荧光的变化跟踪NaV1.6蛋白表达在T + Itpr3tf BTBR / J孤独症小鼠模型

文摘

轴突初始段(AIS),在神经元动作电位的起始,是神经元兴奋性的一个关键决定因素。越来越多的证据表明,适当的招聘AIS macrocomplex对同步发射至关重要。然而,AIS结构的破坏与多种疾病的病因,包括自闭症谱系障碍(ASD),一个条件特点是缺乏社会沟通、刻板行为,和非常有限的利益。到目前为止,一个完整的理解的分子基础AIS的组件在ASD仍然难以捉摸。在这个研究中,我们调查了AIS结构BTBR T + Itpr3tf / J小鼠模型(BTBR),一个有效的模型展示行为,电气、自闭症和分子特性,相比这C57BL / 6 J野生型控制鼠标。利用免疫印迹的研究和高分辨率的共焦显微镜在前额叶额叶皮质(PFC),我们的数据表明干扰电压门控钠通道的不同亚型的表达在AIS (NaV),而其他组件的AIS ankyrin-G和纤维母细胞生长因子等14 (FGF14)和contactin-associated蛋白1 (Caspr)在BTBR同那些生活在野生型小鼠的控制。免疫印迹试验表明,BTBR老鼠表现出显著增加在不同钠通道亚型的PFC与野生型小鼠相比。我们的研究结果提供了潜在的证据之前从未描述机制,可能会在出自闭症的发病机制中发挥作用在BTBR小鼠表型。

1。介绍

自闭症谱系障碍(ASD)是指一个异构和朦胧地定义神经发育和神经行为障碍涉及赤字在社会互动,沟通障碍,重复刻板的行为模式和利益。然而,ASD的确切原因尚不清楚。遗传、表观遗传或环境因素被认为是自闭症的发病机制,目前正在调查1]。ASD的动物模型的使用,因此,提供重要的知识行为表型,潜在的病理生理学,分子动机,和治疗进展1,2]。

表型变异的障碍已确定在几个小鼠模型不同的突变在人类ASD平行,包括药物诱导的小鼠,小鼠丙戊段,Shank3B突变老鼠,BTBR T + Itpr3tf / J (BTBR)。后发现之间的关联产前暴露于丙戊酸(VPA)和自闭症的风险升高,VPA诱发模型已经使用功能型作为ASD模型(3]。相反,SHANK3突变在ASD患者非常普遍和Shank3B小鼠模型已经被广泛地研究过了。在分子方面,这些老鼠表现出赤字在神经传递,突触可塑性和神经连接。行为,他们显示出自闭症行为的核心功能,如强迫刻板重复行为和社交能力降低4]。除了药物诱导VPA模型和Shank3B遗传模型,BTBR近亲繁殖的鼠标应变是ASD的另一个有效的模型被用来代表特发性自闭症。BTBR模型显示各种遗传、解剖和分子违规行为(5),包括改变神经营养脑源性因子(BDNF),胼胝体缺失的情况下,和一个不平衡的兴奋或抑制性(E / I)比(6]。此外,BTBR展览三个独特的ASD和有力的行为特征:缺乏社会沟通和年轻的成年人,一个罕见的超声在新生儿话语,经常性固定修饰行为(7- - - - - -10]。神经影像学研究也表明,改变神经元的激活和认知能力明显BTBR小鼠模型可能表明减少脑血流量和脑氧代谢11]。这些因素都表明BTBR是一个有效的临床前模型,该模型可用于研究自闭症谱系障碍的病理。

以前,有人建议,发展神经网络由于产后事件的管制,包括细胞分化、突触形成,和可塑性,促进自闭症行为在人类12- - - - - -15]。然而,我们的理解背后的分子神经生物学机制ASD是远未完成16]。

轴突初始段(AIS)是一个非常小的亚细胞结构,产生瞬变长度从轴突末梢神经后立即soma (17]。富含蛋白质支架和电压门控钠通道(NaV)。它已经表明,不同亚型的NaV 1型α子单元(NaV1)集中在AIS (18,19]。这提供了一个增加钠离子的流量(Na⁺)和降低动作电位阈值(20.]。在AIS NaV渠道分布不同;例如,NaV1.6是远端局部AIS的一部分,而NaV1.2位于AIS的近端部分(21]。NaV1的结构和/或功能改变α子AIS也可以导致严重的中枢神经系统障碍。例如,人们已经发现,错义改变的基因编码NaV1.1 (SCN1A)可能导致严重的严重癫痫婴儿由于缺陷在AIS的水平22]。同样,突变NaV1.2 (SCN2A)和导航β1 (SCN1B)会导致广义癫痫(23,24]。表达水平上升NaV1.6和ankyrin-G也被报道在AIS癫痫动物模型(25]。任何变更在AIS内在膜蛋白也可能加剧:Angelman综合征的病理生理过程在一个小鼠模型(26]。值得注意的是,钠通道亚型的编码基因发生突变和障碍是自闭症的风险因素27,28]。

Ankyrin-G蛋白有重要的生理作用调节离子通道结构和功能的不同类型的细胞(29日]。细胞骨架脚手架蛋白ankyrin-G大师组织者的膜蛋白在许多类型的细胞(30.]。Ankyrin-G (ANK3)有一个关键的角色在神经元离子通道的目标人群(31日]。在神经元中,ankyrin-G仅限于AIS (32]。体外研究表明,AIS离子通道蛋白质和不固定ankyrin-G从细胞膜的内吞作用[33]。因此,集群的AIS膜蛋白取决于ankyrin-G [34]。的确,缺乏ankyrin-G表达式在老鼠破坏许多辅助蛋白质聚集在AIS,导航等渠道(35,36]。因此,所有的AIS蛋白质直接或间接固定到支架的细胞骨架网络,因此,ankyrin-G组织这些蛋白质的亚细胞极性分子(37]。基因组研究也发现了突变基因编码ankyrin-G之间的联系,ANK3基因,ASD (38- - - - - -41]。这意味着在AIS组件是一个分子签名自闭症谱系障碍的病理生理学。

充分的证据表明,纤维母细胞生长因子分泌和FGF受体酪氨酸- (FGFRs)在适当的大脑发育至关重要,因此,它是涉及各种脑部疾病的病理学。分泌FGF2被认为是适应负荷的指标。它扮演几个角色在细胞增殖、分化、生长、生存,和血管生成(42,43]。在最近的一项研究中,FGF2的水平是减少在ASD患者的血清44]。然而,其他nonsecreted是否相同的基因家族的成员在这一过程中发挥作用并不是完全理解。分泌FGF相比,FGF14属于胞内FGF组(iFGF) iFGF11亚科。这组FGF成员通过FGFRs[不采取行动45,46]。然而,iFGFs交互控制神经元兴奋性和突触传递细胞的carboxy-terminal尾巴NaV频道,轴突贩卖蛋白质(MAP激酶支架蛋白,IB2 (MAPK8IP2)),和微管47]。FGF14在一系列的神经组织和呈现梯度形式的AIS培养海马神经元(46]。人们已经发现与NaV1.1, NaV1.2, NaV1.6渠道直接通过导航c终端(46,48,49]。此外,选择删除FGF14赤字都会涉及到神经元兴奋性(50),不成熟的齿状回表型(51),和认知功能52]。

虽然行为表型BTBR作为自闭症谱系障碍动物模型都被记录在案,在分子水平上,有我们在知识方面的6,7,53- - - - - -55),特别是对于AIS结构。在这项研究中,我们研究了不同组件的AIS在前额叶皮层脑区BTBR小鼠模型利用高分辨率共焦成像,图像分析和免疫印迹的研究。我们的研究结果提供清晰洞察neuroaxonal结构和改善我们的理解自闭症谱系障碍的机制。

2。材料和方法

2.1。动物

BTBR和C57BL / 6 j(野生型)(从杰克逊实验室,巴尔港,我,美国)雄性老鼠通过回交的天生的背景保持同窝出生仔畜交配。成年雄性老鼠在2 - 4个月大的时候被用于这项研究。他们保持在 在12 h光/暗周期,安置在卫生环境,再辅以上贴标准啮齿动物食物的饮食(粮食筒仓和面粉厂组织,利雅得,沙特阿拉伯)。老鼠被安置 - - - - - -6每笼和提供水随意。我们利用每组4 - 6。所有试验程序进行按照沙特国王大学制度研究伦理委员会的指导方针(REC)。

2.2。准备的大脑部分

准备和染色的老鼠大脑部分以前描述的(56]。总之,老鼠深深麻醉与10:1氯胺酮的混合物50毫克/毫升(Tekam)和甲苯噻嗪20毫克/毫升(斯通)(剂量0.1毫升/ 10通用i.p。)稀释1 x磷酸盐(PBS, )(1 x PBS),然后灌注短暂intracardially(流量:8 - 10毫升/分钟2 - 5分钟)1 x PBS。其次是10分钟4%的多聚甲醛刚做好的(Sigma-Aldrich)或商用4%甲醛(37%甲醛溶液的稀释,Sigma-Aldrich 1 x PBS);所有的解决方案都是调整pH值7.4。以确保完整的组织固定,大脑被仔细和后缀相同的固定剂1 h在4°C和低温贮藏在20 - 30%蔗糖在4°C / PBS切片做准备。大脑被嵌入在10月化合物(Tissue-Tek®, Ted斗篷,Inc .)和分段矢状14到20μ在-20°C使用徕卡m厚片CM3050年代低温恒温器(徕卡微系统)。然后他们被安装在玻片(费舍尔科学)和存储在-80°C在甲苯基和免疫荧光研究为进一步使用。第二组的大脑温柔地解剖分离根据老鼠大脑额叶皮质阿特拉斯(57),样本存储在-80°C蛋白免疫印迹分析。

2.3。免疫荧光

矢状大脑部分洗1 x PBS,孵化与permeabilizing代理(1 x Triton, 0.5 x渐变PBS,或-20°C丙酮),然后洗广泛1 x PBS,孵化5%正常山羊血清门店(Sigma-Aldrich) 1 x TBS含有0.3% Triton x - 100 1 h。其次是一夜之间在4°C孵化主要抗体3%牛血清白蛋白(BSA Sigma-Aldrich)和1 x PBS含有0.1%渐变20。主要的抗体使用鼠标anti-FGF14(1: 300年,NeuroMab目录编号75 - 096),鼠标anti-ankyrin-G(1: 1000年,NeuroMab目录编号75 - 146),豚鼠anti-NeuN(1: 750年,突触系统目录266号004),鼠标anti-NaV1.1(1: 500年,NeuroMab目录编号75 - 023),鼠标anti-NaV1.2(1: 300年,NeuroMab目录编号75 - 024),鼠标anti-NaV1.6(1: 300年,NeuroMab目录编号75 - 026),鼠标anti-Caspr(1: 500年,NeuroMab目录编号75 - 001),和鼠标anti-PanNaV1(1: 300年,NeuroMab目录编号75 - 405)。12小时孵化后,洗了1 x PBS的部分,然后用适当的二次孵化的抗体(1:250年,英杰公司)为1 h在1 x PBS溶液含有3% BSA和0.1%渐变20。与二次抗体孵化后,组织洗五次1 x PBS缓冲溶液。最后,玻片放置在烤箱30 -°C 10 - 15分钟晾干然后盖玻片使用Fisherfinest®溢价盖玻片(费舍尔科学)延长®黄金不变色或延长®不变色与DAPI mountant试剂(生命技术、目录号P36941)。

2.4。共焦显微镜

共焦图像获得使用蔡司lsm - 780共焦显微镜计划高度消色透镜(63 x / 1.46石油)的目标。多声道的收购进行励磁Alexa的488 nm 488行,543 nm Alexa 568/594, 633年Alexa 633海里。 - - - - - -系列堆栈共焦图像拍摄以固定间隔相同的针孔设置所有的三个频道;帧大小 像素。激光强度和增益保持不变的实验小组。

2.5。图像采集和分析

分析了共焦图像使用ImageJ(美国国家卫生研究院,http://imagej.nih.gov/ij)。soma荧光强度分析, - - - - - -成堆的共焦图像sum-projected,对应一个ROI soma是强调使用强度阈值方法,量化和平均荧光强度。荧光强度的量化AIS染色是使用前面描述的方法执行47]。总之,分析了AIS的荧光强度,绘制分段线沿着AIS 6像素宽,从躯体和使用anti-ankyrin-G或FGF14染色标记的AIS位置叠加的图像。

2.6。免疫印迹

西方如前所述执行免疫印迹(58]。这涉及到均质化50毫克的PFC BTBR和野生型小鼠的脑组织( - - - - - -每组)5老鼠0.32蔗糖溶液中蛋白酶和磷酸酶抑制剂的存在。免疫印迹,蛋白质浓度样本脑组织匀浆测定使用NanoDrop™8000分光光度计(热费希尔科学),然后用4 x准备十二烷基硫酸钠(SDS)和三羟甲基氨基甲烷(2-carboxyethyl)磷化氢液(TCEP)(1: 20),变性10分钟在95°C,然后运行在7.5% SDS - page凝胶。蛋白质是electrophoretically从凝胶转移到硝化纤维膜。膜被屏蔽5%脱脂奶粉TBS-T 30分钟和探测具有以下主要的抗体在屏蔽解决方案:anti-PanNaV1(1: 500年,NeuroMab) anti-NaV1.1(1: 500年,NeuroMab) anti-NaV1.2(1: 500年,NeuroMab) anti-NaV1.6(1: 500年,NeuroMab),鼠标anti-ankyrin-G(1: 500年,NeuroMab),鼠标anti-FGF14(1: 500年,NeuroMab)和anti-Caspr(1: 500年,NeuroMab)。其次是辣根治疗peroxidase-conjugated二级抗体和ECL免疫印迹检测试剂。信号检测和测量发光图像分析仪(ChemiDoc™MP, Bio-Rad)。ImageJ是用来测量感兴趣的蛋白质的强度。

2.7。统计分析

这样的数据 (SEM)。观察到的统计显著性差异组使用两个示例学生的决心 - - - - - -测试或相应的非参数检验,Mann-Whitney等级,基于样本的分布的人群。一定程度的 被认为是具有统计学意义。执行统计分析使用InStat GraphPad软件,Inc .和SigmaPlot 12 (Systat软件,圣何塞,CA)。Microsoft Excel的数据列表。

3所示。结果

3.1。电压门控钠通道(NaV1.6 NaV1.2, NaV1.1)免疫反应性BTBR鼠标PFC和表达

然后我们检查在PFC-layer NaV1.6三世BTBR,在免疫荧光研究表明荧光表达的soma BTBR相比显著增加的野生型小鼠(图1(一)——(d), 在BTBR vs。 在野生型, , )。同样,总蛋白的免疫印迹分析匀浆的PFC表明NaV1.6蛋白表达升高,虽然不明显,在BTBR比野生型小鼠(图1(g)和(h), 在BTBR vs。 在野生型, , - - - - - -5)。在轴突的荧光跟踪表达式使用ankyrin-G作为轴突的标记,我们发现一个异常的分布模式通过AIS结构(图1(e)和(f))。尽管很难预测这些分子变化的后果自皮质电路是相当复杂的59),这些发现表明,NaV1.6功能可以改变BTBR老鼠。这使我们调查其他亚型的NaV1α子单元。因此,我们研究了NaV1.1和NaV1.2使用免疫印迹和发现,在BTBR PFC的亚型都升高明显比野生型控制。支持这些发现,PanNaV的表达增加的PFC BTBR比野生型小鼠(图2(c)和(d), 在BTBR vs。 在野生型, ,PanNaV; 在BTBR vs。 在野生型, ,NaV1.2;和 在BTBR vs。 在野生型, ,NaV1.1; - - - - - -每组5个)。这些结果显示中断NaV1.6、NaV1.2 NaV1.1表达式,可以涉及改变发射和ASD的突触连接。

3.2。BTBR鼠标PFC Ankyrin-G表达式

探讨AIS ankyrin-G脚手架蛋白的表达,我们检查了ankyrin-G soma的成熟神经元的PFC BTBR,发现疣状似乎没有改变(图3(一)——(d), 在BTBR vs。 在野生型, , 每组)。验证这一发现,我们检查了PFC总蛋白匀浆表达式,从第三层与免疫荧光研究一致,发现ankyrin-G不变的BTBR小鼠模型比野生型小鼠(图3(g)和(h), 在BTBR vs。 在野生型, , - - - - - -每组5个)。AIS的跟踪结构表明,ankyrin-G表达模式是调节在近端AIS(图的一部分3(e)和(f))。这些发现表明,细胞骨架结构BTBR老鼠可能不受影响。

3.3。纤维母细胞生长因子在BTBR 14 (FGF14)表达式

因为大多数NaV1α亚型中断,我们继续研究和检查FGF14, NaV调控的重要渠道。免疫组织化学染色法检查表明,FGF14表情相当(图中两种类型的老鼠4(a)和(b))。这些结果证实了免疫印迹分析(图4(d)和(e), 在BTBR vs。 在野生型, , - - - - - -每组5个)。AIS的跟踪结构表示FGF14增加表达的远端部分PFC神经元(图4(c))。这些结果表明,AIS NaV1.6表达的增加是伴随着增加FGF14 AIS。

3.4。考试的郎飞氏结BTBR小鼠模型

然后又介绍了一个郎飞氏结至关重要的组件通过分析的表达Caspr BTBR PFC的老鼠。的Caspr PFC匀浆免疫反应性分析显示无意义的Caspr表达式与野生型小鼠相比,BTBR(图5(c)和(d), 在BTBR vs。 在野生型, , - - - - - -每组5个)。这些结果表明,郎飞氏结可能BTBR小鼠模型的影响。

4所示。讨论

虽然研究表明自闭症谱系障碍的特点是兴奋和抑制率,减少考试的AIS分子可能揭示自闭症谱系障碍的可能机制和病因和治疗靶点的改进(60]。AIS-specific蛋白起着关键作用的生理学和神经的功能数量(61年]。

在最近的研究中,我们的目的是确定是否中断BTBR AIS辅助蛋白质是观察到的老鼠,这个特性可能是自闭症发病机制的分子签名。我们的研究结果表明,不同NaV1的表达α亚型是减少,AIS辅助支架蛋白ankyrin-G没有改变。此外,FGF14表达相当BTBR和野生型控制。此外,Caspr的表达水平,一个郎飞氏结的关键分子,并没有改变BTBR与野生型控制相比,表明神经元活动可以在这个模型的影响。

BTBR源自近交品系的黑色和褐色Brachyury (BTBR),携带突变的基因包括Itpr3(肌醇1,4,5-trisphosphate受体3)和T (Brachyury)基因62年]。这种应变表现出的大部分行为障碍在ASD。因此,这些老鼠可以在调查结果作为一个有效的模型的结构蛋白AIS所扮演的角色在自闭症大脑的皮层组织。

在我们的实验装置,进行了免疫荧光研究第三层的前额叶皮层,而西方墨点法分析了整个前额叶皮层的匀浆。这条路了,因为根据我们的实验的经验,大多数AIS是浓缩的,容易发现第三层的前额叶皮层。此外,据报道,在皮层,深三层被压缩轴突的存在特征预测(63年]。

有一个高度的浓缩和亚细胞极性AIS NaV渠道,促进高Na⁺电流密度和低动作电位阈值(20.]。NaV1.6主要NaV1α亚基,这是表示与NaV1.1 / NaV1.2或独自在不同子域的AIS在不同神经元(21,64年,65年]。

Nav1.6在大脑中是一个典型的电压门控钠通道(66年]。AIS是丰富了同种型,这使得它能够调节动作电位的起始67年]。它也集中在Ranvier的节点和其他亚细胞结构,包括躯体和树突(66年]。

NaV1.6中起关键作用的产生持久和复苏细胞电流。因此,改变这种蛋白表达可能会有严重的后果66年]。突变基因编码不同亚型的钠离子通道将在人类导致自闭症,和不同的单核苷酸多态性(snp)被发现与自闭症有关(68年]。在这个研究中,我们发现的表达NaV1.6 soma和AIS增加,表明持久和复兴的电流可以改变。很难改变一些钠通道亚型系统级功能障碍相关的神经线路。对于未来的研究描述抑制性中间神经元的轴突结构和分析使用电生理记录神经元群体的功能特征。

在近端NaV1.2 AIS的积累促进动作电位传播soma和设置动作电位阈值神经元的somatodendritic地区。NaV1.2通道可以控制动作电位反向传播由于其高密度近端AIS。我们的研究结果表明NaV1.2的表达渠道的变更在AIS BTBR皮质神经元的老鼠,表明这可能导致功能改变在ASD (21]。NaV1.2的突变可能导致常见的癫痫(23]。同样,最近的基因组研究表明NaV1.2基因的突变(SCN2A) ASD是一致的发现,可能被视为一种ASD风险因素(27]。小NaV渠道密度的变化可能会改变神经元的兴奋性,并降低AIS屏障的完整性会影响轴突的正态分布和somatodendritic蛋白质在细胞中34]。NaV1.2表达的增加在我们的研究未必表明更多的激励。可能是代偿机制作为蛋白质的增加产量可以归因于不当,缺乏功能,或甚至在维护赤字。重要的是,改变导航功能的渠道在AIS可能引起严重的中枢神经系统功能障碍。最近的一项研究表明,NaV1.2-encoding基因的变异导致功能和增加神经元兴奋性的增加:这些结果不平衡激励/抑制(E / I)比和癫痫发作(27]。

除了改变NaV1.2 NaV1.6,我们的分析表明NaV1.1的增加,这表明抑制电流也改变了69年]。增加NaV1.1以前发表在神经损伤后的背根神经节,表明它可能是一个机制调节神经性疼痛(70年]。NaV1.1 (SCN1A)轨迹被确认为表示对自闭症在全基因组关联研究(71年,72年]。NaV1.1基因的突变被发现患有自闭症家庭的基因组测序(68年]。错义突变基因编码NaV1.1可以导致严重的癫痫在婴儿由于缺陷在AIS的水平22]。还报道说,与一个错义突变杂合的老鼠NaV1.1频道开发多动症,自闭症特征,认知障碍,焦虑、社交互动赤字,和过度刻板行为。这些认知和行为缺陷引起的减少在gaba ergic中间神经元动作电位放电(73年]。

调节的分子机制复合NaV1的配置α亚基在AIS是复杂的。一个改变励磁抑制比是一个统一的假设基础自闭症及相关疾病。强有力的证据表明,兴奋和抑制的比率的增加,导致皮质回路的兴奋过度,是与ASD。这种电路不平衡会导致赤字的学习和认知能力以及社交能力60]。

然后我们开始检查ankyrin-G。细胞骨架适配器蛋白质ankyrin-G NaV1的结合位点α子单元。因此,我们调查是否BTBR老鼠也会表现出改变Ank-G表达式。我们发现ankyrin-G疣状BTBR成熟神经元的小鼠与野生型老鼠。之前就有报道,细胞骨架脚手架蛋白ankyrin-G膜蛋白主要策划者的不同类型的细胞和亚细胞极性(32,74年- - - - - -76年]。在神经元中,ankyrin-G集中在AIS和NaV渠道结合ankyrin-G [32,33]。ankyrin-G基因表达的沉默RNA干扰在干扰老鼠大会AIS (NaV渠道的35,36]。这表明突变BTBR老鼠的存在不影响AIS的初始步骤组装;但是,它们影响后续的本地化和招聘蛋白质,钠离子通道等AIS (31日]。

在这个研究中,我们发现FGF14突出表达了AIS的成熟的皮质神经元。FGF14和NaV疣状中断在BTBR小鼠皮层神经元的AIS,表明监管这些蛋白质之间的相互作用。类似的,最近的一项研究表明,FGF14 NaV1扮演监管角色的定位α子单元的浦肯野神经元AIS, NaV1.6减少被发现的表达在AIS的浦肯野神经元的长度77年]。

郎飞氏结有明显脱髓鞘疾病(链接78年,79年]。它也有一个常见的分子组织AIS,可能是因为郎飞氏结是从AIS (34]。的基因翻译成Caspr丰富郎飞氏结,已列为'轨迹自闭症谱系障碍的易感性,双相情感障碍和精神发育迟滞80年,81年]。

三磷酸肌醇受体的突变是一个关键的组件在BTBR功能失调的表型观察。三磷酸肌醇调节各种生理过程通过促进细胞钙信号(82年]。BTBR三磷酸肌醇受体的突变可能负责赤字贩卖AIS组件,导致分子表型观察在这个研究。符合这个证据,先前的研究已经涉及Wnt / Ryk钙信号在轴突产物的规定,轴突的开发和指导(83年]。

5。结论和未来的发展方向

这些结果为自闭症的病因提供了新的见解和青睐的观念改变建筑蛋白在神经元显著增长的AIS的发展自闭症大脑BTBR老鼠。未来的研究可能需要解决的其他组件是否AIS FGF-13等FGF-12 neurofascin,β四血影蛋白改变在BTBR老鼠。它也将有助于阐明电压门控钠离子通道的功能α子单元在ASD的皮质区域模型和描述他们的电生理特性。这将有助于确定AIS的功能体系结构,建立神经元极性。

数据可用性

和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突或从属关系,可能会影响这个审核的客观性。

作者的贡献

M.A.A.,M.R.K., and T.K.A. contributed to the design of the work, acquisition, analysis, and interpretation of the data and drafted the manuscript. M.A.A. performed tissue cryosectioning, immunohistochemistry, confocal imaging, and image analysis. M.A.A. and M.R.K. prepared and perfused mouse tissue and supervised and maintained the animal colony and animal genotyping in the laboratory. M.R.K. and F.F.A. performed the Western blot. A.O.A. maintained the animal colony and conducted animal genotyping in K.A.A.’s laboratory where the IHC experiments were performed by K.A.A. R.A. and M.B. contributed to the editing of the manuscript, and confocal imaging was performed in their laboratory. A.A.N. contributed to the editing of the manuscript.

确认

作者扩展他们的感谢院长以来在沙特国王大学科研资助这项工作通过项目没有。R17-02-17。

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