电针刺激预处理抒发宽容通过抑制脑缺血/再灌注GluN2B / m-Calpain / p38 MAPK Proapoptotic途径

文摘

背景。作为第一步在脑缺血的病理,glutamate-induced会进展得太快了缺血后干预的目标。然而,缺血性预处理包括电针刺激(EA)可能通过改善会引起脑缺血耐受。客观的。调查基于中医理论的EA预处理是否能引起大脑公差对缺血/再灌注(I / R)损伤,并探索其可能会抑制机制调节proapoptotic通路的NMDA谷氨酸受体的亚型(GluN2B)。方法。实验过程包括连续5天预处理阶段和随后的建模阶段的一天。所有的老鼠都均匀随机分为三组:虚假MCAO / R, MCAO / R, EA + MCAO / R。在预处理过程中,只有老鼠+ MCAO / R组EA GV20干预,SP6, PC6 5天每天一次。模型准备MCAO / R或虚假MCAO / R开始2小时后最后的预处理。模型制备后24小时,加西亚神经行为评分标准被用于评估神经赤字,TTC的测量梗死体积,TUNEL染色法测定海马CA1区神经细胞凋亡,世行和双重免疫荧光染色细胞定位的表达和GluN2B m-calpain和p38 MAPK。结果。这个EA预处理机制可以改善neurofunction,减少脑梗死体积,减少神经元凋亡脑I / R损伤后24小时。和EA预处理可能抑制GluN2B受体的过度激活,GluN2B下游proapoptotic中介m-calpain,磷酸化的转录因子p38 MAPK脑I / R损伤后海马神经元。结论。EA政权可能诱导对I / R损伤部分通过调节proapoptotic GluN2B / m-calpain p38 MAPK通路的谷氨酸。

1。介绍

中风是第二大死因和第三世界残疾的主要原因(1]。中风估计造成每年1200万人死亡,20302]。阻塞引起的缺血性中风,脑血流量的主要集中在大脑中动脉(MCA),约占87.9%的中风和经常导致严重的中枢神经系统损伤甚至死亡(3]。目前,重组组织纤溶酶原激活物(rt-PA)是fda唯一批准的代理缺血性中风的hyperacute阶段(2]。然而,这种疗法的应用受限于狭窄的治疗时间窗(3 - 4.5 h)和严格的适应症(3]。因此,只有2 - 5%的病人急性缺血性中风的攻击已经收到rt-PA治疗(2]。此外,rt-PA-treated患者症状性脑出血的绝对风险在未来10年每年2.3% (4,5]。此外,死亡率没有显著减少静脉内溶栓后3到6个月相比aspirin-control组(17.9%比16.5%),和三分之二的幸存者仍遭受某些残疾6]。

由于中风的现状管理一直远低于预期,中风神经生物学家拥有先进的众多证据支持的假设,通过一定的预处理,哺乳动物的大脑可以适应脑缺血等有害侮辱促进细胞存活的后续损伤(7]。这样的神经保护效应引发的某些“预处理”刺激被称为“脑缺血性宽容。”

候选人的刺激应该是不致命的刺激足以启动反应诱导耐受随后致命的攻击,但是不要太多,造成永久性组织损伤(8]。各种预处理范例,如缺氧、非杀伤性缺血和药理麻醉剂探索提供一个独特的窗口进入大脑的内源性保护机制9]。大部分的预处理方法是一把双刃剑,产生不致命的对身体有害的刺激对缺血性宽容。远程缺血预处理可能是唯一政权已经在临床研究进行研究。然而,这种多中心临床试验在2015年进行建议远程缺血预处理没有改善病人的结果(10]。

尽管针灸已经申请了疾病预防自古以来,第一个证据支持其诱导脑缺血耐受的作用在动物模型提供的熊的团队在2003年(11]。研究证实,电针刺激(EA)在GV20脑缺血可以减少缺血后神经赤字在动物模型的程度(11]。直到现在,脑缺血耐受的机制引起的EA预处理已经从各个方面探索,如抑制炎症,氧化应激,内质网压力,大麻素系统的规定,自噬,保护血脑屏障,antiapoptosis [12- - - - - -14]。然而,优势的前提应促使其快速反应致命的伤害。Glutamate-induced会被认定为第一个步骤在脑缺血的病理15]。在病理条件下,如脑缺血、谷氨酸将overreleased突触间隙,然后激活NR2B-containing NMDA受体(GluN2B),其次是在细胞内钙超载。细胞质中的钙超载会激活m-calpain然后诱导STEP61的酶反应,进而抑制脱磷酸作用p38 MAPKs并最终导致细胞凋亡的信号转导(16,17]。这种过程的发生和进展太快是缺血后干预的目标(18]。然而,发现缺血性预处理改善会通过抑制谷氨酸释放(19,20.]。

因此,本研究将专注于EA预处理是否能减少会引起下游通过调节谷氨酸受体在动物模型脑缺血/再灌注(I / R)损伤。

2。材料和方法

2.1。动物

特定的男性Sprague-Dawley无菌老鼠(年龄在6周大,体重 )由北京重要的河流实验动物技术有限公司(中国,北京;许可证没有。SCXK (Jing) 2016 - 0006)。所有老鼠繁殖和安置在SPF动物设施在放射医学研究所,中国医学科学院,北京协和医学院(中国天津;许可证没有。SYXK(金),2019 - 0002年)受控条件下在12小时光/暗周期20 - 25°C的环境温度和湿度在40 - 70%至少3天前预处理。老鼠被允许免费使用一个标准的啮齿动物的饮食和干净的水。伦理委员会批准的所有程序都是天津中医药大学(TCM-LAEC2019018)。

2.2。试验协议

2.2.1。实验我:EA预处理的脑保护作用大脑中动脉缺血/再灌注损伤(MCAO / R)

确定EA预处理的神经保护作用的脑I / R,老鼠均匀随机分为三组:虚假MCAO / R, MCAO / R, EA + MCAO / R(图1(一))。实验过程包括连续5天预处理阶段和随后的建模阶段的一天。在预处理过程中,所有的老鼠都受到手工布,只有老鼠在EA + MCAO / R组接收EA干预。MCAO / R或虚假MCAO / R过程开始后2小时的预处理。所有大鼠MCAO / R, MCA血流是监控在建模过程中说明脑I / R的有效性。在24小时postsham-MCAO / R或MCAO / R,一个独立的人事失明组分配评估神经赤字使用加西亚的所有动物神经行为评分标准(21]。之后,所有的老鼠都牺牲在麻醉和收集脑组织梗死体积的测量在海马CA1区神经细胞凋亡或用TTC和TUNEL染色。

2.2.2。实验二:EA预处理对MCAO / R GluN2B及其下游通路

确定EA预处理的效果对谷氨酸受体GluN2B及其下游通路postcerebral I / R,老鼠均匀随机分为三组:虚假MCAO / R, MCAO / R, EA + MCAO / R。所有预处理过程和随后的建模过程与实验在24小时postsham-MCAO i / R或MCAO / R,所有老鼠都牺牲了麻醉和海马被送往确定GluN2B的表达,m-calpain, p38 MAPK免疫印迹(WB)和细胞定位GluN2B和m-calpain使用双重免疫荧光染色。

2.3。EA预处理

在EA预处理,所有老鼠都受到手工布,使用胶带(图固定在桌子上1 (b))。位置GV20, PC6, SP6老鼠被称为“实验针灸科学”(22]。GV20选择之间的中点的耳朵,刺破落后2毫米的深度。双边PC6选择3毫米以上的腕关节内侧之间的前肢尺骨和半径和垂直穿刺深度1毫米;SP6被选10毫米以上的内踝后肢和垂直扎5毫米的深度。五个穴位的网站使用无菌针灸针的针刺 (Huatuo苏州医疗用品厂,中国)。然后,所有的针都连接到电极。单边PC6和SP6连接到相同的积极的和消极的一端电极,GV20和耳朵的顶端连接到相同的积极的和消极的一端电极形成电流电路使用EA治疗仪(汉斯- 100 a、南京的扛鼎之作医疗技术、中国)。所有穴位刺激参数的2/15 Hz, 1 mA 20分钟/ d连续5天。四肢和头部会轻微震颤在电刺激视为的标志Deqi。

2.4。脑I / R模型制备的监控下使用缝合方法激光多普勒流量计

局灶性脑缺血诱导的瞬态对大脑中动脉闭塞和随后的血液再灌注90分钟后大鼠模型。模型准备之前,将SD大鼠禁食12小时自由但喝水。在麻醉过程中,老鼠被放置在小动物麻醉的麻醉诱导室系统,和3%异氟烷的浓度(异氟烷、RWD生命科学有限公司,中国)将诱导麻醉。老鼠的基底反射消失后,老鼠在黑板上用橡皮筋固定麻醉呼吸面罩连接到系统中,然后,中线切口被切断的脖子充分暴露右侧颈总动脉(CCA),颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)。结扎后右CCA和ECA,从CCA缝合是插入到ICA的深度18到20毫米。经过90分钟的闭塞,再灌注的灯丝被撤回。

区域脑血流量(rCBF)监控使用激光多普勒流量计(DRT-4、沼泽、英国)。分离后的脑血流量的颈动脉( )是作为基线值的血液流动。缺血后血流量( )和再灌注( )也记录评估模型制备的影响(数据吗1 (c)和1 (d))。在每一个时间点,当血流量相对稳定,可以记录和保存价值1分钟没有中断。模型是成功的,在大脑中动脉局部脑血流量下降到30%以下基线缺血后血流量(23]。建模过程在我们的研究中可能产生的代表模型脑I / R后局部脑血流量下降到23.65%的基线值后缺血缝合撤军(图后,回到71.72%1 (e))。

2.5。加西亚得分

的神经行为评分根据执行方法加西亚et al。21),其中包括六个方面:自发的活动(在笼子里5分钟,0 - 3的分数),对称的运动(四肢,0 - 3的分数),对称的前肢(漫步而持有的尾巴,0 - 3分),攀岩墙的钢丝笼(1 - 3分),反应触摸鼻子的两侧(1 - 3分),和应对鼻毛联系(1 - 3分)。加西亚是18,总额较低的分数更多神经功能受损。

2.6。TTC染色

动物麻醉和牺牲来提取脑组织。与冰盐水冲洗后,大脑组织很快就被冻结在-20°C冷藏20分钟变硬切削的脑组织。部分沿冠状平面的厚度是2毫米,和为每个大脑5 - 6片被削减。大脑切片放入培养皿中包裹锡纸和含有2% TTC (Solarbio,中国),然后染料在37°C孵化器30分钟。在此期间,轻轻地把大脑切片,这样就可以充分接触反应。取出培养皿中吸出TTC解决方案1毫升针形管,注入4%多聚甲醛溶液固定5分钟,然后拿出来,把片为了照片。最后,每个脑片的脑梗死体积比是计算Image-Pro +图像软件。为了减少错误引起的缺血性脑半球水肿,梗塞体积是用来减去身体的同侧的正常组织体积侧正常组织体积,和表达的结果是梗塞体积的百分比:

2.7。TUNEL染色

在二甲苯脱蜡后用乙醇脱水,石蜡部分加上20μg / ml蛋白酶K工作方案(Solarbio,中国)在室温下15分钟。然后,51μl (45 TUNEL检测解决方案μl平衡缓冲:5μl核苷酸混合物:1μl rTdT酶)被添加到每个样本和1 h在黑暗中孵化。在室温下2×SSC孵化15分钟终止反应(美国光大Inc .)。添加包含antifluorescence DAPI淬火孵化五分钟在黑暗中,然后盖盖玻片。200 x荧光显微镜获得的图像的海马CA1(德国徕卡)。凋亡阳性细胞在不同的视觉领域的百分比计算,和均值进行统计分析。代表TUNEL染色的结果,我们计算了细胞凋亡率使用以下公式:

2.8。免疫印迹(WB)

总蛋白质是细胞溶解与组织细胞溶解产物。溶菌产物缓冲准备如下:1毫升里帕缓冲区包含10μl蛋白酶抑制剂(PMSF)和10μl蛋白磷酸酶抑制剂(Solarbio,北京)。海马组织的影响方面是孵化的缓冲区在冰上30分钟和离心机12000克10分钟。然后,BCA试剂盒(Solarbio,北京)被用来衡量上层清液的蛋白质浓度。之后,蛋白质样本分8% (GluN2B和m-calpain)或15% (p38 MAPK和p-p38 MAPK), sds - page电泳电压是80 V到120 V。然后转移到PVDF膜蛋白由200毫安电流,动作时间是70分钟(p38 MAPK和p-p38 MAPK), 90分钟(m-calpain),分别和120分钟(GluN2B)。以下主要使用抗体:兔子anti-GluN2B (Abcam 65783, 1: 1000年,美国);兔子anti-m-calpain(美国Abcam 39165 1: 1000);鼠标anti-p38(美国Abcam 31828 1: 1000);兔子anti-p-p38(美国4511、1:1000 CST);和鼠标反β微管蛋白(TransGen HC101-01, 1: 5000年,中国)。二次HRP-Conjugated山羊Anti-Rabbit或山羊Anti-Mouse抗体(TransGen 1: 5000年,中国)使用。乐队的光密度是由凝胶成像系统(德国耶拿)与化学发光试剂(美国微孔)作为开发人员的解决方案。化学发光的强度是衡量使用Visionworks 8.0夺得。

2.9。双重免疫荧光染色

石蜡切片脱蜡、水化,抗原修复(EDTA, Solarbio C1034,中国),密封和5%山羊血清(中国SL038 Solarbio)在室温下30分钟。以下主要使用抗体:兔子anti-GluN2B (Abcam 65783, 1: 100年,美国);兔子anti-m-calpain(美国Abcam 39165 1: 100);和鼠标anti-NeuN (Abcam 104224, 1: 100年,美国)。二次抗体使用PE-labeled山羊Anti-Rabbit免疫球蛋白(TransGen 1: 200年,中国)和AF488-labeled山羊Anti-Mouse免疫球蛋白(TransGen 1: 200年,中国)。细胞核与DAPI标记孵化后远离光为2分钟。最后,使用荧光显微镜捕获的图像部分(德国徕卡)。

2.10。统计分析

SPSS21.0用于数据处理和统计分析。测量数据被表示为 。测量数据在不同时间点比较使用单向重复测量方差分析。没有时间序列的测量数据比较使用单向方差分析或克鲁斯卡尔-沃利斯根据数据分布测试。0.05的值被认为是显示统计学意义。

3所示。结果

3.1。EA预处理诱导神经保护与脑I / R

这个EA预处理政权提出基于中医理论从未探索诱导脑缺血耐受。为了评估这一新的EA预处理的神经保护效应议定书脑I / R,神经行为,梗塞体积,和海马CA1区细胞凋亡测定使用加西亚得分,TTC染色,分别和TUNEL荧光染色。结果证实的有益作用这5天EA预处理脑I / R损伤。与虚假的组相比,大鼠MCAO / R模型提出了受损神经功能障碍( , ;图2(一个))和增加梗死体积( , ;数据2 (b)和2 (c)),和积极的TUNEL细胞荧光建议在海马CA1区细胞凋亡也加剧了大鼠MCAO / R ( , ;数据2 (d)和2 (e))。与此同时,预处理EA可以提高神经赤字( , ;图2(一个)),减少梗塞体积( , ;数据2 (b)和2 (c)),减少TUNEL-positive凋亡细胞在海马CA1区( , ;数据2 (d)和2 (e))。

3.2。EA预处理下调在海马CA1区神经元表达GluN2B Postcerebral I / R损伤

为了测试是否谷氨酸受体proapoptotic GluN2B可能调解EA预处理的脑缺血耐受,整体表达GluN2B海马的影响方面使用白平衡检测,和GluN2B的表达在CA1区神经元进一步观察使用GluN2B和NeuN colabeling免疫荧光染色。

在海马体的整体表达GluN2B MCAO大鼠的/ R模型组显著增加( , ;数据3(一个)和3 (b))虚假的老鼠相比,EA预处理可以扭转这种反应( , ;数据3(一个)和3 (b))。此外,当标签GluN2B和NeuN合并,colabeled细胞的数量在EA + MCAO / R组明显低于在MCAO / R组(图3 (c))。这表明EA预处理可能抑制GluN2B受体的过度激活在海马CA1区神经元postcerebral I / R损伤。

3.3。EA预处理的神经表达下调m-Calpain在海马CA1区Postcerebral I / R损伤

为了测试是否m-calpain也可能造成的缺血性耐受EA预处理,整体表达m-calpain海马的影响方面使用白平衡检测,和m-calpain的表达在CA1区神经元进一步观察使用m-calpain和NeuN双重免疫荧光染色。

发现整体表达m-calpain MCAO / R组大鼠的海马与虚假的老鼠相比显著增加( , ;数据4(一)和4 (b)),和整体的表达m-calpain显著降低EA + MCAO / R组的价格相比MCAO / R组( , ;数据4(一)和4 (b))。m-Calpain和NeuN colabeled图像显示相同的组间变化模式(图4 (c))。这表明,EA预处理也可能抑制GluN2B下游proapoptotic中介m-calpain在老鼠的海马神经元postcerebral I / R损伤。

3.4。EA预处理的磷酸化表达下调p38 MAPK在海马区域Postcerebral I / R损伤

增殖蛋白激酶(MAPKs)下游calpain在神经元的目标。缺血性损伤后,激活m-calpain将激活p38 MAPK启动细胞凋亡信号通路(17]。它也是一个关键问题,p38 MAPK激活是否会导致缺血性耐受EA预处理。因此,磷酸p38比总p38还计算定量测试后使用白平衡。

总p38的表达蛋白(t-p38)稳定在所有组(数字5(一个)和5 (b)),但磷酸化水平p38 (p-p38)和p-p38 / t-p38比率每组明显不同。表达式和比例的p-p38 MCAO大鼠的海马组织/ R组明显高于在虚假的集团( , , , ;数据5(一个),5 (c),5 (d)),表达和比例的p-p38 EA + MCAO / R组明显低于在MCAO / R组( , , , ;数据5(一个),5 (c),5 (d))。这表明,EA预处理可以减轻海马细胞凋亡引起的兴奋性神经毒性postcerebral I / R通过抑制p38 MAPK的磷酸化激活。

4所示。讨论

适当的预处理可以预防脑缺血通过激活内源性信号通路8,24]。不仅适用在高的人患中风的风险或中风复发也预期脑缺血患者,如入侵大脑手术。期待这样的预处理在于减少缺血损伤的严重程度,延长治疗窗口等postattack干预rt-PA,和促进恢复能力(25]。由于神经功能缺损的严重程度是独立与颅内出血症状的风险增加post-t-PA缺血性耐受也可能影响postthrombolysis出血的发生通过降低神经功能缺损的严重程度26]。EA是传统中医和现代的电刺激。在所有政权的预处理,EA应该重视的可行性、实用性和安全在临床实践中。此外,针灸已经广泛用于电机、卒中后管理认知,吞咽功能(27- - - - - -29日]。针灸是很可能被招募到卫生系统中风的交付管理。因此,探索EA在诱导脑缺血的作用和机制的重要性。

大多数以前的研究只刺激GV20诱发脑缺血耐受(11,30.,31日]。我们的团队提出了另一个针灸政权,即。,stimulating GV20, SP6, and PC6 at the same time based on theory of traditional Chinese medicine (TCM). Ischemic tolerance could be induced with holistic adaptation through regulating spirit, activating collaterals, harmonizing气和血,养肝,脾,肾。GV20,最常用的穴位,主要调节精神,激活当地络脉缺血性宽容。SP6和PC6可以提高互补的功效GV20履行全面适应的目标。因此,合并后的EA协议可能更稳定和有效的性能。原来与大鼠MCAO / R相比,5天重复的EA GV20干预,SP6, PC6,可减少术中神经功能障碍,减少梗塞体积,减少海马CA1区细胞凋亡。因此,这部分实验可以提供一个有效的EA处方基于中医理论的进一步探索和临床疗效验证机制。为方便相似的研究由其他研究人员感兴趣的脑缺血性宽容,我们列出所有细节的EA预处理方法,包括穴位位置,电刺激的迹象Qeqi。

缺血性损伤时攻击,快速释放谷氨酸从突触前神经元诱导会最终导致神经元死亡(32),而神经递质谷氨酸等进行验证针灸疗效的介质在神经系统疾病(33)和EA的催化剂预处理在刺激内源性脑保护。先前的研究表明,EA预处理可以降低谷氨酸浓度在纹状体34和海马35分别的老鼠,在动物的脑I / R损伤模式和血管性痴呆。减少细胞外谷氨酸的EA预处理可能通过再吸收过度的谷氨酸转运体2型(36]。神经毒性主要取决于突触后钙超载。NMDA谷氨酸受体的亚型,近年来引起了人们广泛的关注,由于其高渗透性Ca^{2 +}相比之下,电压门控通道当诱导钙超载1,37]。证据确凿的实验证据从体外和体内模型中风的强烈支持,overactivation NMDA受体是主要的步骤导致神经元损伤后中风的侮辱(38,39]。作为显示在图6,NR2A NR2B-containing NMDA受体亚型(GluN2B和GluN2A)有对立的角色在影响突触可塑性的方向调节细胞死亡和细胞生存体内大鼠缺血性中风模型(39]。即,与神经保护GluN2A的作用,激活突触或extrasynaptic GluN2B受体导致会,增加神经细胞凋亡。抑制NMDA受体通过颅内40)或静脉注射41)注入缺血前还可以减少梗塞体积,防止脑缺血后神经元损伤。此外,阻塞GluN2B-mediated细胞死亡是有效地减少梗塞体积只有当受体拮抗剂是中风发病前(39]。因此,GluN2B可能引起脑缺血耐受的关键。EA发现改善认知障碍大鼠通过抑制GluN2B表达式(42]。所以,我们测试的假设EA预处理可能引起脑耐受缺血通过调节水平的GluN2B使用世行和双重免疫荧光染色。与之前的研究[和合42),我们的研究结果表明,重复缺血前EA可以抑制GluN2B表达式在海马CA1区。因此,谷氨酸受体proapoptotic GluN2B可能有助于减少帖子/ R通过降低会引起神经损伤。

作为显示在图6,GluN2B受体诱导细胞凋亡是由酶消化m-calpain和随后的磷酸化反应的转录因子43]。Calpain激活的细胞内calcium-dependent事件会引起的最大贡献44]。当细胞内钙超载引发的^{2 +},Ca^{2 +}端依赖蛋白酶m-calpain可引起细胞骨架和结构蛋白质的降解,并最终启动途径导致神经元死亡(45]。许多先前的研究已经表明,局部脑缺血可以激活m-calpain在海马体中,皮层和纹状体通过上调蛋白表达在脑缺血后1小时46),然后触发calpain-mediated步骤(striatal-enriched蛋白酪氨酸磷酸酶)裂解和诱导神经毒性47]。因此,作为下游的关键中介GluN2B, m-calpain激活是最关键的细胞内calcium-dependent事件导致神经毒性(48]。目前,监管效果的针灸m-calpain从未被报告过。我们的研究表明,海马的m-calpain激活在脑I / R损伤后24小时,和EA预处理可以减少m-calpain在海马CA1区神经元的表达。这表明EA预处理可能会阻止最重要的胞内钙激活通路会引起I / R损伤。

NMDA受体介导死亡信号transcription-dependent [43]。的关键转录因子GluN2B-mediated proapoptotic通路p38 MAPK [43]。大量的研究已经表明,p38 MAPK信号转导通路密切相关脑I / R损伤和缺血耐受(49- - - - - -51]。磷酸化水平p38 MAPK在脑缺血(24小时后达到了顶峰52]。先前的研究发现,EA可以减少的相对密度磷酸化p38 MAPK在脑缺血的动物模型(51]。我们的研究结果显示,没有显著差异总p38的表达水平在每组在脑I / R后24小时,但有一个显著的差异比例的磷酸化p38 p38每组中。增加比模型组表明,p38 MAPK蛋白质起到了破坏作用通过磷酸化激活脑缺血后,与先前的研究一致。我们的研究还表明,EA预处理可以抑制p38 MAPK磷酸化在大鼠海马脑I / R损伤。

一些限制也限制的解释我们的研究。首先,我们只专注于GluN2B-mediated proapoptotic会引起的途径。然而,GluN2A-mediated prosurvival途径也可能会引起的规定。先前的研究表明,EA预处理也可以移植的表达GluN2A [42]。因此,协同作用的GluN2B proapoptotic和GluN2A prosurvival通路会可能会在将来的研究中进一步阐明。其次,神经毒性的过程postcerebral缺血应高度时效性。因此,应该进行进一步的研究来说明EA的时变特性预处理对缺血后会从细胞外谷氨酸的角度。

5。结论

这项研究表明,我们的EA预处理机制可以有效提高neurofunction,减少脑梗死的体积和水平在海马CA1区神经元凋亡脑I / R损伤的动物模型,及其机制可能与抑制GluN2B / m-calpain p38 MAPK proapoptotic途径。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

始终如一,Guan-ran王,文宁被视为co-first作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

始终如一,Guan-ran王、文话宁和丽丽有完全访问所有的数据的研究,负责数据的完整性和数据分析的准确性。丽丽设计研究和修订后的手稿。始终如一,Guan-ran王,文宁进行了实验和起草了手稿。剑刘、杨沙和燕沈献出了自己的宝贵意见关于数据分析和解释。阳王、赵Meng-xiong为实验提供了技术支持。所有作者同意的最终版本。始终如一,Guan-ran王,文Ning同样助长了手稿。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(81804189)、天津市自然科学基金(18 jczdjc99200),发展长江学者和创新研究团队项目计划(IRT1167)和天津市政委员会的计划卫生和计划生育研究中医药和中西医结合(2017130)。

引用

1. g . j .纸巾,“中风”,《柳叶刀》,卷389,不。10069年,第654 - 641页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. b . m . Demaerschalk d . o . Kleindorfer o . m . Adeoye et al .,“科学原理的纳入和排除标准静脉溶栓在急性缺血性中风:声明医疗专业人员从美国心脏协会/美国中风协会”中风卷,47号2、581 - 641年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. w . j .权力,a . a . Rabinstein t Ackerson et al .,“2018年指南急性缺血性中风患者的早期管理:指导医疗专业人员从美国心脏协会/美国中风协会”中风卷,49号3,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. r·h . Kim其子a.s.。萨尔曼,c·e·麦克洛克c . Stapf w . l .年轻,火星Coinvestigators,“未经治疗的脑动静脉畸形:患者的立场分析出血的预测因素,”神经学,卷83,不。7,590 - 597年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. c·p·Derdeyn g . j . Zipfel f·c·阿尔伯克基et al .,“脑动静脉畸形:管理科学声明医疗专业人员从美国心脏协会/美国中风协会”中风,48卷,不。8 pp. e200 - 200 e224 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. j•艾伯森,k·r·李,p .赖登et al .,“治疗延迟的影响,年龄,和中风严重性的影响静脉溶栓与溶栓对于急性缺血性中风:个别病人随机试验数据的统计分析,“《柳叶刀》,卷384,不。9958年,第1935 - 1929页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. j . m . Gidday“脑预处理和缺血性宽容,”自然评论。神经科学,7卷,不。6,437 - 448年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. n Thushara Vijayakumar, a .从b·沙玛,a·马吉德和g·k . Rajanikant“脑缺血性预处理:路上…到目前为止,“分子神经生物学,53卷,不。4、2579 - 2593年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 美国诉Narayanan、k·r·戴夫和m . a . Perez-Pinzon“缺血性预处理和临床场景,”目前在神经病学的意见,26卷,不。1、1 - 7,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. p . Meybohm拜因,o . Brosteanu et al .,“多中心试验远程缺血预处理对心脏手术,”《新英格兰医学杂志》上,卷373,不。15日,第1407 - 1397页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. l . l .熊z Lu侯等人et al .,“预处理与重复电针刺激减弱瞬态焦脑缺血性损伤大鼠,”中国医学杂志,卷116,不。1,第111 - 108页,2003。视图:谷歌学术搜索
12. 高z . Liu x, y . et al .,”参与GluR2老年病电针刺激预处理通过大麻素CB1受体在神经保护的老鼠,”科学报告,5卷,不。1,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. l·查韦斯,s。黄,麦克唐纳,J.-G。林,研究。李,中州。陈”,针灸治疗缺血性中风康复的机制:一个文献综述的基本研究,“国际分子科学杂志》上,18卷,不。11,2270年,页2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 常问:y、y . w .林和c·l·谢“针灸和本次在缺血性中风,”神经再生研究,13卷,不。4、573 - 583年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. o . Revah e . Lasser-Katz中情局Fleidervish,古特尼克,和m . j .,“最早的神经细胞对缺氧的反应glutamate-dependent皮层电路,”疾病的神经生物学卷,95年,第167 - 158页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. k·l·辛普金斯r·p·古德曼爵士y董et al .,“选择性激活诱导解理calpain NR2B亚基的,”《神经科学杂志》上:神经科学学会的官方杂志,23卷,不。36岁,11322 - 11331年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 崔j.y.张成泽,y . w . h . n . Kim et al .,“神经保护作用的小说单一化合物1-methoxyoctadecan-1-ol隔绝钩藤sinensis在初级皮层神经元和photothrombotic缺血模型,”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。1,p . e85322 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. d . Purves g·j·奥古斯汀,d·菲茨帕特里克et al。神经科学2004年,Sinauer Associates。
19. k·r·戴夫,c . Lange-Asschenfeldt a . p .艾et al .,“缺血性预处理改善会通过改变谷氨酸/γ-氨基丁酸释放和生物合成,“神经科学研究杂志,卷82,不。5,665 - 673年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a·g·Douen k .秋山m·j·霍根et al .,“预处理与大脑皮层扩散性抑制减少intraischemic谷氨酸水平和下调兴奋性氨基酸转运蛋白EAAT1和EAAT2鼠大脑皮层等离子体膜,“神经化学杂志,卷75,不。2、812 - 818年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j·h·加西亚,瓦格纳,胡锦涛和x j . k . f . Liu神经元坏死的“神经赤字和程度在大鼠大脑中动脉闭塞引起的。统计验证。”中风,26卷,不。4、627 - 635年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 郭y”,针灸实验科学,“钟郭钟易姚明楚禁止她,2016年。视图:谷歌学术搜索
23. 杨y”,研究行为和神经与血管的再生机制,针灸与脑缺血再灌注损伤大鼠,”北京协和医学院,2016年。视图:谷歌学术搜索
24. s·l·史蒂文斯、k . b . Vartanian和m . p . Stenzel-Poore“重组预处理对中风,”中风,45卷,不。8,2527 - 2531年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. f·r·Bahjat r . Gesuete, m . p . Stenzel-Poore”翻译预处理步骤从基础研究到诊所,“平移中风研究,4卷,不。1,第103 - 89页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 研究所t-PA中风研究小组”,脑出血后静脉t-PA治疗缺血性中风,”中风,28卷,不。11日,第2118 - 2109页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. a, h . m .吴J.-L。唐、l .徐m·杨和g . j . Liu“针灸对中风康复,”Cochrane系统评价的数据库,8卷,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 美国Sharififar、j。j•舒斯特和m . d .主教”标准卒中后康复期间增加电刺激改善运动功能。系统回顾和荟萃分析物理和康复医学的史册,卷61,不。5,339 - 344年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 瞿k . l . x Li邓,y,“针灸治疗中风后吞咽困难:一个更新的随机对照试验的荟萃分析,“中国结合医学杂志》上,24卷,不。9日,第695 - 686页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 李x z . f . Wang高,et al .,“NDRG2参与抗凋亡引起的局灶性脑缺血大鼠电针刺激预处理后,“神经学研究,35卷,不。4、406 - 414年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. z .问:吴、崔郑胜耀l .朱和z .问:邹”期间mTOR-mediated自噬的机制研究电针刺激预处理对脑缺血性损伤,”基于证据的补充和替代疗法:eCAM卷,2016年,页1 - 8,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. s e . Khoshnam w . Winlow m . Farzaneh y法,和h·f·穆贾达姆,“缺血性中风后,致病机制”意大利神经系统神经科学:官方杂志社会和临床神经生理学的意大利社会,38卷,不。7,1167 - 1186年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. l .试训,m . Albanesi m . Guaragna s . b . Paparo l .芦荟,”神经营养因子和针灸。”自主神经系统:基础与临床,卷157,不。1 - 2,上行线,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. z z . y . j . m .郭”,电针刺激预处理对谷氨酸的影响γ氨基丁酸在大鼠大脑中动脉闭塞后,““勇老挝年易雪,27卷,2013年。视图:谷歌学术搜索
35. p . y .孟g . j .太阳,s . h . Liu和h . m .严,“电针刺激预处理对glutamate-NMDAR信号通路的影响在血管性痴呆大鼠海马神经元,”甄Ci燕九,33卷,不。2、103 - 106年,2008页。视图:谷歌学术搜索
36. 李朱x, j .阴l . et al .,“电针刺激preconditioning-induced神经保护可能是由谷氨酸转运体2型,”国际神经化学,卷63,不。4、302 - 308年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. m . Tymianski m·p·查尔顿p l . Carlen和c h . Tator”源特异性的早期钙培养胚胎脊髓神经元的神经毒性,”《神经科学杂志》上:神经科学学会的官方杂志,13卷,不。5,2085 - 2104年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. 李y, w . k . Furukawa先生傅,w·维特克是d . j . Kwiatkowski和m·p·马特森“actin-severing蛋白gelsolin调节钙通道和NMDA受体活动和脆弱性在海马神经元,会引起“《神经科学杂志》上:神经科学学会的官方杂志,17卷,不。21日,第8186 - 8178页,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. m . t . p . y . Liu Wong艾亚茨et al .,“NMDA受体亚基有微分的角色在调停excitotoxic死亡神经元在体外和体内,”《神经科学杂志》上:神经科学学会的官方杂志,27卷,不。11日,第2857 - 2846页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. r·西蒙·j·斯旺、t·格里菲斯和b . Meldrum“封锁的n -甲基- d受体可能预防缺血性损害大脑,”科学,卷226,不。4676年,第852 - 850页,1984年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. Margaill,有土豆的,j . Callebert m . Allix r . g . Boulu和m . Plotkine”短治疗窗口mk - 801年短暂血压正常的大鼠局灶性脑缺血,”脑血流量和新陈代谢杂志》上,16卷,不。1,第113 - 107页,1996。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. m·h·沈c . b . Zhang j . h . Zhang和p·f·李,“电针刺激减弱脑缺血和再灌注损伤大鼠大脑中动脉阻塞的通过调制的细胞凋亡、炎症,氧化应激,会引起,“基于证据的补充和替代疗法:eCAM9438650条,卷。2016年,页1 - 15,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. t·w·赖,s . Zhang和y . t . Wang”会和中风:确定新靶点神经保护,”神经生物学的进展卷,115年,第188 - 157页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. k . g . y . Wu戴瑟罗斯,r·w·钱”依赖性活动分子磷酸化:收敛的一种快速、敏感的钙调蛋白激酶途径和缓慢,那么敏感增殖蛋白激酶通路,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷98,不。5,2808 - 2813年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. r·t·Bartus n·j·海沃德,p . j .艾略特et al .,“Calpain抑制剂AK295保护神经元免受局部脑缺血。影响postocclusion动脉内的政府。”中风,25卷,不。11日,第2270 - 2265页,1994年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. r·w·Neumar p.h.孟a . m .米尔斯et al .,“Calpain瞬态前脑缺血后大鼠大脑的活动,“实验神经学,卷170,不。1,27-35,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. c . m .高兴,m . d . Sepers徐j . et al .,“Calpain STriatal-enriched蛋白酪氨酸磷酸酶(步骤)激活导致extrasynaptic NMDA受体定位在亨廷顿氏舞蹈症老鼠模型中,“人类分子遗传学,21卷,不。17日,第3752 - 3739页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. m . Curcio i l·萨拉查m . Mele l . m . t . Canzoniero和c·b·杜阿尔特“钙蛋白酶和缺血性神经元损伤的大脑:瑞士刀在突触损伤,”神经生物学的进展卷。143年,1-35,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. h·c·赖、问:y . Chang和c·l·谢”信号转导途径的针灸治疗一些神经系统疾病,”基于证据的补充和替代疗法:eCAM2909632条,卷。2019年,1-37,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. l . f . t . Wang Wang Yu, z,“川陈皮素减轻脑ischemic-reperfusion通过MAPK信号通路损伤,”美国转化研究杂志》上,11卷,不。9日,第5977 - 5967页,2019年。视图:谷歌学术搜索
51. y, s·d·杨,m . m . Wang f .董y . s .冯和f·张,“电针刺激减轻神经细胞凋亡在大鼠缺血性中风后通过Midkine和ERK /物/ p38信号通路,”分子神经科学杂志》上:MN,卷66,不。1,26-36,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. k·m·沃尔顿r . DiRocco b . a . Bartlett et al .,”p38的激活^MAPK在缺血后小胶质细胞,”神经化学杂志,卷70,不。4、1764 - 1767年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2020张记等。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。