文摘
硫辛酸(LA)和N乙酰半胱氨酸(NAC)的抗氧化剂和抗炎剂尚未进行过轻度溃疡性结肠炎(UC)。本研究旨在评估拉的行动和/或南汽,在结肠和肝脏氧化应激和炎症标记大鼠组织有轻度加州大学,由葡聚糖硫酸钠(DSS) 2% (w / v)。洛杉矶和/或NAC (100 mg·公斤·天−1,每个),一天一次,在饮食,在预处理阶段(7天)和加州大学感应(5天)。结肠炎感应证实了组织学和生化分析(高效液相色谱法、分光光度法和多路复用®)。之前发生了氧化还原平衡的免疫破坏结肠。南汽导致降低过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)水平和髓过氧化物酶活性。在肝脏,DSS没有造成伤害但治疗与抗氧化剂是有害,LA增加MDA和LA + NAC增加H2O2肿瘤坏死因子α干扰素γ,转氨酶。总之,NAC展出结肠抗氧化和抗炎活性最高,而LA + NAC引起肝损伤。
1。介绍
抗氧化剂的使用被认为是一个重要的补充治疗代谢疾病等几个条件,神经,和胃肠道(GI)疾病,预防癌症和其他(1]。在胃肠道疾病,炎症性肠病(IBD),由溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD),影响150 - 250/100,000人,特别是在美国和欧洲,大量医疗费用约为60亿美元分别为每年4.6 -56亿年,[2,3]。
尽管有广泛的研究,炎症性肠病的病因尚未阐明;然而,被认为是遗传和免疫因素紧密相连,微生物群,和氧化应激,这在加州大学的情况下,关注病因和症状,如肠道通透性的增加紧密连接的破坏,增加感染和炎症的中性粒细胞浸润。因此,结肠溃疡的存在,由于脂质过氧化作用和蛋白质损伤和癌症的发展,是由于DNA损伤(4]。然而,这些症状的原因和临床表现是异构的,根据加州大学不同水平:轻微、中等和严重。在人类中,最常见的问题和加州大学阶段是轻度结肠炎5]。特点是正常的白蛋白,体温、脉搏、和比容比相关的红细胞沉降率< 20毫米/小时,少于4每天排便和没有减肥6]。然而,这种分类根据作者和采用标准可能有所不同(7,8]。
IBD的extraintestinal表现,如系统性另类疗法用于治疗炎症性肠病的影响,探讨甚少。在这些表现中,强调肝胆的障碍。肝脏和肠道之间的密切关系是合理的,他们共同的胚胎发生,直到后来在成年生活(肠门静脉)(9]。然而,引用研究的主要焦点是微生物群,已受到了特殊的关注由于其亲密与代谢综合征、肥胖、和非酒精性脂肪肝疾病10]。
研究表明的先驱,在结肠炎感应(4% DSS的7天),重要的肝损伤发生,证实了高血清结合珠蛋白和各种组织发现,如肝细胞的坏死和不断膨胀的迹象11]。
抗氧化剂的使用已成为一种治疗炎症性肠病。其中,硫辛酸(LA)和N -乙酰半胱氨酸(NAC)脱颖而出,已测试分别在加州大学(4),结合其他临床条件(11,12),与积极的结果。
由于其抗氧化特性在两种形式中,氧化(LA)和减少(dihydrolipoic酸,DHLA),洛杉矶被称为“万能抗氧化剂。“洛杉矶/ DHLA夫妇是超氧化物阴离子自由基的清道夫()、次氯酸(HOCl)、过氧亚硝基(ONOO−),一氧化氮()。它能够恢复外源性抗氧化剂维生素e和抗坏血酸和内源性抗氧化系统减少/氧化谷胱甘肽(GSH / GSSG) [6]。此外,在体外研究表明,作为我的抑制剂κB kinase-2 (IKK2),随后释放核因子k B (NF-kB) [13]。另一个抗炎效应是核的海拔因素(erythroid-derived 2)——2 (Nrf2)细胞内水平通过独立发生的机制,打破Nrf2和扣留1之间的联系(Kelch决定将蛋白1)。这些行动导致各种促炎细胞因子的表达降低,增加酶的表达抗氧化剂,如谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和超氧化物歧化酶(SOD) (14]。
南京是强还原剂15]。像洛杉矶,南京是一个重要的食腐动物活性分子和发挥作用的金属螯合剂。然而,最重要的抗氧化作用分配到南京是增加抗氧化防御活动通过提供半胱氨酸、谷胱甘肽合成所需。南汽的抗炎效应也被证实,通过观察NF-kB抑制(16]。
考虑拉和南汽,单独和组合,是成功测试了在多个系统和把亲密bowel-liver协会,本研究的目的是评估拉的行动和/或南汽,在氧化应激和炎症引起的轻度结肠炎DSS。
2。材料和方法
2.1。化学物质
DSS MW 36000 - 40000 Da来自议员生物医学。LiChrolut®, RP-18 E来自默克,细胞因子包来自Milliplex地图小鼠细胞因子/趋化因子面板(默克密理博®),蛋白酶抑制剂鸡尾酒从罗氏®平板电脑,和丽珀•缓冲来自细胞信号®。洛杉矶和南汽Ao Pharmaceutico(阿拉戈斯/巴西)和所有其他化学物质和酶Sigma-Aldrich®的化学物质。
2.2。设备
高效液相色谱法与紫外检测器(日本岛津公司®),冰箱VIP系列三洋,荧光谱仪(ThermoScientif®Multiskan),和一个奥林巴斯光学显微镜BX51附加到DP70数码相机系统和MAGPIX®多元化读者使用。
2.3。动物
实验协议是动物伦理委员会批准的机构/大学联邦德阿拉戈斯(IAEC / UFAL)(05/2014),并依照执行委员会控制和监督的目的动物实验(CPCSEA)的指导方针。185 - 203 g,成年雄性Wistar鼠从中央得到动物个体UFAL和被关在笼子里,在控制条件下,在室温下(°C)、湿度(%),光(12/12 h光明/黑暗)。商业饲料(Nuvilab®)和水随意。
2.4。加州大学归纳和实验设计
动物被分成5组。健康的老鼠收到商业饲料(对照组)。轻微的加州大学在四组诱导2% w / v DSS,饮用水中管理了5天。Antioxidants-treated老鼠补充7天前轻度结肠炎感应与硫辛酸(洛杉矶,100毫克/公斤/天),防治(南京,100毫克/公斤/天),或拉+ NAC(100毫克/公斤/天,每)。剂量的使用的两种抗氧化剂被认为是安全的大鼠或小鼠(LA高达1800毫克/天(17)和南汽6000 mg / d),成功地通过了测试在一些生理/病理生理条件下在小鼠和大鼠16,18]。
2.5。安乐死,血液样本收集,一般的生化概要,制备组织匀浆
在13天,禁食12小时后,这些动物麻醉(克他命,100毫克/公斤,甲苯噻嗪15毫克/公斤,通过i.p。),和血液通过心脏穿刺收集。灌注后heparine解决方案(1:50 v / v),主动脉被切割。器官的解剖,放在液态氮,并立即存放在−80°C。组织匀浆的准备,在冰冷,与蛋白酶抑制剂鸡尾酒里帕缓冲区(一片50毫升里帕缓冲区),和离心机在19.600×g / 20分钟,在4°C。上层清液储存在−80°C。
生化分析是由经过认证的实验室,用行之有效的方法。结肠和肝脏组织在盐水,重洗。肝左叶和远端结肠被削减,用于组织学分析。
2.6。组织学分析
与10%的缓冲福尔马林固定后,器官被嵌入到裂解和部分加工石蜡和苏木精和伊红染色(他)组织学评价。
总胶原蛋白被马森评估三色的染色设备。短暂,每个部分之一,肝脏和肠道,得到和染色用马森最初的三色的染色,胶原染色蓝,在purple-brown细胞核,细胞质在粉红色的。胶原蛋白区域被定义为不同的蓝色区域,并区别于肌肉、血、炎症细胞。后来,ImageJ®软件被用来量化蓝色区域(像素/营)。
2.7。丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)和亚硝酸盐水平
MDA含量测定的反相离子对高效液相色谱,紫外探测器在270 nm,根据泰特姆et al。19]。高效液相色谱系统条件使用C18 ultrasphere列150毫米×4.6毫米和45毫米×4.6毫米护柱,流动相乙腈组成高效液相色谱/紫外线等级,和Trizma缓冲区(pH值7.4)(1:9)。肠道和肝组织均质与Trizma缓冲区,二叔丁基对甲酚和乙腈。然后,匀浆离心机在872×g / 10分钟,在4°C,上层清液过滤,高效液相色谱法过滤(0.22毫米)。流量为1.0毫升·分钟−1和MDA标准曲线计算,生成使用1,1,3,3-tetramethoxypropane并表示nmol MDA·毫克组织−1。保留时间是2分钟40岁左右。
H2O2测量根据挑选Keisari [20.]。肝或结肠组织中均质1.0毫升的化验缓冲区包含140毫米氯化钠,10毫米PBS, pH值7.0和5.5毫米葡萄糖。离心后(2000×g / 5分钟在4°C),上层清液转移到超小型电子管,含有酚红排泌量0.28毫米,8.5 U /毫升的辣根过氧化物酶,测定缓冲区。孵化后30分钟(37°C),氢氧化钠添加1米。样本在610海里。浓度是表示为纳摩·毫克的蛋白质−1。
亚硝酸盐测定进行了基于格里斯方法用于微型板块。上层清液混合了2,3-diaminonaphthalene (50μg·毫升−1在0.2 M盐酸)和在室温下孵化/ 10分钟。氢氧化钠的反应被添加在540海里(2.8米)和监控。结果被表示为μ摩尔·毫克蛋白−1。
2.8。酶活性的测定
后SOD测定Marklund和g Marklund [21]。肝脏或结肠上层清液添加到0.2毫米焦棓酸(溶解在50 mM磷酸钾缓冲(PBS), pH值6.5)来初始化反应,并减少相关的吸光度监测,焦棓酸420海里。一个单位的草皮被定义为抑制焦棓酸所需的数量每分钟自动氧化50%。结果表示为U·毫克的蛋白质−1(22]。
猫活动测量H的分解率2O2其它地方描述的(23在540纳米),监控。相对活动表示为IU·敏·毫升·毫克的蛋白质−1。
据Flohe总GPx活性测定和Gunzler24),适应微型板块。肝或结肠组织与分析均质缓冲区(PBS 0.1米,EDTA 5毫米,pH值7.4)和离心机(14.000×g / 20分钟,在4°C)。上层清液加入井(一式两份),紧随其后的是添加谷胱甘肽还原酶(GR) (0.048 U)及谷胱甘肽(10毫米),孵化在37°C / 10分钟之后,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)(1.5更易)叔丁基氢过氧化物(0.5毫米)补充道。减少系统的吸光度测量,5分钟,在340海里。一个单位的tGPx被定义为的酶能够催化氧化为1μ摩尔NADPH辅酶ii+在1分钟。结果表示为U·毫克的蛋白质−1。
据布拉德利MPO活性测定et al。25]。肝或结肠组织均质使用缓冲区分析pH值6.0 (PBS, 50 mM, 0.5% hexadecyltrimethylammonium溴化和EDTA, 5毫米)和离心机在1550×g / 15分钟(4°C)。上层清液收集和离心机在14.000×g / 15分钟(4°C)。样品是微型板块和转移(复制)昊图公司邻联茴香胺溶液(0.8毫克/毫升)补充道。孵化后(37°C / 15分钟),一个解决方案的H2O2(0.3%)是补充道。执行一个新的孵化(37°C / 10分钟)和阅读是在460海里。一个单位的MPO被定义为分解的数量1μ摩尔H2O2。结果表示为U·毫克的蛋白质−1。
2.9。总谷胱甘肽的测定
谷胱甘肽和GSSG测量面和罗杰斯(26),用细微的修改。首先,总蛋白质沉淀,离心后(190×g / 10分钟,在−20°C)与偏磷酸(1:1)。获得总谷胱甘肽(tGSH),这个上层清液稀释在分析缓冲区(PBS 0.1米,EDTA 5毫米,pH值7.4)。然后,匀浆被转移到微型板块,最后卷(150μL)完成了分析缓冲区。后来,反应开始,在添加反应混合物1(包含5、5′-dithiobis——(2-nitrobenzoic酸),DTNB, 10毫米,和GR, 4.2 U /毫升)和NADPH, 1% w / v。
测量GSSG,上层清液稀释(1:50)分析缓冲区,包含N-ethylmaleimide (NEM)和离心机(10000×4°C g / 20分钟)。这个解决方案是50分钟完成孵化谷胱甘肽络合和删除。排除NEM,这个上层清液测定缓冲区被筛选了通过Sep-pak®经典C18墨盒。后来,洗脱液转移到微型板块,反应混合物1和NADPH, 1% w / v,补充道。
在这两种分析,吸光度测量在412 nm / 3分钟30年代间隔。根据以下方程:谷胱甘肽测定谷胱甘肽= tGSG−(GSSG / 2)。研究结果表示在海里·毫克的蛋白质−1。
2.10。肿瘤坏死因子-α、il - 10和干扰素γ(正无穷γ)水平
细胞因子的生产被Milliplex量化地图小鼠细胞因子/趋化因子面板(默克密理博),根据制造商的指示。结果表示为pg·毫克的蛋白质−1。
2.11。统计分析
正常被Kolmogorov-Smirnov测试评估。参数变量进行评估使用成对的单向方差分析(方差分析),其次是图基或Bonferroni期末测验。学生的t以及执行只是确认轻度结肠炎疾病组。克鲁斯卡尔-沃利斯测试是用来评估非参数变量和相应的事后分析。结果显示为平均值±标准误差(SEM)为正态分布和非参数的值中位数和四分位范围。双面的p值< 0.05被认为是具有统计学意义。GraphPad®Prism 5.0版本的Windows软件(美国圣地亚哥,CA)使用。
3所示。结果
为了清晰,结果分为三个主题:一般情况下,结肠和肝脏的结果。
3.1。一般的结果
3.1.1。轻度结肠炎和补充并没有改变体重、食物摄取,或者肝脏和结肠权重
在两个阶段(PT和T)的研究中,DSS或补充抗氧化剂并没有引起对体重的影响或进食模式相比,对照组(数字1(一)和1 (b))。同样,在评估期间体重没有变化(图1 (c))。绝对和相对肝脏和结肠的权重(表没有变化1)。水摄入修改也不观察(数据未显示)。
(一)
(b)
(c)
3.1.2。洛杉矶和南汽,但不是LA +南汽减少贫血和白细胞增多引起的轻度结肠炎
证实了贫血轻度结肠炎组降低红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)(数据2(一个)和2 (b)),因为临床变化,如直肠血,腹泻,和减肥没有观察到或没有显示组之间的差异。没有观察到宏观变化后安乐死(数据未显示)。所有的治疗增加了参数(红细胞,HB)。然而,洛杉矶和南汽典型的加州大学炎症改善,由白细胞减少,而洛杉矶的组合+ NAC(图没有显示有益的影响2 (c))。
(一)
(b)
(c)
3.1.3。LA + NAC转氨酶水平上升
使用DSS和南汽没有造成可用的血清学标志物的变化,与补充,提升球蛋白水平的降低与轻度结肠炎集团()。然而,这种生化改变没有表现出生理相关性,由于白蛋白,肝脏功能的最重要的生物标志物,统计组(表中不变的2)。此外,重要的是要观察到洛杉矶的联合行动和南汽在肝脏损伤的生物标记物不同于控制()和南京汽车()组。南汽集团相比,在LA + ALT和AST南汽集团高出2.2倍和2倍。尽管这些酶不是专属的标记肝损伤,增加他们的临床情况如心脏病和肌肉疾病,当氧化(图一起分析7)和炎症(图8)参数,可能被视为一种干扰肝脏代谢的平衡。其他系统的生物标志物分析未见统计学意义。
3.2。结肠的结果
3.2.1之上。洛杉矶或者南汽减少结肠组织学损害引起的DSS
样本DSS-treated动物(轻度结肠炎)显示更高的组织学损伤(图3(一个)比其他组)。尽管所有治疗组显示这些变化,损伤粘膜结构降低了抗氧化剂使用时,显示一个保护作用的抗氧化剂,轻度结肠炎组相比。胶原蛋白沉积(图3 (b)),标志着蓝色,证实了纤维组织的存在轻度结肠炎(图3 (b))。洛杉矶和/或NAC治疗能够降低沉积但并不足以防止轻度溃疡性结肠炎病变及其胶原蛋白数量等于轻度结肠炎和对照组()(图3 (c))。
(一)
(b)
(c)
3.2.2。结肠氧化损伤是第一个信号观察轻度结肠炎
氧化损伤由增加H2O2(图4(一)),亚硝酸盐(图4 (b))和MDA(图4 (c))水平,降低猫一起活动(图4 (d)),已经出现在轻度结肠炎集团和证实了氧化应激参与加州大学的发病机理。NAC能恢复两个H2O2和MDA水平等于对照组和降低MPO水平与轻度结肠炎集团(),从而确认其更高的抗氧化能力相对于洛杉矶。有趣的是,南汽SOD活性下降(图4 (e)LA组相比)。与此同时,它减少结肠氧化损伤。在轻度结肠炎,NAC活动可能保持由于增加谷胱甘肽(图4 (g))因此GSSG(图4 (h)),作为响应尝试身体的氧化损伤。没有改变的谷胱甘肽(GSSG比率(图4(我)所有组(图)和GPx水平4 (j))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(我)
(j)
3.2.3。肠道细胞因子的变化中,并未观察到轻微的加州大学和洛杉矶+ NAC引发炎症
结肠炎症由促炎细胞因子TNF -α和正γ、参与先天免疫和抗炎细胞因子il - 10,不改变轻度结肠炎组相比,控制数据5(一个),5 (b),5 (c))。然而,LA + NAC提升TNF -增加α(与控制、洛杉矶和南汽集团)(图5(一个))和il - 10(对所有组)(图5 (c))。il - 10可能增加到减少促炎效应引起的肿瘤坏死因子-α。
(一)
(b)
(c)
3.3。肝的结果
3.3.1。轻度结肠炎,洛杉矶,和/或NAC并未导致肝脏组织学改变
生化和组织学分析(表2)建议缺乏引起的肝脏损伤DSS。然而,尽管拉之间的关系和南汽表示影响这个组织,可以观察到ALT和AST水平的增加,只有一个形态变化可以确定:门静脉周的区域紊乱肝细胞索(图6(一))没有坏死区域或胶原蛋白沉积(数字6 (b)和6 (c))。
(一)
(b)
(c)
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(我)
(j)
(一)
(b)
(c)
3.3.2。洛杉矶和/或NAC呈现不同的氧化还原调节
DSS没有造成肝氧化还原不平衡。NAC表现出一种改进的SOD的影响(增加)与LA组(图7(一)),而拉增加猫(NAC)(图7 (f))、谷胱甘肽(和轻度结肠炎和NAC)(图7 (g)),因此GPx(与控制(图)7 (j))。这些结果证实,不同的抗氧化剂氧化还原平衡法通过不同的途径。然而,随着生化分析,观察到LA + NAC作为prooxidant补充,导致增加H2O2(图7 (b))。
3.3.3。LA +南汽在肝脏炎症引起的
肝细胞、细胞因子的水平没有修改的轻度结肠炎组相对于对照组(数字8(一个),8 (b),8 (c))。然而,重要的是要注意,在这两个组织(结肠和肝脏),洛杉矶的促炎效应与NAC (LA + NAC)有关。在肝组织,这引发了TNF的增加——组合α和正γ水平,所有组(数据相比8(一个)和8 (b))。
4所示。讨论
分析组织学、氧化应激和炎症生物标记物进行结肠和肝脏组织,为了研究添加抗氧化剂的作用(南汽和/或洛杉矶)在控制造成的损害DSS。在这种情况下,我们观察到氧化还原平衡是第一个在轻度结肠炎变更;NAC能减少氧化应激和细胞损伤,DSS (2% w / w)没有造成肝修改,和LA + NAC增加结肠和肝脏的炎症。
4.1。结肠损伤和补充的影响
先前的研究提供了令人信服的证据之间的关系DSS和不同程度的加州大学(27,28),从轻度结肠炎致癌作用,根据其持续的政府,在2 - 5% w / v,短时间内(第4 - 9天)。此外,组织学、生化和免疫学变化引起的DSS是类似于人类(加州大学29日]。结肠炎由DSS诱导的确切机制尚不清楚,但似乎涉及功能失调的巨噬细胞,细胞腔的细菌改变,和直接毒性上皮(30.]。
氧化还原概要文件是第一生化参数被改变,在免疫学变化,特别是由于增加H2O2和亚硝酸盐水平。结肠损伤的典型的加州大学,由隐窝与无序的破坏肠道结构,观察了DSS的所有组。类似的结果被其他作者报道(31日,32]。然而,洛杉矶和/或NAC补充不能防止这种伤害,包括胶原沉积(数字3 (b)和3 (c))。
即使独自一人,拉表明在人类研究表现出负面影响。雷等人分析老年人心血管风险观察到600 mg / d LA +维生素C(1000毫克)和E (600 IU), 3 x 6周,每周对血压、无效积极作用引起的运动(33]。此外,麦克尼尔公司等。34),研究葡萄糖耐受不良在肥胖患者患心血管疾病的风险,测试1 g / d的12周,有或没有锻炼,发现没有改善血清血脂和增加oxLDL。Showkat et al。35)测试拉(600毫克),30分钟前铁政府在血液透析的慢性肾功能衰竭患者,并观察增加F2 isoprostanes氢过氧化脂质,脂质过氧化反应的生物标记物,从而证实细胞破坏。
洛杉矶能够清除H2O2并减少LP (MDA水平),但NAC是更有效的,完全阻止这些标记物的增加。NAC也被证明是有效的慢性溃疡性结肠炎引起的DSS 5天5% (w / v),所观察到的Amrouche-Mekkioui和Djerdjouri28]。根据这些作者,NAC (150 mg·d·公斤−145天)结肠炎症状,减少炎症、细胞凋亡、MPO和的水平。总的来说,这些结果表明南汽的抗氧化和抗炎作用不同阶段的加州大学。
是一种活性分子与加州大学发展有关,特别是对中毒性巨结肠。此外,反应与,形成过氧硝酸盐导致LP和顺向结肠黏膜溃疡。病变都是常见的炎症性肠病(4]。生产是由酶催化的一氧化氮合酶(NOS)。在炎症组织,如结肠在加州大学,酶的诱导同种型(间接宾语)是高度表达DSS-inflamed冒号和UC患者的结肠36]。这种酶,存在于自己的colonocyte,可能负责的增加亚硝酸盐水平轻度结肠炎组。
F2-isoprostane是最好的通用指标的非酶的脂质过氧化反应在复杂生物系统(37]。然而,在最近的一次系统的回顾抗氧化治疗由我们组发表,我们观察到的大多数研究使用MDA(确定由高效液相色谱直接,或间接通过硫代巴比土酸活性物质,TBARS)来衡量LP。在我们的研究中,选择一个MDA测定。
在目前的研究中,改变结肠SOD、GPx(数字4 (f)和4 (j))轻度结肠炎组中没有观察到,这是类似于Akman报道的数据等。38),研究活跃的患者肠道炎症。另一方面,较低的SOD活性在南汽与LA组,没有证据表明增加H2O2水平,证实了NAC的主要抗氧化能力在我们的模型中。
最近,抗氧化治疗炎症性肠病增加了识别(4]。然而,SOD活性差调查关于LA和南京政府,可能是因为适度降低SOD酶的活动,在组织炎症,与GPx2不同,一种gastrointestinal-specific GPx [36),这是与H密切相关2O2代谢和基因表达下调的几个实验模型的加州大学(39]。
我们的发现在轻度结肠炎的谷胱甘肽和GSSG水平升高组不同于Amrouche-Mekkioui和Djerdjouri[的结果28]。这种提高可能解释为谷胱甘肽在抑制细胞凋亡信号所扮演的角色不仅通过清除细胞内ROS还通过抑制线粒体细胞色素c的释放和调节的活动还存在redox-sensitive [40]。在我们的结果中,证实了氧化应激对谷胱甘肽循环的影响增加GSSG。然而,随之而来的海拔谷胱甘肽水平并未导致谷胱甘肽(GSSG比例变化,最重要的生物标志物。
胃肠道是一个主要站点prooxidants的一代,其生产主要是由于存在大量的微生物,食品配料,免疫细胞之间的相互作用(15]。增强生产活性物种与慢性肠道炎症在炎症性肠病的早期阶段。他们的破坏性影响DNA、蛋白质和脂质可能导致加州大学的发生和发展,导致部分症状,如失血和贫血,致癌作用,肝毒性、肾毒性、过敏性41]。除此之外,增加氧化应激炎症和刺激激活NF-kB,后续生产的促炎细胞因子,趋化因子,生长因子,和粘附分子,导致炎症和纤维化,发现在我们的研究中增加的白细胞水平和胶原沉积。
肿瘤坏死因子-α已被证明炎症性肠病的发病机制中发挥重要作用和生物治疗与肿瘤坏死因子-α阻滞剂一直作为主流治疗表达下调异常的免疫反应和炎症级联(42]。此外,正无穷,γ参与超表达的趋化因子,如干扰素-γ诱导蛋白质10和IFN-inducible t细胞α化学引诱物,在小鼠结肠炎引起的肠道粘膜,和UC患者(43]。另一方面,il - 10,抗炎细胞因子,调节免疫功能需要通过促进广泛抑制免疫反应的多效性的影响(44]。不平衡在这些细胞因子的生产,如肿瘤坏死因子-α扮演关键的角色,炎症通路的信号级联。
Guijarro et al。45]在研究南汽的影响加上mesalamine UC患者TNF -也观察到没有变化α等离子体的水平。可能改变并不确定,因为在这项研究中使用的模型是温和的加州大学和upregulation促炎细胞因子、干扰素等γ和肿瘤坏死因子-α观察了一直在严重的炎症,如结肠炎与致癌作用有关。
出乎意料,LA + NAC没有促进有益的行动,即使是在增加结肠il - 10的水平,这也可能被解释成白细胞和树突细胞的增加,后者负责其分泌和增加在结肠浸润[46]。il - 10高程具有抗炎反应,尤其是在Th2 (2 T辅助淋巴细胞)47),相关的自身免疫性疾病,如加州大学(48]。与其他研究[49,50促炎细胞因子),结肠增加(数据5(一个),5 (b),5 (c)白细胞(图),尽管增加2 (c)),本研究中没有观察到。
4.2。肝损伤和补充的影响
炎症性肠病的extraintestinal表现被科学界缺乏探索。然而,最近的结果有这些表现IBD相关活动51)和肿瘤坏死因子——的使用α抑制剂(52),以肝胆的表现,频率和严重程度(53- - - - - -55]。与此同时,这些炎症性肠病的并发症仍是诊断(56]。
尽管肝脏和结肠之间亲密联系,氧化和炎性改变我们的模型的轻度结肠炎(2%的DSS, v / v, 5天)可能是不足以引起肝损伤,与Trivedi和Jena的结果57)和Farombi et al。58]。然而,当组织(图6(一)),血清学(表2氧化(图)7)和炎症(图8)参数进行评估,肝损伤LA +南汽集团被确认。
与肝(图7 (d)),H2O2生产被刺激的LA + NAC(图的组合7 (f)),而没有修改组织学观察和胶原蛋白口供在这个组。
线粒体和redox-active酶可以生成和H2O2作为副产品在肝细胞和这些活性分子在不同条件下增加慢性肝损伤,引起的酒精,外源性物质,病毒感染,非酒精性脂肪肝病等等。此外,高浓度的氧化物种,如H2O2和、诱导肝星状细胞死亡和导致减少胶原蛋白沉积(59],它可以解释缺乏胶原蛋白沉积的变化,尽管高水平的血清ALT和AST LA +南汽集团。肝脏损伤,急性或慢性,最终导致增加血清转氨酶浓度(60),建议加强对肝脏有害的行动组织,造成这两种抗氧化剂的结合。
NAC补充导致增加肝脏SOD但不增加H2O2水平(相对于轻度结肠炎和洛杉矶),也就是说,提高氧化还原状态的激活抗氧化防御系统。相反,LA显著增加猫,谷胱甘肽、GPx,可能由于氧化应激增加观察到在这个集团和证实了MDA的升高。氧化应激可能观察到GSSG水平,尽管没有统计学意义,这些水平高出大约61%在南汽集团(图7(我))。
相对于猫谷胱甘肽水平较低在南汽集团这些水平可以合理的较短时间内补充。NAC防止氧化应激发生时通过指挥半胱氨酸为谷胱甘肽合成途径,由此增加细胞内谷胱甘肽含量(16]。
在最近的一次回顾,作者表明LA通常是管理与其它物质相关联,这多个治疗损害每个组件的特定角色的识别,提高困难将有益的,协同或拮抗作用[18]。在这种背景下,El-Gowelli et al .,也使用动物模型,观察到LA +环孢霉素,加州大学常用的免疫抑制剂治疗,使结肠损伤。Pop-Busui等人研究1型糖尿病患者观察到类似的有害影响糖尿病患者,使用LA +别嘌呤醇(黄嘌呤氧化酶抑制剂)和烟酰胺的结合并没有阻止心血管自主神经病变的进展。
重要的是要强调,LA +南汽集团获得200毫克·d·公斤−1(100 mg·d·公斤−1每个抗氧化剂)的数量远低于最大限度地建立了安全的口服交付LA(少10倍)61年和NAC (30 x少)62年]。总的来说,这些结果质疑“普遍抗氧化剂”的概念给洛杉矶。
5。结论
在我们的研究中,氧化应激是第一生化表现轻微的加州大学和之前发生的增加TNF -α和正γ。此外,NAC展品更好的抗氧化效果,特别是关于MDA和H2O2的水平。洛杉矶,日常管理,作为一个单一剂量增加肝脏MDA。LA + NAC增加氧化和炎症概要文件在结肠和肝脏(图9)。
总之,我们的工作提供了证据表明,抗氧化剂和抗炎的NAC涉及不仅结肠,而且肝脏。加州大学这一事实证实,肝脏扩大调查的必要性,这是结肠紧密相连。
加州大学的管理和替代疗法是一个大型的调查和实验结肠炎必须模拟人类疾病的光谱。目前,调查在许多组织和器官是必要的,在一个明确的选择治疗。
缩写列表
| 铝青铜: | 白蛋白 |
| ALT: | 丙氨酸转氨酶 |
| 方差分析: | 单向方差分析 |
| 记者: | 碱性磷酸酶 |
| AST: | 天冬氨酸转氨酶 |
| 二叔丁基对甲酚: | 丁羟甲苯 |
| 猫: | 过氧化氢酶 |
| CD: | 克罗恩氏病 |
| c反应蛋白: | C反应蛋白 |
| d: | 一天 |
| DB: | 直接胆红素 |
| DHLA: | Dihydrolipoic酸 |
| 背景: | 脱氧核糖核酸 |
| 决策支持系统: | 右旋糖酐硫酸酯钠 |
| DTNB: | 5、5′-Dithiobis-2-nitrobenzoic酸 |
| GI: | 胃肠 |
| 一团: | 球蛋白 |
| GPx: | 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 格: | 谷胱甘肽还原酶GR |
| 谷胱甘肽: | 谷胱甘肽减少 |
| GSSG: | Dlutathione氧化 |
| H2O2: | 过氧化氢 |
| HB: | 血红蛋白 |
| Hb1Ac: | 糖化血红蛋白 |
| 高密度脂蛋白胆固醇: | 高密度脂蛋白 |
| 他: | 苏木精和伊红 |
| 高效液相色谱法: | 高效液相色谱法 |
| 炎症性肠病: | 炎症性肠病 |
| IB: | 间接胆红素 |
| IKK2: | 我κB kinase-2 |
| IL: | 白介素 |
| 正γ: | 干扰素γ |
| i.p。 | 腹腔内 |
| 扣留1: | Kelch决定将蛋白质1 |
| 拉: | 硫辛酸 |
| 密度: | 低密度脂蛋白 |
| LP: | 脂质过氧化作用 |
| MDA: | 丙二醛 |
| MPO: | 髓过氧物酶 |
| 南京: | N乙酰半胱氨酸 |
| 辅酶ii+: | 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化 |
| NADPH: | 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸减少 |
| NEM: | N-Ethylmaleimide |
| NF-kB: | 核因子k B |
| Nrf2: | 核转录因子(erythroid-derived 2)——2 |
| PBS: | 磷酸钾缓冲 |
| PT: | 预处理 |
| 加拿大皇家银行: | 红细胞 |
| 扫描电镜: | 平均值±标准错误 |
| SOD: | 超氧化物歧化酶 |
| 师: | 治疗 |
| 结核病: | 总胆红素 |
| TC: | 总胆固醇 |
| TG: | 三酰甘油 |
| tGPx: | 总GPx |
| Th2: | 2 T辅助淋巴细胞 |
| 肿瘤坏死因子-α: | 肿瘤坏死因子α |
| TP: | 血清总蛋白 |
| 加州大学: | 溃疡性结肠炎 |
| 维特: | 维生素。 |
附加分
高光。氧化应激发生炎症改变前轻度结肠炎。N乙酰半胱氨酸是一种很有前途的抗氧化剂对减轻溃疡性结肠炎。硫辛酸和N乙酰半胱氨酸氧化改善结肠疾病的生物标记物。硫辛酸和N乙酰半胱氨酸引起重要的肝脏损伤和结肠炎症。拮抗剂作用的抗氧化剂已经被证实,当管理在轻度结肠炎。
相互竞争的利益
作者证实本文的内容没有利益冲突。
确认
作者感谢教授埃米利亚诺·Barreto博士和教授Salete Smaniotto (Laboratorio de Biologia Celular /学院/ UFAL)的理科硕士和博士学位的学生贡献组织学和Milliplex地图小鼠细胞因子/趋化因子面板(默克密理博)分析。教授安东尼奥Euzebio Goulart桑塔纳也感谢提供的实验装置。这项工作是支持由CNPq (4840044/2011-3、407963/2013-8 458114/2014-6), PRONEX / FAPEAL / CNPq / 2009-09-006,和PROCAD /斗篷/ 3004 - 2014。