甜菊醇苷调节不同细胞类型的葡萄糖转运

摘要

摘录甜菊糖甙rebaudianaBertoni是一种原产于中南美洲和南美洲的植物，自古以来被用作甜味剂。目前，甜菊糖甙由于全球范围内2型糖尿病、肥胖症和代谢紊乱的发病率不断上升，提取物被广泛用作一种无热量、高效的生物甜味剂来替代糖。尽管有大量的研究甜菊糖甙和斯替维醇苷在活的有机体内在美国，关于支持对人类健康有益影响的细胞和分子机制的报道很少。四个广告的效果甜菊糖甙在HL-60人白血病细胞和SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞中测定其葡萄糖转运活性。提取物能够增强两种细胞系的葡萄糖摄取，就像胰岛素一样有效。我们的数据表明，由于胰岛素和Akt同时治疗，甜菊醇苷可能通过PI3K/Akt途径调节GLUT易位甜菊糖甙提取物可增加PI3K和Akt的磷酸化。此外,甜菊糖甙提取物能够逆转由甲基乙二醛(胰岛素受体/PI3K/Akt通路的抑制剂)引起的葡萄糖摄取降低的作用。这些结果证实了这一假设甜菊糖甙提取物可模拟胰岛素作用，调节PI3K/Akt通路。

1.介绍

甜菊糖甙rebaudianaBertoni是菊科(菊科)的一种多年生弱灌木，原产于巴西和巴拉圭的亚热带地区。在拉丁美洲和东方，几百年来，它的叶子一直被用作甜味剂和许多其他的药用目的。1，2]．在过去的几年里，由于寻找新的天然无热量甜味剂来替代糖的需求日益增长，营养研究人员和商业领域对这种“香草”越来越感兴趣。事实上，在工业化国家和发展中国家，由于饮食行为、体育活动减少和衰老，2型糖尿病和肥胖症的发病率正急剧上升。这些代谢紊乱已经成为全世界主要的公共健康问题[3.，4]．

血糖控制是糖尿病治疗的基础，因为它与视网膜病变、肾病、神经病变和心血管疾病(糖尿病患者最常见的死亡原因)的发病率显著降低有关。通过控制血糖的关键策略实现接近正常血糖的努力包括预防和控制糖尿病的建议，例如，监测碳水化合物摄入和限制含糖饮料的消费[5]．

甜菊糖甙叶子和提取物是天然的无热量甜味剂，可以替代蔗糖。叶中主要的甜成分，在感官测试中比蔗糖甜约200-400倍[1，6是甜菊糖苷和莱鲍迪糖苷A，这两种甜菊糖苷只不同一个葡萄糖基。甜菊糖由3个葡萄糖分子和一个甜菊醇苷元(一种二萜羧酸醇)分子组成;莱鲍迪苷A含有一个额外的葡萄糖分子[7)(图1）.

甜菊醇糖苷最近被批准作为商业甜味剂。美国食品和药物管理局(FDA)已经允许使用甜菊糖甙提取物总甜菊醇苷含量不低于95%。最近，欧洲食品安全局(EFSA)批准使用甜菊醇苷作为食物添加剂[8，9]．考虑到现有的毒性数据(在体外和在活的有机体内动物研究和一些人类耐受性研究)，甜菊醇苷被认为不致癌，基因毒性，或与任何生殖/发育毒性有关。食品添加剂联合专家委员会(JECFA)确立了甜菊醇苷(表示为甜菊醇当量)每日可接受摄入量(ADI)为每天每公斤体重4毫克[10，11]．

除了甜味外，甜菊醇糖苷，特别是甜菊糖苷，已被证明对人类健康有益[7，12，13]．简单地说，药理活性和治疗益处包括抗肿瘤和抗癌、抗炎、抗高血糖、降压、止泻、免疫调节、利尿剂和酶抑制作用。甜菊糖甙也被用来帮助肥胖的人控制体重[14];此外，抗氧化性能已被描述[15，16]．甜菊糖苷、莱鲍迪糖苷A及其代谢物甜菊醇在国内外研究较多在活的有机体内动物研究，也有少量的人类研究。结果表明甜菊糖苷和相关化合物影响血浆葡萄糖，调节胰岛素分泌和敏感性，从而增加血浆中葡萄糖的去除[17，18]．此外，甜菊糖似乎可以抑制糖尿病大鼠肝脏中的糖异生[19，20.]．这些抗高血糖、促胰岛素和胰高血糖素的作用，特别是利鲍迪苷A，在很大程度上依赖于血糖水平，需要高糖水平[21，22]．尽管有大量的研究甜菊糖甙至于甜菊醇苷，关于这些作用的细胞和分子机制的报道很少。

在本研究中，我们研究了甜菊醇苷在培养细胞中葡萄糖转运中的作用。葡萄糖是极性分子，需要位于质膜上的特定载体蛋白来穿过脂质双分子层进入细胞。葡萄糖通过两种不同类型的膜相关载体蛋白，钠，转运到细胞内⁺-偶联葡萄糖转运体(SGLT)和促进性葡萄糖转运体(GLUT)。人类GLUT家族是一种完整的膜蛋白，广泛分布于可能所有哺乳动物细胞中，它调节细胞外和细胞内的葡萄糖运动，为新陈代谢提供恒定的葡萄糖供应[23]．迄今为止，GLUT家族由14种不同的亚型组成，在人体组织中分布不同[23，24]．GLUT1被认为在许多细胞类型中负责基础摄取，代表最普遍表达的亚型;GLUT4在外周组织中负责胰岛素刺激的葡萄糖摄取，但也有报道称其在大脑中的表达[25，26，葡萄糖是大脑氧化代谢的重要底物。最近有报道称，在人神经细胞系SH-SY5Y中，出现了响应胰岛素样生长因子(IGF-I)的GLUT1易位[27而且，在神经细胞系统中，GLUT4也首次在胰岛素的作用下转移到质膜[28]．长期以来，我们一直在研究以GLUT1为主表达的许多白血病细胞系的葡萄糖转运活性，发现同样在这些细胞类型中，GLUT1在不同的刺激下从细胞内的室间募集到质膜上，大大提高了葡萄糖摄取的速率[29，30.]．此外，众所周知，GLUT4易位受损与胰岛素抵抗和非胰岛素依赖型糖尿病有因果关系[31，32]．

基于这种认识和背景，我们选择表达胰岛素和胰岛素样生长因子-1 (IGF-I)受体的神经母细胞瘤SH-SY5Y和早幼粒细胞白血病细胞系HL-60 [28，33测试一些商业广告甜菊糖甙以评价这些化合物对葡萄糖转运的可能影响，并阐明其作用的分子机制。

2.材料和方法

2．1．化学药品和试剂

Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), foetal calf serum (FCS), penicillin/streptomycin, 3-(4,  5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), staurosporine, 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H₂DCFDA，二氯荧光素二乙酸酯)，2-脱氧葡萄糖(DOG)，根皮素，CelLytic M，哺乳动物蛋白酶抑制剂混合物β-肌动蛋白、甲基乙二醛(MG)、过氧化氢、牛血清白蛋白(BSA)、莱鲍迪苷A标准品(StReb)、甜菊苷标准品(StStev)以及所有其他最高分析等级的化学物质均购自Sigma-Aldrich。Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640培养基(含Hepes，含l -谷氨酰胺)购自PAA。2-Deoxy-D - [2，3.-葡萄糖和Ultima Gold MV闪烁鸡尾酒均来自PerkinElmer公司。PhosSTOP是一种磷酸酶抑制剂鸡尾酒，来自罗氏诊断公司。硝基纤维素膜和Amersham ECL先进Western Blotting检测试剂均来自GE-Healthcare。抗phospho-Akt (Ser473)的一抗4058)，总Akt (no. 4058);抗兔二抗(no. 9272);7074)和抗小鼠(无。7076)购自Cell Signaling Technologies。抗glut1 (sc-1603)、抗glut4 (sc-1606)抗体和与辣根过氧化物酶偶联的抗山羊IgG (sc-2020)均来自Santa Cruz Biotechnology。一抗抗phospho- pi3 Kinase p85 pTyr458/p55 pTyr199 PA5-17387) was from Thermo Scientific. Anti-PI3 Kinase (no. 06-195) antibody was purchased from Millipore. PageRuler Prestained protein ladder was from Fermentas—Thermo Fisher Scientific.

摘录甜菊糖甙rebaudianaBertoni由Eridania Sadam SpA提供。

根据食品及药物管理局和欧洲食品安全局[8- - - - - -11，市售甜菊醇苷总含量甜菊糖甙提取物必须至少95% (w/w)，莱鲍迪苷A和甜菊苷必须至少75%。四种提取物中莱鲍迪苷A和甜菊苷的相对含量不同。特别是，根据对每种甜味剂的分析证明，瑞鲍迪甙A (R97)含有97-98%的瑞鲍迪甙A，甜菊糖甙RA60 (R60)含有60%左右的莱鲍迪苷A和20%左右的甜菊苷;甜菊醇苷SG95 (SG)含有50%莱鲍迪苷A和至少25%甜菊苷;Truvia (truu)含有未经分析定量的甜菊醇苷混合物。

2．2．细胞培养

SH-SY5Y，人类神经母细胞瘤细胞在37℃下在具有5％CO的潮湿培养箱中生长₂在Dulbecco 's modified Eagle 's培养基(DMEM)中添加10% (v/v)胎牛血清(FBS)、2 mM谷氨酰胺、50 U/mL青霉素和50μk / ml链霉素，如[34]．HL-60为急性髓系白血病细胞，在含10%胎牛血清、2 mM谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素，在37°C的湿化气氛中保持在5% CO₂．

2．3.细胞生存能力

用不同浓度的甜菊醇苷(0.5 ~ 5mg /mL)或1mm(对应1mg /mL) StReb或1mm(对应0.8 mg/mL) StStev处理细胞24 h。MTT法评价细胞活力，如[35]．SH-SY5Y和HL-60细胞用0.5 mg/mL MTT在37℃多孔板中孵育4 h。孵育结束时，形成蓝紫色福马赞盐晶体，加入增溶溶液(10% SDS, 0.01 M HCl)溶解;然后在加湿的环境中(37°C, 5% CO)孵育过夜₂)以确保完全溶解。使用多孔平板阅读器(Wallac Victor)测量570 nm处的吸光度²PerkinElmer)。

２.４.乳酸脱氢酶测定

SH-SY5Y和HL-60细胞分别用1mg /mL孵育甜菊糖甙提取24小时。通过收集培养液等量，监测细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放情况。通过分光光度法测定了乳酸脱氢酶(LDH)活性，该分光光度法的基础是丙酮酸还原为乳酸，耦合到NADH氧化。在37°C监测到340 nm处的吸光度下降。One hundred.μM H₂O₂30分钟作为阳性对照。

2．5．Caspase 3活性测定

根据制造商(Sigma)的说明，使用比色法检测试剂盒测量细胞裂解液中的Caspase 3活性，如[36]．用或不用甜菊醇苷(1 mg/mL)孵育细胞1、6或24小时。24小时后，收集细胞并使用试剂盒提供的裂解缓冲液(250 mM HEPES, pH 7.4包含25 mM CHAPS和25 mM DTT)裂解。该分析是基于肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-aminomethylcoumarin (Ac-DEVD-AMC)被caspase 3水解，导致释放的自由AMC片段。使用多孔平板阅读器(Wallac Victor)读取AMC的荧光², PerkinElmer);激发波长为360 nm，发射波长为460 nm。

使用AMC标准曲线计算AMC的释放浓度。Caspase 3活性以每分钟每mL细胞裂解液释放的nmol AMC表达，并以裂解液中的总蛋白含量归一化。结果报告为相对于对照组的百分比。Staurosporine (1μg/mL)作为细胞凋亡诱导剂(阳性对照)。

2．6．细胞内活性氧(ROS)水平的测量

用荧光探针2 '，7 ' -二氯二氢荧光素二乙酸酯(H₂DCFDA)。SH-SY5Y和HL-60细胞分别用5mg /mL孵育甜菊糖甙提取1 h后，再进行或不进行100μM H₂O₂30分钟。依次用PBS洗涤2次，用5μM H₂37℃下DCFDA处理20分钟。H₂DCFDA是一种扩散到细胞内的非极性、非荧光小分子，在细胞内被酯酶去乙酰化为极性非荧光化合物，氧化生成高度绿色荧光2 '，7 ' -二氯荧光素(DCF)。使用多孔平板阅读器(Wallac Victor)测量氧化探针的荧光²PerkinElmer)。激发波长为485 nm，发射波长为535 nm。报告的荧光值是细胞内ROS相对于对照组的百分比。

2.7。葡萄糖运输试验

葡萄糖转运试验如[37，38]．用不同化合物(1 mg/mL)孵育或不孵育细胞1 h;然后在PBS中洗涤两次，在37℃用2-脱氧-d -[混合物处理10分钟(SH-SY5Y)或2分钟(HL-60)。2，3.葡萄糖(0.8)μ(Ci/assay)和1.0 mM未标记葡萄糖类似物，在至少20分钟的摄取呈线性的条件下。通过添加根皮素(最终浓度为0.3 mM)，这是一种有效的葡萄糖转运活性抑制剂。用液体闪烁计数法(三碳水化合物液体闪烁分析仪，PerkinElmer)测定放射性。

2.8。免疫印迹分析

处理后，用冰冷的PBS洗涤细胞，并使用含有哺乳动物蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的CelLytic M在冰上裂解。溶解后的细胞放在冰上溶解45分钟。裂解液在4°C下5000 g离心5分钟，去除未破碎的细胞碎片和细胞核。采用Bio-Rad Bradford蛋白测定法(Bio-Rad Laboratories)测定细胞裂解液蛋白浓度。在使用Mini-Protean仪器(Bio-Rad实验室)在10% SDS-PAGE Mini-Protean TGX预制凝胶上分离之前，样品在95℃下保存5分钟。蛋白质(15μg/lane)电泳转移到硝化纤维素膜(Hybond-C;GE医疗)在110 V的tris -甘氨酸缓冲液中浸泡90分钟。然后用含5% (w/v)白蛋白的阻断缓冲液在Tris-buffered saline (TBS)/Tween中孵育膜，以避免非特异性结合，并在4℃下与一抗(抗glut1，抗glut4，抗磷酸化Akt，抗总Akt，抗磷酸化pi3k，抗总pi3k，或抗β-actin作为内部正常化器)。硝酸纤维素膜用TBS/Tween洗涤3次，与含5%白蛋白的TBS/Tween中的二抗室温孵育60 min，然后用TBS/Tween依次洗涤。根据制造商的协议(GE Healthcare)，使用ECL Advance试剂进行化学发光显示结果。使用CCD成像仪(ChemiDoc MP System, Bio-Rad)获得印迹图像。利用Image Lab分析软件进行条带采集和分析。

2.9。统计分析

结果被表示为手段SD。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)后的Bonferroni多重比较检验确定平均值之间的差异，并认为差异显著．

3.结果与讨论

不同商品提取物的作用甜菊糖甙rebaudiana在SH-SY5Y神经母细胞瘤和HL-60髓系白血病人细胞中研究了Bertoni对葡萄糖转运的影响。

葡萄糖是大脑使用的主要能量来源，它不断地被输送到单个细胞(胶质细胞和神经元)[39]．在大脑中，葡萄糖代谢、GLUT亚型、葡萄糖摄取调节、胰岛素作用和胰岛素受体(IR)分布之间的关系非常复杂，依赖于大脑的特定区域，在认知功能中也起着关键作用。最近的研究报告称，糖摄取/代谢受损与阿尔茨海默病等神经退行性疾病密切相关[40- - - - - -42]．

人们还认识到，由于不受控制的增殖需要高能量，癌细胞经常过度表达GLUT家族成员，而且它们经常表达正常情况下不存在的GLUT亚型。此外，进入肿瘤的大的缺氧区域会导致癌细胞通过糖酵解增加对葡萄糖的利用。能量的需求通过增加糖的摄入来满足，这是通过GLUT表达的增加和质膜转运蛋白的增加来实现的[23]．因此，肿瘤细胞是研究葡萄糖转运活性及其信号转导途径的有用模型系统，有助于阐明甜菊糖苷对葡萄糖代谢生物学作用的分子机制。

我们论文的第一个目的是评估四种不同的效果甜菊糖甙MTT法检测提取物对细胞活力的影响。SH-SY5Y和HL-60细胞分别用不同浓度(0.5-5 mg/mL，对应于0.5-5 mM的R97，可以假设为纯化合物)处理甜菊糖甙提取24 h。图中上报数据2表明提取物没有影响细胞活力/增殖，证实它们在测试的浓度范围内不具有细胞毒性。StReb或StStev浓度相近时也得到了相同的结果(数据未显示)。

用乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞毒性，结果表明细胞膜完整性未受损害，排除细胞坏死(图)3.）.

为了评估其对细胞凋亡的可能影响，我们测定了caspase 3的活性。Caspases在介导各种凋亡反应中发挥中心作用，并在一系列的级联裂解中被激活。采用荧光底物Ac-DEVD-AMC检测caspase 3的酶活性。细胞的处理甜菊糖甙提取1小时，6小时(数据未显示)，或24小时(图4)不影响caspase 3的活性，表明该化合物不诱导程序性细胞死亡。

因为抗氧化性能甜菊糖甙摘要已被描述[15，16]，在SH-SY5Y和HL-60细胞中研究其抗氧化活性。用细胞渗透探针H测定活性氧(ROS)水平₂DCFDA，由于细胞内转化为高度绿色荧光的DCF，通常用于检测细胞中自由基/ROS的产生[43]．如图所示5，这些化合物没有显示出任何抗氧化活性，因为它们既不能在使用的最高浓度下降低基础ROS水平，也不能抵消由于外源性氧化应激而增加的细胞内ROS (100μM H₂O₂30分钟)。这种抗氧化活性的缺乏与其他作者报告的数据形成了对比[15，16，这可能是因为目前研究中使用的化合物是含有95-98%甜菊醇苷的商业甜味剂，而甜菊醇苷中天然存在的多酚含量无法鉴定甜菊糖甙树叶，可能要负责甜菊糖甙抗氧化活性。

甜菊糖甙提取物主要用作无热量的高效生物甜味剂替代糖。四的效果甜菊糖甙在HL-60人白血病细胞中，主要表达基础葡萄糖转运蛋白GLUT1，在SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞中，也表达胰岛素敏感蛋白GLUT4。数字6结果表明，在两种细胞系孵育1小时后，所有提取物和两种标准化合物均能同等程度地提高葡萄糖摄取。

由于用标准获得的葡萄糖摄取的增加与整个提取物所示一致，因此我们可以假设这种效果是由于莱鲍迪甙A和甜菊甙，这两个主要组成部分甜菊糖甙提取物。

此外，影响甜菊糖甙比较了100 nM胰岛素对葡萄糖转运活性的影响(图)6）.结果表明,甜菊糖甙提取物和胰岛素的作用相似甜菊糖甙提取物在增加葡萄糖摄取方面与胰岛素一样有效。与胰岛素和甜菊糖甙提取物引起的葡萄糖运输的增加明显高于胰岛素单独增加。

众所周知，胰岛素诱导GLUT4从细胞质储存囊转到质膜，增强了葡萄糖的运输。最近，这种现象也在神经细胞中被观察到在体外，特别是人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞，通过类似于肌肉或脂肪组织中描述的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)依赖机制[28]．据报道，glut转移到细胞膜是多种细胞类型的各种刺激的结果;此外，glut表达的变化已被描述为对几种代谢和氧化应激的反应和在各种生理或病理条件下。例如，胰岛素和缺血诱导GLUT1向大鼠心脏的膜运动[44];阿霉素通过ros介导的机制将GLUT1招募到心肌细胞的质膜上[37];l -半胱氨酸增加SH-SY5Y细胞葡萄糖摄取和GLUT3水平[45];生长因子、细胞因子、过氧化氢和胆固醇消耗能够增加白血病细胞系中的葡萄糖摄取和GLUT1易位[46- - - - - -49]．研究了神经母细胞瘤和白血病细胞中GLUT1和GLUT4的表达甜菊糖甙通过细胞裂解液的Western blot分析来评估提取物或胰岛素。数字7报道了具有代表性的GLUT亚型免疫印迹和两种细胞系的密度分析。可以看出，暴露后获得的GLUT1和GLUT4含量增加甜菊糖甙提取物与胰岛素刺激得到的提取物相似。这些结果与葡萄糖转运活性评价中观察到的结果一致。

澄清分子机制甜菊糖甙提取物可增强葡萄糖转运，随后评估PI3K和Akt的磷酸化状态甜菊糖甙提取治疗和胰岛素刺激。胰岛素激活PI3K/Akt通路，这对神经元的生存和生长、突触可塑性和发育和学习至关重要[50，51]．事实上，胰岛素受体的刺激，定位于脂筏[52，53，产生酪氨酸受体激酶的磷酸化和涉及PI3K和Akt的信号转导通路的激活。胰岛素与其受体的相互作用是白血病细胞生长和分化的调节因子[54，55]．在人类早幼粒细胞白血病细胞HL-60上发现了高度特异性胰岛素受体[56]．免疫印迹结果(图8)显示PI3K和Akt磷酸化形式在胰岛素或胰岛素治疗后增加甜菊糖甙摘要，表明可能的类似的作用机制，或至少，一个共同的信号通路。

为了更好地描述甜菊醇苷诱导葡萄糖摄取的机制，我们使用甲基乙二醛(MG)作为胰岛素受体/PI3K/Akt通路的抑制剂。MG是一种反应性酮醛，是多种代谢途径的产物，主要是糖酵解，被认为是最相关和反应性的糖基化剂在活的有机体内．晚期糖基化终末产物(AGEs)与几种疾病的发展和进展有关，包括糖尿病及其相关的血管并发症、肾功能衰竭、肝硬化、衰老，最近还与糖尿病神经病变和阿尔茨海默病有关[57]．此外，最近的研究表明MG与胰岛素抵抗之间存在相关性[58]．

数字9结果表明，MG孵育(2小时)可显著降低葡萄糖转运量，而随后的MG孵育(2小时)可显著降低葡萄糖转运量甜菊糖甙提取物或胰岛素能够提高葡萄糖摄取，证实了假设甜菊糖甙提取可以行动通过PI3K / AKT途径类似于胰岛素。由于Mg是对细胞的反应性醛，进行MTT测定以验证用于抑制葡萄糖输送的Mg浓度（0.1mm）不影响细胞活力（数据未显示数据）。

4.结论

本研究评价了甜菊醇苷的作用甜菊糖甙rebaudiana贝尔托尼叶，葡萄糖转运活性在两种不同的细胞系。据我们所知，我们第一次证明了莱鲍迪苷A和甜菊苷，主要的苷甜菊糖甙对SH-SY5Y神经母细胞瘤和HL-60髓系白血病细胞的葡萄糖摄取均有促进作用，其提高效果与胰岛素诱导的效果相似。我们的数据表明，甜菊醇苷通过PI3K/Akt通路调节GLUT易位。虽然还需要进一步的实验，但这些结果支持了甜菊醇苷和胰岛素在调节葡萄糖进入细胞方面具有相似的机制的假设。总之,甜菊糖甙提取物作为零卡路里的天然甜味剂商业化，参与胰岛素调节的葡萄糖代谢。这些发现表明甜菊糖甙提取物不仅具有甜味剂的功效，还可能提供治疗益处，支持使用植物性膳食补充剂来改善生活质量。

作者的贡献

Benedetta Rizzo和Laura Zambonin对本文作出了同样的贡献。

致谢

作者感谢Eridania Sadam SpA的好心提供甜菊糖甙rebaudianaBertoni提取物。这项工作得到了意大利教育，大学和研究部（Miur）的赠款，来自意大利经济发展部（意大利），意大利 - 超过50岁的项目“），以及意大利罗贝纳的Fondazione del Monte di Bologna e Ravenna。资助者在研究设计，数据收集和分析中没有作用，决定发布或纸质准备。作者宣布没有关于本文的出版物的利益冲突。

参考

1. J. R. Hanson和B. H. De Oliveira，《甜菊糖甙和相关的甜二萜苷》，天然产品报告，第10卷，第5期。3，第301-309页，1993。视图:谷歌学者
2. A. D. Kinghorn和D. D. Soejarto，《从植物中发现萜类和酚类甜味剂》，纯化学与应用化学，卷。74，没有。7，pp。1169-1179，2002。视图:谷歌学者
3. P. Z. Zimmet，D.J.McCarty和M. P. de Courten，“非胰岛素依赖性糖尿病的全球流行病学和代谢综合征”糖尿病杂志及其并发症，第11卷，第5期。2，第60-68页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. R. A. DeFronzo，《三巨头》(The three - virvirate)β细胞、肌肉、肝脏。这是对NIDDM负责的共谋。”糖尿病，第37卷，第2期6，页667-687,1988。视图:谷歌学者
5. 《美国糖尿病协会:糖尿病医疗护理标准-2013》糖尿病护理， vol. 36, supplement 1, pp. S11-S66, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. B. Crammer和R. Ikan的《甜菊糖植物中的糖苷》化学在英国第22卷第2期10，第915-917页，1986。视图:谷歌学者
7. V. Chatsudthipong和C. Muanprasat，“甜菊糖苷和相关化合物:超越甜味的治疗益处，”药理学和治疗号，第121卷。1，第41-54页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. 欧洲食品安全局食品添加剂和营养来源小组(ANS)，“甜菊醇苷作为食品添加剂的安全性的科学意见，”EFSA Journal.，第8卷，第2期4，页1537,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. 欧洲食品安全局，“修订的甜菊醇苷作为食品添加剂的暴露评估，”EFSA Journal.，第9卷，第5期。1，p。1972年，2011年。视图:出版商的网站|谷歌学者
10. 粮农组织/世卫组织食品添加剂联合专家委员会食品添加剂规范纲要，专着5. Steviol甘氨酸，2008年，http://www.fao.org/ag/agn/jecfa-additives/details.html?id=898．
11. 粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会，“某些食品添加剂的安全性评价。由粮农组织/世卫组织食品添加剂联合专家委员会第69次会议准备，”世界卫生组织食品添加剂系列，第66卷，第183-220页，2009。视图:谷歌学者
12. S. K. Goyal, S. Samsher和R. K. Goyal，“甜菊糖(甜菊糖)生物甜味剂:综述，”国际食品科学与营养杂志第61卷第1期1, pp. 1 - 10, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. G. Brahmachari，L.C.Mandal，R.Roy，S. Mondal和A.K. Brahmachari，“药物承诺的甜菊糖和相关的化合物分子：重要的概述”档案der Pharmazie第344期1, pp. 5-19, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
14. M. Suttajit, U. Vinitketkaumnuen, U. Meevatee和D.布迪萨克，“甜菊糖苷的诱变性和人类染色体效应，甜菊糖苷是一种甜菊糖。”环境健康展望，第101卷，第1期。3，第53-56页，1993。视图:谷歌学者
15. S. Tavarini和L. G. Angelini，“甜菊糖作为生物活性化合物的来源:收获时间、试验地点和作物年龄对甜菊糖苷含量和抗氧化性能的影响”，食品和农业科学杂志第93卷第5期9, pp. 2121-2212, 2013。视图:谷歌学者
16. N. Shivanna, M. Naika, F. Khanum, and V. K. Kaul， "甜菊糖的抗氧化、抗糖尿病和保护肾脏的特性"糖尿病及其并发症杂志第27卷第2期2, pp. 103-113, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. P. B. Jeppesen, S. Gregersen, C. R. Poulsen和K. Hermansen，“甜菊糖直接作用于胰腺β细胞分泌胰岛素:作用不依赖于环磷酸腺苷和三磷酸腺苷敏感K⁺声道输出的活动。”新陈代谢，第49卷，第49期。2、2000年。视图:谷歌学者
18. N. Lailerd, V. Saengsirisuwan, J. A. Sloniger, C. Toskulkao，和E. J. Henriksen，“甜菊糖苷对胰岛素敏感和胰岛素抵抗大鼠骨骼肌葡萄糖转运活性的影响”，新陈代谢，第53卷，第53期1，页101-107,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. p . Chan K.-L。Wong I.-M。刘,T.-F。Tzeng T.-L。杨,J.-T。血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的抗高血糖作用高血压杂志》第21卷第2期4，页761-769,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
20. 郭宏源。陈,研究所。陈平，陈玉兰。楚,H.-Y。杨,J.-T。甜菊糖甙(甜菊糖的一种苷)的降糖作用机制足底》，第71卷，第71期2，页108-113,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
21. P. B. Jeppesen, S. Gregersen, K. K. Alstrup和K. Hermansen，“甜菊糖诱导抗高血糖，胰岛素和胰高血糖素的作用体内:在糖尿病后藤kakizaki (GK)大鼠的研究中，植物学期刊，第9卷，第5期。1，页9-14,2002。视图:谷歌学者
22. R. Abudula, V. V. Matchkov, P. B. Jeppesen, H. Nilsson, C. Aalkjær，和K. Hermansen，“Rebaudioside A直接刺激胰腺β细胞分泌胰岛素:通过抑制atp敏感K的葡萄糖依赖作用⁺渠道。”糖尿病，肥胖和新陈代谢，第10卷，第5期。11，pp。1074-1085,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
23. R. A. Medina和G. I. Owen，《葡萄糖转运体:表达、调控和癌症》，生物研究第35期1，页9-26,2002。视图:谷歌学者
24. R. Augustin，“葡萄糖转运促进因子的蛋白质家族:这毕竟不仅仅是关于葡萄糖，”IUBMB生活第62期5, pp. 315-333, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
25. C. Leloup, M. Arluison, N. Kassis等人，“离散脑区表达胰岛素反应性葡萄糖转运体GLUT4，”分子脑研究第38卷第2期1，第45-53页，1996。视图:出版商的网站|谷歌学者
26. C. Choeiri, W. Staines，和C. Messier，“小鼠大脑中葡萄糖转运体的免疫组化定位和定量，”神经科学号，第111卷1，页19-34,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
27. V. C. Russo, K. Kobayashi, S. Najdovska, N. L. Baker，和G. a . Werther，“通过调节葡萄糖运输和抑制细胞凋亡来保护神经元免受葡萄糖剥夺:胰岛素样生长因子系统的作用”，大脑研究号，第1009卷。1-2，页40-53,2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
28. “胰岛素和瘦素通过磷脂酰肌醇3-激酶依赖的机制诱导人神经细胞系Glut4质膜移位和葡萄糖摄取，”内分泌学第147卷5, pp. 2550-2556, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
29. T. Maraldi, D. Fiorentini, C. Prata, L. Landi，和G. Hakim，“干细胞因子和H₂O₂诱导M07e细胞GLUT1易位BioFactors，第20卷，第2期。2，页97-108,2004。视图:谷歌学者
30. T. Maraldi, D. Fiorentini, C. Prata, L. Landi，和G. Hakim，“白血病细胞中的葡萄糖转运调节:如何能H₂O₂模仿干细胞因子效应?”抗氧化剂和氧化还原信号，第9卷，第5期。2，页271-279,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
31. F. Ismail-Beigi，《葡萄糖运输的代谢调节》膜生物学杂志，第135卷，第2期1，第1 - 10页，1993。视图:谷歌学者
32. A. R. Saltiel和C. R. Kahn，“胰岛素信号传导和葡萄糖和脂质代谢的调节”，自然，第414卷，第2期。2001年。视图:出版商的网站|谷歌学者
33. A. E.W.Hendrickson，P.Haluska，P.A.Schneider等，“胰岛素受体异构体A和胰岛素样生长因子-1受体在人急性髓性白血病中的表达：双受体抑制剂BMS-536924的作用在体外”,癌症研究，第69卷，第2期19，第7635-7643页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
34. a . Tarozzi, F. Morroni, a . Merlicco等，“作为谷胱甘肽诱导剂的莱菔硫烷可防止氧化应激诱导的多巴胺能样神经母细胞瘤细胞系细胞死亡，”神经化学杂志号，第111卷5, pp. 1161-1171, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
35. a . Minarini, a . Milelli, V. Tumiatti等，“半胱胺-他林二聚体:一种新的多靶点导向配体，作为治疗阿尔茨海默病的潜在药物，”神经药理学第62期2，pp。997-1003,2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
36. C. Angeloni, E. Motori, D. Fabbri et al.，“H₂O₂预处理通过p38 MAPK和PI3K/Akt激活调节II期酶。”美国生理学杂志，第300卷，第2期6、pp. H2196-H2205, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
37. S. Hrelia, D. Fiorentini, T. Maraldi等，“阿霉素诱导培养心肌细胞中与葡萄糖运输变化相关的早期脂质过氧化”，生物化学与生物物理学，第1567卷，第150-156页，2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
38. D. Fiorentini, C. Prata, T. Maraldi等人，“活性氧对细胞因子敏感性不同的两种造血细胞系中Glut1调节的贡献”自由基生物学与医学，第37卷，第2期9、pp. 1402-1411, 2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
39. d·d·克拉克和l·索科洛夫，《大脑的循环和能量代谢》基本的神经化学， G. J. Siegel, B. W. Agranoff, R. W. Albers, S. K. Molinoff, P. B. Fisher和M. D. Uhler, Eds。，第637-669页，Lippincott-Ratven，费城，美国，1999。视图:谷歌学者
40. F. Pasquier, A. Boulogne, D. Leys, and P. Fontaine， "糖尿病和痴呆"糖尿病和新陈代谢，第32卷，第2期5，第403-414页，2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
41. K. F. Neumann, L. Rojo, L. P. Navarrete, G. Farías, P. Reyes，和R. B. Maccioni，“胰岛素抵抗与阿尔茨海默病:分子连接和;临床意义。”目前老年痴呆症研究，第5卷，第5期。5，页438-447,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
42. E. Adeghate, T. Donath, and A. Adem，“阿尔茨海默病和糖尿病:它们有什么共同点吗?”目前老年痴呆症研究，第10卷，第5期。6, pp. 609-617, 2013。视图:谷歌学者
43. E. Eruslanov和S. kusmarsev，“使用氧化DCFDA和流式细胞术鉴定ROS，”分子生物学方法， vol. 594, pp. 57 - 72,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
44. S. Egert, N. Nguyen, M. Schwaiger，“心肌葡萄糖转运体GLUT1:胰岛素和缺血诱导的易位”分子和细胞心脏病学杂志第31卷第1期7，第1337-1344页，1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
45. V. Gazit, R. Ben-Abraham, O. Vofsi，和Y. Katz，“l -半胱氨酸增加小鼠比目鱼肌肉和SH-SY5Y细胞的葡萄糖摄取，”大脑代谢疾病第18卷第2期3，页221-231,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
46. T. Maraldi, C. Prata, D. Fiorentini, L. Zambonin, L. Landi，和G. Hakim，“血小板生成素和粒细胞巨噬细胞集束刺激因子在人白血病细胞系中葡萄糖运输调节中的信号过程和ROS的产生，”自由基的研究号，第41卷。12，页1348-1357,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
47. C. Prata, T. Maraldi, L. Zambonin, D. Fiorentini, G. Hakim，和L. Landi，“两种人类巨核细胞系的ROS产生和Glut1活性”，BioFactors，第20卷，第2期。4，页223-233,2004。视图:谷歌学者
48. C. Prata, T. Maraldi, D. Fiorentini, L. Zambonin, G. Hakim，和L. Landi，“在白血病细胞系中，氮氧化物产生的ROS调节葡萄糖摄取”，自由基的研究，第42卷，第2期5，页405-414,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
49. C. Caliceti, L. Zambonin, C. Prata等，“质膜胆固醇消耗对白血病细胞葡萄糖转运调节的影响”，《公共科学图书馆•综合》，第7卷，第5期7、文章ID e41246, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
50. L. P. van der Heide, G. M. J. Ramakers, M. P. Smidt，“中枢神经系统中的胰岛素信号:学会生存”，神经生物学的进展，第79卷，第5期。4，页205-221,2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
51. R. R. Girgis, J. A. Javitch和J. A. Lieberman，“抗精神病药物机制:治疗效果、代谢副作用和胰岛素信号通路之间的联系”，《分子精神病学》，第13卷，第2期10，页918-929,2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
52. C. Wu, S. Butz, y - s。Ying，和R. G. W. Anderson，“酪氨酸激酶受体集中在神经元质膜的小泡样区域，”生物化学杂志第272期6、第2 - 3页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学者
53. J. Sánchez-Wandelmer, A. Dávalos, G. de la Peña等，“氟哌啶醇破坏SH-SY5Y细胞中的脂质筏和胰岛素信号传导，”神经科学号，第167卷。1，页143-153,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
54. T. J. chapplinski, T. E. Bennett和J. F. Caro，“伴随HL-60白血病细胞分化的胰岛素受体表达改变”，癌症研究第46卷，第46期3，第1203-1207页，1986。视图:谷歌学者
55. J. M. Lord, C. M. Bunce, R. J. Duncan等，“诱导向中性粒细胞或单核细胞分化的HL60细胞中胰岛素受体表达的变化”，分子内分泌学杂志， vol. 1, no. 13，页197-201,1988。视图:谷歌学者
56. J. P. Abita, C. Gauville, and F. Saal，“人早幼粒细胞白血病细胞HL60中胰岛素受体的特性”，生物化学与生物物理研究通讯，第106卷，第2期。2，页574-581,1982。视图:谷歌学者
57. M. Sousa Silva, R. A. Gomes, A. E. Ferreira, A. Ponces Freire, and C. Cordeiro，“乙二醛酶途径:头一百年…及以后，”生物化学杂志第453期1, pp. 1 - 15, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
58. P. Matafome, C. Sena，和R. Seiça，“甲基乙二醛，肥胖和糖尿病，”内分泌号，第43卷。3，第472-484页，2013。视图:出版商的网站|谷歌学者

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