逍遥丸减弱炎症和神经损伤脂多糖诱导的海马神经元体外

文摘

脂多糖(LPS)是proinflammation介质,可以诱导的炎症模型海马神经元,参与抑郁症的病理生理学和神经炎症。逍遥丸是一种传统中药配方,用于治疗精神疾病,如抑郁症在中国宋代以来。我们建立了海马神经元细胞炎症模型由有限合伙人和调查逍遥丸的干预效应和机制。表达水平的il - 6、TNF -α被罩,5、脑源性神经营养因子和β神经生长因子被酶联免疫吸附试验检测。信使rna水平的il - 6、TNF -α5-HT1A IDO-1,脑源性神经营养因子、神经生长因子,原肌球蛋白受体激酶B,原肌球蛋白受体激酶,营地反应元件结合蛋白被逆转录-聚合酶链反应检测。为了进一步验证,由免疫印迹和免疫荧光蛋白表达。Lipopolysaccharide-induced神经炎症状态导致释放il - 6、TNF -α、被罩和减少脑源性神经营养因子、神经生长因子、TrkB, TrkA,分子,p-CREB p-CREB /分子和SYP和海马神经元的抑制海马神经发生。逍遥丸显著降低il - 6的水平,TNF -α,被罩在细胞上清液和BDNF的表达增加,神经生长因子,TrkB, TrkA,分子,p-CREB, p-CREB /分子的平均光密度和SYP BrdU / NeuN double-labelled阳性细胞。我们的研究表明,脂多糖诱导炎症和神经损伤在海马神经元,这是与抑郁症的病理机制密切相关。逍遥丸(XYW)发挥重要的神经保护作用,有关其抑制神经炎症,促进神经损伤的恢复。这些结果提供了药理学依据XYW治疗抑郁症的临床应用。

1。介绍

抑郁症是一种严重的精神疾病,在世界各地盛行,对神经结构和功能产生深远的影响。它的特点是心理生理变化,如情绪低落、失去self-feeling,悲伤,易怒,所有活动的兴趣和损失1]。抑郁症的发病率在全球每一代正在增加。大量研究发现遗传因素、环境因素和压力作为抑郁症的主要危险因素(2]。

虽然抑郁症已经与许多理论解释,如单胺理论,肾上腺皮质(HPA)轴理论,神经营养假说,理论和神经炎症,更多的多因素疾病。从某种意义上说,炎症是一个静态负载涉及免疫、内分泌和神经系统。最初,调查主要关注系统性炎症的影响中枢神经系统(CNS)。然而,目前的研究集中在发生在中枢神经系统的神经炎症;这些发现表明,cytokine-mediated干预可能是有价值的治疗抑郁症的人口(3]。神经炎症的过程涉及到哨兵免疫细胞在中枢神经系统,常驻巨噬细胞被称为小胶质细胞(4]。小胶质细胞的激活可能会进一步引发神经炎症,导致多种神经精神疾病,如抑郁症(5),阿尔茨海默病(6),和精神分裂症7]。神经炎症参与抑郁症的病理生理学通过增加促炎细胞因子,激活肾上腺皮质轴,增加糖皮质激素抵抗,和影响5 -羟色胺的合成和代谢,神经细胞凋亡和神经发生和神经可塑性8]。目前的研究发现,促炎细胞因子抑制HPA轴的负反馈调节,导致损耗的5 -羟色胺(9]。它还起着关键作用的神经内分泌、神经递质耗竭,神经可塑性,和当地的大脑活动。脂多糖(LPS)的挑战可能会刺激导致抑郁症状的急性炎症反应在人类和啮齿动物。因此,基于神经炎症和抑郁之间的密切关系,有限合伙人通常用于准备类似抑郁模型引起的炎症反应(10,11]。

海马萎缩通常观察抑郁症患者和风险被认为是抑郁症的生物标志物12]。海马体是容易神经炎症。众多研究表明,小神经胶质细胞的基础上更上一层楼的效果与慢性神经退化和小神经胶质细胞的激活过程中有着重要的作用,抑制海马神经发生在压力和炎症条件下(13,14]。压力也会降低神经元树突分支和海马神经元的可塑性15]。海马可塑性在抑郁症中涉及海马体积,海马神经发生和海马神经元的凋亡。海马神经发生在人类身上可能对抑郁症的治疗至关重要。

队圣包含在中国药典(16],这是一个中国古典医学公式。这是一个逍遥丸的处方。逍遥圣汤由八个常用的草药北柴胡直流。,当归一昼夜的。,芍药棺罩。,白术macrocephalaKoidz。薄荷Briq。茯苓狼。乌拉尔甘草费斯。,生姜Rosc。如果是直接用于体外细胞实验,它会干扰实验。因此,根据“血清药理学”的概念由日本学者提出Hiroko Iwama我们使用药物血清的药物体外实验;它可以减少干扰的中药制剂在体外实验,同时也符合中医药理作用的生理过程被人体消化和吸收后代谢和生物(17]。目前,已经有许多报道的成分可能存在于血清队,圣:共有55 blood-containing组件,包括16原始组件,被确定在rat-containing血清由提取的北柴胡直流。和芍药棺罩。代谢组件来自皂素代谢物北柴胡直流。和芍药苷代谢产物芍药幕(18). .科汉解释说,发现川芎内酯的相对含量的含药血清当归一昼夜的。和提取显著高于原药物(19]。6父母成分和5代谢成分的代谢组件被发现雄性老鼠药血清的管理茯苓狼。提取(20.]。因此,可靠的使用研究药物血清中药体外。队圣已被用于治疗抑郁症等精神疾病自宋朝在中国大约九百年。抗抑郁药物的潜在可能密切相关,其药理作用为主;脾脏,舒缓的肝脏,血液滋养,清除肝脏火由于血液不足(21]。队圣tryptophan-kynurenine代谢途径的异常改善抑郁大鼠和发挥抗抑郁作用,改变生物指标在大鼠海马22]。修改后的逍遥圣可以改善脑氧依赖性的fMRI信号调节海马神经发生的老鼠的大脑发挥抗抑郁作用[23]。临床上,逍遥丸能改善抑郁的症状,提高患者的生活质量。抑郁症有良好的治疗效果,值得临床应用24,25]。队之前,我们发现圣是一个高度有效的公式,以防止抑郁症通过抑制HPA轴信号,提高BDNF通路信号和老鼠。然而,逍遥圣能否减弱促炎细胞因子的释放,激活脑源性神经营养因子信号通路,促进神经发生在神经炎症仍然未知。

我们先前的研究发现,XYW类似抑郁行为改善,减少炎症的水平指标、神经营养因子和突触蛋白的增加,和恢复尼氏小体在急性应激小鼠和大鼠,从而提高抑郁症体内(26]。在这项研究中,海马神经元细胞的炎症模型建立了有限合伙人来模拟抑郁的发生由海马神经元诱导炎症。模型显示,促炎细胞因子增加,色氨酸代谢异常,downregulation BDNF通路和神经损伤。我们有测量的促炎细胞因子肿瘤坏死因子的水平αIDO的表达和5,il - 6,神经生长因子、脑源性神经营养因子的表达TrkB, TrkA,分子,p-CREB, SYP海马神经元细胞。测量BrdU / NeuN进一步证实了XYW在抑郁症的神经保护效应引起的海马神经元细胞炎症模型中有限合伙人。

2。材料和方法

2.1。逍遥丸质量控制(QC)

分析是由高效液相色谱法(HPLC)(热,美国)。列C18柱( 5毫米,μ米)、色谱分离条件如下:列温度:30°C;流量:1.0毫升/分钟;流动相:乙腈+ 0.1%磷酸(15:85);股票的解决方案的逍遥丸是由溶解0.4 g 25毫升稀乙醇(分析物的21]。逍遥丸》的内容是由定量芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)。芍药苷含量不应小于4.0毫克的1.0 g集中药(11]。芍药苷的含量在1.0 g逍遥丸是27.5毫克。

2.2。药品和试剂

逍遥丸(太极,中国),有限合伙人(大肠杆菌055:B5),盐酸氟西汀(FLX)和DAPI提供的σ(圣路易斯,密苏里州)。兔子anti-NeuN抗体(1:50;猫。不。# 24307年代),鼠标anti-BrdU抗体(1:1400;猫。不。# 5292年代),兔子anti-TrkB抗体(1:1000;猫。不。 #4603), rabbit anti-CREB antibody (1 : 1000; Cat. No. #9197S), rabbit anti-p-CREB antibody (1 : 1000; Cat. No. #9198S), and rabbit anti-β微管蛋白抗体(1:1000;猫。不。# 2128)都从细胞信号技术。兔子anti-synaptophysin多克隆抗体(1:1000;猫。不。# 17785 - 1 - ap)来自Proteintech。兔子anti-GAPDH抗体(1:1000;猫。 No. #GB11002) was from Servicebio. Goat anti-mouse IgG-FITC (1 : 100; Cat. No. #10) and goat anti-rabbit IgG/Cy3 (1 : 100; Cat. No. #AG04017512) were both from Absin.

2.3。逍遥丸的制备血清

男性Sprague-Dawley老鼠重220 - 240克从成都Dashuo购买。所有的动物都是在标准笼子在恒定的温度和湿度的房间( ;40 - 60%)12:12黑暗/光周期(灯在八点。从晚上八点)。动物被赋予自由获取食物和水在整个实验过程。老鼠XYW组intragastrically XYW管理(逍遥丸,1.86 g·公斤¹)每天14天;与此同时,在对照组大鼠intragastrically等体积生理盐水的日常管理,确保等热量的摄入。大鼠麻醉后1 h过去灌洗。然后,血液从腹主动脉,离心机,水浴,消毒过滤膜,并存储在一个−80°C冰箱,避免反复冻融。

2.4。细胞培养和治疗

胚胎的大脑解剖,单细胞海马是通过机械分离的悬浮液Sprague-Dawley老鼠从成都Dashuo购买。主要镀海马神经元的密度 细胞/毫升polylysine-coated文化板块,在DMEM培养补充10%的边后卫在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂/ 95%空气24小时使用标准的细胞培养方法。神经干细胞的分化,用Neurobasal-A替换介质中含有谷酰胺B-27 2%和1%。每3天中被改变。后十^th天,有限合伙人被添加到培养基中。24小时后,海马神经元与逍遥丸孵化血清浓度(4%和8%)Neurobasal-A中没有2% B-27 48 h。初步实验后,发现逍遥丸的血清浓度4%和8%对细胞生存能力没有影响。

2.5。细胞识别

主要的海马神经元在激光共焦培养皿培养13天根据项目2.4。完成后的文化,放弃培养基,添加4%多聚甲醛固定30分钟。添加0.25% Triton x - 100 permeabilize 15分钟,然后用5% BSA-PBST孵化1 h。细胞被孵化后一夜之间添加兔子anti-NeuN抗体稀释剂(1:50;细胞信号传导技术;猫。不。# 24307年代),然后添加山羊anti-rabbit免疫球蛋白/ Cy3稀释剂(1:100;Absin;猫。 No. #AG04017512), and incubating for 1 h. Images were captured at 20x using a confocal microscope. NeuN is a specific marker for neurons, which can be marked red by NeuN-CY3. After the double staining of NeuN and DAPI, the distribution of red fluorescence and blue fluorescence of the cells cultured for 13 days was basically consistent, indicating that the cultured cells were neurons (Figure1)。

2.6。检测机制

2.6.1。ELISA分析il - 6、TNF -α、被罩、5 - BDNF,β神经生长因子

水平的il - 6、TNF -α脑源性神经营养因子,β神经生长因子在细胞上清液和被罩在细胞溶解产物5 - ELISA检测,根据制造商的指示,光密度测量在450 nm标。

2.6.2。海马和皮层的总RNA表达通过rt - pcr

总RNA被用来合成cDNA使用FastQuant RT工具包(Tiangen,北京);随后,放大反应是在反应96孔板进行20μL反应体积(Bio-Rad)。基因的引物序列β肌动蛋白、il - 6、TNF -α5-HT1A IDO1,脑源性神经营养因子、神经生长因子TrkB, TrkA,分子在表列出用于这项研究1。

2.6.3。免疫印迹分析

里帕溶解产物缓冲区包含1毫米PMSF被添加到每个样本收集总蛋白。每个样本的总蛋白浓度由BCA法和调整所有样品相同的浓度。蛋白质样本混合5 x加载缓冲区和变性在95°C。通过sds - page分离的蛋白质(8%或15%)和electrophoretically转移到聚偏二氟乙烯膜。探讨了膜与兔子anti-TrkB抗体(1:1000;细胞信号传导技术;猫。不。# 4603),兔子anti-CREB抗体(1:1000;细胞信号传导技术; Cat. No. #9197S), rabbit anti-p-CREB antibody (1 : 1000; Cell Signaling Technology; Cat. No. #9198S), rabbit anti-β微管蛋白抗体(1:1000;细胞信号传导技术;猫。不。# 2128),兔子anti-synaptophysin多克隆抗体(1:1000;Proteintech;猫。不。# 17785 - 1 - ap),兔子anti-GAPDH抗体(1:1000;Servicebio; Cat. No. #GB11002) overnight at 4°C and then incubated with Anti-rabbit IgG HRP-Linked Antibody (1 : 3000; Servicebio; Cat. No. #GB23303) at 37°C for 1.5 h. Detection was performed using a ChemiDoc XRS⁺(美国Bio-Rad)图像分析系统。

2.6.4。疣状

培养细胞被固定在PBS溶液含有4%多聚甲醛与PBS 15分钟,洗3次。PBS的解决方案包含0.25% Triton被加入到细胞在室温下15分钟,然后用5%牛血清白蛋白孵化1 h。删除这个阻塞试剂后,细胞在湿润孵化室在4°C一夜之间主要抗体:鼠标anti-BrdU抗体(1:1400;细胞信号传导技术;猫。不。# 5292年代),兔子anti-NeuN抗体(1:50;细胞信号传导技术;猫。不。 #24307S), and rabbit anti-NeuN antibody (1 : 50; Cell Signaling Technology; Cat. No. #24307S) diluted in blocking reagent. Then, cells were washed 3 times with PBS and incubated for 1 h in the dark at room temperature in the presence of the fluorescent secondary antibodies: goat anti-mouse IgG-FITC (1 : 100; Absin; Cat. No. #10) and goat anti-rabbit IgG/Cy3 (1 : 100; Absin; Cat. No. #AG04017512). Finally, the coverslips were mounted onto slides in PBS. The preparations were analysed under a fluorescent microscope (Olympus FV1200).

2.7。统计分析

所有使用SPSS分析。给出的数据 。所有使用单向方差分析分析, - - - - - -测试分析,或者Mann-Whitney测试rank-sum分析。是水平的意义 。

3所示。结果

3.1。逍遥丸防止LPS-Induced炎症

如数据所示2(一个)和2 (c)和表1治疗后,有限合伙人,炎性细胞因子,包括白介素(图1(一), , )和肿瘤坏死因子-α(图1(c), ),从海马神经细胞释放。盐酸氟西汀治疗(FLX)可以减少在上层清液(图的il - 6水平2(一个), , )和mRNA表达下调il - 6表达在细胞(图1(b), )和肿瘤坏死因子-α信使rna表达(图2 (b), , )。用逍遥丸治疗血清(8%)可以降低il - 6的水平(图2(一个)8%: , )和肿瘤坏死因子-α(图2 (c)8%: )在上层清液,逍遥丸血清(4%)也减少了在上层清液il - 6的水平(图2(一个), , )。此外,在细胞溶解产物,逍遥丸血清(4%和8%)降低il - 6 mRNA的表达(图2 (b)4%: ;8%: )和肿瘤坏死因子-α信使rna(图2 (b)4%: , ;8%: , )。虽然4%和8%的血清逍遥丸能显著降低il - 6水平浮在表面的,没有明显的剂量相关,这可能与中药成分的复杂性或组件之间的交互。总之,FLX和逍遥丸的血清能抑制LPS引起的海马神经元细胞的炎症反应。

3.2。5我逍遥丸防止LPS-Induced有限

我们进一步证明,在体外实验中,有限合伙人可以增加蛋白质(图3 (c), , )和它的mRNA表达(图3 (d), )被罩在海马神经细胞溶解产物和表达下调(图5 -水平3(一个), , )和它的mRNA表达(图3 (b), , )与对照组相比。FLX改善5的水平(图3(一个), , )和它的信使rna(图3 (b), , )在细胞溶解产物和减少油(图的水平3 (c), , )和它的信使rna(图3 (d), )在细胞溶解产物。逍遥丸血清(8%)也提高了5 -水平(图3(一个), , )和它的mRNA表达(图3 (b), , )在细胞溶解产物,同时减少被罩mRNA的表达(图3 (d), )在细胞溶解产物。逍遥丸血清(4%)降低我的水平蛋白质(图3 (c), , )和它的mRNA表达(图3 (d), )在细胞溶解产物。这些结果表明,逍遥丸能抵抗我的异常upregulation LPS引起的差别和异常对这些5,因此发挥抑制作用在海马神经细胞的炎症反应。

3.3。逍遥丸防止LPS-Induced减少神经营养因子

在初级海马神经元细胞,神经营养因子和相关因素的生产减少在海马体神经元LPS处理后,包括脑源性神经营养因子(蛋白表达:图4 (b), , ;信使rna表达:图4 (d), , )和神经生长因子(蛋白质:图4 (c), , ;信使rna:图4 (e), , ),以及它的高亲和性tropomyosin-related激酶,比如TrkB(蛋白质:图4 (h), , ;信使rna:图4 (f), , ),TrkA (mRNA:图4 (g), , ),和分子(蛋白质:图4 (k), , ;信使rna:图4(我), , ),p-CREB(图4 (j), , ),和p-CREB /分子(图的比例4(左), , )。逍遥丸血清浓度(4%和8%)和FLX可能增加BDNF(图的水平4 (b)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , )和β神经生长因子(图4 (c)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , )在上层清液,增加脑源性神经营养因子的转录水平(图4 (d)FLX: , ;4%: , ;8%: , ),神经生长因子(图4 (e)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),TrkB(图4 (f)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),TrkA(图4 (g)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),和分子(图4(我)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , )蛋白表达的细胞溶解产物,TrkB(图4 (h)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),分子(图4 (k)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),和p-CREB(图4 (j)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , )在细胞溶解产物,以及p-CREB /分子(图的比例4(左)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , )。

神经发生和突触可塑性的调节神经元脑源性神经营养因子密切相关。脑源性神经营养因子可以从神经元到细胞外空间和绑定self-release TrkB,反过来磷酸化分子,发挥神经保护作用。在这项研究中,我们主要观察到细胞外BDNF水平和细胞内的蛋白表达水平TrkB,分子和p-CREB。结果表明,逍遥丸预防减少LPS引起的神经营养因子,激活脑源性神经营养因子/ TrkB /分子分子通路。

3.4。逍遥丸促进LPS-Damaged突触的生长

Synaptophysin (SYP)被广泛认为是支架蛋白,参与突触功能的规定。SYP神经元细胞的水平可能反映了神经突触是否损坏。在海马神经元细胞,LPS诱导突触功能障碍(图5 (b), , )。逍遥丸血清和FLX改善突触功能障碍通过促进synaptophysin的表达(图5 (b)FLX: , ;4%血清: , ;8%血清: , ),建议逍遥丸能促进突触的生长受到有限合伙人。

3.5。逍遥丸防止LPS-Induced减少海马神经元的扩散

BrdU,也称为溴脱氧尿苷,是一个替代品胸腺嘧啶核苷的合成胸苷类似物的选择性绑定在S期细胞DNA。因此,细胞DNA合成和细胞分裂和细胞凋亡检测。经常使用BrdU标记的细胞增殖。BrdU免疫荧光化学已被用于研究神经系统的发展和确定大脑的神经发生。BrdU的平均光密度/ NeuN double-labelled阳性细胞在模型组明显低于对照组(图6 (b), , ),和BrdU / NeuN的比率明显高于逍遥丸的血清(4%)比在LPS组(图组6 (b), , )。它表明,逍遥丸可以防止降低LPS引起的海马神经元的增殖。

4所示。讨论

神经元是神经系统的基本结构和功能单元;神经元的作用是集成和传输信号。和大脑的神经结构和功能的变化以应对各种刺激,包括压力和炎症,引起神经损伤,最终导致抑郁症。抑郁症是最常见的精神疾病之一。它是一种多因素疾病与遗传和环境因素导致其发病机理。和它会影响多个行为领域,提出了各种各样的症状,即抑郁情绪、快感缺乏,焦虑,和认知障碍,导致严重的残疾和障碍的患者的生活质量。

神经炎症被认为是抑郁症的一个重要病理原因。它是细胞因子相关假设;抑郁症患者被发现显示增加的炎症生物标记,包括炎性细胞因子。和激活的脑部炎症通路减少神经营养支持和改变谷氨酸释放/再摄取,以及氧化应激,导致会引起,与抑郁症的神经病理结果一致特征(27]。促炎细胞因子可以引起疾病的行为和细胞损伤28,29日]。增加炎症会导致消极情绪,由研究也支持通过注射LPS诱导炎症。促炎细胞因子(il - 1刺激增长β、il - 6和TNF -α与抑郁症状有关,促炎细胞因子最近显示与大脑,影响神经传递、神经内分泌活动,和大脑的结构和功能,从而改变情绪、认知和行为。的分子机制之一的炎症可以联系情感认知是系统对含血清素的促炎细胞因子的影响。促炎细胞因子激活、酶参与的合成色氨酸犬尿氨酸。中央和周边激活被罩导致色氨酸的分解代谢增加,导致缺5和神经毒性代谢物生产。则行为与5的合成和生产相关的神经毒性代谢物的limbic-cortical-striatal-pallidal-thalamic (LCSPT)电路30.]。我们的研究揭示了海马神经元il - 6的内容。肿瘤坏死因子-α我在LPS组明显高于对照组。LPS组和5的水平明显低于对照组。逍遥丸和FLX抑制il - 6的增加,肿瘤坏死因子-α,我的水平在LPS引起的海马神经元和海马神经元5 -含量的减少,显示细胞损伤的保护作用模型。

此外,有充足的证据表明,抑郁症患者与海马体积的减少,神经元萎缩,神经损失。原因可能是缺乏神经营养因子(31日,32]。有限合伙人可以诱导神经元死亡,减少神经发生,影响突触可塑性和记忆。研究表明,有限合伙人影响大脑中生成水平;神经保护由神经营养因子是受到系统性免疫激活引起的有限合伙人(33]。BDNF属于家庭的神经生长因子对神经系统发育中起着重要的作用,包括生长、分化、和生存。临床前研究表明,接触压力会导致海马萎缩和细胞损失,以及减少神经营养/生长因子表达。因此,它支持抑郁症的神经营养/神经源性假说和抗抑郁作用[34]。脑源性神经营养因子对其神经营养作用通过激活TrkB [35];TrkB的磷酸化激活转录因子基因表达的分子,然后发挥抗抑郁作用[36],促进神经元存活[37),并加强突触可塑性(38]。脑源性神经营养因子是大脑中大量表达,扮演一个角色在维持成人大脑细胞的结构(39]。在啮齿动物,直接注入海马BDNF的显示抗抑郁效果TrkB水平上升,兵,分子,和磷酸化ERK (40]。神经生长因子是一种生长因子首先描述为神经突生长因子(41]。它参与了神经元的生存和在大鼠神经干细胞的增殖42]。脑源性神经营养因子和神经生长因子也可以代表一个重要的因素在神经发生和突触可塑性的规定43]。在这项研究中,我们观察到神经生长因子的表达水平,BDNF, TrkA, TrkB,分子,p-CREB,和p-CREB /分子在LPS组海马神经元显著减少,而逍遥丸能改善上述指标的表达水平。研究结果表明,逍遥丸的抗抑郁作用可能与激活神经生长因子/ BDNF-TrkA / TrkB-CREB通路。

海马的脑源性神经营养因子信号通路调节突触可塑性,和BDNF注入大鼠海马诱发突触增强(LTP和触发器44]。根据先前的研究证明,脑源性神经营养因子起着至关重要的作用在抗抑郁药的作用通过神经可塑性。突触可塑性是大脑的一个最重要的功能,包括能够收集、评估、和存储信息。这个函数是与抑郁症有关,包括损失的神经营养因子的支持和高度的炎性细胞因子。Synaptophysin是现在被广泛接受为支架蛋白,参与突触功能的规定。在我们目前的研究中,LPS诱导海马神经元突触蛋白表达下降,逍遥丸的治疗显著改善突触蛋白减少。

神经发生有一个被广泛描述为海马体的关键功能。神经发生的减少增加先天焦虑和回避冲突行为(45]。大多数动物研究发现,海马神经发生可以通过直接针对HPA轴和相关的神经肽,从而调节行为则通过促进神经发生(46]。增加成人海马神经发生足以减少焦虑和抑郁的行为(47]。在临床研究中,抑郁症患者也表现出降低水平的神经发生(48]。因此,增加神经发生可能是治疗抑郁症的一种很有潜力的治疗策略。阐明海马神经发生的障碍是否与抑郁,我们量化BrdU-positive细胞数量在海马神经元细胞,观察到感染的有限合伙人显著减少新生细胞的生存和不成熟的神经元与先前的报道是一致的。逍遥丸有保护作用的血清LPS-induced损害新生神经元细胞和不成熟的。

我们之前的研究已经表明,逍遥丸intragastrically管理可以降低细胞因子和炎症介质有关的水平,增强神经营养因子和突触蛋白的表达,并改善神经损伤,发挥抑制作用在类似抑郁模型大鼠行为异常引起的脂多糖(26]。在这项研究中,主要的大鼠海马神经元被用作实验载体,和老鼠的逍遥中血清作为观察的影响有待进一步研究逍遥丸对海马神经元的炎症反应在体外。

在这项研究中,选择逍遥丸的血清浓度分别为4%和8%,和上面的浓度并不影响细胞活动,有一定的药理作用。在这个实验中,两个浓度没有明显剂量反应关系,这可能是相关的复杂性中草药复合组件或组件之间的交互(49),这需要进一步探索结合血清药物化学的研究工作。此外,中药化合物对不同的身体条件适合个性化的治疗方案,不判断和疗效剂量(50,51]。然而,两者的功效包含逍遥丸的血清浓度相似,至少表明逍遥丸可能缓解抑郁症状通过抑制炎症反应或激活神经生长因子/ BDNF-TRKA / TrkB-CREB通路后进入身体。

总之,本研究表明,有限合伙人可以增加神经细胞的促炎细胞因子水平,从而提高语言水平,促进色氨酸代谢犬尿氨酸导致减少5水平。此外,有限合伙人可以诱导神经细胞突触蛋白水平的降低,以及阻止脑源性神经营养因子和神经生长因子通路,然后抑制海马神经发生。上面所有的病理机制是抑郁的发生密切相关52- - - - - -54)(图7)。预处理与逍遥丸显著降低细胞因子和炎症介质有关,神经营养因子和突触蛋白的表达增加,缓解神经损伤。这些发现表明,逍遥丸能发挥神经保护作用通过抑制神经炎症反应,促进受伤神经的恢复,从而减少抑郁症的症状(图7),提供可能的治疗抑郁症的临床应用的基础。

缩写

XYW:	逍遥丸
FLX:	盐酸氟西汀
有限合伙人:	脂多糖
il - 6:	白介素- 6
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子α
我:	吲哚胺2,3-dioxygenase
5:	5 -羟色胺
脑源性神经营养因子:	脑源性神经营养因子
神经生长因子:	神经生长因子
TrkB:	原肌球蛋白受体激酶B
TrkA:	原肌球蛋白受体激酶
分子:	营反应元件结合蛋白
PSD95:	突触后密度蛋白95
SYP:	Synaptophysin
BrdU:	5-Bromo-2-deoxyUridine
NeuN:	脊椎动物特异性神经元核蛋白质。

数据可用性

生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

伦理批准

所有程序都是动物伦理委员会批准,成都中医药大学、中国(2016 - 11),并符合美国国立卫生研究院实验室动物保健和使用指南。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

YF,由XBL,杰,ZLR RL,和新西兰的构思和设计实验;YF,由XBL,杰,ZLR和RL进行实验;YF,由XBL,杰,ZLR RL,和新西兰分析数据和起草相关文本;YF和由写的手稿。所有作者都阅读和批准这个手稿的最终版本。杨方和波宇史了同样的工作。阳坊和波宇史co-first作者。

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金(81503277,81503277),四川(16 zb0116),教育部门和成都中医药大学(ZRQN1643)。

引用

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