道提高急性缺血性中风后血管再通。我们检查了溶栓疗效的药物溶栓的影响通过测量溶栓使用新开发的microchip-based flow-chamber化验。栓塞治疗脑缺血的老鼠模型与溶栓或alteplase-edaravone联合治疗。联合治疗显著降低梗死体积和提高神经赤字。人类健康志愿者的血样被暴露于药物不良反应,溶栓、溶栓药物不良反应和过氧化氢的结合。全血灌注在胶原蛋白——thromboplastin-coated芯片;毛细血管闭塞是监控视频显微镜和流动压传感器。曲线下的面积(血栓形成的程度或溶栓)在30分钟edaravone-alteplase——比alteplase-treated组低69.9%。溶栓的溶栓效果明显减弱在过氧化氢的存在,表明氧化应激可能阻碍溶栓。肺动脉栓塞测量来评估这些影响在人类platelet-poor血浆样本。 Although hydrogen peroxide significantly decreased the elevation of D-dimers by alteplase, edaravone significantly inhibited the decrease. Edaravone enhances alteplase-mediated thrombolysis, likely by preventing oxidative stress, which inhibits fibrinolysis by alteplase in thrombi.

1。介绍

溶栓是最有效和常用的重组组织纤溶酶原激活物(tPA)在急性缺血性中风患者溶栓(AIS) (1]。组织纤溶酶原激活物物酶催化转化的纤溶酶原胞浆素(物2]。

药物不良反应(Radicut®;田边三菱制药公司,日本大阪)是一个low-specificity抗氧化剂,进行清除各种自由基。药物不良反应表现出神经与血管的保护作用与细胞凋亡、坏死、水肿,炎性细胞因子(3- - - - - -9]。

多项临床试验表明,edaravone-alteplase联合治疗比独自溶栓在AIS患者更有效(1,10- - - - - -13]。木村等。14推测这些疗效发生因为药物保护缺血性损伤的内皮细胞,增加内源性tPA水平和促进早期血管再通14- - - - - -16]。然而,当前可用的全球临床药物不良反应的疗效的证据不足,这种药物的疗效和更基本的证据结合溶栓是必要的。

在缺血鼠脑中,药物不良反应阻止内皮细胞损伤和血脑屏障的破坏17,18]。这些在活的有机体内研究表明,edaravone-alteplase仅比溶栓联合治疗更有效在大鼠大脑中动脉闭塞的管腔内的尼龙长丝(17,18]。但是,没有报告描述了建立模型的血栓栓塞clot-induced脑缺血,从而更准确地反映临床病理条件。因此,我们使用一个血栓栓塞clot-induced脑缺血模型在活的有机体内。

最近的一项实验研究表明,血栓体积显著降低了edaravone-alteplase比单独使用溶栓联合治疗的氦氖激光器激光血栓形成模型大鼠肠系膜微血管(19]。药物不良反应被认为是保护内皮细胞,防止新的血栓形成增强内皮一氧化氮合酶的表达,提高一氧化氮的释放,抑制selectin[的表达20.]。增加一氧化氮水平导致血管舒张,selectin的差别,对这些基因的抑制血小板粘附,血小板聚集,白细胞粘附[21]。因此,药物不良反应有望加速早期血管再通。然而,药物不良反应血液本身的影响,而不是在内皮细胞,是未知的。当前的在体外化验的纤溶反应,如clot-lysis测试,thromboelastography,和旋转thromboelastometry,通常表现在缺乏血液流动;这就限制了他们与病理的相关性动脉血栓形成或生理止血22,23]。克服的局限性与动物模型和静态的在体外分析评估纤维蛋白溶解,细川护熙et al。24)推测评估fibrin-rich血小板血栓形成在剪切流可以是一个有用的模型,研究动脉溶栓过程循环。

本研究的目的是研究药物不良反应的机制促进alteplase-mediated溶栓在体外在人类血液健康志愿者捐赠的。我们使用了新开发的总血栓形成分析系统(T-TAS®;藤森Kogyo有限公司,东京,日本)量化血栓溶解在血液暴露于药物不良反应,溶栓、溶栓和药物不良反应。我们还研究了过氧化氢的影响(H₂O₂alteplase-induced溶栓)。最后,我们测量肺动脉栓塞的浓度,纤维蛋白降解产物,在富含血小板血浆(PRP)油底壳后解决方案收集T-TAS化验确定edaravone-alteplase联合治疗可以抑制血栓形成或促进血栓溶解。

2。材料和方法

实验协议是机构批准的动物保健和使用委员会鹿儿岛大学(日本鹿儿岛)。研究协议是经当地伦理委员会批准鹿儿岛大学和书面知情同意之前就从所有个人获得他们的参与。

2.1。大鼠血栓栓塞缺血模型

中部和后部脑动脉的血栓栓塞缺血诱导在8-week-old男性Sprague-Dawley老鼠重290 - 310克(如前所述)(25),做了一些调整。麻醉诱导和维持着2.5%到3.0%异氟烷吸入。建立麻醉后,老鼠被放置在手术台上仰卧位。直肠温度保持在37°C±1°C从麻醉之前觉醒的开始。最初,我们执行一个左股1厘米的皮肤切口,插入0.7×1.9毫米24-gauge导管(Angiocath®;正欲有限公司福岛,日本)进入左股动脉在显微镜下,和0.15毫升的动脉血液。这血注入1.5毫升超小型电子管包含10个单位的凝血酶(Sawai制药、日本大阪)50μl盐水和在室温下保持30分钟。在2800转离心进行2分钟,和上层的血清丢弃。血栓被吸进4-French聚氯乙烯管(原子伸缩管;原子医学、日本东京)1毫升一次性注射器(Termosyringe®;作秀的有限公司,日本东京)。操作显微镜下,左常见,外部和内部颈动脉通过中线切口暴露了。颈外动脉的结扎,凝固,减少近端舌和上颌动脉分支。所有其他的颈外动脉的分支是凝固和切断。颈内动脉被隔离以避免损伤迷走神经。pterygopalatine动脉的结扎在它的起源。 The internal and common carotid arteries were clamped with small aneurysm clips. A 24-gauge catheter (SURFLO Flash®; Terumo Co.) combined with a 1 ml syringe was inserted into the internal carotid artery via a small incision in the external carotid artery stump. The clot was pushed into the internal carotid artery via a 24-gauge catheter by means of a straightened 1 mm diameter paper clip. The thrombus occluded the distal internal carotid artery, the proximal portion of the anterior cerebral artery, the middle cerebral artery, and the posterior cerebral arteries. To evaluate the infarction volume, neuromotor function, and hemorrhagic transformation at 24 h, the 5 mm clot (volume of 3.6 mm³)推进颈内动脉( 每组)。撤出导管后,颈外动脉的结扎。临时剪辑被撤回,颈内动脉血流恢复。

我们没有使用脑血流量(CBF)监控。Shimamura et al。25)报道,CBF监视器不不可或缺的这个模型,因为其他手术操作可以执行建立脑损伤和/或颅内压的变化是否已经被避免了。此外,颞肌的解剖导致咀嚼功能障碍,导致营养不足。相反,我们只使用老鼠的神经评分觉醒后3或4。觉醒后的老鼠评估神经赤字和血栓栓塞后24小时。神经运动功能评分系统5范围(0 - 4)曾如前所述26]。规模是如下:0 =没有明显的赤字,1 =右前肢弯曲,2 =减少右前肢握把尾巴时,3 =自发运动在各个方向环绕只有尾巴拉,4 =自发盘旋。

2.2。药物治疗

三组大鼠研究如下:vehicle-injected对照组,溶栓组和edaravone-alteplase组。药物不良反应和溶栓是由三菱田边制药公司提供。后立即血栓栓塞6毫克/公斤的药物不良反应管理在20分钟内通过颈静脉导管使用输液泵。在血栓栓塞后20分钟,3毫克/公斤的溶栓药物不良反应后不久,政府管理。溶栓组车辆代替药物不良反应,其次是溶栓治疗。对照组接受注射的汽车而不是药物不良反应和溶栓。药物不良反应的剂量和时间管理并通过初步实验,确定溶栓药物不良反应的影响最大化(5]。因此,溶栓的剂量低于先前的报道使用10毫克/公斤(17,18]。

2.3。测量梗死体积

静脉血抽样后,老鼠被杀,他们的大脑切除后24 h血栓栓塞(如前所述)(26]。生理盐水灌注是transcardially斩首。大脑仔细切除,切成6 2毫米厚的日冕部分额叶尖端使用大脑切片机。片被浸在1%的解决方案2,3,去除氯磷酸缓冲盐在37°C (pH值7.4)10分钟。染色后,部分进行扫描来确定缺血性梗塞体积。梗死灶使用接穗图像测量软件和β4.0.3 (Scion Corp .)弗雷德里克博士)。总梗塞面积(毫米³)乘以厚度的大脑部分获取梗塞体积。此外,可见血肿或出血性转化的存在被记录。

2.4。大鼠血液样本和实验室数据

在血栓栓塞后24小时,老鼠深深通过腹腔内注射4%水合氯醛麻醉(10毫升/公斤)。从腋静脉血样采集。

药品不良反应如肾脏和肝脏疾病期间偶尔观察药物不良反应治疗> 5%的患者(27]。评价药物不良反应包括肾和肝疾病,血清天冬氨酸氨基转移酶,血清丙氨酸转氨酶、血尿素氮和血清肌酐水平来衡量一个酶的方法使用一个富士DRI-CHEM幻灯片工具包(富士医疗、东京、日本)。

2.5。人类的血液样本

血液样本10健康,禁食日本志愿者(平均年龄40.3±12.7岁)被收集在塑料管含有3.2%柠檬酸钠(作秀的成分有限公司)。所有的志愿者了抗血栓形成的药物研究的2周内。一个志愿者定期带一个场外鱼油补充剂(二十二碳六烯酸300毫克/天,二十碳五烯酸100毫克/天)。正常的范围T-TAS分析尚未定义,但所有志愿者的样品的T-TAS发现躺在123年95%的平均健康的日本人参加了我们的初步研究(数据没有显示)。富含血小板血浆被离心准备15分钟,每分钟800转,platelet-poor等离子体(PPP)是由离心3000 rpm,持续15分钟。

在实验中使用全血和PRP样本,我们选择的最终浓度溶栓(500国际单位/毫升)和药物不良反应(3μ米)基于最大浓度的一半后政府对日本AIS患者(5,28]。在实验中使用购买力平价样本,我们选择的最终浓度溶栓(50,100,和250国际单位/毫升)和药物不良反应(6和60海里)基于初步实验的结果。最终浓度的维生素C (6μ米)、维生素E(120海里),和南汽(6μ米)选择基于初步试验和先前的报道,效果相当于药物不良反应(29日]。的最终浓度H₂O₂(100μM)是基于以前的报告,认识到它是很难估计的局部浓度活性氧簇(ROS)的血管内血栓在AIS (5]。维生素C和E是来自关东大Kagaku有限公司有限公司(日本东京),南汽和光纯化学物质是来自kouichi(日本大阪),和H₂O₂从Sigma-Aldrich获得日本(日本东京)。

样本6个健康,禁食志愿者(平均年龄35.8±7.6岁)进一步选择的实验标本暴露在H₂O₂。这6个志愿者从最初的10中选择,因为他们有一个正常反应溶栓。剩余的志愿者,一个是nonresponder,两个是不完整的救援人员,和一个over-responder。

2.6。T-TAS

溶栓的溶栓作用,药物不良反应,溶栓和药物不良反应与控制流条件下使用T-TAS全血和PRP。量化血栓形成和血栓溶解在流动条件下,如前所述执行T-TAS试验(24]。血栓形成和血栓溶解使用内置光学显微镜观察到的芯片。抗氧化剂(药物,维生素C和E,或NAC)添加到血液样本的溶栓前10分钟。过氧化氢的溶栓后立即添加。一旦溶栓或H₂O₂管理,每个样本在微芯片涂上胶原蛋白和组织灌注血栓形成质促进血栓形成的流量4μl / min,对应的初始壁剪切率240每秒。

2.7。测量肺动脉栓塞浓度油底壳T-TAS的解决方案

T-TAS油底壳的解决方案是由稀释分析池PRP样品在1:25比乙二胺四乙酸在800转离心15分钟紧随其后。肺动脉栓塞的浓度也在水池里的解决方案使用LPIA-NV7仪器测量和rm73 - 752 ylk解决方案(LSI Medience公司(日本东京)。

2.8。纤维蛋白溶解化验

纤维蛋白溶解试验进行评估是否通过溶栓药物不良反应提高溶栓。Microplate-based纤维蛋白溶解化验进行在平底37°C 96孔聚苯乙烯板(康宁;Sigma-Aldrich日本)通过监控(浊度变化_405年)使用VersaMax标(分子设备日本,日本东京)。钙离子加速纤维蛋白凝块的形成的纤维蛋白原凝血酶的存在。一百微升30%的整除人类PPP汇集所有10个志愿者和TBSTC(8毫米三羟甲基氨基甲烷在液pH值7.4,Tween-20 0.008%,氯化钙和12毫米)的存在与否也准备了溶栓(0,100,或250国际单位/毫升)或药物不良反应(0、6或60海里; )。药物不良反应的浓度已经确定初步实验。药物不良反应是添加到样品溶栓前10分钟。

2.9。在人类PPP样品浓度测量肺动脉栓塞

肺动脉栓塞测量,以确定药物不良反应减弱alteplase-induced的抑制纤维蛋白溶解的H₂O₂。四百微升30%的整除人类PPP汇集所有10名志愿者和TBSTC准备。孵化后15分钟37°C, H₂O₂(100μ米),药物不良反应(60海里),或车辆了。孵化后10分钟37°C,溶栓(100国际单位/毫升),胞浆素(250μg / ml),或车辆补充道。孵化后纤维蛋白沉积发生的37°C 10分钟,抑肽酶(400桥/毫升)补充道。以最大速度离心5分钟后,肺动脉栓塞的浓度测量使用ACL上自动分析仪(仪器实验室,贝德福德,MA) ( )。

2.10。统计分析

神经功能评分、梗死体积,出血性转换速度和血液测试数据进行了分析使用Steel-Dwass方法或Bonferroni-Dunn方法在多个比较合适。

曲线下的面积在30分钟(AUC30)计算评估血栓形成和血栓溶解的程度。AUC30代表流动压曲线下的面积(< 80 kPa) 30分钟后开始试验,如前所述[24]。AUC30也用来量化的损伤血栓形成闭塞时没有实现在一个试验。比较两组使用成对进行t以及或Wilcoxon符号秩检验。

吸光度数据分析重复测量双向方差分析Bonferroni紧随其后的测试。

数据提出了均值±标准差,除非另有指示。差异与 被认为是具有统计学意义。所有使用SPSS统计分析(版本20;IBM公司,纽约阿蒙克)。

3所示。结果

3.1。Edaravone-Alteplase组合减少梗塞体积,改善大鼠的神经运动的功能

我们评估大鼠血栓栓塞中风模型,在远端颈内动脉、大脑前动脉的近端部分,大脑中动脉和大脑后动脉被自体血栓闭塞(图1 (b))。我们vehicle-injected对照组相比,溶栓组,和edaravone-alteplase组合集团允许我们调查edaravone-alteplase联合治疗的疗效(图1(一))。

我们没有使用CBF显示器根据以前的报告(25]。所有大鼠的神经学分数后觉醒是3或4,三组大鼠之间的差异,被分配到不同的治疗并不显著(表1)。因此,我们可以不使用CBF监视器诱导脑缺血。

然后我们评估梗塞体积,神经运动的功能,出血性转换和药品不良反应在缺血后24 h三组。与控制相比,溶栓明显减少梗塞体积( )(数据1 (b)和(c))。然而,梗塞体积进一步显著降低大鼠接收edaravone-alteplase ( )(数据1 (b)和(c))。大鼠的神经功能评分接受溶栓仍远远高于控制( )(图1 (d))。此外,老鼠接受edaravone-alteplase显示明显神经分数比老鼠与溶栓治疗( )(图1 (d))。与此同时,出血性转化的速度往往是edaravone-alteplase组低于溶栓组。然而,三组之间的差异没有统计学意义(表1)。

药品不良反应,包括肾和肝脏疾病,并不明显,因为血清天冬氨酸氨基转移酶,血清丙氨酸转氨酶、血尿素氮和血清肌酐水平没有显著差异(表中三组1)。

总之,药物不良反应主体性与急性溶栓治疗实验性血栓性中风模型。

3.2。从健康志愿者获得血液样本的特征

平均红细胞、白细胞和血小板计数的全血和PRP样本如表所示2。这些躺在正常范围内健康的日本人。

3.3。人类全血药物不良反应增强Alteplase-Mediated溶栓

阐明药物不良反应的协同作用机制在动物模型(图1),我们下一个评估药物不良反应是否提高alteplase-mediated溶栓流条件下使用人体全血中的T-TAS(图2)。灌注开始后,大量白色的小血栓观察坚持涂表面。血栓逐渐增加的规模和相互合并,导致毛细血管闭塞在9到10分钟控制和药物不良反应组(数据没有显示)。溶栓和edaravone-alteplase组毛细血管阻塞发生在18到19分钟。然而,edaravone-alteplase组,血栓溶解在27到28分钟(图2(一个))。溶栓治疗对血栓坚定的影响有限,但在药物不良反应的存在,血栓坚定减少血栓的频繁崩溃就证明了这一点。

血栓形成微细管阻塞引起的所有控制样品不暴露于溶栓,溶栓是明显的在大多数样品暴露于溶栓。然而,包括毛细管成为完全阻挡在三个样品暴露于溶栓(一个没有反应溶栓(10%)和两个中有一个不完整的反应[20%])。夸张的反应,观察溶栓在一个样品(10%)。在溶栓nonresponders,溶栓就是明证减少血栓坚定和频繁崩溃样本的观察血栓药物不良反应和溶栓被添加。提供的样例志愿者定期带鱼油补充剂展出溶栓的正常反应。

微细管阻塞发生在所有控制样品和药物组和溶栓组的三个样品,但没有一个样品edaravone-alteplase组(图2 (b))。我们观察到一种特有的周期性流动压模式,它反映了血栓的崩溃,符合缺乏edaravone-alteplase组中微细管阻塞。edaravone-alteplase联合治疗的协同效应是评价计算AUC30 edaravone-alteplase组显著低于在溶栓组( )(图2 (c))。没有显著差异之间的AUC30对照组(1574.9±108.8)和药物不良反应组(1495.2±153.7)( )。总之,人类全血药物不良反应增强alteplase-mediated溶栓。

3.4。其他抗氧化剂增强Alteplase-Mediated人类全血溶栓

溶栓的增强可能是一个edaravone-specific效应在人体全血(图2)。抗氧化剂是否除了药物不良反应也有thrombolysis-enhancing效果未知。我们检查和比较溶栓的协同效应与其他一般抗氧化剂流条件下使用全血中的T-TAS(图3)。微细管阻塞发生在两个样品的溶栓组,但在所有的样品中维生素E与溶栓coadministered(图3(一个))。alteplase-vitamin E组,AUC30显著低于仅在溶栓组( )(图3 (b))。AUC30也显著降低alteplase-NAC组(316.8±246.1)仅比溶栓组(601.6±457.4)( )。然而,没有显著差异之间的AUC30 alteplase-vitamin C组(469.0±500.1)和溶栓组( )。这些发现证实,一些一般性的抗氧化剂有thrombolysis-enhancing效应类似于药物不良反应。

3.5。活性氧抑制Alteplase-Mediated人类全血溶栓

药物不良反应和其他抗氧化剂(维生素E和NAC)可能在全血(图增强alteplase-mediated溶栓3)。ROS可能的关键分子靶点的抗氧化剂,包括药物不良反应。我们检查是否ROS如H₂O₂影响血栓形成或溶栓在全血流量条件下使用T-TAS(图4)。除了100年的μM H₂O₂样品暴露于溶栓导致微细管阻塞比暴露于更大比例的样品中溶栓(图4(一))。的AUC30 H₂O₂单独组大致类似的控件( )(图4 (b)),但是AUC30 alteplase-H显著更高₂O₂组比仅在溶栓组( )(图4 (c))。因此,ROS抑制溶栓,但没有引起血栓形成在这个浓度(100μM H₂O₂)。

3.6。药物不良反应增强Alteplase-Mediated溶栓在人类血浆组件

用于修饰或说明哪些组件的全血受到药物的影响尚不清楚。全血和PRP样本的比较显示,PRP微不足道的红细胞和白细胞的数量(表样本2)。因此,血液组件受到药物的影响可能变得明显的全血和PRP样本之间通过比较其效果。因此,我们研究了溶栓的溶栓作用,药物不良反应,他们的组合流条件下使用T-TAS PRP(数字5(一个)和(b))。暴露的PRP(表2)溶栓、药物不良反应或edaravone-alteplase流条件下微细管阻塞发生的比例降低(图5(一个))。溶栓的协同效应和药物不良反应显著降低AUC30 edaravone-alteplase比溶栓组( )(图5 (b))。因此,thrombolysis-enhancing PRP样品中证实了药物不良反应的影响。

药物不良反应的thrombolysis-enhancing效果确认客观、定量在全血和PRP(数字2,5,5 b)。然而,无论是低AUC T-TAS抑制血栓形成或提高溶栓仍不清楚。在体外研究中,人类的大脑thromboemboli和诱导肺动脉栓塞溶栓溶解检索(即。纤维蛋白降解产物)和最小蛋白质片段(30.]。没有研究确定药物不良反应增强诱导肺动脉栓塞释放溶栓。因此,我们评估肺动脉栓塞PRP底壳解决方案后测量PRP样品使用T-TAS确认thrombolysis-enhancing药物不良反应的影响在健康人体血液样本(图5 (c))。肺动脉栓塞的平均浓度的PRP底壳解决方案收集T-TAS化验后明显高于edaravone-alteplase组(10.2±3.2毫克/毫升)比仅在溶栓组(7.3±1.6毫克/毫升) )(图5 (c)),展示一个逆关系AUC30衡量T-TAS和肺动脉栓塞的浓度。所有控制样品的浓度肺动脉栓塞(100%)< 0.03毫克/毫升,这低于测量范围。仅在药物组,肺动脉栓塞的浓度在8 < 0.03毫克/毫升的10个样本(80.0%)和0.03和1.51毫克/毫升的剩余样品。这些发现表明,溶栓T-TAS评估的强烈与肺动脉栓塞的水平。

edaravone-alteplase联合治疗的协同效应是由AUC30证实客观和定量全血和PRP(数字2和5)。然而,edaravone-alteplase联合治疗对血小板或等离子体的影响尚不清楚因为血小板和血浆中全血和PRP样本。然而,几乎没有血小板存在于购买力平价样本。因此,有关血液组件受到药物的影响可能澄清通过比较其效果在全血样品,分别PRP样本,和购买力平价样本。购买力平价样品不能被评估因为毛细血管并未成为T-TAS闭塞试验。缺乏血小板在购买力平价意味着微细管没有成为阻挡。因此,我们研究了溶栓的影响,药物不良反应,他们的结合在纤维蛋白溶解PPP T-TAS(图以外的使用方法6)。购买力平价替代浊度测定,接触溶栓(100,或250国际单位/毫升)引起的纤维蛋白溶解存在剂量依赖的相关性(图6(一))。在购买力平价样品暴露于溶栓100国际单位/毫升,显著增强了纤维蛋白溶解的药物不良反应在60 nM ( )(图6 (b)在6 nM(),但不是通过药物不良反应 )。因此,药物不良反应的thrombolysis-enhancing效应在购买力平价样品确认。

肺动脉栓塞的浓度明显高于购买力平价样品暴露于溶栓比控制在100国际单位/毫升( )(图6 (c))。此外,在样品暴露于溶栓在100国际单位/毫升,肺动脉栓塞的浓度显著降低的H₂O₂在100μ米( )(图6 (c))。然而,在100国际单位/毫升样品暴露于溶栓和H₂O₂在100μM,肺动脉栓塞的浓度显著增加药物不良反应的增加在60 nM ( )(图6 (c))。这些观察结果证实药物不良反应的thrombolysis-enhancing效应的机理。ROS可能抑制alteplase-mediated溶栓,这是预防药物。与此同时,溶栓但不是血纤维蛋白溶酶被药物不良反应增强。在PPP样品暴露于胞浆素(3.35±2.08μg / ml)与血纤维蛋白溶酶和药物不良反应(2.03±2.23μg / ml),肺动脉栓塞的浓度并不是增加了药物不良反应的增加。

4所示。讨论

edaravone-alteplase联合治疗的协同作用长期以来被认为是由于神经与血管的保护作用的药物不良反应针对ROS和矩阵metalloproteinase-9 [1,17,18]。然而,我们发现,尽管药物不良反应增强alteplase-mediated溶栓,药物不良反应减少血栓形成和增强溶栓。这表明,药物不良反应抑制ROS的抑制作用alteplase-mediated溶栓(图7)。与先前的临床研究[我们的结果一致10- - - - - -13]。

药物不良反应的增强效应对alteplase-mediated溶栓在PRP证实,购买力平价和全血。全血中白细胞,与PRP或购买力平价。此外,H₂O₂抑制alteplase-mediated溶栓在两个全血样品和购买力平价。药物不良反应可提高alteplase-mediated溶栓通过抑制ROS的生成血小板,等离子体组件和白细胞。血小板也产生活性氧和释放血小板源液报道,反过来可以产生活性氧(31日]。药物不良反应的影响,我们观察到在PRP和购买力平价样本可能反映了对血小板的活动——或者exosome-derived ROS。

虽然我们无法识别药物不良反应的确切机制提高溶栓的活动,之前在体外和在活的有机体内研究表明,tPA诱导活性氧,活性氧抑制溶栓。组织纤溶酶原激活物物Mac-1 (CD11b / CD18)配体;Mac-1介导adhesion-dependent H₂O₂生产由人类中性粒细胞(32]。此外,药物不良反应似乎改善alteplase-induced老鼠大脑氧化应激,如4-hydroxy-2-nonenal和N -(己酰)赖氨酸(脂质过氧化指标),8-hydroxy-2′脱氧鸟苷(DNA氧化标记),和先进的糖化终端产品(蛋白质氧化标记)28]。此外,ROS可能诱发纤溶酶原激活物inhibitor-1 (PAI-1),而抗氧化剂废除PAI-1的感应33]。因此,一种抗氧化剂的存在,如药物不良反应,可提高溶栓的多效性的机制。

药物不良反应提高溶栓的溶栓效果;因此,edaravone-alteplase联合治疗可能增加不良事件的发生率,如脑出血患者治疗AIS。我们发现药物不良反应没有当独自管理在凝结的血液溶栓效果。药物可以抑制出血性转换。这可能是解释为减少不良事件的频率引起的溶栓:症状性脑出血的速度发展归因于溶栓注入据说负相关与联合治疗的速度根据几个临床试验药物不良反应。(1]。这也是明显的在我们的研究中。我们发现溶栓而不是血纤维蛋白溶酶被药物不良反应增强。溶栓的fibrin-binding亲和力可以通过接触ROS、受损和血栓的特点优势的选择性溶栓在自发溶栓和溶栓治疗可能减少ROS充裕的环境中(34]。纤溶酶原存在于血液循环和血栓,物和血纤维蛋白溶酶降解纤维蛋白和纤维蛋白原。因此,溶栓可能激活纤溶酶原在血液循环而不是物ROS-rich条件下的血栓。这将导致生产循环血液中纤维蛋白原的自民党,虽然血栓中的纤维蛋白分解程度较轻。Edaravone-alteplase联合治疗可能增加纤维蛋白溶栓的亲和力和选择性引起血纤维蛋白溶酶激活血栓。因此,纤维蛋白原降解与纤溶酶原激活物在血液循环,这不是在血栓,不太可能发生。这可能减少出血的风险倾向。与先前的临床研究[我们的结果一致1]。药物不良反应可提高溶栓和抑制不良事件如脑出血因为药物不良反应提高alteplase-mediated溶栓,可能通过防止alteplase-induced抑制纤维蛋白溶解血栓的氧化应激(图7)。

药物不良反应并不是目前在西方国家许可使用。新配方和给药方案最近被评估在芬兰,荷兰,英国,可以促进药物的使用更广泛的在整个欧盟(35]。与此同时,美国食品和药物管理局批准的药物治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症(2016年36,37]。因此,研究edaravone-alteplase联合疗法在西方国家也可能在不远的将来进行。未来的研究可能的结果显示这种联合治疗是否突破治疗AIS。

4.1。研究的局限性

在临床实践中,溶栓后给予血栓形成和血管闭塞。在目前的实验中,然而,它增加了血栓形成之前。此外,减少AUC30 T-TAS试验中我们观察到不照射是否抑制血栓形成或溶栓被提升。然而,肺动脉栓塞浓度升高,我们发现在水池里解决方案表明,溶栓(溶解纤维蛋白凝块)后发生血栓形成,这意味着药物不良反应是加强alteplase-mediated T-TAS测定溶栓。

直接测定氧化应激等引起的活性氧和自由基并不容易。此外,获得高重现性的生理变化是困难的,因为内生tPA或PAI-1强烈,和这些代理是非常不稳定的。与此同时,直接溶栓的亲和力,H₂O₂,对沉淀纤维蛋白药物不良反应应该评估,但我们不能执行这样一个评价一个八隅体系统(笼罩ForteBio,弗里蒙特,CA) interbiomolecule交互的分析方法。

5。结论

我们调查的影响在alteplase-induced溶栓药物使用血栓栓塞clot-induced脑缺血大鼠模型(严重cardioembolic脑梗塞在活的有机体内)。此外,我们研究了药物不良反应的机制促进alteplase-mediated溶栓在体外在人类血液健康志愿者捐赠的使用新开发的microchip-based flow-chamber化验(总血栓形成分析系统)流条件下进行定量分析。我们表明,药物不良反应是一种增强剂的溶栓,尽管先前的报告只显示neuroprotectant药物不良反应的协同效应。溶栓的溶栓效果明显减弱在过氧化氢的存在,表明氧化应激可能阻碍溶栓。药物不良反应没有影响血栓形成或溶栓。药物不良反应增强alteplase-mediated溶栓在体外,可能作为一种抗氧化剂,防止自由radical-related抑制血栓的溶栓活性。此外,药物不良反应显著减弱alteplase-induced抑制纤维蛋白溶解由过氧化氢所示测量等离子体肺动脉栓塞在人类platelet-poor等离子体。

信息披露

Tomoka Nagasato, Hisayo Sameshima, Kazuya细川护熙的雇员藤森Kogyo有限公司有限公司

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

清菊池进行了研究,分析了数据,并写了手稿。Ketaro Setoyama, Ko-ichi Kawahara, Tomoka Nagasato, Takuto Terashi,引人入胜的建筑师,录像,一辉Shotaro大冢,Naoki三浦,Hisayo Sameshima, Kazuya细川护熙,Yoichiro Harada Binita施米卡山本,洋子Morimoto-Yamashita, Haruna菊池,Kiyama良治,Chinatsu Kamikokuryo, Salunya Tancharoen, Harutoshi Sakakima, Motohiro盛冈,田中Eiichiro,隆Ito帮助与数据分析。Ikuro Maruyama设计研究和分析数据。

确认

本研究支持历经甲级脑血管疾病研究促进基金的赠款(Ikuro Maruyama), jsp KAKENHI(批准号JP16K10746菊池清在内),日本的一般保险协会(清菊池),和ZENKYOREN(国家农业合作社互助保险联合会)日本(清菊池)。作者感谢Arata安倍晋三博士,博士Norihito Shimamura,作者Katano女士,女士Nobue Uto无价的技术援助。溶栓药物不良反应和三菱田边制药公司的礼物,日本大阪。作者感谢Edanz集团(http://www.edanzediting.com)编辑这个手稿的草案。